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Virología: Practica 05 - Inoculación de virus en huevos embrionados

Virología: Practica 05 - Inoculación de virus en huevos embrionados

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Published by Romulo Aycachi Inga
Descripcion de los métodos utilizados para la inoculacion de virus en huevos embrionados. Pasos a seguir, fundamento y demás.
Descripcion de los métodos utilizados para la inoculacion de virus en huevos embrionados. Pasos a seguir, fundamento y demás.

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ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
 
Inoculación de virus en huevosembrionados
ASIGNATURA:
Virología
DOCENTE:
Dra. Graciela Albino Cornejo.
ALUMNO:
Rómulo Aycachi Inga.
CICLO:
2007 - I
 Lambayeque, Agosto del 2007.
 
Inoculación de Virus en HuevosEmbrionados
I.
Introducción:
Se han utilizado huevos fecundados para cultivar virus durante más de15 años. El cultivo de virus gripal en huevo embrionado fue empleado por primera vez por Burnet en 1935, demostrando que el embrión de pollo es unmedio muy sensible para el aislamiento de estos virus, siendo además unmedio estéril y poco costoso. Ha sido posible cultivar virus de diversos gruposen varias cavidades del huevo fecundado, o en el propio embrión en desarrollo.También se emplearon huevos de pato y de ganso para cultivar ciertos virus,pues estos animales tienen un periodo de incubación mas prolongado que elpollo; pero como regla, sigue usándose huevo de gallina de 6 a 8 días deincubación aproximadamente (a veces se usa huevos de mas tiempo deincubación).Los virus sólo pueden reproducirse en determinadas partes del embrión;por consiguiente, se deben inyectar en la región apropiada, P. ej. los mixoviruscrecen bien en la membrana corioalantoidea, en tanto que el virus de laparotiditis prefiere la cavidad alantoidea. La infección puede producir una lesiontisular local conocida como pústula, cuyo aspecto, a menudo, es caracteristicodel virus.El método exacto de inoculación y la edad del embrión que se emplea,dependen del virus problema. P. ej. para aislar en forma primaria el virus de lainfluenza a partir de material recogido de la garganta, suele inocularse este enla cavidad amniótica de embriones de 7 a 8 días; pero el virus se duplicafácilmente en la membrana alantoidea de embriones de 12 a 13 días, despuésde varias resiembras (“adaptación”) en el amnios. Los focos mas utilizadospara la inoculación, a parte de las cavidades amniótica y alantoidea, son lamembrana corioalantoidea y el saco vitelino. Algunas veces, puede inyectarsedirectamente el virus en el embrión en desarrollo, recurriendo a la inoculaciónintravenosa, intraperitoneal o intracerebral. Una vez que se duplicó el virusdentro de las células de las membranas o del embrión, puede liberarse a loslíquidos vecinos, los cuales constituyen entonces una buena fuente de virus. P.ej. el virus de la influenza, que se duplica en el sistema respiratorio del embrióny en las células de la membrana amniótica, pasa al líquido amniótico, que luegopuede recogerse con una jeringa y aguja. En cambio, otros virus, como p.ej. losde la viruela y el herpes, que se duplican en la membrana corioalantoidea,siguen unidos a las células en las lesiones o “pústulas” que se forman sobredicha membrana. Al moler y deshacer en una solución salina isotónica lasmembranas, logran liberarse estos virus.En consecuencia el crecimiento de un virus en un embrión de pollopuede provocar la muerte del embrión (p.ej. virus de la encefalitis), producir pústulas o placas sobre la membrana corioalantoidea (como herpes, viruela,vacuna), desarrollar hemaglutininas en los líquidos o tejidos embrionarios (p.ej.influenza) o desarrollar virus infectante (p.ej. poliovirus tipo 2).En el caso de los virus herpes y vaccinia, estos se pueden cuantificar por la técnica de inoculación de huevos embrionados al correlacionar el número depústulas contadas con la dilucion viral inoculada.
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Actualmente el método preferido para cultivar virus de influenza aviar esla inoculación en huevos embrionados libres de patógenos específicos (SPF) ohuevos negativos a anticuerpos específicos (SAN). El sobrenadante de loscentrifugados de las muestras se inocula en el saco alantoideo de al menos 5huevos de 9-11 días de incubación y se incuba a 35-37ºC durante 4-7 días.Luego los huevos con embriones muertos, cuando esto ocurra, o los quequeden al final del periodo de incubación se refrigeran a 4 ºC y el líquidoalantoideo se chequea con la prueba de hemaglutinacn. Si se detectaactividad de hemoaglutinatión hay una probabilidad alta de la presencia devirus A de influenza o de un paramixovirus aviar. Los fluidos que den reacciónnegativa deben inocularse al menos en otro lote de huevos.Entre los lugares de inoculación tenemos:
Membrana Corioalantoidea:
Se emplean embriones de 10 – 12 días yla cantidad de inóculo es de 0.1 – 0.5 ml. Apropiada especialmente para elaislamiento y cultivo de virus variolicos; virus de laringotraqueitis aviar y de laenfermedad de Beyer (Pseudorrabia); que provocan focos o stulasfácilmente visibles.
Cavidad Alantoidea:
Se emplean embriones de 9 12 as y lacantidad de inoculo es de 0.1 – 0.2 ml. Entre los virus que desarrollan en elendodermo alantoideo tenemos: peste, New Castle, virus de la bronquitisinfecciosa, encefalitis equina occidental y oriental Venezuela, parotiditis.Ventaja: simplicidad de la inoculación y toma de muestra
Cavidad Amniótica:
Se emplean embriones de 7 – 15 días y la cantidadde inóculo es de 0.1 0.2 ml. la edad de los mismos dependefundamentalmente del tipo de virus o del estudio que se realiza.
Saco Vitelino:
Se emplean embriones de 5 – 8 días de incubación y lacantidad de inóculo es de 0.2 – 1 ml. Vía es sumamente adecuada para elaislamiento y cultivo de los virus de enfermedades venéreas, neumonía yrickettsias. El vitelo es empleado para la preparación de vacunas y comoantígeno para reacciones serológicas de los virus ya mencionados.
Vía Intravenosa:
La membrana corialantoidea está irrigada por vasossanguíneos, es susceptible de inoculación para casos especiales, virus queocasionan cambios hematológicos; por ejemplo, virus de la Leucemia. Sonempleados embriones de 10 - 15 días y la cantidad de inóculo es de 0.02 -0.05 ml.
Vía Intracerebral (embrión):
Se emplea embriones de 8 – 14 días,específicamente para virus que producen alteraciones cerebrales: la rabia,herpes, etc; 0.01 – 0.02 ml.
II.Objetivo:
Conocer y aplicar correctamente los métodos adecuados para realizar inoculaciones de virus en embriones aviares.
III.Materiales:
Material Biológico:
Virus de New Castle cepa “La Sota” a virus vivo.
Huevos embrionados de gallina de 9 a 11.
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