Referncia ISO / TS 11133-1:2000 (E) ISO 2000 TCNICO ESPECIFICAO ISO / TS 11133-1 Primeira edio 2000-06-01 Microbiologia de alimentos

s e alimentao animal alimentcios - Orientaes para elaborao e produo de meios de cultura Parte 1: Orientaes gerais sobre a garantia de qualidade para a preparao de meios de cultura na laboratrio aliments Microbiologie des - Guia pour la a preparao da produo et la des milieux de cultura Partie 1: Guia Geral pour l'garantia de la qualit pour la preparacin des milieux cultura de en laboratoire Merck KGaA - Darmstadt ISO / TS 11133-1:2000 (E) disclaimer PDF Este arquivo PDF pode conter fontes incorporadas. De acordo com a poltica de licenciamento da Adobe, este arquivo pode ser impresso ou visualizado, mas no ser editadas, a tipos que esto embutidos so licenciados e instalados no computador realizando a edio. Ao fazer o download deste arquivo, as partes aceitam nele a responsabilidade de no violar a poltica de licenciamento da Adobe. A ISO Secretariado Central no assume qualquer responsabilidade neste regio. Adobe uma marca comercial da Adobe Systems Incorporated. Detalhes dos produtos de software usado para criar este arquivo em PDF pode ser encontrada nas Informaes gerais relativos aos autos, os parmetros de criao de PDF foram otimizados para impresso. Todo cuidado foi tomado para garantir que o arquivo adequado para utilizao pelos organismos membros da ISO. No caso improvvel que um problema relacionado com ela encontrada, por favor, informar o Secretariado Central, no endereo indicado abaixo. ISO 2000 Todos os direitos reservados. Salvo disposio em contrrio, nenhuma parte desta publicao pode ser reproduzida ou utilizada em qualquer forma ou por qualquer meio eletrnico ou mecnico, incluindo fotocpia e microfilme, sem permisso por escrito pela ISO no endereo abaixo ou organismo membro da ISO no pas do solicitante. ISO Escritrio de Direitos Autorais Case Postale 56? CH-1211 Genebra 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 734 10 79 E-mail copyright@iso.ch www.iso.ch Web Impresso na Sua ii ABNT 2000 - Todos os direitos reservados ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados iii Prefcio A ISO (International Organization for Standardization) uma federao mundial de organismos nacionais de normalizao (ISO

membro dos corpos). O trabalho de preparao das Normas Internacionais normalmente realizado atravs de tcnicos da ISO comisses. Cada organismo membro interessado em um assunto para o qual um comit tcnico foi estabelecido tem o direito de ser representada na comisso. As organizaes internacionais, governamentais e nogovernamentais, no ligao com a ISO, participam igualmente nos trabalhos. A ISO colabora estreitamente com a International Electrotechnical Commission (IEC) em todos os assuntos de normalizao electrotcnica. Normas Internacionais so preparadas de acordo com as regras estabelecidas nas Diretivas ISO / IEC, Parte 3. A principal tarefa dos comits tcnicos preparar as Normas Internacionais. Projecto de Normas Internacionais adoptados pelos comits tcnicos so submetidos aos organismos membros para votao. A publicao como International Norma exige a aprovao de pelo menos 75% dos organismos membros com direito a voto. Em outras circunstncias, especialmente quando h uma exigncia do mercado urgente de tais documentos, um tcnico comisso pode decidir publicar outros tipos de documentos normativos: - ISO Especificao Disponvel Publicamente (ISO / PAS), representa um acordo entre os peritos tcnicos em um ISO grupo de trabalho e aceito para publicao, se for aprovado por mais de 50% dos membros do comisso de pais com direito a voto; - Uma especificao tcnica ISO (ISO / TS) representa um acordo entre os membros de uma tcnica comisso e aceito para publicao, se for aprovado por 2 / 3 dos membros da comisso de lanar um votao. Um ISO / PAS ou ISO / TS revisado a cada trs anos, com vista a decidir se ele pode ser transformado em um Norma Internacional. Ateno para a possibilidade de que alguns dos elementos desta Especificao Tcnica poder ser objecto de direitos de patente. ISO no deve ser considerada responsvel pela identificao de quaisquer direitos de patente. ISO / TS 11133-1 foi elaborada pelo Comit Europeu de Normalizao (CEN), em colaborao com a norma ISO Comit Tcnico CT 34, produtos agro-alimentares, Subcomit SC 9, Microbiologia, em conformidade com o Acordo de cooperao tcnica entre a ISO eo CEN (Acordo de Viena). Ao longo do texto desta parte da ISO / TS 11133, ler "... esta na pr-europeia ..." para dizer "... esta tcnica Especificao ...". ISO / TS 11133 composto das seguintes partes, sob o ttulo geral da microbiologia de alimentos e alimentao animal alimentcios - Orientaes para elaborao e produo de meios de cultura: - Parte 1: Orientaes gerais sobre a garantia de qualidade para a preparao de meios de cultura em laboratrio - Parte 2: Aplicao prtica das orientaes gerais sobre a garantia de qualidade dos meios de cultura na laboratrio - Parte 3: O teste de desempenho Anexos A, B e C desta parte da ISO / TS 11133 so apenas para informao. ISO / TS 11133-1:2000 (E) iv ISO 2000 - Todos os direitos reservados

ndice Pgina Prefcio ................................................. .................................................. ............................................ ...... ..... v Introduo ................................................. .................................................. ........................................ .......... v 1 mbito ................................................ .................................................. ............................................... ... ...... 1 2 Referncias normativas ............................................... .................................................. ............................... 1 Terminologia 3 ................................................ .................................................. ............................................. 1 3.1 Generalidades ................................................ .................................................. .................................. .............. 1 3,2 Terminologia da garantia da qualidade ............................................. .................................................. ........... 1 3,3 Terminologia de meios de cultura ............................................. .................................................. .................. 2 3,4 Terminologia para organismos de ensaio ............................................. .................................................. ............... 5 4 Prticas para controle de qualidade dos meios de cultura .......................................... ............................................... 5 4,1 Documentao ................................................ .................................................. .................................. .. 5 4.2 Armazenamento ................................................ .................................................. ............................... ................. 6 4.3 Preparao do laboratrio de mdia ............................................. .................................................. ............. 7 4.4 Preparao para uso .............................................. .................................................. ................................ 9 4,5 Eliminao dos meios de comunicao .............................................. .................................................. ................................ 10 5 Controle de Qualidade do produto acabado ............................................ .................................................. .......... 10 5,1 controle de qualidade fsico .............................................. .................................................. ........................ 10 5.2 Controle de qualidade microbiolgica .............................................. .................................................. .............. 10 Anexo A (informativo) Designao dos componentes dos meios de cultura nas normas sobre anlise microbiolgica de produtos alimentcios e produtos de alimentao animal ......................................... ............ 12 Anexo B (informativo) As orientaes sobre preservao e manuteno de cepas de controle ............................ 14 Anexo C (informativo) garantia de qualidade dos meios de cultura - a resoluo de problemas ..................................... ... 15 Bibliografia ................................................. .................................................. ....................................... ........ 16 ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados v Prefcio O texto da ENV ISO 11133-1:2000 foi elaborada pelo Comit Tcnico CEN / TC 275 Anlise de alimentos "mtodos horizontais ", cuja secretaria mantida pela DIN, em colaborao com o Comit Tcnico

ISO / TC 34 "Agricultura de alimentos". Esta Norma Europeia deve ser atribudo o estatuto de norma nacional, quer atravs da publicao de um texto idntico ou por endosso, o mais tardar at Dezembro de 2000, e normas nacionais divergentes devem ser retiradas o mais tardar at Dezembro de 2000. Este projecto de norma europeia "Microbiologia dos alimentos para animais e alimentos para animais - Orientaes sobre a preparao e produo de meios de cultura "consiste de duas partes: - Parte 1: Orientaes gerais sobre a garantia de qualidade para a preparao de meios de cultura em laboratrio - Parte 2: orientaes prticas sobre o teste de desempenho de meios de cultura em laboratrio Anexos designado como "informativa" so dadas a ttulo meramente informativo. Neste padro Anexos A, B e C so informativo. De acordo com o CEN / CENELEC Regimento Interno, as organizaes nacionais de normalizao dos seguintes pases so obrigados a aplicar esta Norma Europeia: ustria, Blgica, Repblica Checa, Dinamarca, Finlndia, Frana, Alemanha, Grcia, Islndia, Irlanda, Itlia, Luxemburgo, Holanda, Noruega, Espanha, Portugal, Sucia, Sua e Reino Unido. Introduo No laboratrio de microbiologia de muitos testes e procedimentos dependem meios de cultura a ser consistente e fornecendo resultados reprodutveis. Os meios de cultura so utilizados em todas as tcnicas culturais tradicionais e tambm para muitos tcnicas alternativas. Muitas frmulas de meios de cultura desidratados disponveis comercialmente e muitos mais, concebidos para fins de crescimento especfico, so descritos na literatura. Alm disso, em laboratrios que realizam as anlise microbiolgica de alimentos, os principais objectivos so a manuteno, reanimar, crescer, detectar e / ou enumerar uma grande variedade de microorganismos. Os requisitos para a mdia so especficos para ambas as amostras e os organismos possam ser detectados. Os meios de cultura reunio estabelecidos ou critrios de desempenho mnimo so, portanto, um pr-requisito para qualquer trabalho de confiana microbiolgica. testes suficientes devem ser realizados para demonstrar i) o aceitabilidade de cada lote de meio II) que o meio 'adequada ao objectivo e iii) que o meio pode produzir resultados consistentes. Esses trs critrios so uma parte essencial dos processos de controlo de qualidade interno e, com as devidas documentao, ir permitir um controlo eficaz dos meios de cultura e contribuir para a produo de ambos os exatos e dados precisos. ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 1 1 mbito Esta na pr Europeia prev a garantia de terminologia geral relacionados com a qualidade da preparao da meios de cultura e especifica os requisitos mnimos a serem utilizados para a anlise microbiolgica dos produtos

destinados ao consumo humano ou animal. Estes requisitos so aplicveis a trs categorias de meios de cultura utilizados em laboratrios que preparam e / ou utilizar meios de cultura para a realizao de anlises microbiolgicas: - Fabricado comercialmente meios prontos para uso; - Meios preparados a partir de formulaes disponveis comercialmente desidratado (ou agar contagem completa por exemplo, placa ou meios de comunicao de base ao qual so adicionados suplementos por exemplo, Baird-Parker gar); - Meios preparados a partir de seus componentes individuais. 2 Referncias normativas Esta na pr inclui, por referncia datada ou no, disposies de outras publicaes. Estes referncias normativas so citadas nos lugares apropriados no texto e as publicaes so listadas a seguir. Para referncias datadas, emendas ou revises subsequentes de qualquer destas publicaes se aplicam a este Europeu Na pr somente quando nela incorporadas por emenda ou reviso. Para referncias no datadas da ltima edio do publicao referida se aplica. EN 1659:1996, em sistemas de diagnstico in vitro - Meio de cultura para microbiologia - Termos e definies. EN 12322:1999, para diagnstico in vitro dispositivos mdicos - Os meios de cultura para microbiologia - Critrio de desempenho para meios de cultura. ISO 8402:1994, de gesto da qualidade e garantia de qualidade - Vocabulary.1) 3 Terminologia 3.1 Geral Esta clusula d as definies gerais relacionadas com a garantia de qualidade e oferece diferentes tipos de terminologia relacionadas aos meios de cultura e controlar as culturas. Normas citadas entre parnteses indicam que o texto dada idntica citada. 3,2 Terminologia da garantia de qualidade 3.2.1 garantia de qualidade todas as atividades planejadas e sistemticas implementadas no sistema de qualidade e demonstradas como necessrias, para proporcionar confiana adequada de que uma entidade atender os requisitos para a qualidade ? ISO 8402? 1) Trata-se em fase de reviso e ser combinado com a norma ISO 9000-1:1994 para se tornar a norma ISO 9000:2000, de gesto da qualidade sistemas - Fundamentos e vocabulrio. ISO / TS 11133-1:2000 (E) 2 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 3.2.2 controle de qualidade Tcnicas e atividades operacionais que so utilizados para cumprir os requisitos de qualidade ? ISO 8402? 3.2.3 controle de qualidade interno um programa de controlo contnuo do trabalho do laboratrio elaborado por elas ou para elas, e com base na anlise de controle juntamente com o acompanhamento e, se necessrio, aes corretivas 3.2.4 lote de meio de cultura; lote de meios de cultura unidade totalmente rastrevel de um meio de se referindo a uma quantidade definida de granel,

produtos semi-acabados ou produtos finais, que compatvel em tipo e qualidade e que passou as exigncias da produo (controle em processo) e testes de qualidade e que tenha sido produzido dentro de um perodo de produo definido, tendo sido atribudo o mesmo nmero de lote ? EN 12322? 3.2.5 desempenho de meios de cultura a resposta de um meio de cultura para desafiar por organismos de ensaio, sob condies definidas 3,3 Terminologia de meios de cultura 3.3.1 meio de cultura formulao de substncias, no estado lquido, semi-slido ou em forma slida, que contm componentes naturais e / ou sintticas destinados a apoiar a multiplicao, ou para preservar a viabilidade, de microrganismos NOTA Quando usado em conexo com as palavras compostas, este termo muitas vezes abreviado para "mdio" de enriquecimento (por exemplo, mdio). ? PT 1659? 3.3.1 Os meios de cultura classificadas por composio 3.3.2.1 meio de cultura quimicamente definido meio de cultura, consistindo apenas de constituintes quimicamente definidos (isto , da estrutura molecular conhecida e grau de pureza) ? PT 1659? 3.3.2.2 meio de cultura quimicamente incompleta meio de cultura constitudo no todo ou em parte, de materiais naturais, processados ou no, a composio qumica de que no est completamente definido NOTA: Para os vrios componentes quimicamente indefinido usado em meios de cultura, ISO / TC 34/SC 9 especificou harmonizadas denominaes - ver Anexo A. 3.3.2 Os meios de cultura classificadas por coerncia 3.3.3.1 meio de cultura lquido meio de cultura constitudo de uma soluo aquosa de um ou mais componentes (por exemplo, gua peptonada, caldo nutriente) ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 3 NOTA 1: Em alguns casos, as partculas slidas so adicionadas ao meio de cultura lquido. NOTA 2: meio lquido em tubos, frascos ou garrafas so comumente chamados de "caldo". ? PT 1659? 3.3.3.2 meio de cultura slido e meio de cultura semi-slidos meio de cultura lquido contendo materiais solidificar (por exemplo, gar-gar, gelatina, etc) em diferentes concentraes NOTA 1: Devido ao uso mundial de meios de cultura solidificado com gar-gar, o reduzido "agar" termo freqentemente utilizado sinnimo de meios de cultura slidos e, portanto, em conexo com os substantivos, por exemplo, "Agar Contagem de placa". NOTA 2: meios de cultura slido derramado em placas de Petri so comumente chamados "chapas". meios de cultura slido derramado em tubos que

so mantidos em posies inclinada enquanto os meios de comunicao esto se solidificando so freqentemente chamados de "inclinaes". ? PT 1659? 3.3.3 Os meios de cultura classificadas por inteno de uso 3.3.4.1 meio de transporte meio de cultura destinado a preservar e manter a viabilidade dos microrganismos durante o perodo de tempo entre coleta de amostras e processamento laboratorial das amostras meios de transporte NOTA geralmente contm substncias que no permitem a multiplicao de microorganismos, mas garantir a sua preservao (por exemplo, Stuart ou meio Amies "Transportes). ? PT 1659? 3.3.4.2 meio de preservao meio de cultura destinado a preservar e manter a viabilidade dos microrganismos durante um perodo prolongado, a proteg-los contra as influncias negativas que podem ocorrer durante o armazenamento a longo prazo e permitir a recuperao aps esse perodo (por exemplo, meio ovo Dorset) ? PT 1659? 3.3.4.3 meio de reanimao meio de cultura, permitindo estressada e danificada microrganismos para reparar e recuperar a sua capacidade para o normal crescimento, sem necessariamente promover a sua multiplicao ? PT 1659? 3.3.4.4 meio de enriquecimento predominantemente meio de cultura lquido que, devido sua composio, proporciona condies particularmente favorveis para multiplicao de microrganismos ? PT 1659? 3.3.4.4.1 meio de enriquecimento seletivo meio de enriquecimento, que apoia a multiplicao de microrganismos especficos, enquanto inibir parcial ou totalmente o crescimento de outros microrganismos (por exemplo, meio Rappaport-Vassiliadis) ISO / TS 11133-1:2000 (E) 4 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 3.3.4.4.2 meio de enriquecimento no-seletivo meio de enriquecimento, que apia o crescimento da maioria dos microrganismos (por exemplo, caldo nutriente) 3.3.4.5 meio de isolamento meio de cultura slido ou semi-slido que sustenta o crescimento de microorganismos 3.3.4.5.1 meio de isolamento seletivo meio de isolamento que suporta o crescimento de microrganismos especficos, enquanto inibindo outros microrganismos (por exemplo, PALCAM, gar MacConkey) ? PT 1659? 3.3.4.5.2 meio de isolamento no seletivo meio de isolamento que no concebido para inibir seletivamente microorganismos (ex. gar

nutriente) ? PT 1659? 3.3.4.6 meio diferencial meio de cultura que permite a anlise de um ou mais fisiolgicas / bioqumicas caractersticas da microorganismos para a sua identificao (por exemplo, uria mdio, gar Kligler) NOTA mdia diferencial que pode ser usado como meios de isolamento so referidos como meios de isolamento / diferencial (por exemplo, xilose gar lisina desoxicolato (XLD)). ? PT 1659? 3.3.4.7 meio de identificao meio de cultura destinado a produzir uma reao de identificao especfica, que no requer qualquer outra teste confirmatrio Nota para a mdia de identificao que podem ser usados como meios de isolamento so referidos como meios de isolamento / identificao. ? PT 1659? 3.3.4.8 meios com usos mltiplos certos meios de cultura podem ser atribudas a diversas categorias, por exemplo, gar-sangue um meio de reanimao de acordo a 3.3.4.3. um meio de isolamento de acordo com 3.3.4.5 e um meio diferencial, de acordo com 3.3.4.6 utilizados para deteco de hemlise ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 5 3.3.4 Os meios de cultura classificadas de acordo com o mtodo de preparao 3.3.5.1 prontos para uso mdio meio de cultura que fornecido em embalagens prontas para a utilizao de formulrio (por exemplo, placas de Petri ou tubos ou outros recipientes) 3.3.5.2 meio de cultura preparado a partir de formulaes comerciais desidratados meio de cultura na forma seca, que no est pronto para uso imediato (ps, por exemplo, grnulos, produtos liofilizados). Reidratao far um dos dois tipos de meio - Uma completa e pronta para uso mdio; - Um meio incompleta em que os componentes instveis so adicionados no momento do uso. 3.3.5.3 O meio de cultura preparado a partir de componentes individuais em laboratrio 3,4 Terminologia para organismos de ensaio 3.4.1 Geral Estes microorganismos so geralmente usados para controle de qualidade e testes de desempenho de meios de cultura. Eles so definido de acordo com sua fonte da seguinte forma. 3.4.2 estirpe de referncia microrganismo definido, pelo menos, o gnero eo nvel de espcie, catalogados e descritos de acordo com a sua caractersticas e, de preferncia que ateste a origem ? EN 12322? 3.4.3 estoques de referncia um conjunto de distintas culturas idnticas obtidas em laboratrio por um nico sub-cultura a partir da cepa de referncia, quer em laboratrio ou de um fornecedor

? EN 12322? 3.4.4 trabalhar a cultura uma sub-cultura primria de uma unidade de referncia (3.4.3) 4 Prticas para controle de qualidade dos meios de cultura 4,1 Documentao 4.1.1 Documentao exigida do fabricante Os detalhes devem estar disponveis a partir do fabricante: - O nome do meio, os componentes individuais e todos os suplementos e os cdigos de seus produtos; - Cdigo do lote; ISO / TS 11133-1:2000 (E) 6 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados - PH do meio antes de usar; - Armazenamento de informao ea data de validade; - Qualquer avaliao de desempenho e organismo teste utilizado; - Ficha tcnica; - Certificado de controle de qualidade; - Segurana e / ou dados de perigo, quando necessrio. 4.1.2 Lista de verificao pelo laboratrio testes laboratoriais aps a recepo do meio: - O nome do mdio e do cdigo do lote; - Data de recebimento; - Prazo de validade; - Condio e integridade da embalagem; 4.2 Armazenamento 4.2.1 Geral Em todos os casos, siga as instrues do fabricante, quando disponveis sobre as condies de armazenagem, prazo de validade e uso. 4.2.2 A gesto da qualidade e controle de meios desidratados e suplementos Media so geralmente adquiridos de produtores comerciais. Eles so entregues em p ou desidratados granulado em contentores selados e suplementos de diferentes substncias seletivas ou de diagnstico so prestados em qualquer estado do liofilizado ou lquido. No entanto, as compras devem ser planejadas para promover uma rotatividade regular de estoque (ou seja, no primeiro escolher). Para manter um estoque efetivo outras verificaes devem incluir: - Re-verificao do selo; - Data de abertura do primeiro; - Avaliao visual do contedo de contentores abertos. Especialmente aps a abertura de uma nova embalagem, a qualidade do meio pode depender do ambiente de armazenamento. Perda da qualidade do meio desidratado mostrado pela mudana de caractersticas do fluxo de p, homogeneidade, aglomerantes, muda de cor etc. Qualquer meio de cultura desidratado que absorveu umidade ou mostra mudanas bvias em fsica aparncia deve ser descartada. 4.2.3 comercialmente fornecidos meios prontos para uso Siga as instrues do fabricante, as condies de armazenagem, prazo de validade e utilizao. ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 7 4.2.4 Media preparados a partir de formulaes disponveis comercialmente desidratado e individuais bsicos componentes

O prazo de validade desses tipos de mdia varia. Por isso, difcil afirmar prazos gerais para o armazenamento de meios preparados. Internacional Especfico ou National Standards pode estipular condies e vida de prateleira. meios de cultura esterilizados dispensadas em placas, tubos ou frascos e reagentes que no so utilizadas imediatamente ser protegidos contra a luz e dessecao. A menos que uma data de expirao validado tiver sido estabelecido ou especificado na Norma em questo, estril parcialmente mdia completo, ou seja, meios de comunicao em que os componentes so adicionados final imediatamente antes do uso, devem ser mantidos em um geladeira por, no mximo, trs meses ou em temperatura ambiente por no mais de um ms em condies que impedir a sua composio seja modificado. No entanto, recomenda-se que a mdia a que lbil seletiva suplementos foram adicionados devem ser utilizados no dia da preparao. meios slidos contendo quimicamente reactivas e / ou lbil no deve ser armazenado a granel para refuso. Observe a mudana de qualquer cor, sinal de evaporao / desidratao ou o crescimento microbiano. Os lotes de meios de comunicao mostrando como mudanas no devem ser usados. Antes de utilizar ou ainda antes do aquecimento, recomendvel que os meios de cultura ser equilibrada com a temperatura ambiente temperatura. 4.3 Preparao do laboratrio de mdia 4.3.1 Geral A preparao precisa de meios de cultura um dos passos fundamentais na anlise microbiolgica e Ser dada especial ateno. Respeito boas prticas de laboratrio e as instrues do fabricante quanto manipulao dos meios desidratados e outros componentes, especialmente os perigosos, ou seja, materiais que contenham sais biliares ou outros agentes seletivos. Onde os meios so preparados a partir de formulaes comerciais desidratados siga as instrues do fabricante com preciso. Documento todos os dados relevantes, ou seja, pesos / volume, pH, data de preparao, as condies de esterilizao, operador. Para os meios preparados a partir de componentes individuais, siga a receita precisa e registar todos os pormenores, como em (4.1.2) e, Alm disso, a plena identidade (ou seja, cdigo e nmero de lote) de todos os componentes utilizados. 4.3.2 gua A gua utilizada deve ser destilada ou gua de qualidade equivalente ou seja, livre de substncias que possam inibir ou influenciar o crescimento de microrganismos nas condies teste. Se a gua destilada preparado a partir de cloro gua, neutralizar o cloro antes da destilao. A gua destilada deve ser armazenado em recipientes fabricados de preferncia a partir de materiais inertes (por exemplo, de vidro neutro, polietileno, etc), que ser mostrado para ser livre de quaisquer substncias inibidoras antes da sua utilizao inicial. Observao Em alguns casos, pode ser necessrio o uso de gua recentemente preparado, livre de dixido de carbono dissolvido. Para ser considerado como sendo de boa qualidade, a gua destilada deve ter uma resistividade de pelo menos

300 000? Cm. AVISO gua processada atravs de um permutador de ies (desionizada), pode ter um microorganismo de alta contedo, pelo que aconselhvel no usar essa gua, sem verificar que o teor de microorganismo a gua baixa. Consulte o fabricante para a melhor maneira de minimizar a contaminao microbiana. Pesadamente ISO / TS 11133-1:2000 (E) 8 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados gua deionizada contaminada que foi esterilizado por filtrao pode ainda conter substncias inibidoras do crescimento de alguns microorganismos. 4.3.3 Pesagem e reidratao Pesar cuidadosamente a quantidade adequada de meio desidratado (tomando cuidado para no inalar o p, especialmente com meios que contenham substncias txicas) e, progressivamente, adicione a quantidade necessria de gua evitando a aglomerao. 4.3.4 A dissoluo e disperso meios desidratados necessidades rpida disperso pelo imediato e por agitao, seguida de aquecimento, se necessrio, para dissolver. gar contendo devem ser colocados de molho por alguns minutos antes do aquecimento com a mistura para dissolver. Para os meios preparados a partir de componentes individuais de cada componente devem ser adicionados separadamente e autorizado a dissolver-se antes de finalmente tornar-se o volume. 4.3.5 Medio e ajuste de pH Medir o pH com um medidor de pH e ajustar, se necessrio, ou seja para os meios preparados a partir de componentes individuais o laboratrio de forma que aps a esterilizao e resfriamento a 25 C o meio com o pH exigido? 0,2 unidades de pH, a menos em contrrio. O ajuste normalmente realizado atravs de uma soluo de cerca de 40g / l (cerca de 1 mol / l) hidrxido de sdio (NaOH) ou cerca de 36,5 g / l (cerca de 1 mol / l), cido clordrico (HCl). NOTA Comercialmente mdia fabricados podem apresentar alteraes significativas no pH antes e aps a autoclavagem. No entanto, fornecidas de boa qualidade de gua destilada ou desionizada usado, ajuste de pH antes da autoclavagem no deveria ser necessrio. 4.3.6 Distribuio Repartir o meio em recipientes adequados com um volume de 1,2 a 3 vezes maior que a mdia. 4.3.7 Esterilizao 4.3.7.1 Geral A esterilizao dos meios de cultura e de reagentes podem ser realizados por meio de esterilizao por calor mido (4.3.7.2) ou esterilizao por filtrao (4.3.7.3). Certos meios no precisa de esterilizao em autoclave, mas pode ser utilizado aps a ebulio. Por exemplo, meios de comunicao Enterobacteriaceae contendo verde brilhante so particularmente sensveis ao calor e luz e deve ser rapidamente refrigerao aps a ebulio e protegido da luz forte. Alm disso, alguns reagentes podem ser usados sem esterilizao (veja O padro internacional apropriada ou as instrues do fabricante). 4.3.7.2 A esterilizao por calor mido Esterilizao pelo calor hmido realizada em um preparador autoclave ou mdia. Em geral, a operao de autoclavagem leva 15 minutos a 121 C. Para volumes superiores a 1 000 ml, adaptar o ciclo de esterilizao, conforme necessrio. Em todos os casos

siga as instrues dadas na Norma Internacional ou as instrues do fabricante. O desempenho dos o autoclave, devem ser monitorados pelo perfil de temperatura atravs de termopares e tiras de teste sob carga tpica condies para garantir a temperatura desejada pode ser alcanada. NOTA superaquecimento pode ocorrer quando grandes volumes de mdia (> 1 000 ml) so processados em autoclave. Controlo da eficcia da esterilizao essencial. Aps o aquecimento, essencial que os meios de ser arrefecido de modo a impedir a ferver. Isto particularmente importante por exemplo, para produtos sensveis Enterobacteriaceae e meios de comunicao em grandes volumes. ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 9 4.3.7.3 Esterilizao por filtrao Esterilizao por filtrao pode ser realizada sob condies de vcuo ou sob presso. membranas de Uso e filtro elementos com um dimetro de poro de 0,22? m. Eles devem ter sido esterilizados na autoclave. Consulte a instrues do fabricante quanto ao uso de elementos filtrantes ou membranas que foram comprados em um estril condio. Esterilizar as diferentes partes do aparelho de filtrao, montados ou no, em autoclave por 15 min a 121 C. Se a montagem, necessrio assptica pode ser realizada em uma capela de fluxo laminar aps a autoclavagem. Nota Alguns membranas de filtro pode reter protenas (como antibiticos). A fim de obter a concentrao correta do usurio deve pr-molhar o filtro. 4.3.7.4 Acompanhamento Aps autoclavagem, fervura ou filtragem, todas as mdias devem ser monitorados, em especial no que diz respeito ao pH, cor, esterilidade e consistncia. 4.3.8 Preparao de suplementos Manufacturado suplementos que contm agentes txicos, nomeadamente antibiticos, devem ser manuseados com cuidado evitando disperso de p que podem dar origem a reaces alrgicas ou de outros funcionrios do laboratrio. Tomar medidas adequadas Precaues e siga as instrues do fabricante, tornando as solues. No use esse tempo para alm do seu indicado que, por antibitico solues de trabalho, geralmente o mesmo dia. Sob certas circunstncias, o antibitico solues podem ser armazenadas congeladas em alquotas adequadas, mas no devem ser congelados novamente aps o descongelamento. A perda potencial de actividade, devido ao congelamento deve ser discutida com o fabricante ou testados pelo usurio. 4.4 Preparao para uso 4.4.1 fuso de meios de cultura gar Derreta um meio de cultura, colocando-o em um banho de gua fervente ou por qualquer outro processo que d resultados idnticos (Por exemplo, um fluxo de vapor atravs de autoclave). A mdia que tenham sido previamente autoclavado deve ser reaquecido para um tempo mnimo para manter a qualidade da mdia. Evitar sobre-aquecimento e remover quando tiver derretido. Cool derretido da mdio e 47 C? 2 C em banho-maria com termstato at ao momento em que for utilizado. O tempo necessrios para atingir 47 C depende do tipo de meio, o volume eo nmero de unidades em banho-maria.

meio derretido deve ser utilizado o mais rapidamente possvel, mas recomenda-se que no devero ser mantidos por mais de 4 h. 4.4.2 desaerao do meio de cultura Se necessrio, antes de utilizar, o calor do meio de cultura em gua fervente ou sob um fluxo de vapor durante 15 minutos, com tampas ou tampas soltas; aps o aquecimento, aperte as tampas e esfriar rapidamente temperatura operacional. 4.4.3 A adio de suplementos suplementos Heat-lbil deve ser adicionado ao meio aps ter sido resfriado a 47 C? 2 C. Permitir que o estril suplemento para atingir a temperatura ambiente antes de adicion-lo ao meio gar. lquidos frios pode causar gar gel forma de flocos ou transparente. Misture todos os suplementos para o meio com cuidado e completamente, e depois distribuir para a final contentores o mais depressa possvel. 4.4.4 Preparao e armazenamento das mdias em placas de Petri Despeje o meio de cultura gar fundido em placas de Petri, de modo a obter uma espessura de pelo menos 2 mm (por exemplo, para 90 milmetros pratos de dimetro, 15 ml de gar-gar so normalmente exigidos). Deixe o agar para esfriar e solidificar, colocando as placas de Petri com tampas no lugar sobre uma superfcie horizontal fria. ISO / TS 11133-1:2000 (E) 10 ISO 2000 - Todos os direitos reservados NOTA Durante a incubao, a perda de umidade do gar ir ocorrer. A perda de mais de 15% do teor de gua pode afetar negativamente o crescimento de microorganismos em algumas circunstncias. Fatores que influenciam a perda de gua so composio do meio, quantidade de meio nas placas, o tipo de incubadora ou seja, ventilao assistida ou no, a umidade da atmosfera na incubadora, a posio eo nmero das placas na incubadora e da temperatura de incubao. Utilizar o meio solidificado imediatamente ou armazenar em condies que impeam a sua composio seja modificada, ou seja, no escuro e / ou em geladeira a 4 C a 12 C? em sacos fechados por um perodo mximo de uma semana ou como indicado pelo fabricante ou norma especfica. Rotular os pratos na base com a data de preparao e / ou data de validade e de identidade. Alternativa sistemas de codificao cumprir esses requisitos podem ser utilizados. A vida til das placas derramado vai aumentar se eles so armazenados em sacos plsticos fechados. A fim de evitar a ocorrncia de condensao, as placas devem estar fresco antes de ser colocado em sacos. No secar a superfcie do gar placas antes de chill armazenamento. Em geral, para a inoculao de superfcie de um meio de cultura slida, seca a loua, de preferncia, sem tampa e com a superfcie do gar virada para baixo, em um forno definido a uma temperatura entre 25 C e 50 C ou em um capela de fluxo laminar, at que as gotas tenham desaparecido da superfcie do meio. No excesso de sec-los. Comercialmente preparados e prontos a usar placas de gar deve ser armazenado e utilizado de acordo com o fabricante instrues. 4.4.5 Incubao No empilhar os pratos em pilhas de mais de 6 alto e deixar espao para a circulao de ar para permitir atingir a mdia

temperatura de incubao, o mais rapidamente possvel. Por meio lquido, o tempo para atingir a temperatura de incubao dependente Era uma srie de fatores por exemplo volume, carga, recipiente, tipo de incubadora. No caso de frascos anaerbios pode ser necessrias para empilhar as placas superiores a 6 de altura. 4,5 Eliminao da mdia Ambos os contaminados e os meios utilizados devem ser eliminados de uma maneira que seja segura e atenda a qualquer local ou nacional Regulamento. 5 Controle de Qualidade do produto acabado 5,1 controle de qualidade fsico testes laboratoriais devem incluir, no mnimo: - Valor de pH medido entre 20 C e 25 C; e pela observao: - A quantidade cheia e / ou espessura da camada; - De cor; - Clareza / presena de artefactos pticos; - A estabilidade do gel / consistncia / humidade. 5.2 Controle de qualidade microbiolgica 5.2.1 Contaminao Uma quantidade adequada de cada lote dever testado para a contaminao. ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 11 5.2.2 Teste de organismos Um conjunto de organismos de ensaio deve conter apenas os microorganismos com o representante estvel de suas caractersticas espcies e que tm se mostrado confivel para a demonstrao de um timo desempenho de um determinado preparadas em laboratrio mdio. Os organismos de ensaio deve incluir principalmente as tenses que esto amplamente disponveis em colees de referncia da cultura, mas cepas isoladas bem caracterizado pelo laboratrio tambm podem ser includos. A relevantes caractersticas culturais da cultura de reserva devem ser examinados e registrados pelo laboratrio e tenso renovada devem caractersticas atpicas. prefervel usar cepas que originaram a partir de alimentos embora nem todas as colees de culturas fornecer tais dados em sua origem. Os organismos de teste para cada meio podem incluir: - Robusto de amostras positivas com caractersticas tpicas; - Fracamente crescente de amostras positivas (ou seja, de natureza mais sensvel); - Bioquimicamente cepas no-reativa por exemplo, os fermentao mostrando diferentes reaes ou fluorescncia; - Inibiu completamente isolados. NOTA: O Comit Internacional de Microbiologia e Higiene de Trabalho do Partido da Cultura Media (WPCM) tm prescrito um conjunto validado de estirpes de ensaio para avaliao da mdia? 1?. 5.2.3 mdia Ready-to-use e reagentes Os fabricantes de mdias disponveis comercialmente pronto para uso, especialmente se for aprovado com a norma ISO 9001? 2? ou ISO 9002? 3? normas, ter um programa de qualidade em vigor e podem emitir um certificado de qualidade com a mdia que fornecem. Nestas condies o usurio no pode precisar de realizar testes extensivos em mdia, mas deve garantir que condies de armazenamento so mantidas. 5.2.4 Media preparados a partir de formulaes disponveis comercialmente desidratado Para os efeitos desta parte da ENV ISO / TR 11133-1, testes qualitativos para cada lote de meio

preparado so os requisitos mnimos, mas, se os exames quantitativos sobre as amostras devero ser realizadas, testes quantitativos sobre cada lote dar maiores garantias de qualidade da mdia. Para os meios de comunicao que no contm indicadores ou seletiva agentes o uso de uma cepa nico teste positivo adequado. Para os meios de comunicao que contm indicadores ou agentes seletivos, as linhagens que demonstram a funo do indicador (s) e seletividade deve ser utilizada. Para meios complexos, ou seja, com complementaes, cada lote deve ser verificada com as estirpes com caractersticas constantes da 5.2.2. No caso dos meios de comunicao pronto para uso para que os suplementos de laboratrio preparados foram adicionados os mesmos se aplica. 5.2.5 Media preparados a partir de componentes bsicos individuais. Recomenda-se que, para alm dos testes qualitativos descritos no ponto 5.2.4, que alguns testes quantitativos so realizados , utilizando tcnicas como o Miles & modificada tcnica Misra? 1? ou espiral chapeamento, a fim de acompanhar as tendncias em qualidade dos materiais de base, a produtividade do mdium e em casa de protocolos de produo do laboratrio. Observao Essas so as diretrizes mnimas, na prtica, os alimentos podem conter microorganismos salientou. A adequao do meio no que diz respeito recuperao de clulas estressadas devem ser tidos em conta. Para obter informaes sobre a preservao, manuteno tcnicas e colees de cultura de referncia ver Anexo B. ISO / TS 11133-1:2000 (E) 12 ISO 2000 - Todos os direitos reservados Anexo A (Informativo) Designao dos componentes dos meios de cultura nas normas sobre anlise microbiolgica de produtos alimentcios e produtos de alimentao animal A.1General A fim de harmonizar a descrio dos vrios componentes na composio de meios de cultura em microbiolgica mtodos padro, ISO / TC 34/SC 9 "produtos alimentares e agrcolas Microbiologia" decidiu que o denominaes para as categorias de componentes designados em A.2 A.5. A.2Peptones - Digesto enzimtica de casein2); - Digesto enzimtica de farelo de soja; - Digesto enzimtica do animal tissues3); - Digesto enzimtica do corao; - Digesto enzimtica de gelatina; - Digesto enzimtica de tecidos animais e vegetais. A.3Extracts - Extrato de carne; - Corao, crebro, extrato; - Extrato de levedura; - Blis bovina para bacteriologia; - Bilesalts; - Sais biliares No.3. A.4Agar - gar bacteriolgico; A.5Other - Emulso de gema de ovo; 2) Inclui pptica de digerir a casena, trpticos de casena e digerir triptona.

3) Isto inclui peptona de carne, pptica de digerir carne, pancreticas de digerir carne. ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 13 - Leite em p desnatado; - Hidrolisado cido de casena. ISO / TS 11133-1:2000 (E) 14 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados Anexo B (Informativo) Orientaes sobre preservao e manuteno de cepas de controle B.1General Existem vrios mtodos disponveis, ou seja, liofilizao, armazenamento em grnulos de? - 70 C, ou usando nitrognio lquido, para o sucesso da preservao e manuteno de todos os microrganismos relevantes para a microbiologia de alimentos. Um mtodo pode no ser apropriado para todas as estirpes. Estas orientaes so apresentados na figura B.1. cepas B.2Reference de fontes comerciais Se as cepas de referncia a partir de coleces de referncia ou ISO 9001 [2] ou ISO 9002 [3], aprovado fornecedores comerciais compradas e mantidas em suas embalagens originais, as instrues dos fabricantes para seu cultivo e uso devem ser seguidas. B.3Laboratory preparado estoques de referncia Banco de culturas de cepas de referncia (B.2) para controle de qualidade e teste de desempenho deve ser mantida e tratados de uma maneira que minimize a possibilidade de contaminao cruzada, mutao ou alterao de tpica caractersticas. estoques de referncia devem ser armazenados em alquotas mltiplas ou congelados (-70 C) ou liofilizado. suas caractersticas de crescimento devem ser devidamente documentados para cada meio de ligar / em que ser utilizado como teste organismos. B.4Working culturas culturas de trabalho so preparados a partir de aes de referncia liofilizado ou congelado (B.3). As alquotas devem ser manuseados forma, o que evita possvel contaminao cruzada do material de referncia e / ou a sua deteriorao. Trabalho culturas deve ser preparado por centrifugao de uma alquota do material de referncia em um meio de crescimento no-seletiva e incubao de rendimento de uma cultura em fase estacionria. Para os sistemas de preservao comercialmente disponveis as instrues do fabricante devem ser rigorosamente seguidas. NOTA sub-culturas a partir de culturas de trabalho no deve ser feita. No entanto, as culturas de trabalho podem ser usados mais de uma vez desde que sejam manipulados e armazenados adequadamente ou seja, para evitar a contaminao cruzada e / ou deteriorao por no mais de uma semana. Figura B.1 estirpe de referncia Obtidos a partir de uma cultura de referncia coleta de liofilizado e em vcuo, ou um organismo definido para a pelo gnero e nvel de espcie, altamente caracterizado de origem conhecida. estoque Referncia

Uma srie de alquotas de culturas idnticas obtidos em laboratrio por um nico sub-cultura da cepa de referncia. cultura de trabalho A principal sub-cultura a partir de uma alquota de o estoque de referncia ISO / TS 11133-1:2000 (E) ABNT 2000 - Todos os direitos reservados 15 Anexo C (informativo) A garantia da qualidade dos meios de cultura - a resoluo de problemas Anormalidade Possvel Agar no solidificar superaquecimento do meio durante a preparao Baixo pH causando hidrlise cida para ocorrer Incorreta peso do gar utilizado Agar no completamente dissolvido Pobre mistura de ingredientes Incorreta pH do meio de superaquecimento durante o preparo M qualidade da gua contaminao qumica Extraneous pH medido na temperatura errada medidor de pH mal calibrada M qualidade desidratados mdio Anormal cor superaquecimento do meio durante a preparao M qualidade da gua M qualidade desidratados mdio Incorreta pH contaminao Extraneous A formao de precipitados de superaquecimento do meio durante a preparao M qualidade da gua M qualidade desidratados mdio Pobre controle de pH Mdias inibitria / superaquecimento da baixa produtividade da mdia durante a preparao M qualidade desidratados mdio M qualidade da gua Incorreta formulao utilizada, por exemplo, ingredientes no pesava corretamente, os suplementos adicionados em errada concentrao Pobre seletividade do meio de superaquecimento durante o preparo M qualidade desidratados mdio Incorreta formulao utilizada Suplementos adicionados incorretamente por exemplo, quando o meio tambm quente ou em concentrao errada ISO / TS 11133-1:2000 (E) 16 ABNT 2000 - Todos os direitos reservados Bibliografia ? 1? Os meios de cultura para a Microbiologia Alimentar. Progresso em Microbiologia Industrial, vol. 34 (1995). Eds. Corry J.E.L., Curtis G.D.W e Baird, R.M. Elsevier, em Amsterd. ? 2? ISO 9001, Sistemas da qualidade - Modelo para garantia da qualidade em projeto, desenvolvimento, produo, instalao e servicing.4) ? 3? ISO 9002, Sistemas da qualidade - Modelo para garantia da qualidade em produo, instalao e servicing.4) 4) Estes sero combinados como ISO 9001:2000, Sistemas de Gesto da Qualidade - Requisitos. ISO / TS 11133-1:2000 (E)

ICS 07.100.30 Preo baseado em 16 pginas