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Métodos de separación de proteínas

Métodos de separación de proteínas

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Universidad de ChileFacultad de CienciasDepartamento de QuímicaQuímica BiológicaLic. Ciencias mención Química
Laboratorio Nº3
“Métodos de separación deproteínas”
Integrantes:
Álvaro EtcheverryMatías Leal.
Profesora:
Mª Cecilia Rojas
 
INTRODUCCIÓN
El objetivo de este laboratorio consiste en utilizar distintos todos deseparación de proteínas. Básicamente existen tres tipos:Filtración por exclusión molecular, en la cual se aprovecha los distintos tamañosy formas de las proteínas para separarlos mediante cromatografía. En la cromatografíade intercambio iónico, se aprovecha el hecho de cada proteína interactúa de distintaforma con un intercambiador iónico, para así separarlas mediante una cromatografía.Finalmente está la electroforesis en geles de poliacrilamida, el cual es uno de losmétodos más poderosos, el cual consiste en colocar la solución con proteínas en un gelde poliacrilamida al que posteriormente se le aplica un campo eléctrico, de esta formalas proteínas pueden ser separadas de acuerdo a sus tamaños y cargas.En el caso de este laboratorio, sólo se realila filtración por exclusiónmolecular.
MÉTODOS
El método utilizado en esta sesión es el de filtración por exclusión molecular, elconsiste en colocar a la solución de proteínas en una matriz que contiene numerosascuentas porosas. De esta forma, aquellas moléculas lo suficientemente pequeñas como para entrar en ellas quedan atrapadas y eluyen más lento através de la columna, siendolas moléculas más grandes las que eluyen en primer lugar. Los polímeros más usadosson el dextrano, la agarosa y la poliacrilamida
RESULTADOS Y ANÁLISIS DE DATOS
En primer lugar se realizó una curva de calibración con una solución patrón de proteínas cuya concentración es de 10 mg/mL. Para esto se tomaron distintos volúmenesdel suero, se completaron 2 mL con una solución de NaCl 0,15 M y se analizó lamuestra en un espectrofotómetro, de donde se obtuvieron los datos que se muestran enla Tabla N°1:
Tabla N°1
: Absorbancias obtenidas a distintas concentraciones de proteína.
Volumen desuero (mL)Cantidaddeproteína(mg)Volumen deNaCl 0.15 M(mL)Absorbancia
0.2 2 1.8 0.1900.4 4 1.6 0.3690.6 6 1.4 0.4990.8 8 1.2 0.6621.0 10 1.0 0.790
Con estos datos se obtuvo el siguiente gráfico.
 
Gráfico N°1
: Cantidad de proteínas versus absorbanciaMediante una regresión lineal obtuvimos una ecuación que nos permite calcular la cantidad de proteínas presentes en una muestra al medir su absorbancia:0,05410,07235
proteína
 A
=
Donde A corresponde a la absorbancia.Gracias a esta ecuación es posible calcular la cantidad de proteínas que seencontraban en una muestra de cero y además se calculó la cantidad de proteínas totales,la cantidad de seroglobulinas y por diferencia la cantidad de seroalbúminas, como semuestra en la Tabla N°2:
Tabla N°2
: Concentraciones de proteínas en el suero
AbsorbanciaCantidaddeproteínas(mg)Volumende suero(mL)Concentraciónde proteínas(mg/mL)Suerototal
0,333 3,74 2 1,87
Seroalbúminas
0,103 0,66 2 0,33
Seroglobulinas
1,54
Finalmente, para se tomó una muestra de suero al que se le agregó ácido acéticohasta alcanzar el punto isoeléctrico donde la mayor parte de la proteína estabainsolubilizada. Posteriormente, se agregó una solución de NaCl 2 M, hasta solubilizar la proteína nuevamente, gastándose un total de 0,18 mL.

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