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GUIA DE MANEJO PROCESAMIENTO DE MUESTRAS S&C LABORATORIOS

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Propsito Proporcionar la informacin clara, prctica, actualizada y confiable para ser llevada a la prctica y alcanzar el correcto procesamiento de las pruebas realizadas en el laboratorio clnico. 2 Alcance Esta gua esta dirigida a todas las Bacterilogas que tengan a su cargo el procesamiento de muestras en el laboratorio clnico. Autoridad y Responsabilidad La autoridad de esta gua es del coordinador del laboratorio y la responsabilidad es de cada una de las Bacterilogas encargadas del procesamiento de las muestras en las secciones correspondientes. Definiciones.

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4.1 Seccin de Hematologa y Coagulacin Se realizan todas las pruebas que tienen que ver con los elementos formes de la sangre y todas las pruebas que tienen que ver con los factores y procesos que intervienen en la coagulacin. 4.2 Seccin de Qumica Clnica Se realizan todas las pruebas relacionadas con los analitos qumicos presentes en la sangre. 4.3 Seccin de Pruebas Hormonales, Marcadores Tumorales y Marcadores Infecciosos. Se realizan pruebas relacionadas con la cuantificacin de Hormonas y la deteccin de antgenos y anticuerpos presentes en enfermedades infecciosas. 4.4 Seccin de Uroanlisis y Coproanlisis Se realizan todas las pruebas relacionadas con el anlisis qumico y citolgico de la orina, al igual que pruebas qumicas y microscpicas de la materia fecal. 5. Procedimientos tcnicos Seccin de Hematologa y Coagulacin 5.1 Procesamiento de muestras mtodo manual

5.1.1 Clulas Falciformes Drepanocitos 5.1.1.1Fundamento Los hemates que contienen hemoglobina Hb-S o Hb-SS toman forma de hoz al ser sometidos a un medio pobre en oxgeno. Esta forma de los glbulos rojos se debe a la menor solubilidad de la hemoglobina anormal en estado reducido, producindose cuerpos cristalinos que distorsionan y alargan los glbulos rojos hasta producir su forma caracterstica de media luna filamentosa. 5.1.1.2Obtencin y preparacin de la muestra. Sangre total anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.1.3Mtodo 5.1.1.3.1 Colocar una gota de sangre en un portaobjetos. 5.1.1.3.2 Aadir 2 gotas de meta bisulfito de sodio 2% y mezclar bien.

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5.1.1.3.3 Colocar un cubreobjetos y quitar el exceso presionando ligeramente con un papel filtro. 5.1.1.3.4 Sellar los bordes con vaselina. No deben quedar burbujas en la preparacin. 5.1.2 Hemograma automatizado tipo V. 5.1.2.1Fundamento Las clulas son malas conductoras de electricidad, al contrario de lo que ocurre con los lquidos dilutores que conducen la corriente elctrica. Para realizar el recuento de clulas la sangre se diluye y se hace pasar a travs de un orificio, la resistencia elctrica del lquido que pasa a travs del orificio se mide mediante dos electrodos a ambos lados del mismo. Mientras pasa el liquido la resistencia elctrica es mnima y constante, pero cuando una clula lo atraviesa se produce un aumento de la resistencia y un cambio de potencial entre los electrodos que permanece mientras la clula atraviesa el orificio, la amplitud del impulso elctrico es proporcional al tamao de la clula y l nmero de impulsos proporcional a su cantidad. 5.1.2.2Obtencin y preparacin de la muestra Sangre anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.2.3Mtodo Las mediciones son hechas en el equipo COULTER JT, para mayor informacin sobre el modo de operacin de ste, dirigirse al manual del usuario disponible en el archivo. 5.1.3 Eritrosedimentacin Mtodo de Wintrobe 5.1.3.1Fundamento Cuando se deja en reposo un tubo que contiene sangre anticoagulada, despus de cierto tiempo se observa que las clulas sedimentan formando dos fases bien delimitadas que corresponden al plasma (parte superior) y a las clulas (parte inferior) constituidas en su gran mayora por eritrocitos. Este proceso se denomina eritrosedimentacin y su inters radica en que la velocidad con que este fenmeno ocurre vara en diversas situaciones patolgicas. 5.1.3.2Obtencin y preparacin de la muestra Sangre anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.3.3Mtodo 5.1.3.3.1 Con una jeringa provista de una cnula larga llenar el tubo de Wintrobe cuidadosamente evitando crear o dejar burbujas. 5.1.3.3.2 Colocar en la gradilla de Wintrobe los tubos cuidando que no existan desniveles en la superficie. 5.1.3.3.3 Lectura: Despus de exactamente una hora debe leerse la longitud en mm de la columna de plasma en el tubo, para esto se utiliza la escala graduada del tubo que debe leerse a partir del extremo superior del tubo. 5.1.4 Hemoparsitos o gota gruesa 5.1.4.1Fundamento El diagnstico de malaria se realiza mediante la gota gruesa donde se observa la presencia o ausencia y cantidad del parsito y el ESP (extendido de sangre perifrica) donde se identifica la especie. En la gota gruesa se destruyen los

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glbulos rojos que estn distribuidos en varias capas, por lo tanto existe una mayor concentracin de parsitos y por consiguiente se logra un diagnstico ms sensible y rpido. 5.1.4.2Obtencin y preparacin de la muestra Sangre completa, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.1.4.3Mtodo 5.1.4.3.1 Colocar una gota de sangre en un extremo del portaobjetos, ponga en contacto la lmina por encima de la gota evitando tocar el dedo con ella. 5.1.4.3.2 Haciendo un movimiento suave con el vrtice de otra lmina extienda la sangre en forma de N o Z para lograr formar un cuadrado de aproximadamente 1 cm. x 1 cm. de dimetro, presione nuevamente el dedo y coloque otra gota a una distancia de 0.5 a 1 cm. de distancia y proceda a extender la gota de la misma manera evitando llegar a los bordes de la lmina. Prepare dos lminas por paciente. 5.1.4.3.3 Realice un extendido perifrico. 5.1.4.3.4 Coloracin de Field: El colorante est compuesto por dos soluciones acuosas Solucin A que es cloruro de azul de metileno 0.8 g, azur I o azur B 0.5 g, agua amortiguadora 500 ml y la Solucin B que es eosina amarilla hidrosoluble 1g, agua amortiguadora 500 ml. El mtodo de coloracin es el siguiente: Precoloracin Sumergir durante 1 segundo en azul de metileno fosfatado. Dejar escurrir sobre una toalla de papel. Despus de esto, se puede colorear inmediatamente o dejar secar en posicin vertical. Las placas as tratadas se pueden guardar varios das. Prepare el colorante de Field de la siguiente manera: a 3 ml de agua amortiguada adicione 1 gota de Solucin A y 1 gota de Solucin B. Esta cantidad es suficiente para colorear 1 lmina. El colorante se deja actuar durante 9 minutos, luego se escurren las lminas sobre papel absorbente y se deja secar. 5.1.4.3.5 Lectura, Clculo e Interpretacin de Hemoparsitos: Se considera positiva cuando se observa formas parasitarias, se debe informar gnero y especie, en el caso de P. falciparum debe informarse el recuento de parsitos por microlitro de sangre. Para determinar el nmero de parsitos por uL de sangre debe hacerse un conteo de parsitos en los campos necesarios para contar 100 leucocitos. Asumiendo un promedio de 8000 leucocitos/uL de sangre se usa la siguiente formula: N de parsitos x 8000 leuc/uL _________________________ = N parsitos/uL de sangre 100 leucocitos En parasitemias muy altas se puede contar 500 parsitos y el nmero de leucocitos en ellos, en este caso se usa la formula: 500 parsitos contados ___________________ X 8000 = N parsitos/uL de sangre N de leucocitos contados La gota gruesa se considera negativa cuando no se observa ningn parsito en 100 campos microscpico. Cuando la preparacin no es de buena calidad debe revisarse 200 campos microscpicos. 5.1.6.4 Informe de Resultados:

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Para P. vivax y P. malarie no debe hacerse recuento ni diferenciacin entre formas sexuales y asexuales. En infecciones mixtas debe informarse primero el parsito que domina seguido de la especie subordinada. Lectura, Clculo e Interpretacin de Hemoparsitos. 5.1.5 Extendido de Sangre Perifrica 5.1.5.1Fundamento En el diagnstico de Hemoparsitos se utiliza para la visualizacin de los diferentes estadios del parsito y su respectiva diferenciacin de especie. 5.1.5.2Obtencin y preparacin de la muestra. Sangre obtenida por puncin perifrica. La toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.8 5.1.5.3Mtodo 5.1.5.3.1 Colocar una gota pequea de sangre sobre un extremo de una lmina portaobjetos limpia y libre de grasa. 5.1.5.3.2 Colocar el canto de otro portaobjetos por la parte anterior de la gota de sangre sobre la superficie de la lmina formando un ngulo de aproximadamente 45 y desplazarlo suavemente hacia atrs hasta que alcance la gota de sangre. 5.1.5.3.3 Esperar a que por capilaridad toda la sangre se distribuya uniformemente entre el canto de una lmina y la superficie de la otra. 5.1.5.3.4 Deslizar suavemente y a velocidad moderada un portaobjetos sobre el otro hasta que la sangre quede bien extendida. 5.1.5.3.5 Secar el extendido a temperatura ambiente. 5.1.5.3.6 Cubrir las preparaciones secas con colorante de Wrigth durante tres minutos. 5.1.5.3.7 Aadir al colorante buffer Giordano pH 7.0 procurando que la mezcla no se salga del portaobjetos, dejar actuar tres minutos. 5.1.5.3.8 Lavar con abundante agua y secar a temperatura ambiente. 5.1.5.3.9 Cubrir las preparaciones secas con colorante de Wrigth durante tres minutos. 5.1.5.3.10 Aadir al colorante buffer Giordano pH 7.0 procurando que la mezcla no se salga del portaobjetos, dejar actuar tres minutos. 5.1.5.3.11 Lavar con abundante agua y secar a temperatura ambiente. 5.1.6 Determinacin del Grupo Sanguneo ABO 5.1.6.1Fundamento Los hemates son aglutinados por sueros especficos para los antgenos A, B y D cuando poseen alguno de ellos o todos. Si no posee ningn antgeno no se observa aglutinacin. 5.1.6.2Obtencin y preparacin de la muestra. Sangre total anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.6.3Mtodo. 5.1.6.3.1 Coloque sobre una placa con pozos o sobre un portaobjetos tres gotas de sangre separadas. 5.1.6.3.2 Aadir una gota de Anti A, Anti B y Anti D respectivamente a cada una de las gotas. 5.1.6.3.3 Mezclar con ayuda de un palillo. 5.1.6.3.4 Mover la placa o el porta objetos lentamente con movimientos circulares durante aproximadamente dos minutos y observar la presencia de aglutinacin. En caso de duda observar al microscopio. 5.1.6.3.5 Interpretacin: Debe hacerse de acuerdo al siguiente cuadro:

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ANTI A + + + + ANTI B + + + + ANTI D + + + + RESULTADO O negativo O positivo A negativo A positivo B negativo B positivo AB negativo AB positivo

La condicin RH negativo debe confirmarse determinando la variante Du. 5.1.7 Recuento de Reticulocitos 5.1.7.1Fundamento Los reticulocitos son eritrocitos que contienen restos de ARN. Este compuesto precipita en presencia de colorantes vitales como el azul brillante de cresil dando lugar a imgenes filamentosas fcilmente visibles al microscopio ptico. El nmero de reticulocitos en sangre perifrica son casi siempre un reflejo del grado de actividad eritropoytica medular. Los reticulocitos son glbulos rojos jvenes, que representan normalmente de 0.5 1.5% del total de glbulos rojos circulantes. Se caracterizan por ser algo ms grandes que los glbulos rojos maduros y por contener una red de material basfilo en su interior. Su abundancia en la circulacin perifrica es un ndice de la actividad eritropoytica. Se cuentan cifras altas de reticulocitos en los primeros meses de vida, despus de una prdida de sangre o hemorragia y despus de tratar una anemia carencial con sustancias especficas. El recuento se realiza por tincin diferencial de la red de material basfilo de los reticulocitos con un colorante supravital: el azul brillante de cresilo. Mientras ms joven el reticulocito ms difuso es el retculo. Cuando la mdula madura, l mismo se circunscribe al centro y finalmente queda como grnulos diseminados. Los reticulocitos presentan un aspecto reticular o granuloso teido intensamente de azul.

5.1.7.2Obtencin y preparacin de la muestra Sangre total anticoagulada, en lo posible debe hacerse dentro de las dos horas siguientes a la extraccin ya que los reticulocitos maduran in Vitro arrojando resultados errneos bajos, la toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.7. 5.1.7.3Mtodo 5.1.7.3.1 Colocar en un tubo de ensayo partes iguales de sangre y azul brillante de cresil. En sangres muy anmicas debe colocarse el doble en proporcin al colorante. Mezcle bien y deje en reposo 10 minutos. 5.1.7.3.2 Pasado el tiempo y descartando las primeras gotas, coloque una gota de la mezcla en un lmina portaobjetos limpia y efecte un extendido de manera usual 5.1.7.3.3 Dejar secar a temperatura ambiente y montar con aceite de inmersin, observar al microscopio ptico con gran aumento (100X) y contar 500 elementos, eligiendo la zona del frotis donde no haya superposicin de glbulos. 5.1.7.3.4 Los reticulocitos se observan teidos de azul con una red de cromatina en el interior. Obtener el porcentaje de reticulocitos en esos 500 elementos. 5.1.7.3.5 Calcular el porcentaje de reticulocitos de la siguiente forma:

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% reticulocitos = No de reticulocitos contados en 500 glbulos rojos X 0.2 Valores de Referencia Adultos 0.5 1.5% Recin nacidos a trmino 3 6% 5.1.8 Retraccin del Cogulo 5.1.8.1Fundamento La retraccin del cogulo depende bsicamente de la cantidad y la calidad de las plaquetas. 5.1.8.2Obtencin y preparacin de la muestra. Sangre total anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.8.3Mtodo 5.1.8.3.1 La retraccin del cogulo se valora a las 3 - 4 horas de dejar la muestra a 37 C, en un tubo sin ningn tipo de anticoagulante. 5.1.8.4Interpretacin 5.1.8.4.1 La retraccin debe ser completa en un plazo mximo de 4 horas. 5.1.9 Tiempo de Pro trombina (PT) 5.1.9.1Fundamento Un elevado del PT indica desrdenes adquiridos o congnitos que afectan los factores de coagulacin I, II, V, VIII y X. El PT se ha aceptado ampliamente como medio para controlar pacientes en una terapia anticoagulante oral debido a la reduccin en la actividad de los factores de coagulacin dependientes de la vitamina K (II, VII, IX, X, protena C, y la protena S). 5.1.9.2Obtencin y preparacin de la muestra Sangre venosa, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 Usar solamente tubos de plstico o de vidrio siliconizado y citrato de sodio 3,2% (0,109 M) como anticoagulante, no se debe usar heparina, oxalato de sodio ni EDTA. 5.1.9.3Mtodo 5.1.9.3.1 Realizar por duplicado las muestras y los controles 5.1.9.3.2 Precalentar RGT a 37 grados C antes de su uso. Pipetear en tubos de ensayo precalentados Plasma/control O,1 mL Incubar por 3-5 min de 37 C Aadir RGT precalentado Activar el cronmetro con la adicin del RGT. Anotar el tiempo necesario para la formacin del coagulo. 5.1.9.4 Resultados 5.1.9.4.1 Calcular la medida de la determinacin de PT por duplicado en cada plasma y redondear a dcimas de segundo. El resultado puede expresarse en segundos, INR, (ver abajo) y el % del normal (% Quick). NR: cada laboratorio debe establecer su valor normal especfico en segundos (pool de plasma de donantes sanos, si esto no es posible se puede tomar HemoStat

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Control Plasma Normal). Dividir los valores de los pacientes (segundos) por el valor normal (segundos). 5.1.9.5 Control de Calidad Es necesario un control de calidad de rutina en las pruebas de coagulacin. HemoStat Control Plasma Normal (CPN) y Abnormal (CPA) se deben probar en conjunto con los plasmas de los pacientes. El CPN es un plasma normal mientras que el CPA se ajusta a un plasma con deficiencias moderadas. Control en el laboratorio de una terapia con anticoagulante oral Para ampliar los efectos teraputicos deseados y minimizar el sangrado la Organizacin Mundial de la Salud ha recomendado un procedimiento para estandarizar la prueba y el tratamiento. Este procedimiento se basa en la Relacin Internacional Normalizada (INR). El INR se calcula usando la proporcin del PT del paciente sobre el PT del pool de plasma normal de acuerdo a la siguiente relacin matemtica: ISI PT Patient PT-NR El ndice de Sensibilidad Internacional (ISI) es una medida de la sensibilidad de la Tromboplastina/ equipo a los factores de coagulacin. Los valores ISI se asignan por una comparacin con un material de referencia de la tromboplastina primaria (OMS). Los reactivos de alta sensibilidad tienen bajos valores de ISI. El valor ISI asignado en cada lote en particular del HemoStat THROMBOPLASTIN-SI puede tomarse del inserto en el estuche. Generalmente, se aconseja que los pacientes en terapia con anticoagulante oral estabilizada deben mantener un INR entre 2,0 y 3,5 dependiendo de la indicacin clnica. Un valor INR arriba de 0,5 somete al paciente a un riesgo innecesario de sangrado. 5.1.10 Tiempo de Tromboplastina Parcial, PTT o Tiempo de Cefalina

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INR =

5.1.10.1 Fundamento El tiempo de cefalina (PTT) es el tiempo necesario para la coagulacin de un plasma pobre en plaquetas recalcificado en presencia de cefalina que es un fosfolpido similar al factor plaquetario. 5.1.10.2 Obtencin y preparacin de la muestra. Plasma citratado, nueve partes de sangre por una parte de citrato de sodio 3.2% o 3.8%. No se requiere ayuno previo. La toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.10.3 Mtodo 5.1.10.3.1 Precalentar a + 37 grados C el cloruro de calcio 5.1.10.3.2 Precalentar a + 37 grados C 0,1 ml de Actin Reactivo por tubo de ensayo (mezclar antes de usarlo) 5.1.10.3.3 Pipetear en un tubo de plstico lo siguiente: Actin Reactivo Muestra a investigar Plasma control

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(precalentado) Plasma Plasma control Cloruro de calcio Precalentado 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml ---------0,1 ml Mezclar bien e incubar 180 s a +37 grad 0,1 ml 0,1 ml Al agregar el CaCl2 prender el cronmetro, mezclar bien. Pasados 20 seg. Comprobar la coagulacin por primera vez.

5.1.10.4 Advertencia: No se recomienda un tiempo de incubacin de ms de 5 minutos, pues se puede llegar a una perdida de los factores V y VIII. 5.1.10.5 Monitoreo de heparina mediante la determinacin del PTT Para el control de la teraputica con heparina por medio de la determinacin del PTT se deben tener en cuenta los factores que pueden tener influencia sobre el resultado del test. A continuacin estn resumidas algunas advertencias importantes: 5.1.10.5.1 Ya que el tiempo de vida media de la heparina in vivo es 1,5 horas el tiempo de la toma de la muestra es definitivo. La heparina aplicada posee una accin inhibidora inmediata de la coagulacin, la cual disminuya tambin rpidamente. Este efecto se observa claramente para la aplicacin intermitente de inyecciones i.v. aisladas. 5.1.10.5.2 El anticoagulante utilizado para la toma de la sangre puede influenciar los resultados del test. 5.1.10.5.3 Por agregacin o por dao de las plaquetas puede ser liberado el factor 4 de los grnulos alfa plaquetarios, que neutraliza la heparina. Para evitar este tipo de proceso in Vitro las muestras deben ser tomadas con mucho cuidado. Dado que se conoce que la baja temperatura desencadena la agregacin de las plaquetas y por lo tanto la liberacin del factor4, las muestras para el test de heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente. 5.1.10.5.4 El control de la heparina mediante la determinacin del PTT es dependiente del tiempo. Retardos en el procesamiento de la muestra pueden ocasionar prolongaciones del PTT, razn por la cual las muestras deben ser procesadas lo ms pronto posible. 5.1.10.5.5 Una activacin por contacto prolongada puede ocasionar en plasmas que contienen heparina una prolongacin del PTT, razn por la cual, se debe cumplir con el tiempo de incubacin optimo dado para la mezcla cefaloplastina-plasma. 5.1.10.5.6 Ya que los diferentes mtodos de test (por ej. manual, foto-ptico) poseen una sensibilidad a la heparina diferente, se debe evitar el cambio del mtodo utilizado. 5.1.10.5.7 Estudios han demostrados, que las propiedades de la heparina obtenida de diferentes fabricantes o de diferente material inicial se desvan de las especificaciones presumidas inicialmente. In Vivo la reactividad depende del tipo de heparina aplicada, del metabolismo del paciente y de otros medicamentos tomados al mismo tiempo. 5.1.11 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA 5.1.11.1 Fundamento El in ferroso de la hemoglobina se oxida a in frrico por accin de ferricianuro de potsico formndose hemiglobina (meta hemoglobina). La hemiglobina reacciona con el cianuro para formar cianohemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometra. La hemoglobina es una protena pigmentada de color rojo transportadora de oxgeno que se encuentra en lo eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrmero con dos pares de cadenas polipeptdicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina llamado grupo hemo, que a su vez contiene hierro.

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Las concentraciones de hemoglobina estn influidas por variaciones fisiolgicas como la edad, sexo, deshidratacin, postura y altitud, y por procesos patolgicos. Se encuentran valores patolgicos en anemias y policitemia. Las tres causas principales de anemia son: alteracin en la sntesis de los eritrocitos en la medula sea, prdidas de sangre excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre perifrica. Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis, deshidratacin, recin nacidos, cianosis congnita o adquirida, enfermedad renal y pulmonar crnica, quistes renales y en una serie de tumores productores de eritropoyetina. 5.1.11.2 Obtencin y preparacin de la muestra Sangre anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.11.3 Preparacin del Reactivo de Trabajo Diluir el contenido del frasco de reactivo concentrado hasta 1000 ml con agua destilada. Agitar. Si se desea preparar otros volmenes, mezclar en la proporcin 1ml de reactivo concentrado + 49 ml de agua destilada. Conservar el reactivo diluido en un frasco topacio. Estable 6 meses a 15 30 C. 5.1.11.4 Mtodo 5.1.11.4.1 Pipetear en tubos de ensayo TUBOS Patrn Muestra Reactivo Trabajo de BLAN CO ---------------------2.5 ml PATRO N 10 ul ------2.5 ml MUEST RA 10 ul ------2.5 ml

5.1.11.4.2 Agitar bien y dejar durante 3 minutos a temperatura ambiente. 5.1.11.4.3 Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 540 nm frente al blanco. El color es estable durante varias horas. 5.1.12 MICROHEMATOCRITO 5.1.12 1 Fundamento El hematocrito se define por la relacin del volumen globular y el volumen sanguneo total. Se expresa en porcentaje del volumen sanguneo ocupado por los glbulos rojos. El hematocrito nos permite calcular el volumen globular medio y la concentracin corpuscular media de hemoglobina. El hematocrito mide el volumen de los glbulos rojos en una parte de la masa sangunea, pero no da ninguna indicacin sobre el volumen globular total ni tampoco sobre el volumen sanguneo total. No tiene valor sino cuando ste es normal. En los casos de duda, solo la medida de la masa sangunea total por el mtodo isotpico puede permitir una interpretacin exacta de los resultados. Disminucin del Hematocrito Puede ser la consecuencia de una disminucin del volumen globular, compensado por un aumento del volumen sanguneo (masa sangunea total normal). Es el caso de las anemias crnicas. En el caso de las anemias agudas, por hemorragia rpida, la

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prdida es a la vez de glbulos rojos y plasma como consecuencia el hematocrito va a ser normal en un primer tiempo. En un segundo tiempo el aumento del volumen plasmtico tiende a establecer el volumen sanguneo total y la baja del hematocrito es un reflejo de la importancia de la hemorragia. Una baja del hematocrito sin disminucin del volumen globular total puede ser el hecho de bazos voluminosos secuestrando una gran parte de los hemates. La disminucin del hematocrito puede ser producida tambin por aumento del volumen plasmtico que conlleva a una hemodilucin (falsa anemia por hemodilucin). Tal eventualidad se lleva a cabo en los ltimos meses del embarazo normal, en cirrosis con ascitis, insuficiencias cardiacas y renales y ciertas hiperproteinemias (macroglobulinemia de Waldestrom). Aumento del Hematocrito El aumento del hematocrito es la consecuencia de una hemoconcentracin, disminucin del volumen plasmtico total (ejemplo quemaduras extensas, choques infecciosos no txicos), por aumento del volumen globular total (ejemplo policitemia vera, insuficiencia respiratoria crnica). 5.1.12.2 Obtencin y preparacin de la muestra Sangre anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 5.1.12.3 Mtodo 5.1.12.3.1 Tome un capilar de microhematocrito. 5.1.12.3.2 Llene el capilar hasta las partes del mismo con la sangre anticoagulada evitando la formacin de burbujas. 5.1.12.3.3 Selle el capilar con plastilina cuidadosamente evitando ser partido. 5.1.12.3.4 Coloque el capilar en la microcentrfuga. 5.1.12.3.5 Deje centrifugar por un lapso de 5 minutos. 5.1.12.3.6 Realice la medicin con la carta de color que hay en la microcentrfuga de acuerdo al sexo y con ayuda de la lupa para poder interpretar el resultado.

5.2 Perfil Lipdico 5..2.1 Fundamento Informa el estado del colesterol total y sus fracciones HDL, LDL y VLDL adems de los triglicridos, indispensables para el funcionamiento adecuado de las clulas del organismo e importantes precursores de los glucocorticoides, hormonas sexuales y cidos biliares. 5.2.2 Obtencin y preparacin de la muestra. Suero. Ayuno previo de mnimo 12 horas, no es necesario cambiar la dieta, pero se recomienda no ingerir licor desde mnimo 48 horas antes del examen, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.2.3 Mtodo El mtodo del CHEM 7para el Perfil Lipdico se realiza utilizando los reactivos de (colesterol total, colesterol HDL, triglicridos) 5.3 Depuracin de la Creatinina

5.3.1 Fundamento La depuracin de creatinina se emplea para estimar la velocidad de filtracin glomerular (VFG). Se elige la creatinina por que es filtrada libremente por el glomrulos y no es reabsorbida en los tbulos, sin embargo una pequea cantidad de

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creatinina (al rededor del 5%) en la orina normal de las personas sanas deriva de la secrecin tubular. 5.3.2 Obtencin y preparacin de la muestra. Muestra en orina de 24 horas y sangre, la toma de las muestras se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.5 en el caso de la orina de 24 horas y en el numeral 6.9.7 para la muestra en sangre. La muestra de sangre se extrae al terminar el periodo de recoleccin de la orina. 5.3.3Preparacin de los reactivos: Patrn: Esta listo para su uso Reactivo de Trabajo: Mezclar volmenes iguales de Reactivo A y de Reactivo B. Homogenizar. Estable 1 mes a 2 8 C 5.3.4 Mtodo 5.3.4.1Precalentar el reactivo de trabajo y el instrumento a 37 C. 5.3.4.2Pipetear los siguientes tubos Reactivo de Trabajo Patrn o Muestra 5.3.4.3 5.3.4.4 1.0 ml 0. 1 ml

Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. Leer la absorbancia a 500 nm despus de 30 segundos (A1) y de 90 segundos (A2). 5.3.4.5 Clculos La concentracin de creatinina en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general: (A1 - A2)Muestra x C Patrn x Factor de dilucin de la muestra= C Muestra (A1 A2) Patrn 5.3.4.6Mtodo Dilucin de la orina para determinacin de la creatinina: Calcular la excrecin de orina por minuto con la siguiente formula:

Vol. total de orina en ml Ml/min = -----------------------------------------------Tiempo de recoleccin en minutos Para una excrecin normal de 1ml/min se aconseja una dilucin de 1:20. Para excreciones menores de 1 ml/min se requiere de una dilucin de 1:50 y en caso de diuresis puede ser necesaria solo una dilucin de 1:5. 5.3.4.7Clculo de la Depuracin: La depuracin se calcula por medio de la siguiente formula

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Creatinina urinaria x vol. de orina 1.73 dc = --------------------------------------------- x -----Creatinina plasmtica x 1440 sc Donde se es la superficie corporal calculada para el paciente (usando el peso y la talla del paciente extrapolados en el nomograma de superficies corporales) y 1.73 es la superficie corporal de una persona estndar de 70kg. 1440 es el tiempo en minutos en que se recogi la muestra de orina. 5.3.4.8 Interpretacin: El intervalo para la depuracin de creatinina en personas sanas corregido para una superficie corporal de 1.73 m2 es de 90 a 120 ml/min. Cuando la velocidad de filtracin es baja, la depuracin de creatinina no refleja la verdadera velocidad de filtracin glomerular ya que una parte relativamente grande de la creatinina urinaria es secretada y no filtrada. 5.3.4 Creatinina 5.3.4.1Fundamento La excrecin de creatinina srica es una funcin de la masa corporal magra en personas normales que muestra poca o ninguna respuesta a los cambios en la dieta. La concentracin de creatinina srica es ms elevada en los varones que en las mujeres. La creatinina srica aparece aumentada en la insuficiencia renal aguda y crnica, la obstruccin de las vas urinarias, los casos de reduccin del flujo sanguneo renal, shock, deshidratacin y rabdomiolisis. Entre las causas de una concentracin baja de creatinina srica se incluye el debilitamiento y la disminucin de la masa muscular. El ejercicio puede provocar un aumento de la aclaracin de creatinina. 5.3.4.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina (excepto heparina amoniacada), la toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.7. 5.3.4.3Preparacin de los reactivos: Patrn: Esta listo para su uso Reactivo de Trabajo: Mezclar volmenes iguales de Reactivo A y de Reactivo B. Homogenizar. Estable 1 mes a 2 8 C 5.3.4.8 Mtodo 5.3.4.8.1 Precalentar el reactivo de trabajo y el instrumento a 37 C. 5.3.4.8.2 Pipetear los siguientes tubos Reactivo de Trabajo Patrn o Muestra 1.0 ml 0.1 ml

5.3.4.8.3 Mezclar e insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronmetro en marcha. 5.3.4.8.4 Leer la absorbancia a 500 nm despus de 30 segundos (A1) y de 90 segundos (A2). 5.3.4.9Clculos

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La concentracin de creatinina en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general: (A1 - A2)Muestra x C Patrn x Factor de dilucin de la muestra= C Muestra (A1 A2) Patrn 5.3.5 Albmina 5.3.5.1 Fundamento De todas las protenas sricas, la albmina es la que se encuentra en la concentracin ms elevada. Acta para mantener la presin onctica y el transporte de numerosas sustancias. Un aumento de la albmina srica podra indicar deshidratacin o hiperinfusin con albmina; un descenso est relacionado con hidratacin rpida, sobrehidratacin, malnutricin y malabsorcin graves, necrosis heptica difusa grave, hepatitis activa crnica y neoplasia. La albmina suele estar reducida en el alcoholismo crnico, el embarazo, en los casos de prdida de protenas renales, disfuncin tiroidea, lcera pptica y en los procesos inflamatorios crnicos. 5.3.5.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina o EDTA, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7.Se debe separar el suero o plasma en el plazo de una hora y efectuar la determinacin inmediatamente. 5.3.5.3 Mtodo 5.3.5.3.1 Deje atemperar los reactivos y muestras a temperatura ambiente. 5.3.5.3.2 Pipetee los siguientes tubos TUBOS Reactivo Muestra Calibrad or BLAN CO 2.0 ml ------------MUEST RA 2.0 ml 10 ul -----CALIBRA DOR 2.0 ml ------10 ul

5.3.5.3.3 Mezcle y deje los tubos a temperatura ambiente durante 10 minutos. 5.3.5.3.4 Lea las absorbancias de las muestras y el calibrador a 630 nm contra el blanco de reactivo. El color es estable por 30 minutos protegido de la luz. 5.3.5.4 Muestras con concentraciones ms altas de 7 g/dl deben ser diluidas 1:2 con solucin salina y realizar el ensayo nuevamente. Multiplicar el resultado por 2. Los resultados pueden ser tambin expresados en el sistema SI as: g /dl x 10 = g/L 5.3.5.5 Valores de referencia Suero o plasma: Adultos 3.81 4.65 g/dl 38.1 46.5 g/L El rango de valores para individuos hospitalizados vara entre 1.4 y 4.8 g/dl. Es recomendable que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia. 5.3.6 Urea / Bun 5.3.6.1Fundamento La va ms importante para la excrecin del nitrgeno es en forma de urea que es sintetizada en el hgado, liberada al torrente sanguneo y eliminado por los riones. Los niveles elevados del nitrgeno ureico en sangre se asocian con glomerulonefritis, shock, obstruccin de las vas urinarias, pielonefritis y otras causas de insuficiencia renal aguda y crnica. La insuficiencia cardiaca congestiva grave, la hiperalimentacin, la cetoacidosis diabtica, la deshidratacin y las hemorragias del tubo digestivo elevan el nitrgeno ureico. Los niveles bajos de nitrgeno ureico se

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asocian normalmente con el embarazo, un descenso en la ingestin de protenas, insuficiencia heptica aguda y con la administracin intravenosa de lquidos. 5.3.6.2Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina o EDTA, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestra numeral 6.9.7. 5.3.6.3Preparacin De los Reactivos: Reactivo B y Patrn estn listos para su uso. Reactivo A: Vaciar el contenido de un frasco de reactivo A2 en un frasco de reactivo A1. Homogenizar. Si desea preparar otros volmenes, mezclar en la proporcin 1 ml Reactivo A2 + 24 ml de Reactivo A1. Estable 2 meses a 2 8 C. 5.3.6.4 Mtodo 5.3.6.4.1 Atemperar los reactivos a temperatura ambiente 5.3.6.4.2 Pipetear en tubos de ensayo TUBOS Patrn Urea Muestra Reactivo A BLANC O --------------1.0 ml PATRO N 10 ul -----1.0 ml MUEST RA --------10 ul 1.0 ml

5.3.6.4.3 Agitar bien e incubar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente o durante 5 minutos a 37 C. 5.3.6.4.4 Pipetear Reactivo B 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

5.3.6.4.5 Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente 0 durante 5 minutos a 37 C. 5.3.6.4.6 Leer la absorbancia A del patrn y de la muestra a 600 nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 2 horas. 5.3.6.5 Valores de Referencia Suero y plasma: 15- 39 mg/dl Urea= 7-18 mg/dl BUN= 2.5- 6.5 mmol/L urea. En el periodo neonatal las concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 aos se encuentran valores superiores a los adultos. Las concentraciones tambin tienden a ser ligeramente superiores en hombres que en mujeres. Orina: 26 43 g/24 h urea = 12-20 g/24 h BUN= 48-714 mmol/24h urea. 5.3.7 Glucosa 5.3.7.1 Fundamento La glucosa es una fuente primaria de energa celular. Las concentraciones de glucosa plasmtica en ayunas y la tolerancia a una dosis de glucosa se utilizan para establecer el diagnstico de la diabetes mellitus y los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono. Las determinaciones de la glucosa se utilizan para supervisar el tratamiento en las personas diabticas y en pacientes con deshidratacin, coma, hipoglucemia, insulinoma, acidosis y cetoacidosis. 5.3.7.2 Obtencin y preparacin de la muestra

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Suero o plasma, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. El paciente no requiere ninguna preparacin especial. 5.3.7.3Mtodo 5.3.7.3.1 Atemperar el reactivo a temperatura ambiente. 5.3.7.3.2 Pipetear en tubos de ensayo TUBO S Patr n Muest ra Reacti vo BLANC O ----------------1.0 ml PATRO N 10 ul -------1.0 ml MUEST RA ----------10 ul 1.0 ml

5.3.7.3.3 Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente o durante 5 minutos a 37 C. 5.3.7.3.4 Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 500 nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 2 horas. 5.3.7.4 Clculos La concentracin de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general: A Muestra X C Patrn = C Muestra A Patrn 5.3.8 Curva de Tolerancia Oral a la Glucosa 5.3.8.1 Muestra: Debe existir un ayuno mnimo de 12 horas, durante al menos 8 horas antes del estudio y durante el mismo no debe ingerirse caf o bebidas alcohlicas, fumar o realizar ejercicio fuerte. Durante el tiempo de espera entre cada muestra el paciente debe permanecer en perfecto reposo. Suero o plasma, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. El paciente no requiere ninguna preparacin especial. 5.3.8.2 Fundamento: La curva de tolerancia oral a la glucosa es el estudio ms sensible para evaluar los casos subclnicos de diabetes, mide el metabolismo de los carbohidratos despus de ingerir una carga de glucosa. 5.3.8.3 Mtodo: 5.3.8.3.1 Carga de Glucosa: De acuerdo con la OMS debe disolverse 75 grs. De glucosa en 300 ml de agua sin tener en cuenta el peso del paciente si este es adulto. Para las mujeres embarazadas se administran 100 grs. De glucosa disueltos en 400 ml de agua. Si el paciente es un nio se pesa y se le administra 1.75 grs. De glucosa por Kg. de peso. La carga disuelta debe ingerirse en un lapso no mayor de 5 minutos. Test pos y Curvas en adultos: La carga de glucosa usada por S&C LABORATORIOS es GLUMA 50 elaborado por CULTIVOS y dentro de las instrucciones de uso para obtener una carga descrita anteriormente para adultos es: Suministrar en ayunas 150 cm3 de carga de glucosa lquida y agregarle 150 cm3 de agua (equivalente a 75 gr de glucosa) Test de Curva de glicemia en embarazadas: Suministrar en ayunas 200 cm 3 de carga de glucosa lquida y agregarle 200 cm3 de agua (equivalencia 100 gr de glucosa).

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Test pos y curvas en nios: Suministrar 3.5 cm3 de carga de glucosa lquida por kilogramo de peso y agregarle 150 cm. de agua. Prueba de tamizaje para embarazadas: suministrar 100 cm3 de carga de glucosa lquida y agregarle 100 cm3 de agua (equivalencia 50 gr. de glucosa). 5.3.8.3.2 Obtencin de muestras:

Se obtiene una muestra de sangre en ayunas, despus de esto se ingiere la carga de glucosa. La hora en que se inicia la ingestin de la carga se debe anotar cuidadosamente y se llamar tiempo cero para la obtencin de las siguientes muestras. Se obtienen entonces muestras sucesivas de sangre exactamente a la media hora, una hora, dos y tres horas posteriores a la ingestin de la carga, en cada una de las muestras se determina la glucosa. 5.3.8.3.3 Interpretacin:

Se considera diabtica una persona que presente glicemia en ayunas superiores a 140 mg/dl, siempre y cuando presente condiciones bsales estables. Personas mayores de 30 aos, con antecedentes familiares de diabetes, con glicemia en ayuno entre 80 y 140 mg/dl podran requerir una prueba pre y post con carga de 75 gr. de glucosa, si la post es superior a 200 mg/dl se confirma el diagnstico de diabetes, si es inferior a 140 mg/dl se descarta el diagnstico, si se encuentra entre 140 y 200 mg/dl se interpreta como una intolerancia a los carbohidratos. 5.3.9 Colesterol 5.3.9.1 Fundamento El colesterol est presente en los tejidos, en el suero y en el plasma bien como colesterol o bien como steres de colesterol unidos a protenas. El colesterol es un componente estructural esencial de las membranas celulares y de la capa externa de las lipoprotenas plasmticas y es el precursor de todas las hormonas esteroides, incluidas las hormonas sexuales y suprarrenales, los cidos biliares y la vitamina D. Las determinaciones del colesterol se utilizan para valorar el riesgo de desarrollar oclusin de la arteria coronaria, aterosclerosis, infarto de miocardio y enfermedades cerebrovasculares. La aterosclerosis coronaria se correlaciona con niveles elevados de colesterol. Las concentraciones de colesterol estn aumentadas en la hipercolesterolemia primaria; la hiperlipoproteinemia secundaria, incluido el sndrome nefrtico; la cirrosis biliar primaria; el hipotiroidismo; y en algunos casos, la diabetes mellitus. Pueden encontrarse concentraciones bajas de colesterol en la desnutricin, la absorcin insuficiente, los procesos malignos avanzados y el hiperparatiroidismo. La concentracin de colesterol srico depende de numerosos factores, entre ellos la edad y el sexo. 5.3.9.2Obtencin y preparacin de la muestra. Suero o plasma con heparina, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.9.3Mtodo 5.3.9.3.1 Atemperar el reactivo a temperatura ambiente. 5.3.9.3.2 Pipetear en tubos de ensayo TUBO Patrn colesterol de BLANC O ---------PATRO N 10 ul MUEST RA -----------

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Muestra Reactivo ---------1.0 ml ------1.0 ml 10 ul 1.0 ml

5.3.9.3.3 Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente o durante 5 minutos a 37 C. 5.3.9.3.4 Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 500 nm frente al blanco. El color es estable al menos 2 horas.

5.3.10 HDL. Colesterol 5.3.10.1 Fundamento El colesterol HDL se utiliza para evaluar el riesgo de desarrollar cardiopata coronaria (CC). El riesgo de cardiopata coronaria aumenta cuando las concentraciones de colesterol HDL estn reducidas. Esta tcnica emplea un mtodo de separacin basado en la precipitacin selectiva de las lipoprotenas conteniendo apoprotenas B (VLDL, LDL, ALPA) por accin del cido fosfotngstico/Cl2Mg), sedimentacin del precipitado por centrifugacin y subsiguiente anlisis enzimtico como colesterol residual de las lipoprotenas de alta densidad (HDL) contenidas en el sobrenadante claro. Un valor de colesterol HDL bajo es un indicador independiente y firme de enfermedad coronaria. En ATP III el valor bajo de colesterol HDL qued categricamente definido como un nivel < 40 mg/dl, un cambio en relacin al nivel < 35 mg/dl establecido anteriormente en ATP II. Un valor bajo de colesterol HDL se emplea como un estimador de riesgo a 10 aos, de padecer enfermedad cardiaca coronaria debindose sta a diversas causas: triglicridos elevados, sobrepeso y obesidad, inactividad fsica, tabaco, ingestas muy altas de carbohidratos y ciertas drogas como los esteroides, anabolizantes y agentes progestionales. 5.3.10.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina, la toma de la muestra se describe en la gua GLCRGS-01 numeral 6.9.7. 5.3.10.3 Mtodo 5.3.10.3.1 Precipitacin Equilibrar muestras y reactivos a temperatura ambiente 5.3.10.3.2 Pipetear en tubos de centrfuga rotulados Muestra o Patrn Reactivo Precipitante 0.2 ml 0.4 ml

5.3.10.3.3 Mezclar en agitador rotatorio y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente. 5.3.10.3.4 Centrifugar 10 minutos a 4000 rpm o 2 minutos a 12000 rpm. 5.3.10.3.5 Decantar el sobrenadante claro dentro de las 2 horas. En el caso de sobrenadantes turbios ocasionados por triglicridos elevados (> 350 g/dl) deber diluirse la muestra 1:2 con solucin salina y repetir los pasos anteriores. Multiplicar los resultados por 2. 5.3.10.3.6 Colorimtrica Equilibrar el monoreactivo auxiliar de colesterol y el patrn del kit a temperatura ambiente. 5.3.10.3.7 Pipetear en tubos rotulados

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TUBOS BLANC O SOBRENAD ANTE MUESTRA 1.0 ml 50 ul --------SOBRENADA NTE PATRON 1.0 ml ------50 ul

Monoreactiv 1.0 ml o Sobrenadant -------e Pa Patrn --- --------

5.3.10.3.8 Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente 5 minutos a 37 C. 5.3.10.3.9 Leer la absorbancia (A) del sobrenadante y el patrn a 550 nm frente al blanco de reactivo. 5.3.11 Triglicridos. 5.3.11.1 Fundamento Los triglicridos, steres de cidos grasos de glicerol, representan la forma ms importante de grasa en el organismo; su funcin principal es la de almacenar y proporcionar energa a las clulas. La concentracin de triglicridos en el plasma en cualquier momento dado es un equilibrio entre los flujos de entrada y de eliminacin. Las concentraciones de triglicridos en el plasma varan con la edad y el sexo. Durante la fase de crecimiento y desarrollo pueden producirse aumentos moderados. Los triglicridos se utilizan en la evaluacin de las hiperlipidemias, asocindose las concentraciones elevadas con la presencia de hipotiroidismo, sndrome nefrtico, enfermedades por acumulacin de glucgeno y diabetes mellitus. Las concentraciones extremadamente elevadas de triglicridos son comunes en la pancreatitis aguda. 5.3.11.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.11.3 Mtodo 5.3.11.3.1 Lleve los reactivos y muestras a temperatura ambiente. 5.3.11.3.2 Pipetee los siguientes tubos TUBOS Monoreac tivo Muestra Patrn BLANC O 1.0 ml ------------MUEST RA 1.0 ml 10 ul ------PATRON 1.0 ml ------10 ul

5.3.11.3.3 Mezcle y deje los tubos 15 minutos a temperatura ambiente o 5 minutos a 37 C. 5.3.11.3.4 Lea la absorbancia (A) de la muestra y el patrn a 500 nm contra el blanco de reactivo. El color es estable hasta por 1 hora protegido de la luz. 5.3.12 cido rico. 5.3.12.1 Fundamento. El cido rico es el producto final del metabolismo de la purina en el organismo humano. El cido rico se determina en el diagnstico y la monitorizacin de numerosos trastornos renales y metablicos Algunos son insuficiencia renal, gota, leucemia, psoriasis, en estados de hambre, pacientes bajo terapia citosttica.

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El cido rico es oxidado por la accin de la uricasa, en alantona y perxido de hidrogeno. En presencia de peroxidasa (POD) la mezcla de diclorofenol (DCFS) y 4aminoantipirina (4-AA) se condensan por accin del perxido de hidrogeno, formando una quinonaimina coloreada proporcional a la concentracin de cido rico en la muestra. El cido rico es el mayor producto del catabolismo de los nuclesidos purnicos (adenosina y guanina) originarios de la va metablica de las purinas. Estas pueden sintetizarse endgenamente por descomposicin de los cidos nucleicos o incorporarse externamente a travs de dietas en que los cidos nucleicos estn presentes. El aumento anormal de cido rico circulante por encima de 7.0 mg/dl se conoce como hiperuricemia siendo la gota la expresin mayor de la dolencia que cursa con una saturacin de cido rico en los fluidos corporales y la consiguiente deposicin de uratos en los tejidos blandos, especialmente en las articulaciones. Aumentos elevados se hallan tambin asociados a leucemias, toxemia del embarazo y falla renal severa. Menos comunes son los casos de hipouricemia, con concentraciones de cido rico < 2.0 mg/dl, por lo general secundarios a casos de enfermedad hepatocelular, defectos de reabsorcin renal o a sobredosis de drogas uricosricas empleadas en el tratamiento de la hiperuricemia. 5.3.12.2 Obtencin y Preparacin de las Muestras. Suero o plasma con heparina o EDTA, tambin puede utilizarse muestra de orina para esta prueba, pero debe efectuarse la determinacin inmediatamente. La toma de las muestras se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 en el caso del suero y plasma y numeral 6.9.2 para la muestra en orina. 5.3.12.3 Mtodo 5.3.12.3.1 Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente. 5.3.12.3.2 Pipetear en tubos rotulados TUBOS Monoreac tivo Muestra Patrn BLANCO 1.0 ml ------------MUEST RA 1.0 ml 25 ul ------PATRO N 1.0 ml ------25 ul

5.3.12.3.3 Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente 5 minutos a 37 C. 5.3.12.3.4 Leer la absorbancia (A) de la muestra y el patrn a 520 nm frente al blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos protegido de la luz. 5.3.13 Protenas Totales. 5.3.13.1 Fundamento Las protenas sricas transportan frmacos y metabolitos y mantienen la presin osmtica en el plasma. La mayora de las protenas sricas, a excepcin de las gammaglobulinas, se sintetizan en el hgado. Una de las protenas sricas ms importantes que produce el hgado es la albmina. La concentracin de protenas totales en suero puede utilizarse en la evaluacin del estado nutricional. Entre las causas de una concentracin elevada de protenas totales en suero figuran la deshidratacin, la macroglobulinemia de Waldenstrm, el mieloma mltiple, la

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hiperglobulinemia, las enfermedades granulomatosas y algunas enfermedades tropicales. En la reaccin del Biuret se forma un quelato entre el in Cu 2+ y los enlaces peptdicos de las protenas del medio alcalino con la formacin de un complejo coloreado violeta cuya absorbancia se mide foto colorimtricamente. La intensidad del color producido es proporcional a la concentracin de protenas en la muestra. El contenido srico de las protenas solubles, aquellas que circulan en fluidos extra e intracelulares, se emplea en clnica como un marcador de ayuda diagnstica, siendo las principales pruebas analticas las que estn relacionadas con la medicin de las protenas totales y de la albmina. Las protenas del suero y de la albmina se hallan mayoritariamente y en forma conjunta, implicadas en el mantenimiento de la normal distribucin del agua entre los tejidos y la sangre siendo responsables de la regularizacin de la presin onctica del plasma adems del transporte de muchas sustancias, incluyendo macromolculas. La hiperproteinemia o hiperalbuminemia por lo general ocurre en el mieloma mltiple, causados por altos niveles de inmunoglobulinas monoclonales, deshidratacin, excesiva prdida de agua, como en vmitos severos, diarrea, enfermedad de Addison y diabetes acidsica. La hemoconcentracin, descenso en el volumen de agua plasmtica, se refleja como una hiperproteinemia relativa, al verse aumentadas en el mismo grado las concentraciones de todas las protenas plasmticas individuales. La hipoproteinemia o hipoalbuminemia se presenta en caso de malnutricin, edema, sndrome nefrtico, mal absorcin y cirrosis heptica severa. Al estar la albmina presente a tan alta concentracin el simple descenso de esta protena puede ser causa de hipoproteinemia. 5.3.13.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.13.3 Mtodo 5.3.13.3.1 Pipetear en tubos rotulados TUBOS Biuret Muestr a Patrn BLANC O 1.0 ml --------------MUEST RA 1.0 ml 20 ul ------PATRON 1.0 ml -------20 ul

5.3.13.3.2 Mezclar e incubar los tubos 10 minutos a 37 C. 5.3.13.3.3 Leer la absorbancia (A) de la muestra y el patrn a 540 nm frente al blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 1 hora. 5.3.14 Protena C Reactiva cualitativa y semicuantitativa 5.3.14.1 Fundamento La protena C-reactiva es una protena de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayora de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos daados, inflamacin y neoplasias malignas. El incremento de concentracin de esta protena se produce despus de unas horas de desarrollarse la inflamacin pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12 -24 horas.

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Fue descrita por primera vez por Tillet y Francis en 1930. Estos autores comprobaron que los sueros de pacientes afectados de diversos estados infecciosos en fase aguda, precipitaban en presencia de in calcio, con un extracto no proteico de neumococo denominado polisacrido C. Por ello a la protena causante de dicha reaccin se la denomin protena C reactiva. Posteriormente se demostr que la protena C reactiva se encuentra normalmente en el suero de individuos sanos en concentraciones muy bajas, no superando en la mayora de los casos la tasa de 6 mg/dl. Sin embargo, en la mayora de los procesos inflamatorios, ya sean de origen infeccioso o no, el incremento de la protena C puede llegar a alcanzar ttulos muy superiores al valor normal. En estos casos la protena C reactiva puede llegar a alcanzar ttulos muy superiores al valor normal. En estos casos la protena C reactiva aumenta m{as rpidamente que la VSG y se vuelve a la normalidad antes que la misma. La elevacin de la protena C reactiva se produce de forma inespecfica en diversos procesos de agresin tisular por ejemplo, estados infecciosos, fiebres reumticas, artritis reumatoide, infarto de miocardio, tumores malignos, abscesos abdominales, peritonitis, quemaduras, etc. Por todo ello una elevada concentracin de la protena C reactiva en suero carece de valor diagnstico fuera del contexto clnico del paciente. No obstante es de gran utilidad para el seguimiento y control evolutivo de dichos procesos, as como para el diagnstico diferencial de algunas enfermedades. 5.3.14.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero fresco, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.14.3 Mtodo OPERACIONES PREVIAS Control del reactivo ltex: Antes de realizar una serie de determinaciones es aconsejable controlar el reactivo ltex con los controles positivos y negativos, incluidos en el kit. Ambos controles debern utilizarse siguiendo los pasos para la tcnica cualitativa. La reaccin entre el control positivo y el reactivo debe dar una clara aglutinacin distinta de la apariencia uniforme del control negativo. Si la aglutinacin no fuera visible, la prueba debera repetirse y desecharse el kit en caso de que no se observara reaccin positiva. 5.3.14.3.2 Dejar que el reactivo y los controles alcancen la temperatura ambiente (20 30 C). 5.3.14.3 Agitar suavemente el vial de reactivo para dispensar y resuspender las partculas de ltex en la solucin tampn. Debe evitarse una agitacin violenta. 5.3.14.3.4 Dosificar 0.050 ml de suero en una de las secciones del portaobjeto. 5.3.14.3.5 Aadir 1 gota de reactivo junto a la gota de suero. 5.3.14.3.6 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.14.3.7 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (80 100 rpm) durante 2 minutos. 5.3.14.3.8 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.14.3.9 Reacciones Positivas: 3+ Agregados grandes sobre fundo transparente 2+ Agregados moderados sobre fondo ligeramente opaco. 1+ Agregados finos sobre fondo opaco 5.3.14.3.10 Reacciones Negativas: Ausencia de agregados, suspensin uniforme. 5.3.14.3.11 TECNICA SEMICUANTITATIVA 5.3.14.3.12 Preparacin de las diluciones del suero sobre el mismo porta Secciones Salina (ml) 1 ---2 0.050 3 0.050 4 0.050 5 0.050 6 0.050

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Suero (ml) Mezclar Transferir Dilucin Ul/ml y 1:1 6 0.050 0.050 1:2 12 0.050 0.050 1:4 1:8 1:16 24 48 96 0.050 1:32 192 0.0 50 0.050 ------------

5.3.16.3.13 Dosificar 0.050 ml de solucin salina en cada una de las secciones 2 a 6 del portaobjetos. 5.3.16.3.14 Dosificar con una pipeta automtica 0.050 ml de suero en las secciones 1 y 2 del portaobjetos. 5.3.16.3.15 Con la misma pipeta aspirar y expulsar varias veces el suero y la solucin salina contenida en la seccin 2 hasta logar una buena mezcla. 5.3.16.3.16 Tomar 0.050 ml de la mezcla realizada en la seccin 2 y transferir a la seccin 3. 5.3.14.3.17 Realizar las mismas operaciones descritas anteriormente para lograr la mezcla correcta de los reactivos y transferir 0.050 ml de la seccin 3 a la seccin 4 y as sucesivamente hasta la 6, en la que despus de realizada la mezcla, se desecharn 0.050 ml. 5.3.14.3.18 Agitar suavemente el vial de reactivo y aadir una gota del mismo sobre cada una de las secciones 1 a 6 del portaobjetos que contienen las distintas diluciones del suero. 5.3.14.3.19 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.14.3.20 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (60-80 rpm) durante 2 minutos. 5.3.14.3.21 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.15 Protenas en Orina de 24 horas 5.3.15.1 Fundamento La medicin de protenas en orina se emplea en l diagnstico y tratamiento de enfermedades renales o cardiacas o bien de trastornos tiroideos, caracterizados por proteinuria y albuminuria. 5.3.15.2 Obtencin y preparacin de la muestra Orina de 24 horas, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.5. 5.3.15.3 Mtodo 5.3.15.3.1 La protena presente en la muestra reacciona con el rojo de pirogalol y el molibdato en medio cido, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra. 5.3.15.3.2 Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco

Patrn

Muestra

Patrn protena orina Muestra

--------1,0 mL

20 ul ----1,0 mL

----20 ul 1,0 mL

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Reactivo

5.3.15.3.3 Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente o 5 minutos a 37 C. 5.3.15.3.4 Leer la absorbancia del patrn y de la muestra frente al blanco a 600 nm. El color es estable durante al menos 30 minutos. 5.3.16 Factor Reumatoideo cualitativo y cuantitativo 5.3.16.1 Fundamento Los factores reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccin Fc de las inmunoglobulinas G. su principal inters clnico radica en el diagnstico de la artritis reumatoide (RA). La mayora de los de pacientes afectados de artritis reumatoide tienen la propiedad de reaccionar con Ig G no slo humanos sino tambin de otras especies. Ello es debido a la presencia en los mismos de una inmunoglobulina (mayoritariamente del tipo Ig M) que se conoce como factor reumatoide. Esta reaccin es del tipo antgeno anticuerpo, actuando el factor reumatoide en la misma como un anticuerpo. La positividad de la prueba de ltex, indicativa de la existencia del factor reumatoide, es prcticamente la prueba decisiva para el diagnostico de aquellos casos cuyos cuadro clnico sugiere la existencia de una artritis reumatoide. Ya que el factor reumatoide es probablemente un conjunto de varios factores inmunolgicamente distintos, es siempre recomendable realizar en paralelo la prueba de ltex (REHUMA RF, ltex sensibilizado con Ig G humana) y la prueba de WaalerRose modificada (Clearkit AR, hemates sensibilizados con Ig G animal). 5.3.16.2 Obtencin y Preparacin de las Muestras Suero, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.13.3 Mtodo 5.3.16.3.1 OPERACIONES PREVIAS Control del reactivo ltex: Antes de realizar una serie de determinaciones es aconsejable controlar el reactivo ltex con los controles positivos y negativos, incluidos en el kit. Ambos controles debern utilizarse siguiendo los pasos para la tcnica cualitativa. La reaccin entre el control positivo y el reactivo debe dar una clara aglutinacin distinta de la apariencia uniforme del control negativo. Si la aglutinacin no fuera visible, la prueba debera repetirse y desecharse el kit en caso de que no se observara reaccin positiva. 5.3.16.3.2 Dejar que el reactivo y los controles alcancen la temperatura ambiente (20 30 C). 5.3.16.3.3 Agitar suavemente el vial de reactivo para dispensar y resuspender las partculas de ltex en la solucin tampn. Debe evitarse una agitacin violenta. 5.3.16.3.4 Dosificar 0.050 ml de suero en una de las secciones del portaobjeto. 5.3.16.3.5 Aadir 1 gota de reactivo junto a la gota de suero. 5.3.16.3.6 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.16.3.7 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (80 100 rpm) durante 2 minutos. 5.3.16.3.8 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.16.3.9 Reacciones Positivas: 3+ Agregados grandes sobre fundo transparente 2+ Agregados moderados sobre fondo ligeramente opaco. 1+ Agregados finos sobre fondo opaco

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5.3.16.3.10 Reacciones Negativas: Ausencia de agregados, suspensin uniforme. 5.3.16.3.11 TECNICA SEMICUANTITATIVA 5.3.16.3.12 Preparacin de las diluciones del suero sobre el mismo porta

Secciones Salina (ml) Suero (ml) Mezclar Transferir Dilucin Ul/ml y

1 ---0.0 50

2 0.050 0.050 0.050 0.050 1:2 164

3 0.050 ------

4 0.050 ----

5 0.050 ----

6 0.050

1:1 8

0.050 0.050 1:4 1:8 1:16 32 64 128

0.050 1:32 256

5.3.16.3.13 Dosificar 0.050 ml de solucin salina en cada una de las secciones 2 a 6 del portaobjetos. 5.3.16.3.14 Dosificar con una pipeta automtica 0.050 ml de suero en las secciones 1 y 2 del portaobjetos. 5.3.16.3.15 Con la misma pipeta aspirar y expulsar varias veces el suero y la solucin salina contenida en la seccin 2 hasta logar una buena mezcla. 5.3.16.3.16 Tomar 0.050 ml de la mezcla realizada en la seccin 2 y transferir a la seccin 3. 5.3.16.3.17 Realizar las mismas operaciones descritas anteriormente para lograr la mezcla correcta de los reactivos y transferir 0.050 ml de la seccin 3 a la seccin 4 y as sucesivamente hasta la 6, en la que despus de realizada la mezcla, se desecharn 0.050 ml. 5.3.16.3.18 Agitar suavemente el vial de reactivo y aadir una gota del mismo sobre cada una de las secciones 1 a 6 del portaobjetos que contienen las distintas diluciones del suero. 5.3.16.3.19 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.16.3.20 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (80-100 rpm) durante 2 minutos. 5.3.16.3.21 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.17 ASTOS (Antiestreptolisinas) 5.3.17.1 Fundamento La determinacin inmunolgica de anticuerpos especficos contra los Streptococcus. El anticuerpo contra la estreptolisina O, una enzima producida por el Strptococcus beta hemoltico del grupo A constituye el ejemplo clsico, los anticuerpos antiestreptolisina O se determinan cuando aparecen enfermedades como consecuencia de sus efectos txicos y sensibilizantes tales como la fiebre reumtica, eritema anular y glomrulo nefritis aguda postestreptoccica. El estreptococo B- hemoltico del grupo A produce varias toxinas que pueden actuar como antgenos. Una de estas exotoxinas es la estreptolisina O que fue descubierta por Tood en 1.932. El organismo afectado produce anticuerpos especficos contra dichas exotoxinas, destacando entre ellos la antiestreptolisina O. La determinacin del ttulo en el suero de un paciente, permitir, establecer el grado de infeccin debida al estreptococo B hemoltico.

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El procedimiento clnico para la determinacin del ttulo de antiestreptolisina O, se basa e el efecto inhibitorio que el suero del enfermo tiene sobre el poder hemoltico de una estreptolisina O previa mente titulada y reducida. Sin embargo, la reaccin antgeno-anticuerpo ocurre independientemente de la actividad hemoltica de la estreptolisina O, lo que facilita el desarrollo de un test cualitativo y semicuantitativo para la determinacin del ttulo de antiestreptolisina O por aglutinacin de partculas ltex en el portaobjetos. 5.3.17.2 Obtencin y Preparacin de las Muestras Suero, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.17.3 Mtodo 5.3.17.3.1 OPERACIONES PREVIAS Control del reactivo ltex: Antes de realizar una serie de determinaciones es aconsejable controlar el reactivo ltex con los controles positivos y negativos, incluidos en el kit. Ambos controles debern utilizarse siguiendo los pasos para la tcnica cualitativa. La reaccin entre el control positivo y el reactivo debe dar una clara aglutinacin distinta de la apariencia uniforme del control negativo. Si la aglutinacin no fuera visible, la prueba debera repetirse y desecharse el kit en caso de que no se observara reaccin positiva. 5.3.17.3.2 Dejar que el reactivo y los controles alcancen la temperatura ambiente (20 30 C). 5.3.17.3.3 Agitar suavemente el vial de reactivo para dispensar y resuspender las partculas de ltex en la solucin tampn. Debe evitarse una agitacin violenta. 5.3.17.3.4 Dosificar 0.050 ml de suero en una de las secciones del portaobjeto. 5.3.17.3.5 Aadir 1 gota de reactivo junto a la gota de suero. 5.3.17.3.6 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.17.3.7 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (60 80 rpm) durante 2 minutos. 5.3.17.3.8 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.17.3.9 Reacciones Positivas: 3+ Agregados grandes sobre fundo transparente 2+ Agregados moderados sobre fondo ligeramente opaco. 1+ Agregados finos sobre fondo opaco 5.3.17.3.10 Reacciones Negativas: Ausencia de agregados, suspensin uniforme. 5.3.17.3.11 TECNICA SEMICUANTITATIVA 5.3.17.3.12 Preparacin de las diluciones del suero sobre el mismo porta Secciones Salina (ml) Suero (ml) Mezclar Transferir Dilucin Ul/ml y 1:1 200 0.050 0.050 1:2 400 0.050 0.050 1:4 1:8 1:16 800 1600 3200 0.050 1:32 6400 1 ---0.0 50 2 0.050 0.050 3 0.050 -----4 0.050 ---5 0.050 ---6 0.050

5.3.17.3.13 Dosificar 0.050 ml de solucin salina en cada una de las secciones 2 a 6 del portaobjetos. 5.3.17.3.14 Dosificar con una pipeta automtica 0.050 ml de suero en las secciones 1 y 2 del portaobjetos. 5.3.17.3.15 Con la misma pipeta aspirar y expulsar varias veces el suero y la solucin salina contenida en la seccin 2 hasta logar una buena mezcla.

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5.3.17.3.16 Tomar 0.050 ml de la mezcla realizada en la seccin 2 y transferir a la seccin 3. 5.3.17.3.17 Realizar las mismas operaciones descritas anteriormente para lograr la mezcla correcta de los reactivos y transferir 0.050 ml de la seccin 3 a la seccin 4 y as sucesivamente hasta la 6, en la que despus de realizada la mezcla, se desecharn 0.050 ml. 5.3.17.3.18 Agitar suavemente el vial de reactivo y aadir una gota del mismo sobre cada una de las secciones 1 a 6 del portaobjetos que contienen las distintas diluciones del suero. 5.3.17.3.19 Mezclar ambas gotas con un palillo cubriendo toda la superficie de la seccin del portaobjetos. 5.3.17.3.20 Agitar el portaobjetos con un suave movimiento de rotacin, ya sea manualmente o en un agitador rotatorio (80-100 rpm) durante 2 minutos. 5.3.17.3.21 Observar la presencia o ausencia de aglutinacin transcurrido dicho tiempo. 5.3.18 Determinacin Cualitativa de Gonadotropina Corinica Humana (hCG) 5.3.18.1 Fundamento La Gonadotropina Corinica humana es una hormona glicoproteica producida por la placenta en desarrollo poco despus de la fertilizacin. En el embarazo humano, la hCG puede detectarse tanto en orina como en suero ya a los 7-10 das de la concepcin. La aparicin de hCG en orina y suero poco despus de la concepcin, y su posterior aumento rpido durante el principio de la gestacin convierten a esta hormona en un excelente marcador para la deteccin precoz del embarazo. La prueba hCG IHR Diagnostica de embarazo en un solo paso en tira (orina/suero) es una prueba rpida que detecta cualitativamente la presencia de hCG en una muestra de orina o suero con una sensibilidad de 20 mUI/ml. La prueba utiliza una combinacin de anticuerpos monoclonales y policlonales para detectar selectivamente los niveles elevados de hCG en orina o suero. Con el nivel de sensibilidad mencionada la prueba no muestra interferencias cruzadas con otras hormonas glucoprotecas estructuralmente relacionadas FSH, LH y TSH, en niveles fisiolgicos altos. La prueba utiliza dos lneas para indicar los resultados. La lnea de la prueba utiliza una combinacin de anticuerpos que incluyen un anticuerpo monoclonal hCG para detectar selectivamente niveles elevados de hCG. La lnea de control est compuesta por anticuerpos policlonales de cabra y partculas coloidales de oro. El ensayo se realiza sumergiendo una tira de anlisis en una muestra de suero al pocillo y observando la formacin de las lneas de color. Las muestras positivas reaccionan con el conjugado de color del anticuerpo especfico anti hCG para formar una lnea de color en la regin de la lnea de prueba de la membrana. La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo. Para servir de control de procedimiento, siempre aparecer una lnea de color en la regin de la lnea de control, si la prueba se ha realizado correctamente. 5.3.18.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Suero u orina, la toma de las muestras se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 en el caso del suero y numeral 6.9.2 para la muestra en orina. 5.3.18.3 Mtodo 5.3.18.3.1La prueba Ultra hCG de embarazo en Un Solo Paso en Tira (Orina/Suero) es un inmunoensayo cromatogrfico rpido para la deteccin cualitativa de la Gonadotropina Corinica Humana, para el diagnstico precoz del embarazo.

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5.3.18.3.2 Dejar estabilizar el envase a temperatura ambiente antes de abrirlo. Extraiga la tira de anlisis del envase cerrado y selo en cuanto sea posible. Cierre inmediatamente el envase despus de extraer el nmero necesario de tiras. 5.3.18.3.3 Con las flechas sealando hacia la muestra de orina o suero, sumerja la tira verticalmente en la muestra de orina o suero al menos durante 10-15 segundos. No sumergir por encima de la lnea mxima (MAX) de la tira. 5.3.32.3.4 Coloque la tira en una superficie plana no absorbente, ponga en marcha el cronmetro y espere hasta que aparezcan una o dos lneas rojas. Lea el resultado a los 3 minutos cuando se analice una muestra de orina o a los 5 minutos cuando se analice una muestra en suero. 5.3.19 Anfgenos Febriles 5.3.19.1 Fundamento Los anfgenos febriles son suspensiones estandarizadas de bacterias preparadas para la deteccin y semicuantificacin de anticuerpos que se desarrollan durante algunas infecciones febriles tales como la brucelosis, salmonellosis y ciertas rickettsiosis. 5.3.19.2 Obtencin y Preparacin de las Muestras Suero, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7. 5.3.19.3 Mtodo 5.3.19.3.1 Prueba en Lmina 5.3.19.3.2 Dejar atemperar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente 5.3.19.3.3 Depositar una gota de la muestra a ensayar y una gota de cada control en crculos separados de la placa visualizadora de vidrio. 5.3.19.3.4 Homogenizar el anfgeno con suavidad antes de la prueba 5.3.19.3.5 Aadir una gota de cada uno de los anfgenos en crculos separados y luego aadir una gota de la muestra a cada uno de los crculos. 5.3.19.3.6 Mezclar con ayuda de un palillo desechable, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del crculo. 5.3.19.3.7 Agitar el porta manualmente o en agitador rotatorio a 100 rpm durante 2 minutos. 5.3.19.3.8 Prueba en Tubo 5.3.19.3.9 Diluir el suero 1/20 con solucin salina (0.1 ml suero + 1.9 ml de S.S.)y preparar una serie de dobles diluciones en solucin salina. 5.3.19.3.10 Diluir los controles positivo y negativo 1/10 con S.S.(0.1 ml de control + 0.9 ml de S.S.) 5.3.19.3.11 Preparar para cada anfgeno a probar una fila de tubos que contenga 1 ml De cada uno de los siguientes, solucin salina, dilucin del suero y dilucin de los controles 5.3.19.3.12 Aadir a cada tubo una gota de suspensin de anfgeno correspondiente cada tubo y mezclar 5.3.19.3.13 Incubar los tubos a 37 C durante 24 horas. 5.4 Procedimientos Tcnicos de la Seccin de Uroanlisis y Seccin de Copro parasitologa 5.4.1 Parcial de Orina (Uroanlisis) 5.4.1.1 Fundamento

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El anlisis qumico microscpico de la orina es una herramienta diagnostica valiosa para la deteccin y evaluacin de trastornos renales y del tracto urinario, as como de otras enfermedades sistemas. 5.4.1.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Orina miccin espontnea, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.2. 5.4.1.3 Mtodo 5.4.1.3.1 Utilizar orina fresca, no centrifugada. Mezclar a fondo la muestra de orina. Para el anlisis, la muestra debe estar a temperatura ambiente y no haber reposado durante ms de 2 horas. 5.4.1.3.2 Extraer una tira reactiva y volver a cerrar el envase inmediatamente con el tapn original que lleva un agente desecante, ya que en caso contrario las zonas reactivas podran descolorearse a causa de la humedad y producir resultados incorrectos. 5.4.1.3.3 Sumergir la tira reactiva brevemente (aprox. 1 segundo) en la orina y asegurarse de que se humedecen todas las zonas reactivas. 5.4.1.3.4 Al extraer la tira reactiva, rozar el canto lateral de la tira reactiva sobre un papel secante para eliminar el exceso de orina. 5.4.1.3.5 Adems, golpear brevemente el canto lateral de la tira reactiva sobre un papel secante para eliminar totalmente el exceso de lquido. 5.4.1.3.6 Al cabo de 60 segundos (para la zona de leucocitos, al cabo de 60 120 segundos), comparar los colores de reaccin de las partes humedecidas de las zonas reactivas con los colores de la etiqueta. Los cambios de color que slo aparecen en los bordes de las zonas reactivas o se desarrollan despus de transcurridos ms de 2 minutos, carecen de importancia diagnstica. 5.4.2 Morfologa Globular en orina 5.4.2.1 Fundamento La morfologa globular es de gran importancia en la diferenciacin de hematurias de origen renal y hematurias de tracto urinario bajo, es decir descarta o confirma la presencia de dao renal. 5.4.2.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra. Orina fresca, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.2. 5.4.2.3 Mtodo 5.4.2.3.1 Centrifugar la muestra a 1.500 r.p.m. durante 5 minutos. 5.4.2.3.2 Descartar el sobrenadante. 5.4.2.3.3 Montar 50 de sedimento. 5.4.2.3.4 Realizar un recuento de 100 hemates diferenciando eumorfos y dismorfos 5.4.3 Examen Coprolgico 5.4.3.1 Fundamento La observacin microscpica de la materia fecal esta orientada al diagnstico de las parasitemias intestinales mediante la identificacin de las estructuras de los parsitos presentes en la muestra. 5.4.3.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra. Materia fecal, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.18. 5.4.3.3 Mtodo El coprolgico consta de un examen directo y uno por concentracin, este ltimo slo se realiza bajo solicitud directa del mdico (en caso necesario consultar bibliografa).

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El examen directo a su vez consta de un examen macroscpico y un examen microscpico. 5.4.3.3.1 Debe determinarse la consistencia de la muestra, su color y la existencia o no de elementos tales como moco, fibras, sangre o presencia de parsitos adultos como A. lumbricoides, E. vermicularis o proglotidos de Taenia sp. 5.4.3.3.2 Examen Microscpico: En la solucin salina se hace todos los estudios de los parsitos y en el Lugol se observa detalles de la morfologa nuclear de los protozoarios. Al microscopio puede observarse tambin elemento de origen vegetal o animal como leucocitos, eritrocitos, restos de alimento y levaduras. Los huevos de scaris lumbricoides, Trichuris trichiura y uncinarias deben contarse e informarse como huevos por preparacin (hpp), de estas forma es posible hacer un estimado del grado o intensidad de la infeccin y facilita clasificarlas como leves, moderadas o severas y evaluar la eficacia del tratamiento. La presencia de huevos de otros helmintos o cstodos simplemente se informa como positivo. 5.4.4 Sangre Oculta en Heces 5.4.4.1 Fundamento Este anlisis es utilizado para la deteccin de lesiones ulcerosas asintomticas del tubo digestivo. 5.4.4.2 Obtencin y Preparacin de la muestra Materia fecal, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.18. 5.4.4.3 Mtodo 5.4.4.3.1 Coloque el papel filtro sobre una superficie limpia. Aplique la muestra y extienda de tal manera que de un pequeo extendido delgado. (no use emulsiones o suspensiones). 5.4.4.3.2 Adicione una gota del ACTIVADOR, y permita que se absorva. 5.4.4.3.3 Adicione una gota del reactivo (T.M.B), y permita que se absorva. 5.4.4.3.4 Adicione una gota del REVELADOR, permitiendo que se absorva. 5.4.4.4 Resultados 5.4.4.4.1 Leer la reaccin despus de 30 segundos hasta los 2 minutos. 5.4.4.4.2 Positivo: Si la reaccin es positiva una Coloracin Azul, aparece en papel de filtro alrededor de la muestra. 5.4.4.4.3 Cualquier color desarrollado despus de 2 minutos debe ignorarse. 5.4.4.4.4 Para confirmar que los reactivos estn funcionando correctamente utilice una gota de sangre diluida en solucin salina y siga el mismo procedimiento como si fuera una muestra. 5.4.5 Azcares Reductores en Heces 5.4.5.1 Fundamento La determinacin de los azcares reductores es til en la determinacin de la etiologa de una diarrea, las diarreas bacterianas rara vez producen intolerancia a los azcares, mientras que las diarreas de origen viral generalmente cursan con intolerancia a los azcares. 5.4.5.2 Obtencin y Preparacin de la muestra: Materia fecal fresca, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.18. 5.4.5.3 Mtodo

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5.4.5.3.1 Disolver la materia fecal en agua destilada, 1 parte de materia fecal x 2 de agua estilada, homogenice. 5.4.5.3.2 Mida el PH y la glucosa con una tira de orina. 5.4.5.3.3 En 2 tubos gruesos coloque 15 gotas de materia fecal, al tubo 1 agregue 10 gotas de HCL 1 normal, agregue a ambos tubos una pasta de CLINITEST. 5.4.5.3.4 Tubo 1: glucosa el valor del tubo 1 = lactosa. Tubo 2: glucosa el valor del tubo 2 = sacarosa. 5.4.6 Ph en Materia Fecal 5.4.6.1 Fundamento En diarreas por bacterias invasivas generalmente es cido, en diarreas virales siempre es cido y en diarreas de origen txico es neutro. 5.4.6.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Materia fecal fresca, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.18. 5.4.6.3 Mtodo Impregnar un trozo de papel Indicador Universal con la muestra. 5.4.7 Identificacin Perianal de Oxiuros (Test de Graham) 5.4.7.1 Fundamento Esta prueba es utilizada para investigar huevos de oxiuros. 5.4.7.2 Obtencin y preparacin de la muestra La toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras de manejo para toma de muestras numeral 6.9.32. 5.4.7.3 Mtodo Observar al microscopio la cinta transparente fijada al porta objetos. Los huevos de E. Vermicularis son de forma ovalada con un lado aplanado, miden aproximadamente 55 x 25 micras. 5.5 Procedimientos Tcnicos Seccin Microbiologa 5.5.1 Flujo Vaginal Examen en Fresco 5.5.1.1 Fundamento El examen del flujo vaginal consta de 2 partes bsicas, un examen en fresco, para observar parsitos como las Trichomonas, hongos como las levaduras y otros elementos como hemates, etc. y un examen microscpico con coloracin de Gram para mirar la flora bacteriana presente, el cultivo es de gran ayuda cuando la etiologa del flujo es difusa, o la paciente con resultados normales en fresco pero persiste con sintomatologa, ocasionalmente bacterias como el Streptococcus agalactiae es difcil de demostrar en un examen en fresco, pero se evidencia en un cultivo. Los microorganismos que ms frecuentemente se encuentran causando patologas en los genitales femeninos son: Neisseria gonorrhoeae: causante de la gonorrea enfermedad de transmisin sexual, la cual puede ser sintomtica en las mujeres, ms no en los hombres cuya sintomatologa es franca. Su gravedad se encuentra en que si no es tratada a tiempo puede producir infertilidad, infecciones articulares y hasta septicemia. Trichomonas vaginalis: parsito de transmisin sexual, causante de infeccin vaginal caracterizada por escozor y abundante flujo vaginal.

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Gardnerella vaginalis: productora de vaginitis, produce un flujo vaginal con olor desagradable a pescado, debido a que generalmente se asocia con un bacilo anaerobio llamado mobiluncus. Cndida albicans: productora de vaginitis y vaginosis, produce un flujo abundante y blanquecino, que causa mucho prurito. Streptococcus beta hemoltico grupo B agalactiae: produce un flujo que puede pasar inadvertido o ser difcil de diagnosticar, la mejor forma de diagnosticarlo es con un cultivo, su importancia radica en que es el principal agente causal de abortos o partos pretrmino, al igual que puede infectar al beb al paso por el canal del parto. 5.5.1.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra La toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.30. 5.5.1.3 Mtodo Examen en fresco 5.5.1.3.1 Montar el examen en fresco del tubo con solucin salina, colocando una gota de flujo en una lmina portaobjetos y cubriendo con una laminilla y observar los siguientes parmetros. 5.5.1.3.2 Presencia o Ausencia de Clulas gua 5.5.1.3.3 Presencia o Ausencia de Tricomonas 5.5.1.3.4 Presencia o ausencia de Levaduras y pseudomicelios 5.5.1.3.5 Presencia de Hemates cuantificando x campo 5.5.1.3.6 Presencia de leucocitos cuantificando x campo 5.5.1.3.7 Medir el pH con papel indicador. 5.5.1.3.8 Realizar prueba de aminas: en una lmina porta objetos colocar una gota de flujo y una gota de KOH, percibir el olor a pescado como prueba positiva, inoloro prueba negativa.

5.5.2 Coloracin de Gram 5.5.2.1 Fundamento Algunas especies bacterianas, debido a la naturaleza qumica de su pared celular, tienen la capacidad de retener el cristal violeta an despus del tratamiento con un decolorante orgnico (Gram positivo). Otras especies no retienen el cristal violeta cuando son tratadas con decolorante quiz debido al alto contenido lipdico de su pared celular, estas bacterias decoloradas captan la contratincin con safranina y se denominan Gram negativas. Es la fuente de informacin preliminar que gua tanto al mdico como a la bacteriloga en el tratamiento inicial contra los posibles grmenes a aislar de los diferentes fluidos y secreciones de donde se toma, es el paso inicial de todo cultivo y su correcta tcnica, lectura e interpretacin son de vital importancia. 5.5.2.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra La toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.21. 5.5.2.3 Mtodo 5.5.2.3.1 Hacer un frotis delgado del material a estudiar y dejar secar al aire. 5.5.2.3.2 Fijar el material en el portaobjetos pasndolo 3 o 4 veces a travs de la llama de un mechero. 5.5.2.3.3 Dejar enfriar. 5.5.2.3.4 Colocar sobre rejilla de coloracin y cubrir con cristal violeta. 5.5.2.3.5 Despus de un minuto lavar con agua. 5.5.2.3.6 Cubrir con solucin de yodo de Gram durante un minuto.

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5.5.2.3.7 Lavar con agua. 5.5.2.3.8 Cubrir con alcohol acetona hasta que no desprenda mas color violeta (20 segundos aproximadamente) 5.5.2.3.9 Lavar con agua. 5.5.2.3.10 Cubrir con safranina por un minuto. 5.5.2.3.11 Lavar con agua. 5.5.2.3.12 Dejar secar en posicin vertical. 5.5.3 Coloracin de Ziehl Neelsen 5.5.3.1 Fundamento El mecanismo de cido alcohol resistencia es un mecanismo doble que requiere la penetracin de la fucsina al citoplasma bacilar, as como la interaccin qumica con los cidos miclicos y los pptido-glicolpidos presentes en la pared celular de la micobacterias esta reaccin impide la salida de la fucsina atrapada en el citoplasma cuando es expuesta a la accin del alcohol cido, asegurando as la brillantez y el color rojo intenso de los grmenes; el papel del mordiente (solucin fenolada) es definitivo, porque aumenta la penetracin de la fucsina y su unin con los pptidoglicolpidos bacilares hacindola ms liposoluble y menos hidrosoluble. La coloracin de Zielh Neelsen para bacterias cido alcohol resistentes es de vital importancia para el diagnstico primario de enfermedades producidas por grmenes tales como las micobacterias, nocardias o actinomyces. El significado clnico de las distintas especies micobacterianas depende en gran parte del estado del sistema inmunitario del husped. El Mycobacterium tuberculosis es el causante mas comn de la tuberculosis pulmonar y continua siendo la especie micobacteriana ms virulenta 5.5.3.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Cualquier componente orgnico proveniente del lugar donde se sospecha mycobacteriosis. 5.5.3.3 Reactivos Fucsina fenicada Alcohol cido Azul de metileno 5.5.3.4 Mtodo 5.5.3.4.1 Hacer un frotis delgado del material a estudiar y fijarlo con calor. 5.5.3.4.2 Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada y calentar el portaobjetos hasta que salgan vapores, por 10 minutos. No dejar secar. 5.5.3.4.3 5.5.3.4.5 5.5.3.4.6 Enjuague con agua. Enjuagar. Cubrir con azul de metileno entre uno y dos minutos. Enjuagar, escurrir y secar verticalmente al aire.

5.5.3.4.4 Decolorar con alcohol cido hasta que no salga ms colorante.

5.5.3.4.7

5.5.4 Examen Directo para Hongos KOH 5.5.4.1 Fundamento El hidrxido de potasio (KOH) en concentraciones relativamente bajas degrada todo el material orgnico presente en la muestra resaltando as la presencia de los hongos que son resistentes a la accin del KOH. Favorecer la visualizacin de las estructuras micticas provenientes de muestras de pacientes, para ayudar a la identificacin preliminar de los hongos. 5.5.4.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra

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Usualmente se utiliza un frotis o fragmento de piel, cabello o uas pero la tcnica de examen directo puede ampliarse hasta incluir todas las muestras clnicas excepto la sangre. 5.5.4.3 Reactivos KOH al 10% 5.5.4.4 Mtodo 5.5.4.4.1 Sobre un portaobjetos mezclar una pequea cantidad del espcimen y una gota de KOH 10%, se coloca cubreobjetos, puede calentarse suavemente el portaobjetos sin dejar hervir la preparacin. 5.5.4.4.2 Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X, bajar el condensador. 5.6 Procedimientos en la Seccin de Hormonas, Marcadores tumorales, Marcadores infecciosos.

5.6.1 TSH (Hormona Tiroestimulante) 5.6.1.1 Fundamento La TSH es una hormona que se produce en la Hipfisis anterior y esta sujeta al ritmo circadiano de secrecin. La determinacin sirve como test inicial en el diagnstico tiroideo, pequeas variaciones en la concentracin de la fraccin libre de las hormonas tiroideas implican importante alteracin del nivel de TSH, esto la hace un parmetro altamente sensible y especfico para la Interpretacin de la funcin tiroidea. La hormona tirotropa u hormona tiroideoestimulante (TSH) es una glicoprotena con un peso molecular de 28.000 a 30.000 Daltons. Est constituida por 2 subunidades peptdicas alfa y beta ligadas en forma no covalente. La subunidad alfa, est compuesta por 92 aminocidos, es similar a la FSH, LH y hCG. La subunidad beta, compuesta por 112 aminocidos, determina la especificidad biolgica e inmunolgica de la hormona. A estas subunidades peptdicas estn ligados los residuos glucnicos. La produccin de la TSH corre a cargo de las clulas tirotropas de la hipfisis anterior. Su secrecin en la circulacin sangunea sigue un ritmo circadiano cuyo mximo se alcanza entre la 1h y las 2 h de la madrugada. La TSH constituye el principal factor de estimulacin de la glndula tiroidea que determina la produccin de las hormonas tiroideas T3 y T4. De regreso estas hormonas tiroideas ejercen un retrocontrol sobre la ante-hipfisis que frena la secrecin de TSH. La secrecin de TSH est adems bajo el control del sistema nervioso central mediante un neuropptido hipotalmico, la TRH y de neuromediadores como la somatostatina o la dopamina. En el caso de hipertiroidismo (enfermedad de Basedow, adenomas tiroideos, tiroiditis inflamatorias), la concentracin de TSH se ve enormemente disminuida, siendo incluso indetectable. En raras formas de hipertiroidismo de origen alto, al no tener efecto el retrocontrol negativo de las hormonas tiroideas, la tasa de TSH no se ve disminuida. En los hipotiroidismos primitivos, la concentracin de TSH es siempre muy netamente superior a la normal, y va acompaada de una disminucin de los valores de hormonas tiroideas. En los hipotiroidismos parciales o frustrados, un aumento moderado de la TSH permite mantener una produccin tiroidea normal, pudiendo mantenerse este estado durante muchos aos sin trastorno clnico evidente. 5.6.1.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Suero o Plasma con Heparina, con EDTA o con Citrato Sdico, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7.

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5.6.1.3 Mtodo 5.6.1.3.1 Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 5.6.1.3.2 Utilizar un cartucho TSH y un cono para cada muestra, control o calibrador a probar. Comprobar que se cierra correctamente la bolsa de conos despus de cada uso. 5.6.1.3.3 Teclear o seleccionar TSH en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador identificado obligatoriamente como S1, debe ser utilizado en doble. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 5.6.1.3.4 Homogenizar el calibrador, el control y las muestras con un agitador tipo vortex. 5.6.1.3.5 distribuir 200 ul de calibrador, de control o de muestra en la cubeta de muestra de los cartuchos. 5.6.1.3.6 Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 5.6.1.3.7 Iniciar el anlisis (ver el manual del usuario).Todas las etapas son gestionadas automticamente por el instrumento. La duracin de la prueba es de unos 40 minutos. 5.6.1.3.8 Al finalizar el anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 5.6.1.3.9 Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un recipiente apropiado.

5.6.2 T 4 (Tiroxina) 5.6.2.1 Fundamento Es le principal producto de secrecin del tiroides y forma parte importante del mecanismo de regulacin entre Hipotlamo, Hipfisis anterior y Tiroides. La mayor parte de la tiroxina en suero esta ligada a las Protenas, por lo tanto al evaluarla se debe tener en cuenta el estado de las protenas ligadoras. La determinacin de T4 se indica en la deteccin de Hipertiroidismo primario y secundario. La tiroxina (T4) es una hormona que proviene de la secrecin tiroidea, ligada en gran partea protenas portadoras (99.9%), principalmente a la TBG (globulina fijadora de tiroxina). Se considera la fraccin libre como parte activa de la hormona. La prueba VIDAS T4 constituye una ayuda en la exploracin de la funcin del tiroides, caracterizada por la disminucin de la concentracin en caso de hipotiroidismo y un aumento de la concentracin cuando se trata de un hipotiroidismo. La dependencia de la T4 frente a la concentracin de las protenas portadoras requiere la comprobacin de la capacidad de unin de las hormonas tiroideas. Esta prueba debe asociarse igualmente a otros anlisis del equilibrio tiroideo tales como la TSH y T3, as como el examen clnico del paciente. La prueba VIDAS T4 constituye una ayuda para el diagnstico de los desrdenes tiroideos. 5.6.2.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Suero o Plasma con Heparina, EDTA o Citrato sdico, la toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.7. 5.6.2.3 Mtodo 5.6.2.3.1 Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 5.6.2.3.2 Utilizar un cartucho T4 y un cono para cada muestra, control o calibrador a probar. Comprobar que se cierra correctamente la bolsa de conos despus de cada uso.

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5.6.2.3.3 Teclear o seleccionar T4 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador identificado obligatoriamente como S1, debe ser utilizado en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 5.6.2.3.4 Homogenizar el calibrador, el control y las muestras con un agitador tipo vortex. 5.6.2.3.5 Distribuir 200 ul de calibrador, de control o de muestra en la cubeta de muestra de los cartuchos. 5.6.2.3.6 Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 5.6.2.3.7 Iniciar el anlisis (ver el manual del usuario).Todas las etapas son gestionadas automticamente por el instrumento. La duracin de la prueba es de unos 40 minutos. 5.6.2.3.8 Al finalizar el anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 5.6.2.3.9 Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un recipiente apropiado.

5.6.3

T 3 (Triyodotironina)

5.6.3.1 Fundamento La T3 es la principal hormona responsable de los efectos de las hormonas tiroideas sobre los distintos rganos diana. La mayor parte de esta hormona se forma en el Hgado por la desyodacion de la T4. Su determinacin sirve para el diagnstico de la Toxicosis, reconocimiento precoz del hipertiroidismo. La triyodotironina (T3) es una hormona que proviene en parte de la secrecin tiroidea (20%) y en su mayora de la desyodacin perifrica de la T4 en T3 (80%). Dado que la T3 es fisiolgicamente mucho ms activa que la T4, contribuye de forma importante al mantenimiento del eutiroidismo. La T3 circula en forma libre (0.3%) o ligada a protenas portadoras (>99.7%) tales como la TBG (globulina ligadora de tiroxina), la albmina o la pre albmina. La forma libre es la fraccin fisiolgicamente activa y parece tener mayor influencia sobre el control metablico. La prueba de T3 debe realizarse conjuntamente con otros anlisis, tales como la prueba de TSH y de la T4, as como un examen clnico del paciente. 5.6.3.2 Obtencin y Preparacin de la Muestra Suero o Plasma con Heparina, EDTA o Citrato sdico, la toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.7. 5.6.3.3 Mtodo 5.6.3.3.1 Sacar nicamente los reactivos necesarios, dejarlos 30 minutos a temperatura ambiente antes de usarlos. 5.6.3.3.2 Utilizar un cartucho T4 y un cono para cada muestra, control o calibrador a probar. Comprobar que se cierra correctamente la bolsa de conos despus de cada uso. 5.6.3.3.3 Teclear o seleccionar T4 en el instrumento para introducir el cdigo de la prueba. El calibrador identificado obligatoriamente como S1, debe ser utilizado en triple. Si debe probarse el control, ser identificado como C1. 5.6.3.3.4 Homogenizar el calibrador, el control y las muestras con un agitador tipo vortex. 5.6.3.3.5 distribuir 200 ul de calibrador, de control o de muestra en la cubeta de muestra de los cartuchos. 5.6.3.3.6 Colocar en el instrumento los conos y los cartuchos. Comprobar la correcta concordancia (colores y letras) entre el cono y el cartucho. 5.6.3.3.7 Iniciar el anlisis (ver el manual del usuario).Todas las etapas son gestionadas automticamente por el instrumento. La duracin de la prueba es de unos 40 minutos.

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5.6.3.3.8 Al finalizar el anlisis, retirar los conos y los cartuchos del instrumento. 5.6.3.3.9 Eliminar los conos y los cartuchos utilizados en un recipiente apropiado. 5.7.1 Alanin Aminotransferasa (ALT- GPT) 5.7.1.1 Fundamento La alanino aminotransferasa presenta una elevada actividad en hgado, msculo esqueltico, corazn y rin. La ALT srica aumenta rpidamente en la necrosis celular heptica, la cirrosis heptica, los tumores hepticos, la ictericia obstructiva, el sndrome de Reye, el traumatismo generalizado del msculo esqueltico, la miositis, la miocarditis y el infarto de miocardio. La alanina Aminotransferasa cataliza la transferencia del grupo amino de la alanina al cetoglutarato con la formacin de glutamato y piruvato. Este ltimo es reducido a piruvato por la lactato deshidrogenasa (LDH) en presencia de nicotinamido adenin dinucletido reducido (NADH). La reaccin se controla cinticamente a 340 nm a travs de la disminucin de la absorbancia resultante de la oxidacin del NADH a NAD+, proporcional a la actividad de ALT en la muestra. 5.7.1.2 Obtencin de la muestra Suero o plasma con heparina o EDTA, la toma de la muestra se describe en la gua GLCR-GS-01 numeral 6.9.7.

5.7.1.3

Preparacin del reactivo de trabajo: Mezclar 4 ml de R1 + 1 ml R2. Estable durante 4 semanas a 2- 8 C. Resguardar de la luz. Desechar el reactivo cuando presente una absorbancia inferior a 1200 a 340 nm frente a agua destilada o no recupere los valores declarados de las sueros control. 5.7.1.4 Mtodo 5.7.1.4.1 Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reaccin. 5.7.1.4.2 Ajustar a 0 el fotmetro con agua destilada. 5.7.1.4.3 Pipetear en una cubeta Temperatura de 37 30 Reaccin C C Reactivo de 1.0 1.0 Trabajo ml ml Muestra o Control 50 100 ul ul

5.7.1.4.4

Mezclar suavemente por inversin, insertar la cubeta en el compartimiento termostatado del instrumento y poner el cronmetro en marcha. 5.7.1.4.5 Incubar durante 1 minuto y anotar la absorbancia inicial. 5.7.1.4.6 Repetir las lecturas exactamente a los 1, 2 y 3 minutos. 5.7.1.4.7 Calcular las diferencias entre absorbancias. 5.7.1.4.8 Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio de promedio en absorbancia por minuto. 5.7.2 Aspartato Aminotransferasa (AST-TGO) 5.7.2.1 Fundamento La aspartato aminotransferasa presenta una elevada actividad en el corazn, el msculo esqueltico y el hgado. Los aumentos de la actividad de la AST en suero se observan habitualmente despus de un infarto de miocardio, embolia pulmonar, traumatismo del msculo esqueltico, cirrosis alcohlica, hepatitis vrica y hepatitis inducida por frmacos.

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La Aspartato Aminotransferasa cataliza la transferencia del grupo amino del Aspartato al cetoglutarato con la formacin de glutamato y oxaloacetato. Este ltimo es reducido a malato por la malato deshidrogenasa (MDH) en presencia de nicotinamido adenin dinucletido reducido (NADH). La reaccin se controla cinticamente a travs de la disminucin de la absorbancia resultante de la oxidacin del NADH a NAD+, proporcional a la actividad AST en la muestra. 5.7.2.2 Obtencin y preparacin de la muestra Suero o plasma con heparina, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7.

5.7.2.3

Preparacin del reactivo de trabajo: Mezclar 4 ml de R1 + 1 ml R2. Estable durante 4 semanas a 2- 8 C. Resguardar de la luz. Desechar el reactivo cuando presente una absorbancia inferior a 1200 a 340 nm frente a agua destilada o no recupere los valores declarados de los sueros control. 5.7.2.4 Mtodo 5.7.2.4.1 Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reaccin. 5.7.2.4.2 Ajustar a 0 el fotmetro con agua destilada. 5.7.2.4.3 Pipetear en una cubeta Temperatura de 37 30 Reaccin C C Reactivo de 1.0 1.0 Trabajo ml ml Muestra o Control 50 100 ul ul 5.7.2.4.4 Mezclar suavemente por inversin, insertar la cubeta en el compartimiento termostatado del instrumento y poner el cronmetro en marcha. 5.7.2.4.5 Incubar durante 1 minuto y anotar la absorbancia inicial. 5.7.2.4.6 Repetir las lecturas exactamente a los 1, 2 y 3 minutos. 5.7.2.4.7 Calcular las diferencias entre absorbancias. 5.7.2.4.8 Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio de promedio en absorbancia por minuto.

5.7.3 Citologa vaginal

5.7.3.1 5.7.3.2 Fundamento Muestra remitida

Obtencin y preparacin de la muestra La toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 5.2.46. 5.7.3.3 Mtodo Muestra no procesada en S&C LABORATORIOS.

5.7.4 VDRL en suero (serologa) 5.7.4.1. Fundamento

La sfilis es una enfermedad venrea causada por el Treponema Pallidum, que invade las mucosas intactas o la piel en reas de abrasiones. El contacto sexual es la forma ms comn de transmisin. Esta enfermedad con el paso del tiempo y sin

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un tratamiento adecuado tiende a tener complicaciones graves como sfilis cardiovascular, neurosfilis y sfilis congnita. El diagnostico de la enfermedad sufre la carencia de un mtodo para cultivar el microorganismo en medios de laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la enfermedad en los que no se observan lesiones epidrmicas. Sin embargo desde el comienzo de la infeccin aparecen en el suero del individuo infectado ciertas sustancias llamadas reaginas, que reaccionan con antgenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a los signos clnicos son por lo tanto los procedimientos ms rpidos y tiles disponibles para diagnstico de sfilis.

5.7.4.2 Obtencin y preparacin de la muestra.

Suero, plasma o liquido cefalorraqudeo (LCR), la toma de las muestras se describen en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7 en al caso de las muestras en suero, y numeral 6.9.16 para la muestras en LCR. 5.7.4.3 Mtodo Las reaginas, presentes en individuos infectados por T. Pallidium se detectan en suero por la reaccin con un antgeno cardiolipnico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene reagina, sta se unir al antgeno produciendo una floculacin visible en microscopio. 5.7.4.4 Procedimiento Tanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes de realizar la prueba. 5.7.4.4.1 Prueba cualitativa en suero o plasma En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar: Muestra 50 Ul Con gotero provisto colocar: Antgeno 1 gota 5.7.4.4.2 Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. Observar inmediatamente en microscopio con poco aumento (60 a 100 x).

5.7.4.4.3 Prueba semicuantitativa en suero o plasma Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solucin fisiolgica y realizar para dilucin la prueba como se describi anteriormente. 5.7.4.4.4 Prueba cualitativa para LCR 5.7.4.4.5 Diluir el antgeno 1:2 con solucin de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro de las 2 horas de preparacin. 5.7.4.4.6 En cada sector delimitado de la placa colocar: Muestra 50 Ul Con aguja calibre 6 agregar: Antgeno diluido --- 1 gota (10 Ul) 5.7.4.4.7 Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante 8 minutos a 180 rpm. Leer los resultados en microscopio con poco aumento (60 a 100 x).

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5.7.5 HEMOGLOBINA GLICOSILADA 5.7.5.1 Fundamento La resina de cambio inico, cargada negativamente, exhibe una afinidad por molculas con carga positiva. En fuerza inica y pH seleccionados, la hemoglobina glucosada (Hb-G) tiene carga positiva menor que la hemoglobina A y se empalma ms dbilmente a la resina. La aplicacin del tampn Hb rpida promueve la elucin de la hemoglobina glucosada, quedando las otras hemoglobinas retenidas en la resina. La medida espectrofotomtrica del eluato (HB-G) y de la hemoglobina total permite el clculo del porcentaje de Hb-G en la muestra. El sistema hemoglobina glicada Labtest utiliza una tcnica de microcromatrografa para separacin rpida y segura de la hemoglobina G, una vez que elproceso fue optimizado con la finalidad de obtenerse los resultados en un tiempo significativamente mas corto, obtenindose una elucin de la Hb- G en un tiempo promedio de 15 minutos. La modificacin introducida agreg una significativa robustez al sistema, haciendo que las imprecisiones intra ensayo y total sean menores que 2.0% y 5.0 %, respectivamente atendiendo as a las recomendaciones de desempeo necesarias para que los resultados puedan tener utilidad mdica. Como consecuencia de la fraccin lbil pre A1C (aldimina) produce resultados falsamente elevados dificultando la interpretacin clnica de los resultados, esa fraccin es eliminada por los iones borato presentes en el reactivo hemolizante. 5.7.5.2 Obtencin y preparacin de la muestra. Sangre total anticoagulada, la toma de la muestra se describe en la gua de manejo para toma de muestras numeral 6.9.7

Mtodo 5.7.5.3.1 Preparacin del hemolizado En un tubo 12 x 75, aadir 0.4 ml de hemolizante y 0.1 ml de la muestra. Agitar con fuerza por 20 segundos y esperar 5 minutos. Si la hemlisis ha sido incompleta (el lquido en el tubo se muestra turbio) centrifugar y usar el sobrenadante. Antes de empezar la cromatografa, asegurarse que el hemolizado, el tampn y las columna estn a la misma temperatura que el ambiente. Nunca realizar la cromatografa cuando el hemolizado, tampn y la columna estn a temperaturas distintas del ambiente en el que se realizar la cromatografa. Preparacin de la columna La presencia de burbujas de aire en el filtro o en la resina interfiere en el drenaje del tampn, aumentando el tiempo de elucin de la hemoglobina glucosada. Quitar la tapa superior de la columna, introducir el bastn haciendo movimientos giratorios descendientes y ascendentes para resuspender la resina. Remover inmediatamente la tapa inferior, colocar la columna en un tubo de ensayo (lo suficientemente para que la punta de la columna no toque el lquido en el tubo) y esperar a que todo el lquido penetre en la resina. A partir de entonces, la columna estar lista para uso y la cromatografa deber empezarse inmediatamente. Jams efectuar la cromatografa a temperatura inferior a 16 C o superior a 30 C. Medir la temperatura del lquido que dren de la columna para corregir el resultado. 5.7.5.3.2 Cromatografa Aadir 0.05 ml del hemolizado sobre la resina de modo a impedir su resuspensin y evitando la formacin de burbujas de aire. Esperar que todo el hemolizado penetre en la resina. Transferir la columna para un tubo de ensayo limpio y seco (alto suficiente para que la punta de la columna no toque el lquido en el tubo), maracdo como # 1 y aadir lentamente, con la punta de la pipeta tocando la pared de la columna 3.5 ml de tampn Hb rpida. La elucin de la Hb G se completa cuando todo el tampn penetra en la resina. Deshacerse de la columna. 5.7.5.3.3 Colorimetra

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Homogenizar el contenido del tubo # 1 y usarlo para la colorimetra sin cualquier tratamiento adicional. Para un tubo limpio y seco, marcado como # 2 pipetear 7.0 ml de agua destilada, aadir 0.02 ml del hemolizado y mezclar.

5.7.5.3.2 Agitar bien y dejar los tubos durante 1 minuto a temperatura ambiente. 5.7.5.3.3. Leer la Absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 630 nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 30 minutos.

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