BIOQUÍMICA

FORENSE

 Análisis de manchas
Estudio de manchas.

 Por mancha se entiende toda modificación de color,

toda suciedad o toda adición de una materia extraña,
visible o no, en la superficie del cuerpo humano, ropa,
instrumentos u objetos cualquiera, determinadas por
depósito de un producto líquido, blando y algunas
veces sólido.
 El estudio de las manchas puede establecer relaciones
de la intervención o participación de una persona o
cosa en un hecho delictivo
 Analizaremos manchas de sangre y semen.
Investigaciones analíticas de manchas de
sangre
 Diagnóstico genérico: demostrar la naturaleza
sanguínea de la mancha
 Diagnóstico específico: especie animal a la
que corresponde la mancha.
 Diagnóstico individual: demostrado que la
sangre es humana, determinar a que individuo
pertenece.
Diagnóstico genérico

 A menudo el aspecto de una mancha es muy

demostrativo que está formada por sangre; otras
veces su apariencia es menos clara. Tanto en un
caso como en el otro, la prueba de convicción
debe ser confirmada en su naturaleza para que
tenga valor.
 Las técnicas analíticas adquieren su mayor
importancia cuando las manchas son pequeñas,
invisibles o inaparentes o para excluir como
sangre una mancha que lo aparece por su forma
y aspecto
Diagnóstico genérico

 Habitualmente se emplean dos tipos de

pruebas: pruebas de orientación , que a su
falta de especificidad oponen una gran
sensibilidad, y pruebas de certeza ,
absolutamente específicas.
 Es aconsejable comenzar por las últimas y, si
hubiese material suficiente, emplear las
primeras para ratificar los resultados.
Pruebas de certeza
 Se basan en poner de manifiesto algún
elemento característico de la sangre, bien
sus elementos figurados o bien la
hemoglobina .
 Sobre la base de estos elementos y de
acuerdo con la metodología utilizada, se
pueden dividir en técnicas microscópicas,
microquímicas o cristalográficas,
espectroscópicas y cromatográficas.
1. Técnicas microscópicas

 Fundamento: ponen de manifiesto los

elementos figurados de la sangre.
 Ventajas: si el examen es directo, no
modifica la prueba de convicción en
absoluto. Cuando el diagnóstico es
positivo puede adelantar datos
referentes a la especie.
Técnicas microscópicas
 Investigación directa: se utiliza
un microscopio especial en que
la iluminación se hace por
reflexión. Da mejores resultados
cuando la sangre ha formado
una costra delgada (ejemplo
arma blanca). Los hematíes se
observan como pilas de
monedas apiladas y puede
apreciarse si presentan o no
núcleos. La prueba sólo tiene
valor si es positiva.
1. Técnicas microscópicas
 Investigación de los elementos después de una
preparación: A menudo los elementos figurados de la
sangre se rompen en la mancha y hacen imposible la
investigación directa. No obstante existen métodos
para aislar y teñir los glóbulos rojos y blancos.
1. Técnicas microscópicas
 Para ello se eluye la
mancha con suero
isotónico o suero
sanguíneo. Se
realiza un frotis
(extendido en un
portaobjetos) y se
tiñe con May-
Grunwald-Giemsa.
2. Técnicas microquímicas o cristalográficas

 Fundamento: se basan en la existencia de ciertos

derivados de la hemoglobina que tienen tendencia a
cristalizar. Los más importantes son las sales
halogenadas de la hematina y el hemocromógeno.
 Las sales halogenadas de de hematina (descrito en
1853), el fundamento de esta reacción consiste en tratar la
hemoglobina en caliente con un ácido orgánico, con lo cual
la hemoglobina se desdobla en heme y globina, a la vez se
oxida el hierro del heme. En presencia de una sal
halogenada de Cl, Br o I, se forman cristales de clorhidrato,
bromhidrato o yodhidrato de hematina, respectivamente.
Los cristales son alargados y pardos oscuros.
2. Técnicas microquímicas o cristalográficas

 El hemocromógeno, a su vez, es un
compuesto nitrogenado de la hematina,
después de una reducción. Se utiliza sosa al
10 %, piridina, una solución saturada de
glucosa y agua destilada, no es necesario
calentar. Los cristales son de color naranja y
tiene forma arborescentes.
 La sangre vieja no da reacción positiva a
cristales de hematina, pero si a la formación
de hemocromógeno.
3. Técnicas Espectroscópicas

 Fundamento: obtener el espectro de absorción de la

hemoglobina o alguno de sus derivados, como prueba
de la naturaleza sanguínea de la mancha. La
hemoglobina tiene dos bandas de absorción en la zona
del visible, cuyos máximos se encuentran a 577 y
540.5 nm, respectivamente. Además, de la banda de
Soret típica de los derivados porfirínicos , próximo al
UV, para la hemoglobina a 412 nm. Esta última banda
es mucho más intensa, unas veinte veces mayor que
las otras.
 Técnica: se prepara una solución de la mancha en
agua destilada.
4. Técnicas Cromatográficas

 Fundamento: aprovechan la propiedad fisico-química

de la hemoglobina, que le confiere una movilidad
cromatográfica concreta cuando se desarrolla en un
solvente adecuado.
 Técnica: Cromatografía en placa fina, mezcla
metanol-ácido acético-agua (90:3:7). Se seca y se
pulveriza con una solución de agua oxigenada, la
hemoglobina y la hematina aparecen de color azul. Si
se observa a la luz UV aparece una flourescencia roja
que corresponde a la hematoporfirina. Obviamente se
deben correr en paralelo estándares de hemoglobina y
hematina. El Rf de la hemoglobina es de 0.70.
Pruebas de Orientación
Pruebas de orientación
 Son extraordinariamente sensibles, por lo
que permiten demostrar trazas de sangre a
diluciones de 1:200.000. Carecen en
cambio de especificidad.
 Podemos nombrar:
3. Peroxidasas
4. Luminol
Peroxidasas
 Fundamento: se basan en la presencia en la
sangre de peroxidasas, enzimas capaces de
descomponer el peróxido desprendiendo
oxígeno. El oxígeno se para oxidar una
base, la base oxidada cambia de color.
 Pruebas de orientación

 Reacción de la peroxidasa:
H2O2 + Sangre (peroxidasa) H2O + O2
Base + + O2 Base coloreada
 Principales bases utilizadas:
Reactivo de Adler: bencidina azul
Reactivo de Van Deen: tintura de guayaco azul
Reactivo de Kastle-Meyer: fenolftaleína rojo
Reactivo de Kohn-O Kelly: ortoluidina verde azul
 Pruebas de orientación
 Valor de la prueba: la prueba tiene valor cuando es
negativa, sirviendo entonces para ratificar la negatividad
de las pruebas de certeza; su gran sensibilidad permite
excluir que la negatividad de las pruebas de certeza se
deba a la escasez de material sanguíneo en la muestra
de la mancha sospechosa.
 Es importante destacar que un resultado positivo, en
cambio, no autoriza a establecer la naturaleza
sanguínea de la mancha, ya que vegetales, semen o
heces dan resultados positivos al poseer catalasas y
peroxidasas.
Luminol
 El luminol es un compuesto orgánico que,
cuando se oxida emite luz
(quimioluminiscencia).
 En esta reacción una pequeña cantidad de
luminol (3-aminoftalhidrazida) se disuelve en
una solución básica acuosa, que contiene
además una pequeña cantidad de sulfato de
cobre. Al agregar esta solución a otra donde
exista un agente oxidante, la reacción que se
produce es la siguiente:
Luminol
Luminol
 En una solución acuosa la oxidación
de luminol es catalizada por la
presencia de un ión metálico, como
hierro o cobre.
 Por esta razón la solución de luminol
puede ser usada para detectar
sangre, ya que puede ser catalizada
por el hierro de la hemoglobina.
Luminol en escena del crimen
Luminol
 Con frecuencia, las ropas manchadas con sangre
durante un acto violento son lavadas para eliminar
los vestigios.
 El análisis de DNA mediante PCR ha dotado a la
criminalística de la posibilidad de estudiar indicios
mínimos que, con otros métodos, sería imposible
analizar.
 El luminol tiene una alta sensibilidad para encontrar
manchas de sangre invisibles.
 Además, en condiciones experimentales no produce
interferencias en la posterior extracción y
amplificación del DNA.
Luminol (Verdú y cols, Cuadernos de Medicina Forense, 2002)
Diagnóstico específico
Diagnóstico específico

 El segundo punto que el perito debe resolver

es si la sangres es humana o no. En los
últimos años ha habido un gran número de
aportes en este campo, sobre todo a nivel de
perfeccionamiento técnico.
 Glóbulos rojos: en los mamíferos son
redondos y carecen de núcleo. En las aves,
reptiles y batracios son elípticos y poseen
núcleo.
Diagnóstico específico

 Glóbulos blancos: tienen la

ventaja que se conservan
mejor en la mancha, y los
eosinófilos proporciona más
datos al variar su granulación
de especie en especie.
Diagnóstico específico
 Suero: concretamente las
proteínas del suero
debido a sus propiedades
antigénicas. Se utilizan
anticuerpos polivalentes
frente a un suero humano
total o monovalente, es
decir, frente a una sola
fracción antigénica, el
más usando es
antihemoglobina humana
y anti-IgG.
Diagnóstico individual

 Actualmente se realiza con técnicas de

biología molecular.
Manchas de semen
Análisis de semen
 El semen o líquido espermático se puede
presentar al investigador en tres formas
distintas: como mancha, impregnando un tejido,
como fluido, mezclado con otros fluidos
corporales (secreción vaginal), o como semen o
líquido espermático, cuando se obtiene del
sujeto para una investigación de esterilidad.
 En el campo del derecho penal esta relacionado
con delitos sexuales (agresión o abuso sexual)
Análisis de semen
 Entre las huellas que puede resultar de la
comisión de un delito sexual figuran las
manchas de semen sobre las ropas, en el
propio sujeto o la víctima, constituyendo una
prueba de enorme importancia.
Análisis de semen
 Características del semen: El semen recién
emitido es un líquido, cremoso, opalescente,
que tiende a amarillo verdoso cuando pasa el
tiempo y olor típico. Consta de dos elementos
distintos: las células o espermatozoides y el
plasma seminal. El plasma seminal sirve
como soporte, vehículo, medio nutricio y de
estabilización para los espermios.
 Análisis de semen
 Semen: volumen eyaculado normal es de 2 a 4 ml.
 Espermatozoides: eyaculación normal aproximadamente
100 millones de espermios/ml.
 Líquido seminal: Contiene fructosa, ribosa, inositol,
sorbitol, aminoácidos libres, amina (espermina, colina y
etanolamina), ergoteína, albúmina, dos a tres alfa
globulinas, dos beta globulinas, y una gamma globulina,
fibrinolisina, aminooxidasa, fosfatasa ácida, fosfatasa
alcalina, 5-nucleotidasa, lecitinas y ácidos grasos
(Prostanglandinas), Zinc y calcio.
Análisis de semen
 El tiempo post-coito que se pueden encontrar
espermatozoides en la vagina varía de unos
autores a otros: 14 hasta 85 horas. De todos
modos, cuanto más precozmente se proceda,
mayores posibilidades de éxito habrá.
 Cavidad rectal se pueden encontrar
espermatozoides hasta 24 horas después.
 En la boca hasta 8 horas.
Análisis de semen

 Cuando el semen se encuentra en forma de

mancha, su forma varía según el soporte:
1. Piel: cuando se deseca adquiere una forma de una fina
película,como de pegamento. Estas manchas deben buscarse
en la víctima como en el agresor en las zonas del pubis, cara
interna de muslo y labios mayores.
2. Pelos: los pelos impregnados tienen un aspecto como
engomado.
3. En tejidos absorbentes: forma manchas típicas con una
característica de tiesura, como si el tejido estuviera almidonado.
Si la mancha es reciente tiene un olor típico.
Análisis de semen
 Las prendas sospechosas deben ser examinadas a la
luz UV de Wood (luz UV de 320 a 400nm). Las
manchas de semen dan una fluorescencia blanca
amarillenta, que va ganado amarillo con el tiempo. El
examen de fluorescencia permite diferenciarlas de
otros productos como orina (fluorescencia celeste),
pus, moco o secreción vaginal.
 La fluorescencia de Wood no es específica para el
semen, ya que puede estar ausente si la mancha ha
sido tratada con detergente.
Análisis de semen: Investigaciones analíticas

 El examen se orienta a la búsqueda de

espermatozoides y de espermina y colina. Se
añaden a la investigación la determinación de
fosfatasa y métodos inmunológicos.
 Investigación de espermios: Se ha
denominado la prueba de certeza, siendo la
prueba reina del diagnóstico. Ya que si se
encuentra un espermatozoide o su cabeza,
queda identificada en su naturaleza.
Análisis de semen: Investigaciones analíticas

 Técnica: maceración de la mancha o

destrucción del soporte con ácido sulfúrico al
80% (destruye tejido y no espermios).
Tinción (hematoxilia-eosina, azul de metileno-
fucsina) de los espermatozoides y
observación microscópica.
Análisis de semen: Investigaciones analíticas

 Investigación de espermina y colina: El hecho de no

descubrir un espermatozoide completo no debe
llevar a concluir que la mancha no es semen. La
investigación de los espermios en una mancha
puede ser negativa por varias razones:
1. Deshidratación de los espermios en la mancha los que los
hace frágiles y se rompen.
2. Difícil elución desde los tejidos.
3. Difusión de los espermios de la mancha no es uniforme.
4. Sujeto azoospérmico.
 Análisis de semen: Investigaciones analíticas.

1. Técnicas electroforéticas: Electroforesis sobre papel

en tampón piridina/ácido acético/agua pH 3.9, a 350 V
por 1 hora y 50 min. Se seca y se pulveriza con reactivo
de Dragendorff. La colina aparece de color rojo y la
espermina color calabaza.
2. Técnicas enzimáticas: Investigación de fosfatasa ácida
prostática (tiene la misma significancia que la
determinación de peroxidasa en sangre). Se utilizan kits
comerciales.
Análisis de Pelos
Análisis de Pelos
 El pelo tiene una gran importancia como
evidencia. Pero, su utilidad como indicio
ofrece notas contrapuestas, ya que si bien
tiene una gran resistencia a la destrucción,
dada su estructura y composición, por otro
lado puede pasar inadvertido por su
pequeñez, y por su poco peso puede ser
transportado a otro lugar por diversos
agentes.
 Análisis de Pelos
 Estructura del pelo: el pelo es un
anexo dela piel y presenta pelo
libre propiamente tal y su raíz.
 El pelo propiamente tal tiene
tres capas concéntricas que
desde afuera hacia adentro son:
cutícula, corteza y médula.
 El diagnóstico más importante
es el de diferenciar pelo de
animales de ser humano.
 Si se tiene la raíz del pelo se
puede realizar análisis de ADN.
 Examen de prendas

 Tipos de manchas
Estudio de manchas: examen de la ropa.

 Examen de la ropa: la importancia y

trascendencia que desde el punto de vista
criminálistico tiene el examen de la vestimenta,
fundamentalmente por la gran cantidad de
vestigios que los vestidos puedan contener.
 En los bolsillos se puede encontrar peinetas con
restos de pelo de la víctima.
Estudio de manchas: examen de la ropa.

 En la ropa se pueden encontrar manchas

biológicas de sangre, semen u orina, así como
otros vestigios biológicos (pelos, caspa).
 Para el estudio se utilizan tres tipos de
iluminación: la de incandencia o luz ordinaria,
la luz de tungsteno, rica en radiaciones rojas,
que da muy buenos resultados en manchas de
sangre y, finalmente la luz UV, que pone de
manifiesto las sustancias con propiedades
fluorescentes y es muy útil para manchas de
semen, orina, pinturas y aceites.
Estudio de manchas: examen de la ropa.

 También hay que pesquizar destrucción de

partes de las ropas. Relacionar como un
puzzle trozos de prendas encontrados en el
sitio del suceso.
 Finalmente describir totalmente cada una de
las prendas (tamaño, forma, color, tipo de
tela, etc.)
Estudio de manchas:

 Aunque el número de manchas puede ser

muy elevado, en esta sección de curso nos
ocuparemos de dos tipos de manchas: las de
sangre y semen.
Manchas de sangre:

 La sangre es el vestigio más importante y el más

frecuente. Cuando se encuentre debe ser estudiado
cuidadosamente en cada uno de sus aspectos.
 El aspecto de las manchas varía con la antigüedad y
el soporte en que recae.
• En los tejidos absorbentes y claros las manchas
presentan un color rojo oscuro, que con el tiempo
tiende a ennegrecerse más. Si las manchas han
sido lavadas con agua, el color se hace rosa y el
pigmento difunde al tejido, de manera irregular, con
lugares más densos que otros.
 Manchas de sangre:

2. En los tejidos oscuros las manchas se visualizan mal,

por lo que se hace necesario emplear el reactivo de
luminol para hacerlas visibles. Este reactivo contiene 3-
aminoftalhidracida, el cual hace la mancha fluorescente
sin alterarla químicamente.
3. Cuando la mancha se asienta sobre un soporte no
absorbente, se forman costras con aspecto de
escamas brillantes o agujas. Si la sangre es reciente,
las escamas son rojas, aunque el color depende del
grosor de la costra (menor espesor más roja). A
medida que el tiempo transcurre las costras se hacen
más oscuras.
 Mecanismo de producción de las manchas de sangre

Se pueden distinguir los siguientes mecanismos:

 Proyección: tiene lugar cuando la sangre sale
proyectada con cierta fuerza viva, bien
describiendo una curva parabólica o bien en
caída libre.
 Escurrimiento: la sangre babea y, por
concentración de cierta cantidad, al ir cayendo
por acción de la gravedad, forma charcos, etc.
 Mecanismo de producción de las manchas de
sangre

 Contacto: cualquier objeto ensangrentado al

contacto con un sustrato deja una impresión,
como huellas de manos, pies, etc.
 Impregnación: se trata de un mecanismo
común a los anteriores, con los que se asocia;
consiste en la imbibición de un sustrato por el
líquido. Si el tejido es absorbente, la sangre lo
empapa y difunde por él dando origen a
manchas uniformes, circulares y de bordes
netos.
Mecanismo de producción de las manchas de
sangre

 Un mecanismo mixto, entre el contacto y la

impregnación, es el origen de las manchas
en limpiadura. Cuando se enjuga una hoja
de arma blanca, o un palo, en un trapo
absorbente, se producen unas manchas
típicas, de forma rectangular, con soluciones
de continuidad y trazos transversales más
densos, y la intensidad del color decrece
progresivamente.
Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

Manchas de Proyección:
1. Altura: si la altura es pequeña, la mancha tiene
la forma de un disco redondeado; a mayor altura,
el diámetro es mayor y el contorno es irregular,
apareciendo dentellones y gotas satélites, que
se forman al estallar aquella y romperse la
tensión superficial de la sangre.
 Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

 Una relación estricta entre altura y

característica de la mancha no pueden
establecerse, aunque existen trabajos
experimentales al respecto, teniendo en cuenta
las características físico-qcas de la sangre
(viscosidad) influyen poco, en cambio si influye
la cantidad de sangre. Sumado al hecho que
una gota normal contiene: 0.0495 a 0.0516 ml
de sangre (límite de confianza de 95%).
 Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

 Una gota que cae de unos 8 cm de altura produce una

mancha perfectamente regular, de color rojo oscuro y
de unos 9 mm de diámetro.
 Si la altura de caída es 30 cm produce una mancha de
13 mm de diámetro, de periferia festoneada, con
salientes de longitud de 0.5mm.
 Si aumenta la altura la gota principal no suele pasar de
16 mm, pero las agujas salientes aparecen en mayor
número, adquiriendo forma estrellada, si el plano es
horizontal.
 Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

2. Naturaleza del soporte: El tamaño y las

características del contorno están
condicionados muy directamente con las
condiciones del soporte, tanto su superficie
como su naturaleza intrínseca.
 Superficies duras y lisas, no absorbentes: se formarán
gotas más circulares.
 Superficies rugosas o que tengan junturas: manchas
irregulares con gotículas satélites. Cuando la superficie
es absorbente, predomina el mecanismo de imbibición
o impregnación y desaparecen las gotas satélites
Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

 Si la gota es proyectada oblicuamente, incide

sobre el plano en un ángulo agudo, con lo que
la mancha se alarga en el sentido de la
dirección. Según este ángulo de incidencia, la
velocidad de proyección y la cantidad de
sangre, la superficie de la mancha se alargará
más o menos, dibujando, en los casos más
extremos, una gota satélite en la punta, lo que
asemeja a un signo de exclamación (¡).
Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección
 Cuando se encuentren centenares de pequeñas gotas
a gran distancia entre sí y en ausencia de otras de
mayor tamaño, debe pensarse en un mecanismo de
proyección a alta velocidad, como un disparo a boca
de jarro.
 Pequeñas gotas alargadas en forma de signos de
exclamación, de dirección opuesta o múltiple, sugiere
un arma ensangrentada manejada violentamente; para
conocer el lugar de procedencia basta trazar el eje de
todas las gotas y ver el lugar donde convergen: ahí
debe situarse la fuente de proyección.
Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de proyección

 Unas manchas de proyección que dejan en la

pared un espacio “mudo”, o hueco sin
manchar, pueden indicar el lugar que
ocupaba el agresor y que interceptó la
sangre.
 Las manchas de proyección sobre los
objetos son fácilmente transportables, que
llevan implícita la posibilidad que hayan sido
cambiadas de sitio, por lo que deberán
valorarse con suma prudencia.
Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de escurrimiento

 Manchas de escurrimiento: Su mayor interés

radica en que permiten reconstruir los
cambios de posición que haya
experimentado el cadáver.
2. El reguero sigue siempre en su dirección la
influencia de la gravedad; regueros opuestos, por lo
tanto, indicarán cambios de posición.
3. Igualmente el reguero puede reconstruir la
supervivencia de la víctima, señalando el recorrido
que hizo luego de la agresión.
 Importancia médico-legal de los mecanismos de
producción de las manchas de contacto e impregnación
 Tienen extraordinario interés cuando
dibujan huellas de manos o pies, así como
cuando han sido producidas para limpiar un
arma blanca.
2. Las dimensiones de las manchas de la ropa
empapada pueden dar una idea del tiempo que
estuvieron en contacto con la sangre.
3. La existencia de coágulos de sangre en la mancha
indica sobrevivencia de la víctima.