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DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO ESPECÍFICO DE PRÓSTATA (PSA)

DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO ESPECÍFICO DE PRÓSTATA (PSA)

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Realizar la determinación semi-cuantitativa del antígeno específico de la próstata (PSA) en el suero humano.
Realizar la determinación semi-cuantitativa del antígeno específico de la próstata (PSA) en el suero humano.

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Practica 7
Fátima Sarai López Hernández, Mónica Adriana Rodríguez Zavala, Sarai Zúñiga Estupiñan,Abraham López Arellano
29/10/2011
 
Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Séptimo Semestre grupo C  Laboratorio de Inmunología Diagnostica
 
1
Universidad Autonoma de Zacatecas
 
“Francisco García Salinas”
 
Area de Ciencias de la Salud
 
Unidad Academica de Ciencias Químicas
 
Químico Farmaceutico Biologo
 
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA DIAGNOSTICA
RACTICA
D
ETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO ESPECÍFICO DEPRÓSTATA
(PSA)
* Fátima Sarai López Hernández, Mónica Adriana Rodríguez Zavala,Sarai Zúñiga Estupiñan, Abraham López ArellanoDocente:
Aracely Gómez Corvera
 
*
7
°
Semestre Grupo
C
” Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, Campus
UAZ Siglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp.98160 Zacatecas Zac.Agosto-Diciembre 2011
OBJETIVO
 Realizar la determinación semi-cuantitativa del antígeno específico de la próstata(PSA) en el suero humano.
INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO
El antígeno prostático específico (PSA), también llamado
calicreína III 
,
seminina
,
semenogelasa
,
γ
-seminoprotein
y
antígeno P30
, es unaglicoproteínade 34kDproducida casi exclusivamente por la glándula prostática. El PSA es producido con el fin de licuar el
 
Practica 7
Fátima Sarai López Hernández, Mónica Adriana Rodríguez Zavala, Sarai Zúñiga Estupiñan,Abraham López Arellano
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Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Séptimo Semestre grupo C  Laboratorio de Inmunología Diagnostica
 
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semeneyaculadoy permitir un medio para que losespermatozoidesse movilicen libremente. También se cree que es útil para disolver la capa mucosacervical,permitiendola entrada a los espermatozoides. Bioquímicamente, el PSA es una enzima serín-proteasa elgen de la cual está localizado en el cromosoma 19 (19q13).Es una proteína cuya síntesis no es exclusiva de la próstata. Una pequeñísima partede este PSA pasa a la circulación sanguínea de hombres enfermos, y es precisamente estaPSA que pasa a lasangre,la que se mide para eldiagnóstico,pronósticoy seguimiento del cáncer
 — 
tanto localizado comometastásico
 — 
y otros trastornos de la próstata, como laprostatitis.Los niveles normales en sangre de PSA en losvaronessanos son muy bajos, del orden de millones de veces menos que elsemen,y se elevan en laenfermedadprostática. Los valores de referencia para el PSA sérico varían según los distintos laboratorios,aunque el valor normal aceptado actualmente es de hasta 2,5 ng/ml. Su producción dependede la presencia deandrógenosy del tamaño de laglándulaprostática. El PSA aumenta con el agrandamiento de la próstata, llamado tambiénhiperplasiabenigna de próstatao HBP, fenómeno que ocurre en muchos hombres conforme vanavanzando en edad. También puede aumentar en caso de irritación,prostatitis
 — 
unainflamación de la glándula prostática
 — 
y en el infarto prostático. El PSA también puedeaumentar normal y lentamente conforme avanza la edad del hombre, incluso si la próstataes normal. Laeyaculaciónpuede provocar un aumento temporal del PSA en la sangre,razón por la que se recomienda abstenerse derelaciones sexualesun mínimo de 2 días antesde la extracción de sangre para el estudio del PSA. Al contrario de lo que se ha creídodurante años, el tacto rectal no altera significativamente los niveles del PSA. Utilizandoconjuntamente el valor del PSA y el tacto rectal se puede descubrir más del 60% de loscánceres de próstata que todavía no están localizados.
La prueba PSA ELISA está basada en el principio de un ensayo inmunoabsorbentevinculado a las enzimas de fase sólida. El sistema de ensayo utiliza un anticuerpo Anti-PSAde ratón dirigido hacia el PSA intacto para la inmovilización de la fase sólida(en los pozosde la microplaca) un anticuerpo Anti-PSA monoclonal conjugado para peroxidasa derábano (HRPO) se encuentra en la solución de conjugado de enzima-anticuerpo.La muestra de la prueba es permitida reaccionar primero con el anticuerpo de conejoinmovilizado a T °C ambiente por 60´los,pozos son lavados para remover cualquier
 
Practica 7
Fátima Sarai López Hernández, Mónica Adriana Rodríguez Zavala, Sarai Zúñiga Estupiñan,Abraham López Arellano
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antígeno no adherido. El conjugado HRPO Anti-PSA monoclonal es entonces reaccionadocon el antígeno inmovilizado por 60´a T °C ambiente provocando que las moléculas dePSA se encuentren entre la fase sólida y los anticuerpos vinculados a la enzima. Los pozosson lavados con agua para remover anticuerpos etiquetados no adheridos.Una solución de reactivo TMB es agregada e incubada a T °C ambiente por20´provocando el desarrollo de un color azul. El desarrollo del color es frenado con laadición de solución de frenado cambiando el color a amarillo. La concentración de PSA esdirectamente proporcional a la intensidad del color de la muestra de prueba. La absorbanciaes medida espectrofotométricamente a
450 nm.
 
INTERPRETACIÓN
En la hiperplasia benigna prostática, los valores de PSA son directamenteproporcionales al tamaño de la glándula prostática. Un valor de PSA mayor de 10 ng/ mlsiempre es patológico, y en un 50 % de los casos se diagnostica un cáncer prostáticomediante biopsia.Trabajos de investigación han descripto que pacientes con hiperplasia benignaprostática tienen mayor proporción de PSA libre respecto a aquellos con cáncer prostático.La combinación de ambos ensayos y la expresión del resultado a través del índice de PSAlibre/total permitiría utilizar el mismo para evaluar el riesgo relativo de CP .El valor decorte de este índice no ha sido claramente definido. Según la metodología utilizada el puntode corte seria de 0.15-0.25 (valores por debajo indicarían mayor probabilidad de cáncer).Se ha reportado su utilidad para valores de PSA total entre 4 -10 ng/mlSegún el criterio establecido por Mayo Clinic (USA):PSA < 4 ng/ml el riesgo de Cancer de prostata(CP) es bajoPSA > 4ng/ml y PSAL/PSA total <0,25 indica aumenta del riesgo de CPPSA < 4ng/ml y PSAL/PSA total <0,18 indica aumenta del riesgo de CPNota: Los resultados de laboratorios pueden variar según la metodología utilizada.

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