Pembahasan mengenai:

Pengertian dan jenis Kegunaan/manfaat Peralatan dan cara kerja Pemisahan dengan teknik elektroforesis Faktor-faktor yang mempengaruhi pemisahan Kelebihan/kelemahan teknik elektroforesis

Pengertian dan Jenis

a. Pengertian Elektroforesis adalah suatu teknik pemisahan/analisis kualitatif suatu zat dengan bantuan arus listrik.

04/21/12

Pengertian dan Jenis

a. Pengertian Prinsip pemisahan dalam elektroforesis didasarkan atas perbedaan migrasi komponen pada fasa pendukung, karena adanya perbedaan muatan dan massa molekul.

04/21/12

Pengertian dan Jenis

b. Jenis-jenis Teknik Elektroforesis

Teknik Elektroforesis Teknik Elektroforesis
Dibedakan atas Teknik

Konvensional
Dibedakan atas Teknik

Kapiler

Frontal (moving boundary): tak berpendukung

04/21/12

Zonal : berpendukung
4

Pengertian dan Jenis

T.E.F. konvensional :
Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawa cukup besar Menggunakan arus listrik dengan tegangan tidak terlalu besar ( beberapa puluh volt saja) Proses lama (lebih dari 0,5 jam)

04/21/12

Pengertian dan Jenis

T.E.F. kapiler :
Ukuran alat /jumlah cuplikan/fasa pembawa sangat sedikit/kecil Menggunakan arus listrik dengan tegangan tinggi ( sampai 30.000 volt ) Proses cepat (kurang dari 0,5 jam)

04/21/12

Kegunaan/Manfaat

Kegunaan / manfaat
Pemisahan dan analisis senyawa bermuatan Pemisahan dan analisis makromolekul seperti protein, polisakarida, as. Nukleat Pemisahan dan analisis campuran senyawa bermuatan dan tak bermuatan ( untuk E.F. kapiler)
04/21/12 7

Peralatan dan cara Kerja

T.E.F. Berpendukung

04/21/12

Peralatan dan cara Kerja

Gambar Alat Elektroforesis

04/21/12

Peralatan dan cara Kerja

Senyawa tidak berwarna dapat dilihat dengan paparan sinar UV

04/21/12

10

Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit 2. Zat pendukung 3. Elektroda

04/21/12

11

Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit: Adalah larutan pembawa komponen umumnya bufer dengan pH tertentu.

04/21/12

12

Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

2. Zat pendukung: tempat pemisahan terjadi, biasanya berupa kertas (selulosa asetat, selulosa nitrat), gel kanji, gel poliakrilamid, busa poliuretan, agar-agar.

04/21/12

13

Peralatan dan cara Kerja

Komponen utama alat

3. Elektroda : katoda dan anoda yang dihubungkan Dengan arus listrik.

04/21/12

14

Peralatan dan cara Kerja

Cara Kerja
1. Wadah dijenuhkan dengan larutan elektrolit 2. Cuplikan ditotolkan pada fasa pendukung 3. Pendukung dengan tootolan cuplikan dijenuhkan dengan uap elektrolit. 4. Ujung-ujung pendukung dicelupkan ke dalam elektrolit
04/21/12 15

Peralatan dan cara Kerja

Cara Kerja
5. Kedua elektroda dihubungkan 6. Pemisahan dimulai 7. Hasil pemisahan dihubungkan dengan detektor untuk keperluan analisis kualitatif dan kuantitatif

04/21/12

16

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Proses Pemisahan

Untuk Melihat Animasi Klik di sini!

04/21/12

17

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Pada fasa pendukung

Setelah Melalui detektor

04/21/12

18

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Perhatikan migrasi komponen berikut ini pada waktu yang sama

Untuk Animasi Klik Di sini!

04/21/12

19

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Latihan Pemahaman Konsep

Jawablah pertanyaan berikut : 1. Pemisahan terjadi karena adanya 2. Partikel + bergerak ke kutub 3. Partikel - bergerak ke kutub . 4. Partikel tidak bermuatan bergerak ke kutub Klik disini untuk soal selanjutnya
04/21/12 20

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

5. Laju migrasi partikel dengan Mr kecil daripada partikel dengan Mr besar. 6. Laju migrasi partikel dengan muatan paling besar bermigrasi .

Bila anda telah dapat menjawab dengan benar teruskan pada materi berikutnya ! Klik kunci jawaban
04/21/12 21

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

Jawaban Soal Latihan

1. Pemisahan terjadi karena adanya perbedaan migrasi komponen. 2.Partikel + bergerak ke kutub katoda (-). 3.Partikel - bergerak ke kutub anoda (+). 4.Partikel tidak bermuatan (netral) tidak bermigrasi

04/21/12

22

Pemisahan dengan Teknik Elektroforesis

5.Laju migrasi partikel dengan Mr kecil lebih cepat daripada partikel dengan Mr besar. 6.Laju migrasi partikel dengan muatan paling besar bermigrasi paling cepat

Silahkan melanjutkan ke materi berikutnya!

04/21/12

23

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Faktor yang mempengaruhi pemisahan dengan ZEF

1. Kemobilan ion/partikel (): 2. Derajat onisasi 3. Pembentukan Kompleks Bermuatan 4. Konsentrasi larutan elektrolit

04/21/12

24

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

1. Kemobilan ion/partikel ():

Perbedaan kemobilan ( ) harus besar agar perbedaan jarak pemisahan besar, sehingga pemisahan efisien.

04/21/12

25

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Pada pemisahan dua komponen :

( A B )t.E S = SA SB = L
L = panjang pendukung A dan B = kemobilan A dan B , E = tegangan, t= waktu pengembangan,
SA dan SB =jarak komponen A dan B dari titik awal penotolan,

04/21/12

26

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

2. Bagaimana pemisahan senyawa (S) bila tegangan, perbedaan mobilitas, waktu [pengembangan serta panjang pendukung besar ?

Bila anda telah dapat menjawab pertanyaan di atas, anda dapat melanjutkan pembelajaran pada materi berikutnya.
Kunci jawaban
04/21/12 27

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Kunci jawaban : 1. Jika viskositas larutan elektrolit dan jari-jari ion besar, maka kemobilan suatu ion akan besar pula. Demikian sebaliknya. 2. Pemisahan akan efisien bila perbedaan mobilitas ion besar. Demikian pula semakin besar tegangan, semakin lama waktu pengembangan akan berdampak pada semakin baiknya pemisahan. Sampai batas tertentu, terlalu panjangnya fasa pendukung akan memperkecil efisiensi pemisahan

04/21/12

28

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

2. Derajat onisasi
Mari kita perhatikan ionisasi senyawa asam amino (asam lemah), HA berikut.

HA (aq) H+ (aq) + A- (aq)

pKa= 4,76

04/21/12

29

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Jawablah pertanyaan berikut:

Keadaan HA pada a) pH = 4,76 adalah b) pH > 4,76 adalah c) pH < 4,76 adalah
Bila anda telah memahami jawaban pertanyaan di atas, silahkan teruskan ke materi berikutnya
Kunci Jawaban
04/21/12 30

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Marilah kita perhatikan data pemisahan dua asam amino dengan ZEF pada berbagai pH larutan elektrolit !
ASAM AMINO TIL MIGRASI RELATIF PADA ZEF pH= 3,3 HISTIDIN (HIS) AS. GLUTAMAT (AG) 7,7 3,3 - 68 +7 pH = 7,2 -8 +72 pH = 9,3 +10 +77

TIL = Titik Isolistrik, pH di mana struktur senyawa memiliki gugus - dan + Tanda menunjukkan arah migrasi ke kutub katoda dan Tanda + menunjukkan arah migrasi ke kutub Anoda)

04/21/12

31

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Struktur histidin

Struktur asam glutamat

04/21/12

32

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

Jawablah pertanyaan di bawah ini

I. Pada pH larutan 3,3, maka 1. AG bermuatan .., sedangkan HIS bermuatan 2. AG bermigrasi ke kutub .., sedangkan HIS bermigrasi ke kutub . 3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju migrasi HIS *) pilih salah satu. 4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi ini ?
04/21/12 33

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

II. Pada pH larutan 7,2, maka

1. AG bermuatan ., sedangkan HIS bermuatan .. 2. AG bermigrasi ke kutub ., sedangkan HIS bermigrasi ke kutub . 3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju migrasi HIS 4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi ini ?

04/21/12

34

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

III. Pada pH larutan 9,3, maka

1. AG bermuatan ., sedangkan HIS bermuatan .. 2. AG bermigrasi ke kutub ., sedangkan HIS bermigrasi ke kutub . 3. Laju migrasi AG (< , = , > )* dibandingkan dengan laju migrasi HIS. 4. Apakah AG dapat dipisahkan dari HIS pada kondisi ini ? Kesimpulan :
Bila anda telah memahami materi ini, silahkan dilanjutkan ke materi berikutnya
04/21/12

Kunci Jawaban

35

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

3. Pembentukan Kompleks Bermuatan

Senyawa yang tidak bermuatan dapat dipisahkan dengan ZEF, tetapi terlebih dahulu harus dibuat bermuatan. Caranya; dengan pembentukan kompleks bermuatan Contoh : KH + BO33Kompleks organo-borat bermuatan (-)

04/21/12

36

Faktor-faktor yang Mempengaruhi Pemisahan

4. Konsentrasi Larutan Elektrolit Fungsi larutan elektrolit :

a. Fasa pembawa b. Menyebabkan terjadinya arus c. Menurunkan tahanan fasa pendukung Konsentrasi larutan elektrolit erat kaitannya dengan kemobilan ion. Berilah penjelasan, kaitkan dengan viskositas larutan.
04/21/12 37

Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelebihan Teknik Elektroforesis

Mudah untuk molekul besar dan bermuatan. Dapat digabungkan dengan kromatografi (Lempeng tipis). Lebih cepat dari kromatografi biasa. Alat dan teknik sederhana.

04/21/12

38

Kelebihan/Kelemahan Teknik Elektroforesis

Kelemahan Teknik Elektroforesis

Sulit untuk analisis kuantitatif, kecuali dengan EF tidak berpendukung. Sukar mendeteksi konsentrasi rendah. Sukar untuk senyawa tidak bermuatan.

Kelemahan teknik ZEF dapat diatasi dengan elektroforesis kapiler

04/21/12 39

Teknik Elektroforesis Kapiler

Teknik Elektroforesis Kapiler

Karakteristik Pendukung:pipa kapiler terbuat dari gelas dengan panjang bermeter-meter. Elektrolit: larutan bufer

04/21/12

40

Teknik Elektroforesis Kapiler

Tegangan 10.000 30.000 V. Memerlukan larutan elektrolit dan komponen cuplikan sedikit (mikro). Mekanisme berbeda dari EF konvensional.

04/21/12

41

Teknik Elektroforesis Kapiler

04/21/12

42

Teknik Elektroforesis Kapiler

04/21/12

43

Teknik Elektroforesis Kapiler

04/21/12

44

Teknik Elektroforesis Kapiler

Diagram alat EF kapiler

04/21/12

45