MICROBIOLOGIA

Oalmanaque
Caractersticasprincipaisdavidacelular
1. MetabolismoInteracesentrea
clulaeoambiente.

2. Reproduo (crescimento) As
Substncias qumicas do ambiente
so transformadas em novas
clulas, atravs das clulas j
existentes.

3. Diferenciao * Formao de
uma estrutura celular que
normalmente faz parte do ciclo da
vida(ex.:esporo).

*DiferenciaoeMovimentono
so propriedades comuns a todos
osmicrorganismos.

4. Comunicao As clulas
comunicameinteragematravsde
qumicos que so libertados ou
apanhados.

5. Movimento * Os organismos
vivos so capazes de se
movimentarematravsdeflagelos.

6. Evoluo As clulas tm genes e

evoluem de forma a adquirirem
novas propriedades biolgicas. As
rvores filogenticas mostram a
evoluoentreasclulas.

DesignaodosMicrorganismos
Ex.PseudomonasputidaIST21Estirpe

GneroEspcie
(Itlicoousublinhado)

Pseudomonassp.vriasespcies

ObjectivodaMicrobiologia
Entenderomodocomoosmicrorganismosfuncionam,demodoa:
Explorarosaspectosbenficossuaactividade;
Prevenir/evitarosaspectosnegativos.
2
TcnicasBsicasdaMicrobiologia

Preparaodemeiosdecultura

Acomposiodeummeiodeculturadependedaespciequesepretendecultivar.

Macronutrientes:
Carbono(~50%)
3
Oxignio(~20%)
Azoto(~14%)
Hidrognio(~8%)
Fsforo(~3%)
Enxofre(~1%)
Potssio
Magnsio
Sdio
Clcio
Ferro
Micronutrientes:
Crmio
Cobalto
Cobre
Elementos
essenciais
Mangans
Molibdnio
Niquel
Selnio
Tungstnio
Vandio
Zinco
Ferro
Vitaminasfactoresdecrescimentoessenciais.

Meiosdeculturasintticosoudefinidoscomposioqumicaconhecida.
Meiosdeculturacomplexoscomposioexactadesconhecida.Tmalgunsingredientes
comoPeptonas(fontedecarbono,deenergiaedeazoto),ExtractodeLevedura(fontede
vitaminas,carbono,azotoeminerais),ExtractodeCarne,etc.

MeioSelectivosuprimeocrescimentodedeterminadosorganismosembenefciode
outros.
MeioDiferencialpermitedistinguirmicrorganismoscombasenacapacidadede
metabolizarcomponentesespecficospresentesnomeiodeculturae/ounamorfologiadas
clulas.Permite,porvezes,aidentificaodemicrorganismoscombasenassuas
caractersticasbiolgicas.

Isolamentodeculturaspuras

TcnicadeRiscadoemmeioslido

TcnicadeEspalhamentoemmeioslido

ColniaCulturapuradeummicrorganismo.
CulturapuraCulturadeclulasgenticaemorfologicamenteidnticas.
Morfologia de colnias depende do microrganismo, mas tambm pode depender
das condies ambientai, tais como, quantidade de oxignio, nutrientes disponveis,
etc.

PostuladosdeKoch(primeirocientistaadefinir
cultura pura e a isolar colnias de bactrias em
meiosdeculturaslidos):
1. O organismo patognico suspeito devia
estarpresenteemtodososanimaisdoentes
eausentenosanimaissaudveis;
2. O organismo suspeito era cultivado em
culturapura;
3. Clulas de uma cultura pura do organismo
suspeito deviam provocar a doena no
animalsaudvel;
4. O organismo voltava a ser isolado e
mostravasequeeraigualaooriginal.
4

IsolamentodecolniaseenumeraodeUnidadesFormadorasdeColnias(UFC)
Passo1.Diluiessucessivas.

Passo2.Transferir0,1mLdecadaumadasdiluiesparaasplacasdeagar.
Passo3.EsterilizaravaretadevidroemLeespalharaamostranasuperfciedoagar.

Passo4.Incubar.
Passo5.Contarascolniasdasplacasquecontenham20300colnias.

Cultura de enriquecimento Isolamento de microrganismos pouco abundantes e com

requerimentosnutricionaisespecficos,apartirdepopulaesmistas.
10
3
10
2
10
4
Ncolniasx10x(diluio)
1
UFC/mldesuspenso(A)
Ncolniasx10
3
x(diluio)
1
UFC/100mlde
suspensodesolo/10g
6

isolamentodecolniasemmeioslido.
esentes nos ambientes naturais so
ultivveisemmeiosdeculturalaboratoriaisconhecidos.
icrorganismos nocultivveis nos meios de cultura
borat
pendentes do cultivo) para
Procuradenovasfrmulasparacultivodemicrorganismos.

Tcnicasdeasspsiaedeesterilizao
Este iz laboratrio:

co eficiente e aplicado apenas a material
Calorh
bactrias, pois
tesaocalor.
rfcies)
es)
filtrao:

(highefficiencyparticulateairfilters)
Usados
uxolaminardeseguranabiolgica;
Salaslimpas.
anutenodeclulasviveisnolaboratrio
no de clulas viveis, no
con
sdePetricontendomeioslido(diasousemanas);

Emarcascongeladoras(70
o
C);
Crescimentoemmeiosdeculturaselectivos
1enriquecimentoemmeiolquido;
2

Limitaesdastcnicasdeisolamentodecolnias
Apenas 110% dos microrganismos funcionais pr
c

Explorao das potencialidades dos m

la oriaisconhecidos
Desenvolvimento de mtodos moleculares (no de
pesquisaeidentificao(ex.:AnlisedeDNA,RNA,protenas);

ril aono
Calor:
Calor seco em estufa (pou
resistenteaaltastemperaturas);
mido(vapordeguasaturado)naautoclave.
A esterilizao na autoclave feita a 121C durante pelo menos
15minutos para assegurar a destrruio dos endsporos das
estassoasestruturasbiolgicasmaisresisten
Radiaoultravioleta(limitadaasupe
Filtrao(aplicadaalquidosegas
Esterilizaodoarpor
Mscarascirurgicas;
Rolhasdealgodonosfrascosparacultivarmicrorganismos;
FiltrosHEPA
em:
Cmarasdefl

Metodologias que permitem a manute

taminadaseinalteradasnassuaspropriedades:
Emrampasouplaca
Congelao(anos)
Emazotolquido(196
o
C);
Liofilizaodesidrataodasclulasporsublimaodeguacongelada,sob
vcuo(anos,dcadas)

Microscopia

TcnicasMicroscpicas
PoderdeResoluodoMicroscpiopticocomposto

Distnciamnimaentredois
objectos.Quantomenosodmaior
opoderderesoluo
Abertura
angular
ndicederefracodomeio
entrealminadevidroea
lentedaobjectiva
=1Ar
=1,52vidro;leode
imerso
Comprimentodeondadaluzque
incidenoobjeto

VriosTiposdeMicroscpiopticoComposto:
Microscpiodecampoclaro
Microscpiodecampoescuro
7
Microscpiodecontrastedefase
Microscpiodecontrastedeinterferncia Maiorcontraste
diferencial(DIC)
Microscpiodefluorescncia

CampoClaro Campodecontrastedefase Campoescuro

Saccharomycescerevisae
Luzvisvel
Idealpara
observarclulas
coradas
Idealparaobservarclulasvivas,nocoradas
Baixocontraste Melhorcontraste
Melhorcontraste
quecampoclaro

Contrastedefase
Contrastedeinterferncia
diferencial

Paramecium

Imagemtridimensional
colorida

Melhorresoluoque
contrastedefase

Excelenteparaobservar
clulasvivas
MicroscpiodeFluorescncia
Expeoobjectoaradiaoultravioleta,violetaouazul;
Aplicaes:
Visualizao de clulas (coradas com fluorocromos
ouautofluorescentes);
Distinoentreclulasviveis/activasemortas;
Giardiasp.
Diagnstico rpido de microrganismos especficos em
amostrasclnicas,ambientais,alimentares,etc.

Exemplo.Imunofluorescncia
O anticorpo combinado com
fluorocromo;
8
O anticorpo combinado
adicionado s clulas fixadas
sobre uma lmina e ligase aos
antignios do microrgansimo
quesepretendedetectar;
9
As clulas s quais o anticorpo se ligou fluorescem depois de serem sujeitas a
radiao.

Os anticorpos so molculas produzidas por um animal infectado (resposta

imunitria) e que tm a capacidade de se ligar aos antigneos que induziram a sua
produo.

Microscpioconfocaldelaser:
Usaluzemitidaporlaserparailuminarumplanodoobjectodecadavez;
Clulassocoradascomfluorocromo;
Imagembidimensionaloutridimensional;
Aplicaes:
Anlisedecamadasdemicrorganismosembiofilmes;
Anlisedocontedomicrobianodeamostrasexpessas,emprofundidade;
Ecologiamicrobiana.

Coloraodepreparaesdeclulas:
Aumentaocontrastedasclulasouestruturassubcelulares;
Acentuacaractersticasmorfolgicasespecficas;
Preservapreparaes;
Facilitadiagnsticodemicrorganismosespecficos(ex.:ColoraodeGram);
PassosPrincipais:
1. Fixao
Fixaoqumica(preservaestruturasubcelularfina)
Fixaoporacodocalor
2. Tratamentodapreparaocomcorantes
Coloraosimples
Colorao diferencial (mais do que um corante) divide microrganismos em grupos
combasenasuacolorao(ex.:ColoraodeGram);
Coloraodeestruturasespecficas

Microscpioelectrnicodetransmisso:
usaumfeixedeelectres;
permiteresolverestruturasmaispequenasqueomicroscpioptico;
imagembidimensional;
Aplicao:
observaodevirus;
observaodaultraestruturainternadeclulasdotipoeucariticoeprocaritico;
preparaodaamostracomplexaemorosa.

10
Microscpioelectrnicodevarrimento:
usaelectresreflectidospelasuperfciedoobjectoparaformaraimagem;
imagemtridimensional;
observao de caractersticas da superfcie de clulas e virus e estrutura de colnias,
directamentenasuperfciedetecidos,etc.

ImpactodosMicrorganismosnoambienteenasactividades
humanas
Principaisrazessubjacentesdiminuiodaincidnciadedoenasinfecciosas:
Melhor compreenso dos agentes microbianos causadores de doena e dos processos de
transmissoedesenvolvimento;
Melhoramentodasprticassanitrias;
Descobertaeusodeagentesantimicrobianos;
Descobertaeusodevacinas.
ModeloscelularesutilizadosemInvestigaoBsica:
ProcessosBiolgicos Modelos
DNAcomoasubstnciagentica
Mecanismodaexpressogentica
Batriasevrus
CdigoGentico
Viasmetablicasessenciais
Enzimasderestrio
Bactrias
Transcriptasereversa vrus
Mecanismosderesistnciaamultiplasdrogas Bactriasefungos

ActividadesbenficasnosAmbientesNaturais
Microflora natural competem com microrganismos patognicos e produzem
algunsnutrientesparaoorganismohospedeiro;
Microfloranaturalnoserhumano
Barreiradedefesacontramicrorganismospatognicos;
Participaonanutrio.
Umdesequilbrionafloramicrobiananaturalpodecausarinfecesedoenas.
Bactriasdapele:
eliminampelemorta;
11
impedemainvasoporbactriaspatognicas.
Osmicrorganismosdaepidermevariamcom:
Modificaodascondiesmeteorolgicas;
Exposioluzsolar;
Usodecosmticos;
Higienepessoal.

Decomposiodematriaorgnicamortareciclagemdenutrientesnabiosfera;
Reciclagemdenutrientesinorgnicos;
Fertilidadedosolo(fixaodeazoto,nitrificao)algumasbactriasfixamoN
2

atmosfrico e convertemno em NH
3
para ser utilizado pelas plantas. Outras
transformamNH
3
emnitrato;
Sobrevivnciadogadoeoutrosruminantesdigestodacelulose;
Controlodepestesbiopesticidasmicrobianosnaturais;
Basedascadeiasalimentareseciclosdenutrientesaquticoseterrestres;
Produodeoxigniomicrorganismosfotossintticosaquticos;
Destruiodecompostostxicosbiodegradaodecompostostxicosnaturais
eartificiais;
Alimentos
Produodebebidasfermentadas;
Produodealimentos;
Conservaodealimentoscidolctico,cidoactico,bacteriocinas,etc;
Aditivos Probiticos Microrganismos ou substncias por eles sintetizadas que
promovemasadeeocrescimento(Lactobacillussp.)
Energia/Ambiente
Produodemetanol/biocombustvel;
Produodeetanol/combustvel,solventeindustrial;
Biorremediao despoluio de solos e ambientes aquticos/marinhos,
biodegradaodehidrocarbonetosdopetrleo,pesticidas,solventes;
Tratamentobiolgicodeesgotoseguasresiduais;
Recuperao/lexiviaodeminrios
Biotecnologia
Produo de Antibiticos muitos microrganismos sintetizam compostos
qumicosqueimpedemocrescimentodeoutrosmicrorganismospatognicos;
Produodeoutrosprodutosfarmacuticospormicrorganismosgeneticamente
manipulados;
Produodeenzimas,vitaminas,aminocidos,bioinsecticidas,etc.;

AlgumasBactriasfamosas(Procariotas)
Escherichiacoli(bactrianaturaldointestino);
Cianobactria(fotossnteseoxignica);
Pseudomonassp.(biodegraodecompostosorgnicospoluentesnoambiente);
Bacillusanthracis(ANTRAX);
Lactobacillusacidophilus(fermentolcteodoiogurte);
Staphylococcusaureus(patogneohumano)

Algunsfungosfamosos(Eucariotas)
Saccharomycescerevisiae(leveduradopoedacerveja);
Cogumelos;
Fungofilamentoso(oubolor)

Algunsfungosfamosos(Eucariotas)
Papel:
sopredadoresdebactrias;
decompositoresdematriaorgnica;
parasitasemanimais;
agentes causadores de doenas
intestinais.
Exemplos:
Giardialamblia
Parameciumsp.
Amoeba

AlgumasmicroalgasFamosas(Eucariotas)
Papel:
base da cadeias cadeias alimentares
aquticasemarinhas;
oxigenaodoAmbiente;
responsveis por eutrofizao
(proliferao excessiva de algas o que leva
aumaumentodemicrorganismos);
sntesetoxinas;
produodecarotenides.
Exemplos:
Spirogyra
Volvox
Chlorella
Diatomceas (indicadores da qualidade
daguapresenadepoluio)

12
Introduoclassificaodemicrorganismos

Sistemados5Reinos

13

Interpretaodarvorefilogenticauniversal

Aspectosevolutivosreveladosporestaabordagem:
As espcies dos domnios Bacteria, Archaea e Eukarya divergiram de um organismo
ancestralnoinciodahistriadaTerra;
Os microrganismos procariotas evoluiram separadamente formando os domnios
BacteriaeArchaea;
Espcies do domnio Archaea esto mais prximas filogeneticamente dos eucariotas
doquedeespciesdeBacteria;
Clulas eucariticas contm genes dos domnios Eukarya e Bacteria. A sequenciao
do rRNA das mitocndrias e cloroplastos revelou que eles derivam de linhagens
especficasdeclulasdotipoBacteria, queoutrorateroestabelecidoendosimbioses
estveis com outras clulas e evoluido formando clulas do tipo eucaritico (Teoria
Endossimbitica).

Seresvivosdivididosportrsdomnios:
Eukarya:
Microrganismos:protozorios,microalgas,fungos;
Organismossuperiores:animais,plantas,algasmulticelulares;
Archaea:
Maiorpartedasbactriasextremfilas;
Bactriasprodutorasdegsmetano.
Bacteria
Todasasoutrasbactrias.

14

MicrorganismosProcariotas

Formasetamanhosdasclulasdotipoprocaritico

Clulasprocaritica

Paredecelulardeprocariotasextruturarigidasituadaexternamentemembrana
plasmtica.Temcomofunes:
Darformaeintegridadeclula;
Protegeracluladaliseosmtica;
Contribuirparaapatogenicidadedealgumasbactrias;
Protegeracluladesubstnciastxicas.
Aparedecelulareaprotecoosmtica
Osmose:movimentodeguaatravsdeumamembranaselectivamentepermevel,de
soluesdiludasparamaisconcentradas.
15
Asclulasestogeralmenteemsolueshipotnicas:[soluto]
foradaclula
<[soluto]
dentrodaclula

16
Aparedecelularprotegecontraaliseosmtica
lulasestoemsolueshipotnicas;

Aparedecelularnoprotegecontraaplasmlise
ndoasclulasestoemsolueshipertnicas.
aqueresultaemperda
Asbactriasdividemseemdoisgruposcombasenaestruturaecomposioda
arede gram

LiseOsmtica:Podeocorrerquandoasc
Omovimentodeguaparaointeriordasclulascausaaumentodevolumeque
culminanalisedaclula,devidodiferenadepressoosmtica.
Plasmlise
Ocorrequa
Aguasaidaclulacausandooencolhimentodocitoplasm
deviabilidadedaclula.
p celular:bactriasGrampositivaseGramnegativas.Asbactriasgrampositivase
negativasdistinguemsecombasenarespostacoloraodeGram.

Liseosmtica
Aliseosmticaorompimentodamembranacelulareocorreporacodalisoenzima(hidrliseda
ligao14nopeptidoglicano)oudoantibiticopenicilina(queinibeasntesedomesmo).

Porsuspensodasclulasemmeioisotnicoouligeiramentehipertnicoetratamentocompenicilina
podemobterse:
o Protoplastossoclulassemparedecelular(obtmseapartirdeGrampositivas);
o Esferoplastossoclulassempeptidoglicano,mascommembrana(obtmseapartirdeGram
negativas)
Tantoosprotoplastoscomoosesferoplastossosensveisamodificaesdapressoosmticadomeio
extracelular,porquequandosuspensosemmeioshipotnicos(diludos)sofremlisedevidoentrada
descontroladadegua.
NasbactriasdodomnioArchaea(Arqueobactrias)(ex:
Methanobacterium),ocomponenteprincipaldaparedecelular
oPseudopeptidoglicano:
Monmero:
Aucares: Nacetilglucosamida;
Nacetiltalosaminurnico
Ligaesglicosdicas:13INSENSVEISLISE
Ponteentrecadeias:resduodeglutamato
ParedecelulardeBactriasGrampositivas:
Aparedecelulardestetipodebactrias
contmessencialmentepeptidoglicanoe
cidosteiicos:estesltimossopolmeros
deglicerolouribitolligadosporgrupos
fosfato,quepodemteracaresouD
17
alaninaligadoseconferemcarganegativasuperfciecelular,permitindoligarcatiesdivalentes.
ParedecelulardeBactriasGramnegativas
Aparededestetipodebactriasconsistenumafinacamadadepeptidoglicano,rodeadaporuma
membranaexterna
compostaporlpidos,
lipoprotenase
lipopolissacridos(LPS).As
caractersticasdaparede
so:
o AsLipoprotenasde
Braunligam
fortementea
membranaexternaaopeptidoglicano;
o Oslocaisdeadesosolocaisdecontactodirectoentreamembranaplasmticaeamembrana
externa,permitindoasadaeentradadirectamentenesteslocais;
o Amembranaexternamaispermevelqueaplasmticadevidopresenadeporinaseprotenas
transportadoras;
o Asporinasformamcanaisatravsdosquaispequenasmolculassocapazesdepassar.

OLipopolissacrido(LPS):

ImportnciadoLPS
AntignioO Protecocontraasdefesasdohospedeiro
Regiocentral
Hidrfila
Contribuiparaacarganegativadasuperfcie
daclula
LpidoA
Hidrfobo
1. Ajudaaestabilizaraestruturada
membranaexterna;
2. Podeserumaendotoxinaquecausa
infecessintomasnohospedeiro

18

Citoplasma
Encontraseentreamembranaeonucleideeumaestrutura
organizadanoquerespeitalocalizaodeprotenas
Ribossomas
o ConstitudosporprotenaseRNA;
o Localdasntesedeprotenas;
o Maispequenos(70S)queosdoseucariotas(80S)S:unidadeSvedburg
(sedimentao)
Nucleide
o Regiocomformairregular;
o Localizaodocromossoma:
o MolculadeDNAcadeiadupla,geralmentecircular
o Tamanhovarivelentre0,5e10Mpb(10
6
paresdebases)
o Umacpiaporclula(normalmente)
o 90%dogenomadeE.colicodificaparaprotenas
Plasmdeos
o PequenasmolculasdeDNAemcadeiadupla
o Existemereplicamseindependentementedocromossoma
o Nosonecessriosparaocrescimentoereproduodaclula
o Podemcontergenesqueconferemvantagemselectivasclulasqueos
albergam(ex.:resistnciaadrogas,transformaoe/oudegradaode
compostostxicos
CorposdeIncluso
o Grnulosdemateriaisorgnicosouinorgnicosproduzidospelaclula
o Frequentementeusadoscomomateriaisdereserva(ex.:paraenergiae
biossntese)
o Quantidadedependedoestadonutricionaldaclula
GrnulosOrgnicos(reservadecarbonoeenergia):
o Glicognio(polmerodeglucose)ex.:BactriasE.coli,Salmonella,
Bacillus,tambmemfungos
o Amido(polmerodeGlucose:amilose,amilopectina)ex.:gneros
Clostridium,Acetobacter
o Granulaeslipdicasdepolihidroxibutirato(PHB)(polmerode
hidroxibutirato.ex.:gnerosAlcaligenes,Bacillus
19
GrnulosInorgnicos:
o Polifosfato:Grnulosdevolutina(polmeroslinearesdeortofosfato(ex.:
Spirillumvolutens):reservadefsforoparaasntesedecidosnucleicos
efosfolpidos;
o Enxofre:materialdereservaenergticaembactriasqueoxidam
compostosdeenxofrereduzidos(comooH
2
S)eacumulam
temporariamenteS
0

Vacolosgasosos
o Agregadosdevriasestruturascilndricasocas
o Presentesembactriasaquticas(ex.:cianobactrias,bactriasprpurae
verdesealgumasbactriasaquticasnofotossintticas;
o Permitemregularaprofundidadeaquevivem(capacidadeparaflutuar
consoanteasnecessidadesdeluminosidade)
Magnetossomas

o Contmferrosobaformademagnetite(Fe
3
O
4
);
o Sousadosparaorientarasclulasnocampomagnticoterrestre
(magnetotaxia)
o Algumasespciesdebactriasaquticasex.:Aquaspirillummagnetotacticum
Componentesexterioresparedecelular
Cpsula:umacamadaformada,geralmente,porpolissacridos,exteriorparedecelular,dificilmente
removidapelaclulaeobservvelnomicroscpioptico,porcoloraonegativa.Assuasfunesso:
o Favoreceraadesoasuperfcies;
o Protegerdecondiesambientaisdesfavorveis(ex.:desidratao);
o Protegerdasdefesasdohospedeiroqueinfecta(ex.:fagocitose)
o Protegerdeinfecesporvrus;
o Protegerdostressosmtico
Fmbrias:(setavermelha)apndicespequenosefinos,constitudosporprotenas(at1000/clula)que
medeiamaadesoasuperfcies(porex.:reconhecemreceptoresnasclulasdostecidosquecolonizam
einfectam).
Pilussexual:(setaazul)semelhantessfmbrias,masmais
grossosemenosnumerosos(110/clula)esonecessriospara
aconjugaoentrebactrias(transfernciadeplasmdeose
cromossomas)
20
Flagelos:permitemalocomoodasclulas:
1. Monotrquicoepolar:1flagelonumaextremidadecelular
2. Peritrquico:vriosflagelosvoltadetodaasuperfciedaclula
3. Lofotrquico:tufosdevriosflagelosnumaouemambasasextremidades
dasclulas
Oflagelorodacomoumaventoinhanosentidooucontraomovimentodosponteirosdorelgio.
constitudoportrspartes:
1. Filamento:cilindrorgidoeoco,
compostoporsubunidadesproteicas
flagelina;
2. Gancho:ligaofilamentoaocorpo
basal;
3. Corpobasal:sriedeanisque
provocamomovimentoflagelar
Quimiotaxia:movimentonadireco
deumcompostoqumicoatractivooupara
longedeumrepelente:aconcentraodestescompostosdetectadaporquimioreceptoresexistentes
nasuperfciedasclulas.umprocessocomplexo,masrpido(asrespostasocorrememmenosde20
milissegundos),eenvolveaalteraoconformacionaldeprotenas.
Endsporobacteriano
umaestruturadormente(notemactividademetablica),produzida(processochamado
ESPORULAOverfigura)porcertasbactriasGrampositivas(ex.:gnerosBacillus,Clostridium,
Sporosarcina,Sporolactobacillus,etc.)quandosujeitasacondiesambientaisextremas:ausnciade
nutrientes,desidratao,etc.,equeresisteaagressesambientais(calor,radiaoUV,desinfectantes
qumicos).Aformadoesporoelocalizaonaclulatemvalortaxionmico:podeserterminal,
subterminaloucentral.Oenvlucrodoesporoconstitudoporvriascamadasdeprotenas:
impermeveleresponsvelpelaresistnciaentradadecompostosqumicos.Oncleocontm
algumasestruturascelularesdaclulavegetativa,comoribossomasecidosnucleicos.Oconstituinte
principaldoendsporoodipicolinatodeclcio(complexoformadoentreocidodipicolnicoeies
clcio).
Oquetornaoendsporotoresistente:
1. oscomplexosdeclciocomcidodipicolnicointercaladosnasbasesdoDNA,estabilizandoo;
21
2. adesidrataodointeriordoendsporoinactivandoenzimas(ausnciadeactividade
metablica);
3. camadaespessaaprotegerointerior;
4. ricoemenzimasdereparaodoDNA
Germinaodosendsporos:
1. Oendsporoabsorveguaeincha;
2. ocidodipicolnicoexcretado;
3. iniciaseasntesedemacromolculas;
4. iniciaseaactividadeenzimticaemetablica;
5. protoplastodoendsporosintetizacomponentesnovos,emergedoenvlucroeentraemciclo
devidavegetativo.
Agerminaoinibidaemambientescidos(aplicaonaconservaodealimentos)

Estruturadoendsporo Esporognese

22
ClulasEucariticas
Ncleo
o Estruturarodeadaporumamembranaequealbergatodoomaterial
gentico:
MembranaNuclear:
o constitudaporumamembranaexternaeoutrainternaquedelimitam
oncleo;
o atravessadaporporosnuclearesquepermitemotransportede
molculasparadentroeforadoncleo
Nuclolo:
o Podehavermaisque1nuclolo/ncleo;
o Notemmembrana;
o Localdefabricodosribossomas,snteseeprocessamentoderRNA
Ribossomas
o 80S(subunidades60S+40S);
o Podemestarligadosaoretculoendoplasmticooulivresnocitoplasma;
o ConstitudosporprotenaseRNA;
o Localdesntesedeprotenas
RetculoEndoplasmtico(RE)

o Redeirregulardetbulosesacos(cisterna)envolvidosporumamembrana
o ExistecontinuidadeentreamembranaexternaeoRE
o Maiororganelo
o Sntese/transportedeprotenas(ex:membranares,excretadas,),lpidose
outrosmateriaisdentrodaclulaeparaamembranaplasmtica
o Localdesntesedemembranaslipdicas;
o Sntesedosconstituintesdoslisossomas
RErugoso(granulado):
o Contmribossomasligadosnasuafaceexterna;
o Envolvidonoprocessamentoetransportedeprotenasquevoser
localizadasnamembranaplasmtica(ex:protenastransmembranares,
protenasenvolvidasnotransportedesolutos)ouquevoserexcretadas
paraforadaclula(ex:enzimasextracelulares).
REliso(nogranulado):
o Nocontmribossomas;
o Sntesedelpidoscomponentesdasmembranasbiolgicas(ex:
23
fosfolpidos,esteridies(colesterolanimais;ergosterolfungos)
ComplexodeGolgi

o Organelomembranarconstitudoporsacosempilhadosunssobreosoutros
(cisternae);
o umafbricaondeprotenaselpidosrecebidosdoREsoprocessadose
transportadosaosseuslocaisdedestino
o Glicosilaodeprotenas
o Sntesedeesfingomielinaeglicolpidos;
o Sntesedehemiceluloseepectinaemplantas
Lisossomas

o Sovesculasmembranaresquecontmenzimashidrolticasnecessrias
paraadigestodemacromolculas(protenas,lpidos,polissacridos,cidos
nucleicos);
o OpHdolmencidoemantidoatravsdeumabombadeprotes(H
+

paradentrodolisossomaportransporteactivoprimrio),comhidrlisede
ATP;
o Realizaadigestointracelulardemacromolculaseorganelosno
funcionais;
o Permiteareciclagemdemolculasparanovabiossntese;
o Defesadohospedeiroinfectado;
o Aquisiodenutrientes(endocitoseentradanaclulademolculasvindas
doexterior,atravsdaformaodevesculascomorigemnamembrana
plasmtica
Mitocndria

o Organeloquesepensaterresultadodeumprocessodeendosimbiose.Asua
principalfunoproduzirenergia:olocalondeserealizamasreacesdo
ciclodoscidostricarboxlicos(cicloTCA)oxidaodeacetilCoAaCO
2
,
comformaodeNADHeFADH
2
.(fontesdeacetilCoA:piruvato
provenientedagliclise,ecidosgordos,importadosdocitoplasma;
o LocalondegeradoATP,emresultadodotransporteelectrnicoe
fosforilaooxidativa;
o Presenteemclulasdeprotozorios,fungoseemorganismossuperiores
Matriz:
o DNA(molculacircularfechada).Vriascpiaspororganelo.Osseus
genescodificamparaprotenasenvolvidasnotransporteelectrnicoe
nasreacesdefosforilaooxidativaepararRNAealgunstRNA
o Ribossomas(70S)
o EnzimasenvolvidasnaoxidaodecidosgordosaacetilCoAenociclo
24
TCA
Membranainterna:
o Contmacadeiadetransportedeelectres:catalizaatransfernciade
electresdoNADHeFADH
2
geradosnocicloTCA,paraooxignio
molecular,gerandoumgradientedeprotesatravsdamembrana;
o ContmaenzimaF0F1:usaaenergiapotencialdogradiente
transmembranarparacatalisarasntesedeATPapartirdeADP
Peroxissomas
o Pequenosorganelosrodeadosporumamembranalocalizadosno
citoplasma.Podemexistiremgrandenmero.
o Contmenzimasenvolvidasemvriasreacesmetablicas
o Oxidaodecidosgordos:fonteimportantedeenergiametablicapara
vriosorganismos(emclulasanimaisocorreemperoxissomasenas
mitocndrias;emleveduraseplantasocorremaioritariamentenos
peroxissomas
o Levamacaboreacesdeoxidaodediversoscompostos(cidosgordos,
cidorico,aminocidos,porinas)intracelulares,conduzindoproduode
perxidodehidrognio(H
2
O
2
).Estetxicoedecompostopelaenzima
catalase.
o Emclulasanimaisparticipamnaabsoroedigestodegorduraseesto
tambmenvolvidosnasntesedecolesterol(porexemplo,abundantesnas
clulasdofgadoerins)
Cloroplasto

o Organeloquesepensaterresultadodeumprocessodeendosimbiose;
encontraseemplantasealgas;
o Localondeserealizaafotossntese
Membranastilacides(grana):
o Localondeseencontraaclorofilaeoscomponentesdacadeiade
transporteelectrnico,envolvidosnasreacesluminosasda
fotossntese:captaodeluzparagerarenergianaformadeATPeNAPH
eformaodeO
2

Matriz(estroma):
o DNA(molculacircularfechada)
o Ribossomas(70S)
o Enzimasenvolvidasnasreacesdafaseescuradafotossntese:fixao
deCO
2
comformaodehidratosdecarbono
25
Citoplasma
o Localondeseencontramtodososorganeloseresponsvelpelaformae
movimentocelular.Contmocitoesqueleto:rededemicrofilamentos,
microtbulosefilamentosintermdios.
Microfilamentos:
o Estruturasflexveisformadaspalapolimerizaodemonmerosde
actina,formandoumaestruturaemhlice
Microtbulos:
o Cilindrosocosergidoscompostosportubulina,queparticipamno
transporteintracelulardesubstncias,eestoenvolvidosnomovimento
deorganelos.Participamnaformadaclula.Estoancoradosnos
centrossomaseparticipamnainterfase(estendemseparaaperiferia
ondeservemdetrilhosparaotransportedeorganelos)enamitose
(formamofusomitticoassegurandoaseparaoequitativados
cromossomaspalasduasclulasfilhas
ClioseFlagelos

o Ambosservemparalocomooetmorigememmicrotbulos
o Oscliosfuncionamcomoremoseosflagelostmmovimentoondulante
ParedeCelular
o Coberturargidadecomposiovarivel;emmuitoscasososcomponentes
principaissopolissacridos:Microalgas(celuloseepectina);Fungos
(quitina,celuloseeglucan).Excepo:Diatomceas(slica).
o AquitinaumpolissacridoinsolvelcompostoporunidadesdeN
acetilglucosamina.Pensasequeaquitinatenhapotencialparasubstituir
futuramentealgunsprodutosdeplstico,comavantagemdeser
biodegradvel,equepossaserutilizadanaconstruocivilcomomaterialde
extremaresistnciapresso.Ataomomentoaindanofoipossvela
snteseinvitro

Exemplosdemicrorganismoseucariotas:Fungos(leveduras,fungosmiceliaisoufilamentosos),
Protozorios,Microalgas.

26

MembranasBiolgicasComposioeestrutura
o Amembranaplasmticaconstitudapor
lpidoseprotenas:oslpidosformamuma
bicamadaeasprotenasestoembebidasou
associadasaoslpidos.
o umaestruturaorganizada,flexvele
dinmica,estabilizadaporligaesdeHepor
interaceshidrofbicas(entreoslpidoseasprotenasdenaturezaanfiptica).
o umabarreiraselectivamentepermevelacompostosqumicos.

Osfosfolpidossomolculasanfipticas(tmuma
regiohidroflica/polareumahidrofbica/apolar).A
atracoentreasregiesnopolaresdoscidos
gordosdasduascamadasdefosfolpidoscontribui
paraapermeabilidadeselectivadamembrana.
27
28

Diferenasentreosfosfolpidosdostrsdomnios:
BactriaeEukarya Archaea
R cidogordo
Cadeialateralalifticaoisopropenoa
unidaderepetida
TipodeLigao LigaoSTERentregliceroleR LigaoTERentregliceroleR

o LpidoseestruturasdamembranadebactriasdodomnioArchaea:
Amonocamadalipdica/bifitanilobastanteresistenteeencontradaemalgumasespcies(ex.bactrias
hipertermoflicasdodomnioArchaea.Ofitaniloumacadeiaalifticaramificadacompostapor
unidadesrepetidasdohidrocarbonetoisopropeno(C5).

o Outroslpidosmembranares.Esteslpidosconferem
algumarigidezeestabilidadesmembranasdevido
suaestruturaplanarrgida
o Esterides,comooergosterol(fungos)ouo
colesterol(animais),existememmembranas
deeucariotas;
o Hopanidesexistememmembranasde
procariotas

EstruturadasmembranasbiolgicasModelodomosaicofluido

Asprotenasmembranarespodemser:
o Protenasperifricas:fracamenteassociadasmembranaefceisderemover;
o Protenasintegrais:embebidasnasmembranasedifceisderemover.
29
Reparar:Aunidadedasmembranassemelhanteembactrias,outrosmicrorganismos,animaise
plantas.
Funesprincipaisdamembranaplasmtica
1. Barreirapermevel:previneperdademetabolitosessenciaisecontrolaaentradadenutrientes
esadadesolutos(ex.compostotxicos):algumaspassamlivrementeatravsdamembrana,
outrasnecessitamdetransportemediadooucatalizadoporpermeases(protenas
transportadoraslocalizadasnamembrana);
2. Localderealizaodeprocessosmetablicosessenciais,comootransportedeelectresea
fosforilaooxidativa;
3. Ondeestolocalizadasmolculasreceptorasenvolvidasnadetecoerespostaaestmulosdo
meioambiente;
4. Conservaodeenergia:localdegeraoeusodogradientedeprotes;
5. ncoradeprotenas:localizaodeprotenasenvolvidasnotransporte,bioenergticae
quimiotaxia.
Transportedesolutosatravsdamembrana
o Apermeabilidadedabicamadafosfolipdicadependedanaturezaqumicadasmolculasemcausa;
o impermevelmaiorpartedosnutrientesesolutosessenciais;
o Tembaixapermeabilidadeaiesoumolculaspolaresoucomcargaelctrica
Tiposdetransportemembranar:
1. Transportenomediado/Difusosimplesoupassiva;
o Movimentonoespecficodasmolculasdeumsolutoatravs
damembrana;
o Ocorreafavordogradientedeconcentrao;
o Aentradadsepordissoluodasmolculasnafaselipdicada
membrana=>quantomaispequena(gua,etanol,gases)e/ou
lipossolvel(hidrocarbonetos(dopetrleo),compostosaromticos,compostos
organoclorados(pesticidas,solventesorgnicos))foramolcula,maisfacilmenteentra;
o Alipossolubilidadedosolutopodeseravaliadacombasenamediaodocoeficientede
partionoctanol/gua(K
OW
ouP):

Ovalordestecoeficienteumamedidadabiodisponibilidadedeumcompostoparaos
organismosexpostosaessecomposto:permitepreveracapacidadedebioconcentraoe
bioacumulaodoscompostosemclulasdetecidosdeanimaisoudeplantas=>
determinaograudetoxicidadedocomposto
Coeficiente de Hansch = log P = log ([X]
fase octanol
)/[X]
fase aquosa
)

30

2. Transportemediado/catalizadoporprotenastransportadorasoupermeasesou"carriers"
2.1.Difusofacilitada
o semelhantedifusopassivanadirecodomovimento(tambmafavordo
gradientedeconcentrao),navelocidadedetransporte(tambmfunodo
gradientedeconcentrao)eomovimentodosolutonodependedo
fornecimentodeenergia;
o Asdiferenassoquerecorreaprotenastransportadoras(permeases/"carrier")
quesofremmodificaoconformacional;bastahaverumpequenogradientede
concentraoparaqueasmolculasentrem;
o Emmuitosorganismosserveparatransportarglicerol,acares,eaminocidos;
o Avelocidadedetransportedeumsolutoaumentamaisrapidamenteabaixas
concentraesdosoluto.Estadifusoatingeumvalormximoquandoo
transportadoratingeasaturaovelocidademximadetransporte

Difusofacilitada(compermeases)
Velocidadedetransporteemfunodogradiente
deconcentraoparaadifusopassivaedifuso
facilitada

2.2.Transporteactivo
o Envolvepermeases=>humacinticadesaturao;
o Processodependedeenergiaobtidaporhidrlisedeumaoumaismolculasde
ATP(sistemasdetransporteactivoprimrio);porgeraodeumgradiente
electroqumicodeies(H
+
,Na
+
,K
+
)(sistemasdetransporteactivosecundrio);
31
o Movimentocontraogradientedeconcentrao=>asmolculassoconcentradas
nointeriordaclula=>umprocessoacumulativo,permitindoassegurartaxas
metablicaselevadas;
o Ossistemasdetransporteactivo
primrio,porexemplo,transportadores
dotipoABC,existemembactriasdos
domniosArchaeaeBacteriaeem
eucariotas,existindoalgunsque
transportamparaforadaclula
(responsveispelaresistnciaacertos
antibiticos.EmbactriasGram
negativasenvolveacaptaoinicialdamolculadenutrienteporumaprotena
periplasmtica
o Existemtrstiposdetransporteactivosecundrio:Uniporte,Antiportee
Simporte

Segueseumexemplodetransporteactivoembactrias:
32

1. Os protes so expelidos no transporte electrnico

=> Formao de um gradiente electroqumico de
protes
2. Antiporte Na
+
/H
+
para formao de gradiente
electroqumico de Na
+
3. O sdio liga-se permease
4. A forma do local de ligao do soluto modifica-se e o
soluto (acar, aminocido)
5. A conformao da permease altera-se para que o
sdio entre na clula, o que seguido da dissociao da
molcula de soluto da protena (mecanismo de
Simporte)
Translocaoporgrupo
o Asmolculassomodificadasquimicamenteduranteotransporte;
o Processodependedeenergia
o OsistemaPTS(fosfoenolpiruvatofosfotransferase)embactrias,paratransporte
deglucose,envolveatransfernciasequencialdefosfatodofosfoenolpiruvato
(PEPmetabolitodagliclise)atravsdeumsistemadeprotenasintermedirias.
Altima(EnzimaIIc)transportaefosforilaumamolculadeglucoseparao
interiordaclula

Caractersticasgeraisdossistemasdetransportemediadosporprotenas:
o CinticadesaturaotipoMichaelisMenten:velocidademximaeKsconstantede
afinidadedapermeaseparaosoluto;
33
o Especificidade:emgeral,apermeaseespecficaparaumnutrienteougrupode
substratosquimicamenterelacionados;
o Induo:sntesedepermeaseinduzidapelapresenadosubstratonomeioextracelular

CinticadotipoMichaelisMenten
Reparar:Asclulasnecessitamfrequentementedetransportarsolutosaelevadasvelocidadesatravs
damembranademodoacobrirassuasnecessidadesmetablicasdecrescimento.Talobtidoatravs
deumagrandediversidadedesistemasdetransportedesolutos.

Transportedeferro:
o Oiofrrico,Fe3+,tembaixasolubilidadeemmeioaquosoeest,porisso,pouco
disponvelparasertransportadoparaointeriordaclula;
o Osmicrorganismosproduzemeexcretamsiderforosparacaptaressesiespor
complexao.
Siderforos:
o Molculasdebaixopesomolecular;
o Sintetizadaseexcretadasporbactriasefungosquandoaconcentraodeferronomeio
baixa;
o Ocomplexoqueformacomoiofrricoposteriormentereconhecidoporprotenas
receptorasespecficasetransportadoparaointeriordaclula;
o Soimportantesfactoresdevirulncia.

34
35
CategoriasNutricionaisdosmicrorganismos

Fontedecarbono
CO
2
Autotrofismo
CompostosOrgnicos Heterotrofismo
Fontedeenergia
Sol Fototrofismo
Compostos
orgnicos
reduzidos
Quimioorganotrofismo
Compostos
inorgnicos
reduzidos
Quimiolitotrofismo

Adiversidademicrobianaresulta,emgrandeparte,dadiversidademetablicadosmicrorganismos,em
particulardasdiversasestratgiasparasintetizarATP(BIOENERGTICA)queosmicrorganismos
apresentam.

Noesquecer:Catabolismo=Produodeenergia;Anabolismo=consumodeenergia

Relaodosmicrorganismoscomooxignio
Grupo RelaocomO
2
Tipodemetabolismo
Aerbioobrigatrio Necessrio Respiraoaerbica
Aerbiofacultativo Nonecessrio,masprefervel Respiraoaerbicae
anaerbicaefermentao
Microaeroflico Necessrioemnveismaisbaixo
queosatmosfricos
Respiraoaerbica
Anaerbioaerotolerante Nonecessrio,prefervelCO
2
Fermentao
Anaerbioobrigatrio Prejudicaoumata Fermentaoourespirao
anaerbica

o Oxignioestresseoxidativo:Asespciesreactivasformadasnacadeiadetransporte
electrnico(aniosuperxido,perxidodehidrognioeradicalhidroxilo)soextremamente
txicasparaasclulascausando,porexemplo,aoxidaodemacromolculas(protenas,
cidosnucleicos)ealteraesnoslpidosdasmembranascelulares(reduodacapacidadeda
bicamadalipdicacomobarreiradepermeabilidadeasolutos),etc.

o Apesardeexistiremenzimasquedestroemasespciestxicas,comoacatalase,peroxidase,
superxidodismutaseouaacocombinadadelas,nemtodososorganismosestoprotegidos.
MetabolismoQuimioorganotrfico(Protozorios,fungosemaiorpartedasbactriasfotossintticas):
Aobtenodeenergiadseapartirdecompostosorgnicose,apartirdestes,podeocorrerrespirao
aerbica,respiraoanaerbicaoufermentao.Aproduodeaceitadoresdeelectresconduz
sntesedeATPporfosforilao.Umdosprodutosprincipaisodixidodecarbono.Pelofluxode
carbonosintetizamsenovasmolculas:biossntese.Noesquecerqueaconservaodeenergia,na
respirao,sednamembranaplasmtica(pelafosforilaooxidativa),enafermentaopela
fosforilaooxidativaaonveldosubstrato.

EXTRA:RevisodeconceitosdeBioqumica
Respirao:oxidaocompletadecompostosorgnicos,comutilizaodeumaceitadordeelectres
externo(exgeno)paracontrabalanarreacesdeoxidaoreduousadasparagerarATP.Amaior
partedoATPformadaporfosforilaooxidativacombasenumgradienteprotnico(foraH
+
motriz)
estabelecidoatravsdemembranas(membranaplasmticaemprocariotasoumembranainternada
36
37
mitocndriaemeucariotas).Quantonaturezadosaceitadoresfinaisdeelectres,soconhecidos2
situaesgenricas:
1.Respiraoaerbia
OxigniocomoaceitadorfinaldeelectresnaCadeiadeTransportedeElectresmembranar.A
transfernciadeelectresdeNADHeFADH
2
paraoO
2
atravsdoscomponentesdacadeiade
transportedeelectresconduzaoestabelecimentodoGradientetransmembranardeProtes
(foraH
+
motriz).EstegradienteaforamotrizparaasntesedeATPpelaATPase(ouATPsintase).
OO
2
reduzidoaH
2
O.Esteprocessorendegrandesquantidadesdeenergia.
2.Respiraoanaerbia
Compostosinorgnicos,taiscomonitrato,sulfato,dixidodeCarbono(oucarbonato),etc.so
aceitadoresfinaisdeelectresnaCadeiadeTransportedeElectresqueestabeleceoGradiente
transmembranardeProtes(foraH
+
motriz)parasntesedeATP.Nessesprocessos,oscompostos
inorgnicossoreduzidos.Presenteembactrias.
Fermentao:ocorrefrequentementeemcondiesanaerbias(ausnciadeO
2
).Osubstratoorgnico
sofreoxidaoparcial.Norequerumaceitadordeelectresexternooequilbriodereacesde
oxidaoreduoobtidocombaseemmetabolitosintermedirios(endgenos)resultantesda
oxidaodamolculadesubstratoorgnico(porexemplo,nagliclise).ATPsintetizadopor
fosforilaoanveldosubstrato.Encontramosdiferentesviasfermentativasemdiferentes
microrganismos(eucariotasouprocariotas),asquaisrendemdiferentesprodutosfinais.Orendimento
energticoparaaclulamaisbaixoqueodarespirao.

Passosprincipaisdocatabolismoaerbionumorganismoquimiorganoheterotrfico:

5. Sntese de ATP, por fosforilao oxidativa. O

2
o aceitador
final de electres na cadeia respiratria
4. As linhas a tracejado mostram os fluxos de electres
(transportados por NADH e FADH
2
) para a Cadeia de
Transporte de Electres
3. Posio central do ciclo TCA
2. Fontes de energia diferentes so canalizadas para vias
degradativas comuns
1. Hidrlise das macromolculas disponveis no Ambiente
(por bactrias, fungos, protozorios, produtores de enzimas
hidrolticas)

RespiraoAnaerbia
CommolculasquesejammelhoresdadorasdeelectrescomooCH
3
COO

,oCH
4
eoHS

,ocorre
acetognese(bactriasacetognicas),metanognese(bactriasmetanognicas)ereduodosulfato
(bactriassulfatoredutoras),respectivamente.Todasestasbactriassoanaerbicasobrigatrias.
Nota:H
2
Stxico.
Commelhoresaceitadoresdeelectres,comooNO
2
,N
2
OouN
2
ocorredesnitrificao(bactrias
desnitrificantesaerbiasfacultativas).
Arespiraoanaerbiausaoutrosaceitadoresdeelectres(semseroO
2
),permitindoarespiraode
bactriasespecficasemambientesondeoO
2
estausente(elevadaimportnciaecolgica);geralmente
orendimentoenergticomaisbaixo(quenarespiraoaerbia),porqueopotencialredutordo
aceitadordeelectresmenospositivodoqueodoO
2
.

Fermentao
o usado,frequentemente,opiruvatoouderivado(provenientedagliclise)comoaceitadorde
electresendgeno;
o OATPformadoporoxidaoanveldosubstrato;
o Apenasumapequenapartedocompostoorgnicousadaparabiossntese;
o Soproduzidosdiferentesprodutosparadiferentesfermentaes(cidos,lcoois,lactato,etc.)
38
39

MetabolismoQuimiolitotrfico
o Obtenodeenergiaapartirdaoxidaodecompostosinorgnicosdadoresdeelectres;
o Tmelevadaimportnciaecolgica(nosciclosbiogeoqumicosdoselementos);
o Amaiorparterealizarespiraoaerbia;mas,algumassoanaerbias(aceitadoresfinaisde
electrespodemseronitratoouosulfato);
o ATPsintetizadoporfosforilaooxidativa;
o Oselectressolibertadosdirectamentedocompostoinorgnicoreduzidoparaos
componentesdaCadeiadeTransportedeElectreslocalizadanamembranaplasmtica,e
transferidosparaaceitadorfinal,quesofrereduo.
o Orendimentoenergticobaixo.

Tipode
Quimiolitotrofismo
Bactrias Dadordeelectres Aceitadordeelectres
OxidaodeH
2
Bactriasdohidrognio H
2
O
2
Nitrificao Bactriasnitrificantes NO
2
,NH
4+
O
2
Oxidaodeenxofre
(exemplodeum
metabolismo
quimiolitotrfico
anaerbico)
Bactriasdoenxofre S
0
,H
2
S NO
3
Oxidaodeferro Bactriasdoferro Fe
2+
,S
0
,H
2
S O
2

Origemdasfontesdeenergia:
o Actividadevulcnica(H
2
S);
o Agricultura(Amnia;nitrito)
o Actividadesmineiras(Fe
2+
)
o Queimadecombustveisfsseiselixo(H
2
S;NH
3
)
o Biolgicasdecomposiomicrobianadematriaorgnica(porexemplo,H
2
S;NH
3
;H
2
)

FluxodeelectresnaCadeiadeTransportedeElectresdeumaBactriaNitrificante
1.Oxidasenitritoanitrato,eocorretransportedeelectresnosentidonormal,demodoagerar
gradienteelectroqumicodeprotestransmembranar(foraH
+
motriz)paraasntesedeATPpor
fosforilaooxidativa.
2.UmapartedaforaH
+
motrizestabelecidanaCadeiadetransportedeElectresdirectausada
paraforarofluxodeelectresnosentidoinversocadeiadetransportedeelectresinversa
(contraogradientedepotencialdereduo)donitritoparaNAD
+
,demodoagerarNADH(fonte
deelectresparafixaodeCO
2
ciclodeCalvin).

40
41
Importante:Tambmosfototrficospodemusarcomofontedecarbonoodixidodecarbono
(fotoautotrficos)oucompostosorgnicos(fotohetrotrficos).

Nanatureza,algunsmicrorganismosmudamometabolismo,dependendodosrecursosquetm
disponveis.

Fotossntese

Afotossntesepodeseranoxignica(opoderredutorformadoapartirdeH
2
S,SouH
2
,dependendo
daespciebacteriana),embactriasprpuraverde,ouoxignica(aluzcaptadatambmusadana
fotlisedagua,gerandoO
2
epoderredutor,necessrioparaafixaodoCO
2
),emmicroalgas,
cianobactriaseplantas.Emambas,aobtenodeenergiaapartirdaluz,masafotossntese
anoxignicadsenaausnciadeoxignio.

Isolamentodemicrorganismosapartirdoambientenatural
Factoresimportantes:
1.Inculo(fontedosmicrorganismos);
2.Composiomeiodecultura;
3.Condiesambientais(oxignio;Temperatura,pH,luminosidade,etc.)

Exemplo1.Isolamentodebactriasdesnitrificantes(porexemploPseudomonasrespirao
anaerbia);
ImportnciaremoodenitratodeguasresiduaisemETARs)
1. Inculo:solo,sedimentosdelagos
2. Meiodecultura:cidosorgnicos,comofontesdeCeenergia;NO
3
2
comoaceitadorde
electres;
3. Ausnciadear(O
2
).

42
Exemplo2Isolamentodebactriasnitrificantes(porexemploNitrobacterquimiolitoautotrfica
aerbia);
Importnciafertilizaodossoloscomnitrato
1. Inculo:solo,lama
2. Meiodecultura:ausnciadeCarbonoorgnico(paraseleccionarbactriasautotrficas);NO
2

comodadordeelectres;
3. PresenadeO
2
/ar(porqueaerbia);ausnciadeluz(paraeliminarfotoautotrficas)

Importnciadosmicrorganismosnoecossistema:
Produoprimriadematriaorgnicapormicrorganismosautotrficos
Consumodirectoouprimrioporconsumidoresprimrios
Mineralizao:decomposiodecompostosorgnicoscomplexoscomformaode
compostossimples

Osmicrorganismostmumpapelfundamentalnareciclagemdosvrioselementosqumicos
noambiente(Carbono,azoto,enxofreeferro)

Crescimento microbiano: aumento do nmero de clulas do microrganismo ao longo do

tempo.
Podeserquantificadoemtermosde
- Nmerodeclulas
- a(DO) Densidadepticadacultur
- Massacelular(biomassa)

darorigemaduasaofim
deumcertoperododetempotempodegeraoouduplicao.

Mtodosparaavaliaraconcentraodeclulasnumapopulaomicrobiana:
Grandepartedosmicroganismosmultiplicaseporfissobinria(maioriadasbactrias)oupor
gemulao(maioriadasleveduras).Emambososcasos,umaclula

Contagemdirectadonmerodeclulas:

2. Contadoreselectrnicos.

avaliam nmeros totais de clulas. Contudo no distinguem clulas

mortasdenoviveis.

Contagemdeclulasviveis:
1. Cmarasdecontagem

Estas duas tcnicas
43
44


Recorrese a tcnicas de contagem em placa em que um volume conhecido de uma
suspensodemicrorganismosespalhadonasuperfciedeummeiodeculturasolidificado.As
colnias que se desenvolvem, aps incubao adequada, so contadas e os resultados vm
expressosemtermosdeunidadesformadorasdecolnias(UFC)

Mtodosindirectos:
Mtodo espectrofotomtrico permite estimar a concentrao de clulas numa
suspensopelapassagemdeumfeixedeluzatravsdela.
(maisclulasmaisluzdesviadamenosluztransmitida)
Determinao da massa molecular envolve a pesagem de clulas presentes na
culturamicrobiana(processomoroso)

Fasesdocrescimentomicrobianoemdescontnuo(batch)

Fase de latncia, durante a qual o organismo se ajusta ao novo meio (ex. sntese de
enzimas)

Fase exponencial, nesta fase a populao cresce com taxa especfica de crescimento
mxima.

consumo de materiais de reserva endgenos (possvel
produodeendsporos)

Fasedemorte,perdairreversveldacapacidadededivisocelular

intervalos (fase de latncia) que correspondem adaptao das clulas ao

novosubstrato.

Relativamentefasedecrescimentoexponencial:
O Estimativadataxaespecficadecrescimentodapopulao

Faseestacionria,correspondenteaoesgotamentodenutrientese/ouacumulaode
metabolito txico. No entanto, parte das clulas podem permanecer viveis durante
algumas horas custa do
Crescimento diuxico: em meios contendo por exemplo duas substncias como fonte de
carbonoeenergiaosmicrorganismospodemcontrolarautilizaodestes,demodoaqueum
sejaconsumidoprimeiroedepoisooutro.Nestascondiesodeclivedarectanoconstante
e surgem breves
) ( ln ln
0
t t N N
t
= +
0

45
Ta
crescimento
xaespecficade

46

O Estimativadotempode populao,g

duplicaoda

= g
actoresqueafectamocrescimentomicrobiano

centraodonutrientelimitante
iv. Disponibilidadedegua
v. Oxignio

i.Concentraodonutrientelimitante
nto pare. O transporte das
molculas de nutrientes atravs de sistemas de transporte transmembranar mediado por
nzimasedevriospassosmetablicoscatalizadosporenzimas.

Ataxaespecficade endedaconcentraodenutrientelimitante

2 ln

F
i. Con
ii. Temperatura
iii. pH
Factoresambientais

Nutriente limitante do crescimento S: o seu esgotamento no meio de cultura leva a que a

populao microbiana entre na fase estacionria e o crescime
e
crescimento,dep
S Ks
S
mx
+
= (EquaodeMONOD)

mx

mx
representa o valor quando [S] se encontra
em concentrao saturante (sistemas de
transporte transmembranar para o nutriente S
esto saturadas) e Ks uma constante de
semi-saturao que corresponde
concentrao de substrato, [S], que permite a
finidade dos sistemas de
transporte transmenbranar para a molcula do
utriente limitante
taxa de crescimento igual a metade da mx.
Ks reflecte a a
n

47

Ks

Osvaloresdasconstantes
mx
eKsdependem:
o Dascaractersticasintrnsecasdomicrorganismo
o Dosubstratolimitanteusadoparaocrescimento
o Dascondiesambientais(temperatura,pH,)

Culturacontnuademicrorganismonoquimiostato

Na cultura em descontnuo os microrganismos esto sujeitos a uma modificao

contnuadomeio,porqueossubstratossoconsumidoseosprodutosdemetabolismosevo
acumulando,nopodendoporissoocrescimentoexponencialsermantidoindefinidamente.

Nos sistemas de cultura contnuas a populao microbiana mantida continuamente

em fase de crescimento equilibrado, isto , num estado estacionrio, por remoo de parte
da cultura de microrganismos que substituda por meio fresco, sendo o caudal de
alimentaoigualaocaudaldesada.

Recorrese ao quimiostato, que opera por fornecimento do nutriente essencial que

limitaocrescimentoaumataxaconstantedemodoaqueadensidadecelular(biomassa)ea
taxadecrescimentodomicrorganismoseajustamaestefornecimento.

Taxa de diluio: traduz o volume que entra e sai do fermentador, por unidade de
tempoeporunidadedevolume

Caudaldealimentaodomeiofresco=caudaldesadadacultura(F)
Volumedaculturanoquimiostato=Vconstante

V
F
D =
Emestadoestacionrio:ataxaespecficadecrescimentocorrespondeaovalordataxa
de diluio ( =D) a taxa especfica de crescimento do microrganismo controlada pela
taxadediluioaqueoquimiostatoopera(D)

WASHOUT

Quanto maior for a taxa de diluio maior a taxa de crescimento da populao. No

entanto,paraDD
c
ocrescimentocelularnoconseguecompensaradiluiodaculturaea
populao e a populao de clulas sai do quimiostato (WASHOUT lavagem do
quimiostato).

Vantagensdocrescimentomicrobianoemcontnuo:
Permite manter populao microbiana na fase exponencial do crescimento durante
perodoslongos

Permite obter produto com caractersticas constantes durante perodos de tempos

longos

Permiteobtermaioresprodutividades

possvel obter culturas em crescimento exponencial e com taxas especficas de

crescimentodiferenteatravsdaalteraodataxadediluio

possvel seleccionar uma populao de clulas dum microrganismo nico, que seja
muito competitivo e metabolize muito eficientemente um composto orgnico face a outros
microrganismosmenoscompetitivoseventualmentepresentesnapopulaomistainicial

Desvantagens:
Contaminaodacultura
48
49
Degenerescnciadacultura(devidoamutaesespontneas)

ii.Temperatura

A temperatura interfere em fenmenos enzimticos e no metabolismo celular, que

dependemdelaparaobomfuncionamento.Paracadamicrorganismopossveldefenir:
Temperaturamximaacimadaqualomicrorganismomorre
(geralmentepordesnaturaoproteica)
Temperatura ptima aquela que proporciona uma maior taxa de
multiplicao
Temperatura mnima abaixo da qual o metabolismo do
microrganismocessa

Quantotemperaturaptima,asbactriasclassificamseem
MesofiloscomTptima~2540C
PsicrfiloscomTptima~410C
TermfiloscomTptima>45C
HipertermfiloscomTptima>80c

Adaptaesmolecularespsicrofilia:
- insaturados face a cidos
gordossaturadosnosfosfolpidosdabicamadalipidica

Adaptaesmolecularestermofilia:
bicamada d
- Membranas ricas no hidrocarboneto isopropeno; estrutura em monocamada
lipdica.
anismosclassificamseem:
s
lcalfilo

- Protenaseenzimasquesoestveisatemperaturasbaixas
Membranas com maior proporo de cidos gordos
- Protenasestveisatemperaturasaltas
- Snteseeacumulaodesolutoscompatveisnocitoplasma
- Membranas com maior proporo de cidos gordos saturados face a cidos
gordosinsaturados,nosfosfolipidosda lipi ica.

iii.pHdomeio
Osmicrorg
Acidfilos
Neutrfilo
A

50
.Disponibilidadedegua
O crescimento microbiano depende da quantidade de gua disponvel no meio extracelular
e
aixoa
w
pressoosmticaelevada; altaa
w
pressoosmticabaixa)
Deste modo, os microrganismos podem ser halfilos
iv

(expresso rmosdeactividadedegua,a
w
). emt
(B

, halotolerantes, osmfilos ou halfilos

extremosdeacordocomascondiesdeactividadedeguaemquevivem.
is, aumentando deste modo a a
w

intracelularequilibrandoacomaa
w
extracelular.Istopossveldevidosntesedepolialcoois
outransporteactivodeiesK
+
paraointeriordaclula.
icrorganismosextremfilos
Limitao c

Adaptaesdecertosmicrorganismosaocrescimentoemmeioscombaixaa
w

Acumulao intracelular de solutos compatve

EXTREMOZYMES
Enzimas que funcionam em condies
termfilosouhipertermfilos
Acidfilosoualcalfilos
halfilos

Crescimentomicrobianonosambientesnaturais:
do rescimentoporfactoresambientais:
51
crescimento
dependefrequentementedaconcentraodessenutriente

Leidatolerncia:acertoslimitesambientaisaspopulaesmicrobianaspodem
nocrescer,independentementedadisponibilidadedenutrientes

Respostados

Modificaes morfolgicas (menor tamanho das clulas maior rea

Cr
e biofilmes : comunidade estruturada de clulas adetentes a uma
superfcie inerte ou viva embebidas numa matriz de polissacrido de origem
Vantagensdosbiofilmes:
. Proteco relativamente a condies agressoras ou a fagocitose por clulas do
sistemaimunitrio
disponibilidadedenutrientes
. Estabelecimento de relaes que podem ser benficas, como por exemplo
comunicao entre clulas envolvendo molculas sensoras ou troca de material

=Controlodo anismos=
Agentesanti r icos:
Filtrao
Frio
Calor
Radiao
Calor
Lei do mnimo: a biomassa total de um organismo particular limitada pelo
nutriente presente com mais baixa concentrao; a taxa de
micorganismosanveisbaixosdenutrientes:
superficialparatransfernciadenutrientesmaiortaxametablica
escimentomaisrpido

Formao d
microbiana.

2. Maior

3
gentico
smicrorg
mic obianosfs

52
Principais
Protenasdesnaturaotrmicainactivaodeenzimas
Membranascelularesdesorganizaodabicamadalipidica
empo de reduo decimal, D
T
: intervalo de tempo para matar 90% de um dado
microrganismo quando sujeita temperatura T (i.e. fraco de sobreviventes diminui de 100

Processosquerecorremaocalorparacontrolarmicrorganismos:
+ Esterilizao(calorhmido,autoclave,ouseco)
+ Pasteurizao
+
Rad

- potenteacooxidantequecausam
deDNAeprotenasmortedasclulas

- Radiao u a ir a mutaes e morte dos microrganismos

devidoformaodedmerosdetiminanoDNA.
alvos:
perdadafunodebarreirasemipermevel

T
para10%duranteoperododetempoDt)

iao
RaiosXegamaproduzelectreseradicaiscom
alteraoerotura
ltr violeta Pode conduz
Reparaodedanos:
Fotoreactivao
Reactivaonoescuro

intensidades altas podem gerar um agente oxidante potente que leva

fotooxidaodeprotenasecidosnucleicos
Respostafotooxidao
- Luz visvel
:
Pigmentos como carotenides protegemos microrganismos expostos luz dos danos por
fotooxidaa.
Me

diodaactividadedeagentesantimicrobianos:

+ MtododasdiluiessucessivasValoresdeMIC
53
deser medida com base
menteocrescimentodomicrorganismo
+ Mtododadifusoemagardimetrosdoshalosdeinibio
Aactividade antimicrobianadeum compostoqumicopo
na determinao da concentrao mais baixa desse composto necessria para
inibircompleta

Aplicadoporexemplonadeterminaodasusceptibilidadedeestirpesbacterianas

AgentesbacteriostticosouFungistticos:causaminibiodecrescimento

molculas com as
mesmaspropriedadesmassintetizadasquimicamente(agentessintticos).Umaspectocrtico
de um ente quimioteraputico a sua toxicidade selectiva, isto , a sua capacidade para
inibir ou matar bactrias ou outro microrganismo patognico sem afectar adversamente o
hospedeiro. Cada agente ou grupo de agentes quimioteraputicos tem um espectro de aco
antimicrobiana.s antibiticos com aco antibacteriana so especialmente teis no
tratamentodedoenasinfecciosascausadasporbactriaspatognicas

a antibiticos
Germicidas: mata microrganismos patognicos ou no (no mata necessariamente
endsporos)

Certos compostos qumicos com aco antimicrobiana podem ser usados nos seres
vivosparaocontrolodedoenasinfecciosasagentesantimicrobianosdeusoteraputico.Os
agentes quimioteraputicos podem ser molculas produzidas por microrganismos ou plantas
com efeito contra outros microrganismos (antibiticos) ou podem ser
ag
Controlo dos microrganismos por agentes antimicrobianos

Desinfectantes,antispticoseesterilizantes,etc(agentesantimicrobianosqumicos)
o Exemplosemodosdeaco.

Agente Tipodeagente Aco

Alcois
Desinfectantese
Antispticos
Acobactericidaefungicida,masnoesporicida;
Inactivamalgunsvirus
Desnaturamprotenasedesorganizam
membranascelulares

Compostosfenlicos

Desinfectantes
Desnaturaodeprotenaserupturademembranas

Halogneos

(1)Iodoecompostos
iodados

(2)Cloroecompostos
clorados
(1)Antispticodapele
Agenteoxidante

(2)Agenteoxidante

(1)Oxidaconstituintescelularesereagecom
protenascausandoasuainactivao.
Concentraesaltaspodeminactivaresporos
(2)Oxidaconstituintescelulares
Destriclulasvegetativasdebactriasefungos,
masnoesporosactuasobrealgunsvirus
Podereagircommatriaorgnicaeformar
compostoscarcinognicos

Compostosquaternriosdeamnio

(1)Detergentes
(2)Detergentes
catinicos

(1)Causamrupturadasmembranascelulares
Actuamcomoemulsionantes
(2)Matammaiorpartedasbactrias,ou
endosporos

Metaispesados(prata,zinco,cobre)

Antispticosou
desinfectantes

Estabelecemligaescomgruposespecficosde
protenas,inactivandoasoulevandosua
precipitao

Aldeidos

Agentesalquilantes,

Acobactericida,fungicida,virucidaeesporocida;
combinamsecomcidosnucleicoseprotenase
causamasuainactivao.

Gasesesterilizantes

Esterilizante
Agentesalquilantes
Acomicrobicidaeesporocida
Combinamsecomprotenasinactivandoas
54
55

AGENTES ANTIMICROBIANOS PARA USO TERAPUTICO

Agentesquimioteraputicoagentesantimicrobianossousadosparacontrolaretratarin
vivodoenasinfecciosas,actuamsobreumnmeromaisoumenoslimitadode
microrganismos.

AlvosbiolgicosdeagentesquimioteraputicosANTIBACTERIANOS

Estesagentesactuamselectivamentesobreocrescimentoouviabilidadedebactrias.

56

AlvosbiolgicosdeagentesquimioteraputicosANTIFUNGICOS

Toxicidadeselectivamaisdifcildeconseguir;
Algumasdrogasspodemserusadastopicamente,devidoaograudetoxicidadepara
hospedeiros.

Resistncia a drogas antimicrobianas

Definio:Capacidadeadquiridadummicrorganismopatognicopararesistiraosefeitosde
umagentequimioteraputicoaoqualerasusceptvel.

Causa:
usoindiscriminadodedrogasantimicrobianas
usoexcessivodeprodutosdelimpezapessoaisoudomsticoscomagentes
antibacterianos,etc.

ExemplosdebactriaspatognicasHumanasquesetornaramresistentes:Pseudomonas
aeruginosa,staphylococcusaureus
57
58

Mecanismosderesistnciaadrogasemestirpesmicrobianasresistentes:

Reduodapermeabilidadedaparedeemembranaplasmticadroga;
Inactivaodadrogadevidoamodificaoqumicaouquebradamolcula(aco
enzimtica)
Desenvolvimentodeviabioqumicaalternativa
Expulsodadrogaparaforadaclulaporsistemadetransporteactivo(efluxo)

Aresistnciaresultadaselecoeexpressodegenesespecficos,presentesemplasmdeos
(PlasmdeosRdeResistncia)ounogenomabacterianos.

PrevenoeSolues:

- Higiene;imunizao;prticaclnicaadequada;
- Procuradenovasdrogasantimicrobianasatravsdedesigncomputarizado
- Aumentodoconhecimentosobremecanismosderesistncia(erapsgenmica)

Modificaoetransfernciadainformaogentica
Definiesbsicas:

Estirpeoucloneumapopulaodeclulasgeneticamenteidnticas

GeneumfragmentodeDNAemqueasequnciadebases,apstranscrioetraduo,originauma
protenacomumasequnciadeaminocidosbemdefinida

Genomaconjuntodetodososgenesdeumorganismo.Asbactriassohaplides(1cpiadecadaum
dosgenesdogenoma).

Gentipoconjuntodegenesespecficoqueumorganismopossui.leu,leu

Fentipopropriedadeobservvel.Aexpressofenotpicaprofundamenteinfluenciadaporfactores
ambientais.Leu+,Leu

Principaismecanismosquegeramvariabilidadegenticanasbactrias

Mutao
Transposio
Transfernciadegenes(veiculadaporplasmdeos)
RecombinaesentreregiesdasmolculasdoDNA

Mutao

DefinioqualqueralteraopermanentedeumasequnciadebasesdoDNA,mesmoque
notenhaefeitodetectvelnofentipo.Podelevaraoestabelecimentodeuma
subpopulao.
59

Mutaespodemser:

Espontneas;
Induzidas;

Mutaesespontneas(ausnciadequalqueragentemutagnico,aleatrias,poucofreqentes)

TautomerismodebasesamutaoresultadeerrosnareplicaodoDNAdevido
incorporaodenucletidoscontendoformastautomricas(ismerosquesediferenciam
naposiodeumgrupofuncional).

MutaoespontneaportransioNestetipodemutaoumapurinasubstituda
poroutrapurinadiferenteouumapirimidinaporoutrapirimidinadiferente

Adioeeliminaodebasespodeocorrerumescorregamentonumadascadeias
(cadeiaemformaoouparental)quelevaformaodeumlaoestabilizadopor
ligaesdeHnasequnciarepetitiva.AcontinuaodareplicaodeDNAleva
adioouremoodenucleotdeo(s),respectivamenteex:

60

TransposesAmutaopodeocorrerporinserodasequnciadeinserooudo
transposocomplexodentrodasequnciacodificantedeumgeneounasuaregio
reguladora

Nota:Oqueumtransposo?
segmentosdeDNAmveis
nopossuemfunesautoreplicativas
nonecessitaderegiesdehomologiaentreotransposoeolocal
doDNAondesevaiinserir
requeraenzimatransposaseeextremidadescontendosequncias
derepetioinvertida(IR)
Ostransposescomplexospodemtransportargenesdiversosque
conferemresistnciaantibiotica.

Algumasconsequnciasdestamutao:
interrupoouactivaodatranscriodeumgene
transfernciadegenesparticularesparaplasmdeos,oudeplasmdeos
paraogenoma;

Osnveisdemutaoespontneasocontroladospelaactividadedepolimerases53e
exonucleases35.

61
Mutaesinduzidas:(presenadeagentemutagnico)

Agentesmutagnicos:(soagentesqueestimulamataxademutao(~1000x))

Qumicos
Fscos

Agentesmutagnicosqumicos:

IncorporaodeanlogosdebasesOcrescimentodeumapopulaodeclulasna
presenadesteanlogooriginaumadescendnciadeclulasondeocorreu
substituiodebases(parATparGC)Ex.5bromouracilo.

AgentesalquilantesResponsveispeloemparelhamentoerradodebasestornando
maislbilasligaesentreelas.Exdeagentesalquilantes:Hidroxilamina,
Metanossulfonatodeetilo(SEM)

DesaminaooxidativadasbasesporacodeHNO
2
OHNO
2
promoveasadado
grupoNH
2
dasbasesazotadasoqueprovocaligaesmaislbeisouligaesentre
basesnocorrespondentes.

62
Nesteexemploacitosinadesaminadaauracilo,oqualligaaadeninaemvezdeguanina
AgentesqueseintercalamentreasbasesdacadeiadupladeDNAEstesagentes
causammutaesdotipo"frameshift".Ex.Brometodeetdeo,Acridinalaranja,
proflavina

Agentesmutagnicosfsicos:

Radiao UV Leva formao de dmeros de timina adjacentes por aco

deradiaoUV(~260nm)causandodistoresnacadeiadeDNA.Estamutaopode
serreparadaporacofotoquimica

Efeitodasmutaesaonveldasprotenas

Mutao"missense"Mutaopontualnumcodopodelevarsubstituiodeum
aminocidoporoutro,resultandonumaprotenadeficiente.

Mutao"nonsense(semsentido)OriginaoaparecimentodeumcodoSTOP,
tendocomoconsequnciaaproduodeumaprotenasemactividade.

Mutao"frameshif(mutaodesfasada)Aadiooueliminaodeparesdebases
nomltiplosde3,levaalteraodagrelhadeleituraabertadosegmentodeDNAque
codificaparaumaprotena.

MutaosilenciosaDevidodegenerescnciadocdigogentico,nemtodasas
mutaessoexpressasfenotipicamente

MutaoneutraResultanacodificaodeumaminocidodiferente,mas
funcionalmenteequivalente

63

Expressodasmutaes(Adetecodemutantesspossvelseasalteraesocorridasno
patrimniogenticodomicrorganismocausarumaalteraodefentipo)

"Forwardmutation(mutaodirecta)

Aseguiraumaprimeiramutaodirecta,podemseguirsemutaes(mutaoinversaou
mutaosupresso)querestabeleceousubstituiporumequivalenterestabelecimentodo
fentipooriginal:

"Reversemutation"(mutaoinversa).Ex:

r
presso)
"Suppresso
mutation"
(mutaosu

SelecodemutantesOobjectivoaproduodemutantesparainvestigaooumelhoramentode
estirpesparafinsbiotecnolgicos.

Tiposdemutantes:

Letais
Condicionais(asmutaessoexpressassemdeterminadascondiesambientais)
Morfolgicos(mutantesqueporexemplopromovemapigmentao)
Resistnciaaumcomposto
Bioqumicos(levamaalteraesmetablicas)
o AuxotrficosNecessitamdeumprodutodeumaviametablicacomonutrienteemmeio
mnimo,porquenosocapazesdeosintetizar
o PrototrficosCrescememmeiomnimosemsuplementos

64
65

Selecoindirecta(negativa)usodatecnicaderplicaplating

Aselecoindirectapermitedetectarmutantescondicionaisebioqumicos

Atcnicaderplicaplating:usadaparaidentificarmutantesqueperderamporexemploa
capacidadedesintetizarumnutrienteessencial

Selecodirecta(positiva)

Aselecodirectapermitedetectarmutantesmorfolgicosederesistnciaeainda
mutantesauxotrficosquesetornamprototrficos.

TestedeAmesusadoparadespistarapotencialacomutagnicadecompostosqumicos;recorrea
mutantes
auxotficosdebactrias(ex.MutanteHisdeSalmolellasp.);analisadaafrequnciadereversodeauxotrficosa
prototrficosporacodocomposto

OtestedeAmesusadonadetecodecompostoscarcinognicos

66

Processosdetransfernciadematerialgentico

Osplasmideospodemserdevriostipos:

PlasmdeosBacterianos:

Soelementosgenticos(DNAemcadeiadupla),circularesoulineares
Tmreplicaoautnoma
Podemexistiremcpianicaouhavermltiplascpias
Podemsereliminados(curing)deforma:
Expontnea
Induzida
Sodispensveisviabilidadecelular
Algunsplasmdeossoepissomas(conseguemintegrarnocromossomahospedeiro)
Algunsplasmdeossoconjugativosepodemaderircomareceptorapor:
pilusoutubodeconjugao
Conjugao(atravsdeumapontecitoplasmtica)
Podemconferirvantagemselectivaemdeterminadosambientes

PlasmdeosCol(EmEscherichiacoli,Salmonellasp.,Enterobactersp.)

Codificamparacolicinas(bacteriocinas)
Algunsdestesplasmdeossoconjugativos
Algunstambmcontmgenesderesistnciap.exresistnciaaantibiticos

Plasmdeosdevirulncia
67

Contmgenesdevirulnciaetornamabactriamaispatognica
Ex.genesqueconferemresistnciaaosmecanismosdedefesadohospedeiro(p.ex.Sntese
decpsula)
Plasmdeosmetablicos

Contmgenesenvolvidosemprocessosmetablicos
Ex.genesresponsveispelafixaobiolgicadeazoto

Plasmideosqueconferemresistnciaaantibiticos
FactoresdeResistncia:

PlasmdeosR
Tmgenesquecodificamparaaresistnciaaantibiticos,metaispesados
(Hg,Ni,Co),etc.
Algunssoconjugativos
Geralmentenoseintegramnocromossoma

PlasmdeoF,
FactorFdefertilidadeouplasmdioFfundamentalnaconjugaobacteriana.
OfactorFpodeexistirnaclulabacterianade2formasdiferentes:
livrenocitoplasma;
integradonocromossoma(epissoma)

68
IntegraodofactorFnaE.Coli.

Aintegraomediadaporsequnciasdeinsero(IS)

3Mecanismosprincipaisnatransfernciadematerialgentico

Conjugao(explasmideosconjugados)
Transformao
Transduo

ConjugaoBacteriana

TransfernciadeDNAporcontactodirectoentreasclulas
Contactodirectoentreasclulasfoiprovado
pelaexperinciadetuboemU.
69

ConjugaoF+xF

F+estirpedadorcontemofactorF
Festirpereceptorn~\aocontemofactorF

OfactorFreplicapelomecanismocrculorolante,duplicaetransferido
Atransfernciagenticaunidirecional(deF+paraF)
AestirpereceptoratornaseF+
AestirpedadoracontinuaF+

PodeocorreremalgumasbactriasGram.positivas(E.coli,Pseudomonassp.,etc.)eem
algumasespciesGrampositivas(p.ex.dosgnerosBacillus,Streptococcus,
Staphylococcus,etc)

70
ConjugaoHfrxF

EstirpeHfr(Highfrequencyofrecombination)
AestirpedadoracontmofactorF(epissoma)
ODNAdasclulasHfrduplicapelomecanismocirculorolanteecomeaaser
transferido
Nestecaso,afrequnciadetransfernciadocromossomamuito
altaemcomparaocomadoFactorFporclulasF+
Existetransfernciadegenesquerdoplasmdeo,querdocromossomaathaverquebrada
ligaoentreasclulas.
AclulareceptorapodecontinuarF,separtedoplasmdeoFnotransferida

71
ConjugaoFxF

OplasmdeoFumepissoma,peloquepodelibertarsedocromossomabacterianoexciso.
PlasmdeoF
Formaseporexcisoincorrectadocromossoma
Podelevarconsigomaisdoque1genedocromossomaondeestavaintegrado
ClulaHfrpassaaF

AclulaFtransferesseplasmdeoparaumaclulareceptoraF(mecanismovirtualmente
semelhanteaodaconjugaoF+xF)

AGenescromossomais

AparterosafactorFintegradonocromossomacircularmaior

Nota:
Osgenescromossomais(A)nemsempretemqueseintegradosnaclulaparase
expressarem
AsclulasreceptorestornamseFesoparcialmentediploides(possuemdoisconjuntosdo
geneA)

72
73
Osgenesbacterianospodemserdifundidosatravsdestemecanismo
TransfernciadeDNAportransformao

Comprovaodasuaexistncia:
ExperinciadeGriffith

Definio:aentradadeDNAlivreexistentenomeioambientedasclulasesua
incorporaoestvelnumaclulareceptoracompetente.
umprocessoaleatrio
Asuafrequnciaemclulascompetentesmuitofrequente

Espciesnaturalmentecompetentes:
Espciespertencentes
Aosgneros
Haemophilus
Streptococcus
Bacillus
Azotobacter
Pseudomonas,etc

Mecansimodetransformaoemclulascompetentes

AsclulascompetentespodemfixarfragmentosdeDNAnumaprotenareceptora
especficadaparedecelular,nodiscriminaotipodeDNA

OfragmentodeDNA,emcadeiasimples,vaiseralinhadocomregiohomloga,
ocorrendorecombinaoentreascadeias(mediadoporprodutodogeneRecA)

Fragmentosquenoencontremregiohomloganocromossomadesaparecero
(apsalgumasgeraes)

74
75

TransformaoArtificialembactrias

Podesetornarasclulastemporariamentecompetentespor:

Tratamentodasclulascomcloretodeclcioe/ououtrosies,
seguidodechoquetrmico;

Electroporaoouelectrotransformao

TransduoGeneralizada

Definio:atransfernciadegenesbacterianosentreclulasdiferentesmediadaporvirus
queinfectambactrias(designadosporbacterifagosoufagos)

ResultadofactodefragmentosdoDNAdabacteriahospedeiraentrarem,porengano,na
cabeadofagoaquandodasuareplicaoematuraopodeocorerduranteoCicloLticode
replicaodevirusembactriasinfectadas.

ClassificaoeIdentificaodemicorganismos
TaxonomiaCinciaquedistribuiosorganismosporcategoriastaxonmicasoutaxaque
traduzemoseugraudesemelhana.

Divideseem:
Classificaodefineaformadedistribuiodosorganismosem
grupostaxonmicos;
Nomenclaturaatribuinomesaosgrupostaxonmicosdeacordocom
regrasprestabelecidas;
Identificaooprocessodedeterminaraquegrupotaxonmico
pertenceumdeterminadoisolado.

Espcieunidadebsicadataxonomiamicrobiana.definidacomo:
umconjuntodeestirpesquepartilhammuitascaractersticasestveise
diferemsignificativamentedeoutrosgruposdeestirpes;
umconjuntodeestirpescujacomposioG+Cdogenomaidnticaeemque
asequnciadenucleotdeosdoDNAapresenta70%oumaissemelhana.

Gnerogrupobemdefinidodeumaoumaisespcies,claramenteseparadodeoutros
gneros.

76
77

Utilizaseumsistemabinomialparaadesignaodeumaespcie,sendoognero(primeiro
nome)porvezesabreviadoinicial.

78
Todososorganismosvivosestodistribuidospor3divisesmaiores:osdomniosBacteria,
ArchaeaeEukarya.

Estirpe:
populaodeorganismosquesedistinguedeoutrasdentrodeumtaxon
descendedeumnicoorganismoouculturapura
variamentreelasdevariasformas:
Biovardiferenasbioqumicasefisiolgicas
Morfovardiferenasmorfolgicas
Serovardiferenaspropriedadesantignicas

Estirpetipo:
5. aprimeiraestirpedaespcieaserestudada
6. geralmenteamaisbemcaracterizada
7. nonecessariamenteomembromaisrepresentativodaespcie

79
Caractersticastaxonmicas:

7. Clssicas:
8. morfologiaforma,tamanho,reacogram,flagelo(setiver)
9. fisiologiaemetabolismomecanismodeconservaoenergtica;relaocom
oxignio;temperatura,pH,etolerncia/necessidadesalina;capacidadedeusaros
vrioscarbonos,nitrognioefontesdeenxofre;factordecrescimento;pigmentos;
patogencidade;sensibilidadeantibitica
10. ecolgicaciclodevida,relaessimbiticas,capacidadedecausardoenasem
hospedeiros,habitatpreferencial,factoresqueinfluenciamocrescimento
11. anlisegenticacapacidadedetrocadeinformaogenticaportransformao
econjugao(geralmenteconfinadosaognero),existenciadeplasmideos
(emboraainformaonelescontidapossainduziremerro)

12. Moleculares:

13. cidosnucleicos
14. Proteinas
15. Lpidos

Ostestescomerciaissaobaseadosprincipalmenteemcaractersticasfisiolgicase
bioqumicas,eosperfisdecaracteristicasobservados(deculturaspuras)saocomparadoscom
basesdedados.

SISTEMASDECLASSIFICAO:

Classificaonaturaldispeosorganismosemgruposcujosmembrospartilhammuitas
caractersticas,ereflecteanaturezabiolgicadosorganismos.Executadapordoismtodos:

Fentico(classificaofentica)agrupaosorganismoscombaseem
semelhanasfenotpicas,caractersticasestascomomesmopeso;omelhor
mtodoparacompararomaiornmerodepropriedadespossvel
Filogentico(classificaofilogentica)agrupaosorganismoscombasena
suaprovvelproximidadeevolutiva(filogentica)baseiaseusualmentena
comparaodirectadematerialgentico(ex.DNA,RNA)ouprodutosdegenes
80

TAXONOMIANUMRICA

usadaparaestabelecerumsistemadeclassificao,eenvolveosseguintespassos:

Todasaspropriedadestestadastmomesmopeso(1=temcaracteristica;2=nao
temcaracterstica)
Determinaodoscoeficientesdesemelhana
Coeficientesimplematchingbaseadoemtodasascaractersticas,quer
estejampresentesouausentes
CoeficientedeJaccardqueignoraascaractersticasausentesnosdois
organismos
Usacomputadoresparacompararorganismos(em50oumaiscaractersticas)
Construodematrizesdesimilaridade
Construodedendogramas(diagramasemrvores)querelacionamos
microrganismosentresi.

Umgrupodeorganismoscomumgraudesemelhanasuperiora80%umaespcie
bacteriana.

Classificaomolecularfeitaatravsdacomparaodeprotenas,deperfisde
lipidos,dacomparaodacomposiodoscidosnucleicos(ex.ContedoG+CdoDNA),da
hibridaodecidosnucleicos,dacomparaodesequnciasdebasesdecidosnucleicos.

Comparaodeprotenascomparaodamobilidadeelectrofortica,de
propriedadesenzimticaseadeterminaodesequnciasdeaminocidos,erespectivo
alinhamentodassequncias.

HIBRIDAODNA:DNAcomoferramentataxonmicaMedeograudesimilaridade(ou
homologia)noDNAdedoisorganismos(peloemparelhamentodeduasmolculasdeDNA
desnaturadas)
81

Ecotipopopulaodeclulasquecompetemparaummesmorecurso

Novaespciepopulaodeclulasquesedistinguegenticamentedasclulasdoecotipo
original

Filogenia(ouclassificaofilogentica)

Traduzahistriaevolutivadeumgrupodeorganismos;Ahierarquiataxonmicarevela
relaesevolutivasoufilogenticas

Evoluoalteraesnumalinhagemdedescendnciaaolongodotempo,
conduzindoanovasvariedadeseespcies.Relaoesevolutivassaomostradasemrvores
filogenticas.

CLASSIFICAOFILOGENTICA

Baseiasenacomparaodirectadassequnciasdematerialgentico
(genes)oudosseusprodutos(protenas)

cidosnucleicoseprotenasfuncionalmenteidnticospodemserusadosparamedir
aevoluodosorganismosaolongodotempo
Baseiamseemalgunspressupostos
Assequnciasalteramsegradualmenteaolongodotempo
Essasalteraessorelativamentealeatrias
82
Aquantidadedealteraesaumentalinearmentecomotempo

OsribossomassomolculasdeRNAribossmico(rRNA)soexcelentesferramentaspara
determinarrelaesevolutivasentreorganismosCRONMETROSEVOLUTIVOS.Istoporque:

Souniversais(estopresentesemtodososorganismosvivosecom
amesmafuno)
Asuafunonosealterouaolongodoprocessoevolutivo
Contmvriasregiesemqueasequnciadenucleotdeos
conservadaemtodosostiposdeclulas

AssequnciasdorRNA16S(emprocariotas)edorRNA18S(oequivalenteemeucariotas)a
maisusadaemtaxonomia.AsequnciadebasesnestasmolculasderRNAmuito
conservadaaolongodoprocessoevolutivo.

83
PASSOSPRINCIPAISENVOLVIDOSNAOBTENODERVORES
FILOGENTICASBASEADASNASEQUNCIADENUCLEOTDEOSDOrRNA:

1. ExtracodoDNAdeclulasdecadaumdosmicrorganismosquesepretende
comparar

2. ApartirdoDNAobtidoem(a)sofeitasmuitascpiasdogenequecodificao
16SrRNAemcadaumdosmicrorganismos,porrecursotcnicadePCR.A
tcnicadePCRbaseiasenarealizaoinvitrodoprocessonaturalde
replicaodeDNAqueocorreinvivo.Permiteobtermuitascpiasiguaisde
umgeneespecfico.

3. Sequenciaodosgenesquecodificamo16SrRNAdecadamicrorganismo;

4. Alinhamentodassequnciasdenucleotdeosdosgenesquecodificamo16S
rRNAparapesquisarsemelhanasediferenas,porrecursoaferramentas
informticasespecializadas(p.ex.disponveisnositeRibossomalDatabase
Project;nestabasededadosestdepositadaumacolecodecercade160
000sequnciasde16SrRNAsdadodeNov2006).

5. Umalgoritmopermitefazercomparaesecalculardistnciasevolutivas,dois
adois,econstriumarvorefilogenticaquemostraasdiferenasnas
sequnciasdorRNAentreosorganismosanalisados:nesteexemplo
microrganismos1e3soparentesmaisprximos(provavelmente,
pertencemmesmacategoriataxonmica),doque2e3ou1e2.