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Cap 23 - Bacterias - Aspectos practicos

Cap 23 - Bacterias - Aspectos practicos

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BACILOS GRAM NEGATIVOS: Aspectos pr\u00e1cticos
Bel\u00e9n Amor\u00edn
MEDIOS Y PRUEBAS BIOQUIMICAS
Se utilizar\u00e1n para el cultivo de los bacilos Gram negativos diferentes tipos de medios:
Medios simples: Son aquellos que contienen pocas sustancias nutritivas. Ejemplo: Agar nutriente.

Medios complejos: Son aquellos a los cuales se les a\u00f1ade ingredientes de composici\u00f3n qu\u00edmica no bien definida, como peptona, extracto de carne, extracto de levadura, l\u00edquidos org\u00e1nicos, que permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos de la m\u00e1s amplia exigencia nutricional. Ejemplo: Agar sangre.

Medios diferenciales: Son aquellos a los que se les agrega un indicador de pH de distinta \u00edndole y los cuales contienen un az\u00facar degradable por la bacteria, el cual cambiar\u00e1 de color (viraje del indicador) cuando un grupo de organismos determinado se desarrolla en \u00e9l utilizando ese carbohidrato. Ejemplo: Agar-lactosa-rojo-fenol.

Medios selectivos y diferenciales: Son medios a los que se les agrega Lactosa-rojo-fenol y otras sustancias tales como cristal violeta, que permite el crecimiento de bacilos Gram negativos e inhibe el desarrollo de los Gram positivos. Ejemplo: Agar Mac Conkey.

Medios de identificaci\u00f3n
Se incluyen bajo este nombre todos aquellos medios que ponen en evidencia distintas propiedades fisiol\u00f3gicas de las
bacterias, por ejemplo: reacciones bioqu\u00edmicas o enzim\u00e1ticas, movilidad, producci\u00f3n de pigmento, etc.
Prueba de la Oxidasa: Pone en evidencia la enzima indofenol-oxidasa, mediante la oxidaci\u00f3n de un colorante
previamente reducido que cambia de color en su presencia. Permite diferenciar entre bacilos Gram negativos no
fermentadores, de aquellos pertenecientes a la familiaEnterobacteriaceae.
Se toma una porci\u00f3n de una colonia pura de 24 horas, con una pipeta pasteur, se deposita sobre una tira de papel
impregnada en el reactivo de oxidasa.
LECTURA: Reacci\u00f3n positiva: Aparici\u00f3n de un color rojo viol\u00e1ceo entre los 10 y 60 segundos.
Metabolismo oxidativo-fermentativo: El medio utilizado se denomina OF, que es semis\u00f3lido y tiene azul de
bromotimol como indicador de pH, y una determinada concentraci\u00f3n de carbohidratos. Se siembra en dos tubos en
profundidad con una punta, un tubo sin vaselina y el otro con vaselina. Se incuba a 370C por 24 hs.
LECTURA:
Tipo
de
metabolismo
Tubo abierto
Tubo cerrado
oxid./ferm.
amarillo en todo el
tubo
amarillo en todo
el tubo
oxidativo
amarillo en super-
ficie
no viraje
inactivo
no viraje
no viraje

El metabolismo gluc\u00eddico se explora por la adici\u00f3n al medio, que puede ser s\u00f3lido, semis\u00f3lido o l\u00edquido del carbohidrato deseado m\u00e1s un indicador de pH. All\u00ed se estudia el tipo de ataque del gl\u00facido considerando el viraje o no del indicador y la producci\u00f3n o no de gas que se detecta en el medio s\u00f3lido por burbujas que rompen el Agar.

TSI (triple az\u00facar hierro): Este medio determina la habilidad de un microorganismo de atacar un carbohidrato

espec\u00edfico incorporado a un medio basal de crecimiento con o sin la producci\u00f3n de gas y la producci\u00f3n de sulf\u00eddrico. Sirve de gu\u00eda como primera aproximaci\u00f3n al estudio de bacilos Gram negativos no fermentadores. Es un medio s\u00f3lido con una concentraci\u00f3n de lactosa y sacarosa al 1% y de glucosa al 0,1%, peptonas, sulfato ferroso y rojo fenol como indicador de pH (pH \u00e1cido = amarillo, pH alcalino = rojo, pH neutro = rojo p\u00e1lido). Se reparte en tubos dejando una superficie inclinada ("slant"), y un fondo ("butt") de 3 a 4 cm de profundidad. Se siembra por puntura y en superficie. Se incuba a 37\u00baC por 18- 24 horas.

LECTURA: Se lee el cambio de pH (viraje del indicador) desde la superficie al fondo, la producci\u00f3n de gas y de
sulf\u00eddrico; registr\u00e1ndolo del modo siguiente por ej. A/A gas (+) H2S (-).

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Marcelina Rivas Segura added this note
ayuda me a conseguir la repuestas de aspectos de las bacterias

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