Anticuerpos Estructura y Funcin

Solange Rivas Inmunohistoqumica 2010

Repaso clase anterior

Cules son los objetivos de la inmunotincin?

Demostrar antgenos (ag) presentes en las clulas o tejidos mediante el uso de anticuerpos (ac)determinados marcados gracias a su capacidad de unirse especificamente a los ag La reaccin es visible solamente si el ac est marcado con una sustancia que absorbe o emite luz o produce coloracin.

Consideraciones
Existen 3 factores principales que determinan la facilidad de deteccin de un antgeno:
1.- Concentracin local de un antgeno 2.- Tipo de fijador y anticuerpo empleado 3.- Mtodo de deteccin empleado

Fijadores
IDEAL: Inmovilizar al antgeno sin modificar su eptope manteniendo la estructura celular y permitir el acceso a los ag REALIDAD: Muchos eptopes son enmascarados o alterados y los antgenos pueden no reconocerlos (tratamientos con tripsina)

Para la inmunotincin existen 2 tipos de tcnicas:

I.

Tcnicas de inmunofluorescencia.

II. Tcnicas de inmunoperoxidasa.

Tcnica de Inmunofluorescencia
Marcadores Compuestos de fluorescena que emiten luz de longitud de onda visible bajo luz ultravioleta. Ejm: Isotiocianato de fluorescena (luz verde amarillenta intensa). 1.2 Muestras Fresco o congeladas.

1.3 Inmunofluorescencia directa Diagnstico de enfermedades cutneas (Enf. Ampollares, vasculitis y mesenquimopatas). Alta sensibilidad. Desventajas: Falta de permanencia de la reaccin, microscopa especializada y poco detalle morfolgico.

IFD; positiva en vasos de dermis superficial Presencia de depsitos granulares de IgA en las paredes de los vasos de la dermis
Marcela Leyva-Sartori1, Vctor Delgado-Gonzles http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v16_n2/pdf/a07v16n2.pdf

Tcnica de Inmunoperoxidasa
1.1 Marcadores Enzimas capaces de hacer cambiar de color un sustrato incoloro. Enzimas: Peroxidasa y fosfatasa alcalina. Sustrato: Diaminobenzidina(color pardo), aminoetilcarbazol(color rojo) y nitroazul de tetrazoilo(color azul). Unin directa al ac primario o a travs de otros ac (secundarios) o sustancias como la biotina y protena A.

Ventajas y desventajas
Tincin permanente Uso de microscopio de luz No hay prdida de la intensidad de la reaccin Archivarse por mucho tiempo.

Desventajas: rx inespecfica (acs policlonales), estandarizacin precisa y estricto control de calidad Tipos de tcnicas: Ac a utilizar (policlonal o monoclonal), material utilizado (fresco, congelado o fijado en formalina tamponada) y ag a estudiar (superficie o membrana, citoplasmticos y nucleares).

Proliferacin celular de linfocitos. Fosfatasa alcalina

Epitelio alveolar: Proliferacin virus PI3 en pulmn de ovino. Inmunoperoxidasa

Importante!!
Uso de controles internos o paralelos negativos y positivos. El control negativo se obtiene omitiendo el paso de incubacin con ac primario.

Caractersticas de los antgenos

Molcula que posee una estructura tridimensional y extraa al animal en el cual es introducida. Protena y carbohidratos. Capaz de inducir la formacin de anticuerpos. Eptope: Sitio especfico del ag. donde se une el ac.

Definicin de anticuerpos
Son

glucoprotenas del tipo gamma globulina producida por los mamferos como respuesta a un antgeno. Tienen la propiedad de combinarse especficamente con el antgeno que indujo su produccin.

 Los anticuerpos o inmunoglobulinas son sintetizados por

los plasmocitos los cuales son los principales efectores de la llamada respuesta humoral.

Clulas plasmticas H-E 40x

Caractersticas
Ac Policlonales
Acs contra diferente eptopes presentes en el ag. Refleja la mezcla de diferente productos clonales que tiene.

Ac monoclonales

Hibridacin o Ingeniera gentica. Altamente especficos. Eptopes individuales.

Estructura de un monmero de inmunoglobulina

Estructura
o Cadenas polipeptdicas pesadas existen 5 tipos en mamferos lo que va a definir la clase de anticuerpo (IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM) o Cadena polipeptdica ligera existen 2 tipos; lambda y kappa las que para cada anticuerpo son idnticas. o Regiones FAB Fragmento de unin al antgeno reconoce elementos extraos especficos compuesta por un dominio variable y otro constante de cada una de las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo. o Regiones FC Fragmento cristalizable, modula la actividad de la clula imunitaria.

Funciones: luego de unirse a su antgeno

Pueden impedir que los patgenos entren en las clulas o

las daen al unirse a ellas (neutralizacin).

Pueden estimular la eliminacin de un patgeno por los

macrfagos y otras clulas revistiendo al patgeno (opsonizacin)

Pueden desencadenar la destruccin (lisis) directa del

patgeno estimulando otras respuestas inmunes como la va del complemento.

Ejemplos de marcadores inmunohistoqumicos

Reacciones cruzadas
Es la reaccin entre un antgeno y un anticuerpo que fue

generado contra un antgeno diferente pero similar.

La relacin entre un anticuerpo determinado y el

antgeno que ha dado lugar a su produccin se conoce como interaccin especfica. Cuando el anticuerpo da reaccin positiva con otros antgenos, relacionados o no con el utilizado en la inmunizacin, se habla de reaccin cruzada.

Por su atencin