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Microbiologia de Alimentos: Practica nº 14-Aislamiento e identificacionde Clostridium perfringens

Microbiologia de Alimentos: Practica nº 14-Aislamiento e identificacionde Clostridium perfringens

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Metodo utilizado para la deteccion de Clostridium perfringens a partir de alimentos. Fundamentos del metodo, interpretacion y demás.
Metodo utilizado para la deteccion de Clostridium perfringens a partir de alimentos. Fundamentos del metodo, interpretacion y demás.

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 ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA 
PRÁCTICA Nº 14Aislamiento e Identificación de
Clostridium perfringens
ASIGNATURA:
Microbiología de los Alimentos I
DOCENTE:
Dra. Graciela Albino Cornejo
ALUMNO:
Rómulo Aycachi Inga
CICLO:
2007 - II
 Lambayeque, 03 de abril de 2008.
1
 
PRÁCTICA Nº 14
Aislamiento e Identificación de
Clostridium perfringens
I.Introducción:El género
Clostridium
está formado por más de cien especies con limitada relacióngenética y propiedades bioquímicas diversas. Comprende a bacilos grampositivos,anaerobios, esporulados. Son ubicuos pudiendo ser encontrados en el suelo y aguasresiduales así como también en la flora intestinal de hombres y animales. En su mayoríason saprofitos, pero los patógenos pueden causar graves enfermedades como gangrenagaseosa, botulismo, tétanos, infecciones de piel y partes blandas, colitis asociada aantibióticos e
intoxicaciones alimentarias.
La capacidad para provocar enfermedad esta vinculada a la posibilidad de sobrevivir en condiciones ambientales adversas mediante la formación de esporas, crecerápidamente y producir toxinas histolíticas, enterotoxinas y neurotoxinas.
Clostridium perfringens
es la especie del género
Clostridium
más frecuentementeaislada en materiales clínicos. Es un bacilo gram positivo grande (1μm de ancho por 4μm de largo, en promedio) de bordes rectos y extremos romos. Desarrolla rápidamenteen anaerobiosis, produciendo colonias grandes (1 a 3 μm de diámetro) que muestrandoble halo de hemólisis en las placas de agar sangre.Sus características morfológicas, la demostración de presencia de esporas, el rápidodesarrollo en anaerobiosis y algunas propiedades bioquímicas (lecitinasa) conforman un perfil que facilita su rápida detección en el laboratorio.
C. perfringens
es agente etiológico de muchas enfermedades y es la tercera causa detoxinfección alimentaria bacteriana después
Samonella
spp. y
Saphylococcus aureus
.Existen dentro de la especie cinco tipos llamados A, B, C, D y E.
C. perfringens
Aes el responsable de la mayoría de los procesos infecciosos. Produce una enterotoxina(polipéptido de 35.000 daltons de peso molecular) que se comporta como unsuperantígeno promoviendo la liberación de mediadores de inflamación en formamasiva.La enterotoxina es susceptible a pronasa pero no a tripsina ni quimiotripsina. En elintestino delgado, la enterotoxina se une a un receptor de membrana del ribete en cepilloe induce una alteración de la permeabilidad calcio dependiente resultando en una pérdida de iones y metabolitos. Esta pérdida electrolítica altera la función metabólicaintracelular provocando daño morfológico y eventual lisis.La enfermedad se produce cuando el individuo ingiere alimento contaminado con unelevado número de organismos productores de enterotoxinas (100 millones).Los alimentos que pueden estar contaminados son carnes vacuna, pollo, salsascocinadas y no refrigeradas. Cuando los alimentos llegan al intestino delgado se produce la esporulación y la liberación de enterotoxinas. No son comunes los brotes familiares pero si los producidos a través de alimentos preparados comercialmente y destinados a restaurantes o instituciones.Para confirmar la existencia de una enfermedad de este tipo es necesario recuperar el agente de la muestra clínica y del paciente. Se deben recuperar al menos 100.000UFC de
C. perfringens
 por gramo de alimento y 1.000.000 de microorganismos por gramo de heces en las primeras 24 horas. Es posible detectar anticuerpos contra laenterotoxina pero ellos no tienen valor protector 2
 
II.Objetivos:-Determinar la presencia de
C. perfringens
sulfito reductores de muestras dealimentos.-Familiarizarse con los todos de aislamientos de bacterias anaebicas enalimentos.-Tomar conciencia de los peligros que ocasionan la presencia de estosmicroorganismos en los alimentos. III.Materiales:-Medios de Cultivo: AgaWilson-Blair.-Diluyente: Agua peptonada-Muestras: Agua de acequia, pescado fresco salado.-Baño María-Tubos de ensayo con tapa rosca-Pipetas-Frascos estériles-Gradillas-Mechero BunsenIV.Procedimiento:-Para muestra de agua:a.Tomamos 5 tubos de ensayo a los cuales les agregaremos 5 mL de aguasservidas a cada uno. b.Luego agregaremos el medio Wilson-Blair, previamente calentado(disuelto) en el baño María.c.El agua servida debe haber sido también calentada, previamente, en el baño María a 80 ºC por 10 min.d.Al medio le agregamos la solución sulfato-ferrosa.e.Luego incubamos los tubos en anaerobiosis a 37 ºC por 48 h.f.Se observarán, de ser positivas, colonias negras en la profundidad.g.Los resultados se dan en “esporas de
Clostridium
sulfito reductoras/100mL”.-Para muestra de alimentos:a.La muestra de pescado es eviscerada, le sacamos la piel, las agallas y sihubiera, los intestinos. b.Luego, ponemos todo eso en un frasco estéril y le agregamos el diluyente(agua peptonada) la cantidad suficiente. Homogenizamos.c.Luego realizamos las diluciones respetivas (10
-1
, 10
-2,
10
-3
).d.De las diluciones realizadas sembramos por todo de “siembra en profundidad”, una placa por cada dilución.e.Luego enviamos a incubar, en anaerobiosis, a 37 ºC por 48 h.f.Al igual que en la anterior, la positividad de las colonias se verá por sucaracterístico color negro. 3

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