CROMATINA

SEXUAL

DEFINIIE Cromatina sexual este un cromocentru cu particulariti morfologice bine definite care permite stabilirea sexului genetic. Cromatina sexual este o form de heterocromatin facultativ, deoarece are morfologie distinct n celule provenite de la persoane cu sex diferit (la femei - crt.X, la brbai - crt.Y) Sexul genetic se stabilete n momentul fecundrii gameilor i reprezint configuraia cromosomilor sexuali ai zigotului i implicit a fiecrei celule somatice a unui individ. El este n mod normal: XX pentru femeie; XY pentru brbat. Numai aceast configuraie gonosomic asigur o sexualizare normal.

A. CROMATINA X
1. DATE GENERALE a. Definiie: Cromocentru vizibil, n mod normal, n nucleii interfazici ai celulelor aparinnd sexului feminin; ea rezult prin heterocromatinizarea unuia dintre cei doi cromosomi X. b. Istoric - descris n 1949 de Barr si Bertram n nucleul neuronilor de le pisica femel; ulterior cromatina X a fost observat i la alte animale, precum i la om : - explicarea originii i semnificaiei cromatinei X a fost realizat de MARY LYON (1961) Ipoteza MARY LYON privind originea cromatinei X (3 postulate): (1) rezult prin inactivarea si heterocromatinizarea unuia din cei doi cromosomi X la femeie; (2) inactivarea cromosomului X matern sau cromosomului X patern se face la ntmplare i independent n celule diferite. (3) inactivarea este precoce (pn n ziua 16 de via intrauterin) i definitiv (toat viaa); Dup M. Lyon semnificaia apariiei cromatinei X se datorete faptului c la om, i la mamifere, este necesar un singur X activ, restul se inactiveaz, altfel diferena dintre materialul genetic la femeie i brbat ar fi prea mare. De fapt, nu tot cromosomul X se inactiveaz. O parte mic a acestuia rmne activ, asigurnd un mic avantaj selectiv sexului feminin (o mai bun adaptare i o mai mare rezisten la aciunea factorilor exogeni). c. Metode de studiu: - studiul celulelor interfazice din orice esut provenit de la organismul feminin normal. Tehnicile uzuale folosesc frotiul din celulele mucoasei bucale (testul Barr) i frotiul din snge periferic; - stabilirea numrului cromosomilor X n corelaie cu numrul de corpusculi de heterocromatin X. 2. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE MUCOAS BUCAL a. Tehnica efecturii frotiului de mucoas bucal: (1) recoltarea: se racleaz (rzuiete) faa intern a obrazului (la copii buza inferioar) cu o lam de sticl rodat; recoltarea superficial (celule descuamate) se nltur, a doua recoltare se folosete ntinzndu-se un frotiu
1

celular gros pe o lam de microscop; (2) fixarea: cu amestec fixator, durata 30 minute 12 ore; (3) rehidratarea: 4 bi succesive a 5' fiecare cu: alcool 70, alcool 50, ap distilat I, ap distilat II; (4) hidroliza: neobligatorie (cu HCl); (5) colorarea: colorant CARR (fuxin bazic); (6) examinarea frotiului la microscopul cu imersie b. morfologia corpusculului Barr - condensat i intens colorat bazofil (corpuscul BARR); - situat cel mai adesea periferic, lipit de faa intern a membranei nucleare (intranuclear); - forma: ovalar, plan convex, discoidal sau triunghiular; - mrime medie: 1 micron ( 0,3); - cnd este situat central trebuie difereniat de nucleol (rotund i mai mare, brun-crmiziu n coloraia cu verde de metil pironin) i de cromocentri nespecifici (mai mici sau mai mari cu form neregulat). c. Frecvena: teoretic 100%, practic aproximativ 30-40%. Aceast frecven real se datorete: - excluderii corpusculilor situai central; - calitilor improprii ale unor nuclei din celulele superficiale sau profunde, defecte de colorare; - existenei reale a celulelor cromatin - negative: cromosomul X inactiv nu se condenseaz din cauza unor condiii metabolice generale sau celulare; - alte cauze: vrsta, ciclu ovarian, boli, tratamente. d. Interpretare: Nr. corpusculi BARR = nr. cromosomi X - 1 - n mod normal corpusculul BARR lipsete la brbat i este prezent ntr-un singur exemplar la femeie, deoarece brbatul are un singur cromosom X, iar acesta nu se inactiveaz, n timp ce femeia are 2 cromosomi X, din care unul se inactiveaz; - n cazuri patologice - anomalii de numr ale cromosomilor X (disgenezii gonadice) - poate fi prezent la brbat (47,XXY), absent la femeie (45,X) sau prezent n mai multe exemplare la ambele sexe; - mrimea corpuscului BARR depinde de mrimea cromosomului X inactivat (mai mare de 1 micron: isoXq, mai mic de 1 micron: isoXp, deleie pe cromosomul X); - cnd pe aceeai lam se ntlnesc celule cu un numr diferit de corpusculi BARR, se ia n consideraie numrul maxim gsit deoarece unii ar putea s nu apar (vezi frecvena). 3. STUDIUL CROMATINEI X N FROTIUL DE SNGE PERIFERIC a. Tehnica: se evideniaz n nucleul polimorfonuclearelor neutrofile pe frotiuri colorate cu soluie MAY - GRUNWALD - GIEMSA. b. Morfologie: (1) aspectul cromatinei: - apendici nucleari de tip A au form de "b de tob" (drum stick) i prezint un cap ovalar sau rotund legat printr-un filament subire de unul din lobii nucleului PMN; - apendici nucleari de tip B sau noduli sesili prezint aceeai mrime i form ca i apendicii nucleari de tip A dar sunt legai direct la nucleu printr-o baz larg de implantare.
2

(2) culoare: intens bazofil. (3) mrime: 1,5 microni. c. Frecvena: - normal la femeie: 1/38 PMN (1/6 --> 1/98 PMN). - n practic, pe o lam cu frotiu din snge periferic trebuie s fie cel puin 6 apendici tipici pentru a declara cromatina X pozitiv i s nu existe nici un apendice tipic n cel puin 500 neutrofile studiate pentru a declara cromatina X negativ. d. Interpretare: Nr. apendici nucleari = nr. cromosomi X - 1 Interpretarea se face dup aceleai reguli ca i n cazul frotiului de mucoas bucal.

B. CROMATINA Y
a. Origine: aspectul interfazic al celor 2/3 distale ale braului q al cromosomului Y; b. Morfologie: - se evideniaz prin colorare cu quinacrin - corpuscul intens fluorescent (corpuscul F), vizibil n nucleul interfazic; - mrime 0,25 microni; - situat liber sau lipit de membrana nuclear; - frecvena: diferit n diferite esuturi ale sexului masculin: * 70-80% n fibroblati; * 45% n spermatozoizi; c. Interpretare: Nr. corpusculi F = Nr. cromosomi Y - corpusculul F este prezent exclusiv la brbat ntr-un singur exemplar; poate fi prezent n dou exemplare la persoanele cu cariotip 47,XYY.

C. VALOAREA PRACTIC A TESTULUI CROMATINEI SEXUALE (INDICAII I LIMITE)

Testul cromatinei X este un test rapid, foarte util n multe situaii, care poate fi efectuat n condiii de dotare minim, cu mijloace modeste. 1. INDICAII: a) prenatal: n celulele extrase prin puncie amniotic; - permite stabilirea sexului genetic al ftului n anomaliile gonosomale recesive (de exemplu hemofilie sau miopatie Duchenne) n cazul n care femeia este purttoare a genei anormale (risc 50%). b) la natere: n cazul ambiguitii sexuale la nou nscuii cu testicul nepalpabil. - pentru precizarea sexului genetic i punerea n concordan cu sexul civil; sexul civil are importan mai ales n edificarea ulterioar a sexului psiho-comportamental. c) mai trziu: n diferite anomalii de sexualizare: - pentru precizarea sexului genetic; - diagnosticul disgeneziilor gonadice - orhitice sau ovariene - anomalii de numr i structur a cromosomilor sexuali. d) n medicina legal i criminalistic: pentru precizarea provenienei
3

feminine sau masculine a unor fragmente de esuturi, pete de snge, fire de pr. 2. LIMITE: Testul cromatinei sexuale este un test subiectiv, nu poate depista toate mozaicurile i nici anomaliile autosomilor; n multe situaii, pentru rigurozitate necesit efectuarea cariotipului.

D. PRACTIC
- Realizai tehnica de obinere a frotiului de mucoas bucal; - Analizai la microscop frotiurile obinute i stabilii sexul gonadic al persoanei de la care s-a recoltat; - Analizai la microscop cromatina sexual din frotiurile din snge periferic; - Analizai diapozitive, plane i fotografii referitoare la heterocromatina sexual n diferite celule de la brbat i femeie; - Discutai condiiile n care este indicat realizarea testului Barr; - Facei corelaii ntre mrimea corpusculului Barr sau a corpusculului F i situaiile fiziologice sau patologice ale celulei respective. E. VERIFICARE CUNOTINE 1. Definii urmtorii termeni: - corpuscul barr - sex genetic - corpuscul F apendice nuclear - drum stick - nodul sesil - disgenezie gonadic sex gonadic 2. ntrebri: - Care sunt postulatele ipotezei Lyon asupra inactivrii unui cromosom X la femeie? - Care este corelaia dintre numrul de corpusculi Barr i numrul cromosomilor X? - Care sunt caracterele morfologice ale corpusculului F i care este semnificaia lui? - Care este explicaia discordanei dintre frecvena teoretic i cea practic a cromatinei sexuale?