MINISTRIO DA EDUCAO DIRECO REGIONAL DE EDUCAO DO ALGARVE AGRUPAMENTO DE ESCOLAS DR.

LAURA AYRES

Disciplina: Biologia e geologia Professora: Zenaida Lima

Extrao de DNA de clulas vegetais

Relatrio reallizado por:

Ruben Miguel Heath Seromenho N 17 11 B

Quarteira Outubro 2011

ndice

ndice ............................................................................................................................................. 2 Introduo ..................................................................................................................................... 3 Fundamentao terica.................................................................................................................. 4 Processo experimental ................................................................................................................... 6 Materiais.................................................................................................................................... 6 Metodologia .............................................................................................................................. 7 Registo dos resultados ............................................................................................................... 8 Interpretao dos resultados .......................................................................................................... 9 Concluso .................................................................................................................................... 10 Bibliografia ................................................................................................................................. 11

Introduo

Este relatrio baseado numa experincia em que o objectivo principal a extrao do DNA de clulas vegetais. Para isto utilizamos o kiwi por vrios motivos. Um destes o seu fcil manuseamento mas tambm optamos pelo kiwi devido simplesmente a ser a fruta da poca.

Fundamentao terica

Esta experincia tem como principal objectivo extrair o DNA de clulas vegetais. Mas o que o DNA? At meados do sculos XX, o suporte fsico da informao necessria para o desenvolvimento de um ser vivo era desconhecido, de facto at considerava-se que a informao necessria para formar um ser vivo estaria contida nas protenas mas na realidade esta est contida no DNA. O DNA foi descoberto em 1869 por Friedrich Miescher. No entanto, esta descoberta teve pouca importncia na altura, porque estas molculas foram consideradas demasiado simples para albergarem a complexa informao que se esperava que o material gentico contivesse. Ento em 1928, os trabalhos realizados pelo bacteriologista Frederick Griffith abriram caminho para um conjunto de trabalhos experimentais que viriam a permitir identificar o material gentico. Uma das suas experincias foi com bactrias do tipo S e do tipo R. As bactrias do tipo S so capsuladas enquanto que as bactrias do tipo R no ou seja as bactrias do tipo R so logo destrudas. Esta experincia mostrou que as bactrias conseguem ir buscar informao as bactrias do tipo S para criarem tambm uma cpsula. Esta informao deveria ser transmitida por uma substncia qumica, que ficou conhecida por prncipio transformante, pelo facto de transformar um tipo de bactrias noutro. A descoberta deste princpio transformante surgiu em 1944 como resultado de trabalhos de investigao realizados por uma equipa de investigadores norte-americanos. Avery e os seus colaboradores suspeitavam que o DNA pudesse ser o prncipio transformante e com umas experincias estas suspeitas foram comprovadas. Hershey e Chase, em 1952, realizaram novas experincias que confirmavam o prncipio transformante. Desta forma, ficou demonstrado que o DNA contm a informao necessria para a produo de novos vrus, no tendo havido interveno das protenas virais.
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Assim, estes investigadores puderam concluir que o DNA o suporte da informao gentica e no as protenas, reforando os resultados de Avery e dos seus colaboradores.

Mas em que constituido o DNA? O DNA consttuido por bases azotadas que podem ser a adenina, a citosina, a guanina e a timina. Os nucletidos estabelecem ligaes entre si, formando cadeias polinucleotdicas. Estas ligaes estabelecem-se entre o grupo fosfato de um dos nucletidos e o carbono 3 da pentose do nucletido seguinte. Estas ligaes designamse ligaes fosfodister.

Processo experimental
Materiais

-Kiwi -Almofariz -Bisturi -Banho-maria (37C) -Coador -Proveta de 100 ml -Tubo de ensaio -gua Destilada -Detergente da loua -Cloreto de Sdio -Etanol (5C) -Gobel -Fucsina bsica -Vareta - Caixa de Petri

Metodologia
1. Descascar um kiwi, cort-lo em pequenos cubos e esmag-lo num almofariz.

2. Adicionar uma soluo composta por: 100 ml de H2O; 10 ml de detergente de loua; 3g de NaCl. 3. Continuar o processo de esmagamento. 4. Colocar o preparado em banha-maria (37) durante 15 minutos 5. Filtrar, atravs de uma gaze (ou pano) de forma a obter 5 ml de lquido para um tubo de ensaio. 6. Adicionar, lentamente, 5 ml de etanol 96% a 5 C. 7. Deixar repousar at se observar a ascenso de uma camada gelatinosa.

Registo dos resultados

Fig.1- Extrao do DNA

Ao fim de alguns minutos , aps adicionarmos a pequena quantidade de etanol , foi possvel observar na experincia 3 camadas diferentes . A superior branca , a central transparente e a inferior verde o que indica que o trabalho experimental foi realizado corretamente. A camada gelatinosa superior onde o DNA ficou concentrado.

Interpretao dos resultados

A experincia realizada, em que o principal objectio era extrair o DNA das clulas vegetais, apresentou os resultados esperados obtendo 3 camadas diferenciadas pelo tom de cor devido s substncias adicionadas e necessrias para o nosso objectivo. O detergente teve a funo desagregar as membranas fosfolipdicas, o cloreto de sdio teve como objectivo impedir a repulso eltrica entre as molculas de DNA por ter carga positiva neutralizando a carga negativa do grupo de fosfato do DNA e permitiu a sua agregao de modo a formar filamentos mais espessos e compridos sendo assim mais visveis. A soluo foi aquecida em banho-maria a 37 C e devido adio do etanol a 5C provocou um choque trmico originando as tais formaes de bolhas de ar ajudando a elevar o ADN. Outra razo pelo DNA ter ascendido porque este insoluvl a etanol de concentrao 96%, separando assim o DNA. E como este menos denso que a gua, posicionou-se na parte duperior do filtrado.

Concluso
A nossa experincia foi bem sucedida e assim foi possvel concluir o objetivo que era observar a estrutura do DNA das clulas vegetais do kiwi e claro, compreender como funciona todo o processo e os efeitos das substncias utilizadas que permitiram fazer a extrao do DNA.

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Bibliografia
MATIAS, Osrio e MARTINS Pedro, Biologia 11Ano,Areal Editores, Porto, pp.13-23.

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