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Microbiologia de Alimentos: Practica nº 07-Detección de Salmonella

Microbiologia de Alimentos: Practica nº 07-Detección de Salmonella

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Métodos usados para la deteccion de Salmonella sp. en alimentos. Descripcion, fundamento, interpretacion y demas.
Métodos usados para la deteccion de Salmonella sp. en alimentos. Descripcion, fundamento, interpretacion y demas.

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 ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA 
PRÁCTICA Nº 07Detección del
 Salmonella
ASIGNATURA:
Microbiología de los Alimentos I
DOCENTE:
Dra. Graciela Albino Cornejo
ALUMNO:
Rómulo Aycachi Inga
CICLO:
2007 - II
 Lambayeque, 21 de febrero de 2008.
1
 
PRÁCTICA Nº 07
DETECCIÓN DE SALMONELLA
I.Introducción:
El
género
 
Salmonella
se incluye en la familia
 Enterobacteriaceae,
integrada por bacilosGram negativos anaerobios facultativos. Poseen, por lo tanto, las característicasgenerales de las enterobacterias: son fermentadores de la glucosa, catalasa positiva,oxidasa negativa y suelen ser móviles; representa una excepción
Salmonella gallinarum
,siempre inmóvil.La nomenclatura de
Salmonella
es compleja. Se han usado diferentes sistemas parareferir a este género. Teniendo en cuenta que estas bacterias tienen una muy importantehomología general de su ADN, deberían ser caracterizadas como dos únicas especies.Esta propuesta, formulada por Le Minor y Popoff en la década de los ochenta, no hasido completamente aceptada. No obstante, y teniendo en cuenta la necesidad deuniformizar la comunicación entre los distintos actores (médicos, veterinarios,químicos, etc.), la mayoría ha optado por seguir una antigua propuesta de Kaufmann,con las más recientes modificaciones (formuladas desde el Centro de Referenciacolaborador de la OMS, en el Instituto Pasteur); así, se divide el género en dos especies:
Salmonella enterica
y
Salmonella bongori
, diferenciables entre sí por característicasmetabólicas tales como la hidrólisis del ONPG, el crecimiento en presencia de KCN yotras.
Salmonella enterica
se subdivide, a su vez, en seis subespecies:
enterica (I),
s
alamae
(II),
arizonae
(IIIa),
diarizonae
(IIIb
 ), houenae
(IV), e
indica
(VI) que corresponden alos antiguos subgéneros. Estas subespecies son diferenciables bioquímicamente.Como todas las enterobacterias, el género
Salmonella
tiene tres tipos de antígenos:sotico (O), flagelar (H) y de envoltura, para
Salmonella
(Vi). Los antígenossomáticos son termoestables y su especificidad radica en el componente polisacárido dela endotoxina, complejo proteína- lipopolisacárido. Los antígenos O se clasifican enmayores y menores; los mayores son los que definen un grupo antigénico. Así, el factor antigénico 0:4 caracteriza el antiguo grupo B, hoy llamado O:4, mientras que losantígenos menores tienen menor valor discriminativo. Por ejemplo, el antígeno O:12 lo presenta toda
Salmonella
 perteneciente a los grupos A, B y D. Pueden encontrarse otrosantígenos menores generados por modificaciones químicas o por conversiones fágicas.Los antígenos capsulares o de envoltura sólo lo presentan algunos serotipos deSalmonella (Typhi y Dublin). Los antígenos flagelares son proteicos y termolábiles.Algunas serovariedades lo producen un único tipo de antígeno H, siendo, enconsecuencia, monosicos. Sin embargo otros serotipos pueden producir alternativamente dos tipos de antígenos H, por lo que se denominan bifásicos.Mediante el uso de reacciones antígeno anticuerpo se determina la fórmula antigénicade una cepa y, a partir de dicha fórmula, se la clasifica en serovar o serotipo siguiendo elesquema propuesto originalmente por Kauffman y White (que agrupa todas lasserovariedades conocidas, mas de dos mil quinientos).II.Objetivos:-Investigar la presencia de
Salmonella
en alimentos de consumo humano.-Realizar un recuento de
Salmonella
.-Conocer el método de análisis y el uso de los medios de cultivo.2
 
III.Materiales:-Muestra de alimentos (en estecaso huevos de gallina).-Medio de enriquecimiento noselectivo (caldo lactosado)-Medio de enriquecimientoselectivo (caldo selenito y caldotetrationato)-Agar S-S.-Placas Petri-Tubos de dilución-Frascos-Pipetas-Mechero Bunsen-GradillasIV.Procedimiento:-Como en este caso la muestra a estudiar han sido huevos crudos de gallina setoman diez de estos y se los reparte equitativamente en dos frascos grandesestériles (al introducirlos se los rompe).-Luego se le agrega 225 mL de caldo lactosado (enriquecimiento no selectivo).-Los frascos se los envía a estufa a 30 ºC por 24 h.-Pasado el tiempo, se preparan los tubos conteniendo 10 mL de los medios deenriquecimiento selectivo (dos con caldo selenito y dos con caldo tetrationato).-Se inocula 1 mL de la muestra anterior a cada uno de los tubos y luego se lossepara, un par de tubos (C. selenito y C. tetrationato) van a incubación a 37 ºC yel otro par de tubos van a 42 ºC y ambos por 24 h.-Pasado el tiempo de incubación, se siembran de cada uno de los tubos en placascon agar S-S. Éstas se incubarán a 37 ºC por 24 h.-Luego, se realizarán a las colonias características, las pruebas bioqmicasnecesarias para su identificación. 3
CaldoSelenitoCaldoTetrationatoCaldoTetrationatoCaldoSelenito
37 ºC
42 ºC
Incubar por 24 h.Luego sesiembran en agar SSSe incuba a 37 ºC por 24 h
Pruebas biouímicas
Muestra: Huevos
Enriquecimiento noselectivoEnriquecimientoselectivo30 ºC x 24 h
.
225 mL caldo lactosado +25 mL muestra
1 mL
 

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