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Acuaporinas Los Canales de Agua Celulares

Acuaporinas Los Canales de Agua Celulares

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Published by: Veronica Calabazita Urquizo on Nov 07, 2011
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Acuaporinas:los canalesde agua celulares
Las acuaporinas regulan el paso del agua a través de la membrana celular.Forman una familia de proteínas muy diversa; se hallan presentes en todos los seres vivos.Abundan sobre todo en plantas y en el sistema renal de animales
Miriam Echevarría y Rafael Zardoya
E
l agua, el compuesto más abundante de nuestrocuerpo, es esencial para la vida. Todos losiones, lípidos, azúcares, proteínas y otras ma-cromoléculas que forman parte de las célulasy su entorno se encuentran disueltos en medioacuoso. Para realizar las funciones que hacenposible la vida, las células deben incorporar nutrientes,hormonas, iones y gases. Y deben también expulsar sus-tancias de desecho.Ese intercambio de materia con el entorno se reali-za a través de la membrana. Opera un mecanismo dedifusión pasiva o se recurre a proteínas transportadorasespecíficas. La circulación de iones y otras moléculasprovoca una distribución desigual de estas sustancias aun lado y otro de la membrana celular.El transporte genera un flujo de agua a través de lamembrana. La entrada y salida de agua cambia el vo-lumen de la célula, amén de modificar la composicióndel medio intracelular y extracelular. Entender cómoel agua atraviesa las membranas celulares en nuestrocuerpo ha constituido una de las cuestiones de mayorinterés en biología.
Los primeros modelos teóricos
Ya en 1895, Charles Overton publicó un extenso estudiosobre las propiedades osmóticas de las células, vegetalesy animales; analizaba allí el efecto ejercido por más de500 compuestos químicos en el flujo del agua a tra-vés de la membrana celular. Desde entonces, y durantemuchos años, se creyó que el agua podía atravesar lamembrana celular por difusión pasiva entre los lípidosque constituyen dicha estructura.Pero la difusión pasiva no permitía explicar la per-meabilidad al agua que muestran los glóbulos rojos ylas células del túbulo renal; aquí, el flujo de agua através de la membrana en presencia de un gradiente deconcentración era superior al flujo en ausencia de dichogradiente. Además, la energía disipada por la interacciónentre agua y membrana se acercaba a la del movimientodel agua en solución libre. Se descubrió también queel paso del agua a través de estas membranas podíabloquearse mediante fármacos derivados de compuestosmercuriales.Todas esas observaciones, sumadas a las realizadasen membranas artificiales, permitieron comparar la per-
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meabilidad al agua de membranaslipídicas artificiales con la de mem-branas biológicas. De la comparaciónen cuestión se dedujo la existenciade proteínas especializadas en la for-mación de poros acuosos.
Descubrimientode las acuaporinas
El descubrimiento del primer canalde agua en la membrana celular, laacuaporina-1 (AQP1), el estudio de sudistribución en los tejidos y la inves-tigación de sus propiedades estructu-rales y funcionales le valieron a PeterAgre el premio Nobel de química de2003. Agre y su equipo, de la Uni-versidad Johns Hopkins, estudiabanen 1988 las proteínas de la membranade los eritrocitos. Durante sus traba- jos de purificación de la proteína de32 kilodalton que determina el gruposanguíneo Rh, encontraron un poli-péptido de peso molecular inferior(28 kilodalton) que copurificaba consu proteína de interés. Pensaron quecorrespondía a un subproducto de lahidrólisis de la proteína Rh. Pero elanálisis estructural de la molécula de28 kilodalton, abundante en glóbulosrojos y en células del túbulo proxi-mal del riñón, reveló que se tratabade una nueva proteína integral demembrana. Sin relación alguna conla proteína Rh.Hasta 1992 no descifraron la fun-ción de la proteína. Denominada enun comienzo CHIP28, abreviaciónde proteína integral de 28 kilodaltonformadora de canales, recibiría mástarde el nombre de AQP1.En sus trabajos hallaron que losovocitos de la rana
 Xenopus laevis
 inyectados con cantidades exiguas deARN mensajero de AQP1 desarro-llaban una permeabilidad al aguasuperior a la de un ovocito controlsin inyectar o inyectado con agua.Se descubrió también que la per-meabilidad al agua dependiente deAQP1 se inhibía mediante cloruro demercurio y que tal efecto se revertíacon agentes reductores.El comportamiento reseñadocorrespondía al esperado para unflujo de agua mediado por canales.Se percataron entonces de que habíandescubierto, por fin, la proteína delcanal de agua. La presencia de AQP1 justificaba la elevada permeabilidadal agua de la membrana del hematíey del túbulo proximal renal. Pero,¿cómo explicar la reabsorción deagua dependiente de la hormona va-sopresina en el segmento más distalde la nefrona, el túbulo colector yen otros tejidos que no poseen estaproteína? La identificación molecularde AQP1 fue el detonante de la bús-
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queda que condujo al descubrimientode las trece acuaporinas que hoy seconocen en humanos.Lo primero que llamó la atención,al comparar la secuencia de AQP1con las almacenadas en el banco degenes, fue su estrecha semejanza conmiembros de una familia de proteínasintegrales de membrana (PIM); entreellas, la proteína Big Brain de
 Dro-sophila
, la Nodulina26 de la semilladel género
Glycine
, el transportadorde glicerol GLpF de
 Escherichia coli
 y PIM, una proteína de 26 kilodaltonque abunda en el cristalino bovino,que da nombre a la familia. AQP1comparte con ellas varios aminoáci-dos en determinadas posiciones dela secuencia: todos los miembros dela familia PIM mostraban el tripleteasparragina-prolina-alanina (NPA)mentario. El ADNc se utilizó comomolde en una reacción en cadena de lapolimerasa, junto con cebadores quereconocerían y se hibridarían a lasregiones NPA de cualquier miembrode la familia PIM presente en la mues-tra de ARN. El grupo de Agre clonólas proteínas AQP1, AQP4, AQP5 yAQP6; el de Sei Sasaki, de la Uni-versidad de Medicina y Odontologíade Tokio, identificó las secuencias deAQP2, AQP7, AQP8, AQP9, AQP10,AQP11 y AQP12. En la identificaciónde AQP3 intervino uno de los autores(Miriam Echevarría).
Un reloj de arena
El tamaño de las acuaporinas sueleoscilar entre 250 y 300 aminoácidos.Muy hidrofóbicas, se organizan enseis segmentos de estructura
α
-héliceque atraviesan la membrana de ladoa lado, unidos por cinco lazos conec-tores. Dos de los lazos (uno extrace-lular y otro intracelular) se plieganhacia la membrana y se aproximanpara formar el poro. La estructuraresultante encierra una zona centralestrecha que se ensancha abriéndosehacia ambos lados de la membrana.Este particular plegamiento, en formade reloj de arena, pone en contactolos tripletes NPA para formar el sitiomás estrecho del poro. Aunque cadaacuaporina constituye por sí sola uncanal, en la membrana celular estasproteínas se ensamblan en gruposde cuatro.repetido dos veces, además de otrosaminoácidos individuales a lo largode la secuencia, muy conservados.AQP1 consta de dos grandes domi-nios, imagen especular uno de otro,con un triplete NPA presente en cadamitad, el primero en un lazo intrace-lular y el segundo en uno extracelu-lar. Se procedió luego a la clonaciónsucesiva de otras acuaporinas que,en conjunto, forman la familia deproteínas integrales de membrana res-ponsables del transporte de agua. Senombraron desde AQP2 a AQP12; laproteína PIM se denominó AQP0.Se siguió el mismo protocolo declonación para todas ellas. De los teji-dos donde se sospechaba la existenciade un nuevo canal de agua se extrajoARN. A partir de éste se obtuvo, portranscripción inversa, el ADN comple-
   C   O   N   T   R   O   L   A   Q   P   1
TIEMPO (minutos)
0,51,52,53,5
a
HgCl
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1. EL PRIMER MODELO que describía la cir-culación de agua a través de la membranacelular data de 1895. Según éste, el aguase escurría por difusión pasiva entre loslípidos (
amarillo
) que constituyen la membra-na (
a
). El estudio de la influencia del gra-diente, la energía disipada por la interaccióndel agua con la membrana, el bloqueo decompuestos mercuriales y la comparaciónde membranas puramente lipídicas conmembranas biológicas llevó a proponer laexistencia de proteínas (
 rojo
) especializadasen la formación de poros hídricos (
 b
).
2. OVOCITOS DE LA RANA
 Xenopus laevis
 inyectados con cantidades reducidas deARN mensajero de acuaporina-1 (0,1-10ng).Muestran una permeabilidad al agua supe-rior a la de un ovocito control no inyectadoo inyectado con agua.
   M   I   R   I   A   M    E   C   H   E   V   A   R   R   I   A   Y   R   A   F   A   E   L   Z   A   R   D   O   Y   A

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