MANUAL DE MICROBIOLOGA

PRACTICA 8 Medios de cultivo y tcnicas de siembra Introduccin Las bacterias deben ser cultivadas en los medios correspondientes de laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificacin y determinar sus actividades metablicas. Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay gran diversidad microbiana, as como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos. Los cultivos puros est formados por un solo tipo de microorganismo; y son indispensables para conocer las caractersticas morfolgicas, propiedades de tincin, actividad bioqumica, patogenicidad, sensibilidad a antibiticos e identificacin de las especies microbianas. Objetivos Conocer las diferentes tcnicas de aislamiento en medios de cultivo slido para la obtencin de cultivos puros de bacterias. Conocer los medios de cultivo de uso general, diferenciales y selectivos.

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Materiales de laboratorio por equipo 2 Mecheros 1 Asa bacteriolgica en punta 1 Asa bacteriolgica en aro 3 tubos de caldo nutritivo 3 Tubo con agar nutritivo 3 Cajas de Petri con agar nutritivo 1 cajas de Petri con agar KTP 1 Cajas de Petri con EMB Actividad de la practica Tcnica de estra cruzada

Material del equipo Cinta adhesiva (masquin) Cerillos 1 Plumn indeleble o lpiz graso Franela Colores Cloro

1. En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en 4 cuadrantes. Tomar una muestra con el asa previamente flameada y fra, inocular la muestra haciendo 4-5 estras simples muy juntas de lado a lado sobre el primer cuadrante. 2. Flamear el asa de inoculacin y hacer girara la caja Petri un cuarto de vuelta. Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la superficie del medio lejos de la zona de estras recin hechas. 3. Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estras y hacer un segundo grupo de estras en el segundo cuadrante, esta vez mas separadas y en una sola direccin. 4. Repetir el paso 2 y 3 para el tercer cuadrante (enfriar en el mismo lugar que el anterior) y para el cuarto cuadrante no se flamear el asa, las estras sern ms separadas o abiertas.

Siembra en tubos 1. Sembrar en los tubos de agar nutritivo (inclinados), con el asa previamente esterilizada, realizando una pequea estra desde abajo hasta el pico,

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finalizando con una picadura en la base y en los tubos de agar nutritivo en forma recta por picadura. 2. Incubar los tubos a 35 C durante 24 hrs. 3. Los tubos con caldo nutritivo se dejaran en agitacin Siembra de cajas de Petri con medios diferenciales y selectivos. 1. Dividir en tres partes, una caja de Petri con EMB y agar KTP, sembrar por estra simple. 2. Incubar a 35 C en forma invertida durante 24 hrs.

Resultados Recopilar la informacin de la caracterizacin colonial de cada cepa en el cuadro de resultados. Bacteria1 Bacteria 2 Sin inocular (3)

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Aislamiento estra (agar nutritivo)

por cruzada

Forma: Color Tamao(mm) Borde Superficie Aspecto Elevacin Luz transmitida Luz reflejada Consistencia Medio EMB Medio KTP

Siembra en medios selectivos diferenciales y 2 1 3 2 1 3

Bacteria 1 Forma Color Tamao Tamao(mm) Borde Superficie Aspecto Elevacin Luz transmitida

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Luz reflejada Consistencia Bacteria 2 Forma Color Tamao Tamao(mm) Borde Superficie Aspecto Elevacin Luz transmitida Luz reflejada Consistencia

Nota: la descripcin colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios. Forma: circular, irregular, filamentosa o rizoide Borde: entero, lobulado, aserrado Superficie: lisa o rugosa Aspecto: hmeda, seca, butirosa Elevacin: convexa, de agar nutritivo: Tubos inclinados plana, hundida Luz transmitida: translcida, opaca Luz reflejada: brillante, mate Consistencia: dura, blanda, mucoide

Bacteria1

Bacteria 2

Sin inocular

Crecimiento: arborescente, filiforme, rizoide, disperso, puntiforme. Color Bacteria1 Bacteria 2 Sin inocular Tubos de caldo nutritivo

Crecimiento: superficie como pelcula, como sedimento, turbidez en todo el

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tubo. Color Bacteria1 Tubos rectos de agar nutritivo Bacteria 2 Sin inocular

Crecimiento: en forma de pelcula superficial, a lo largo de la picadura, solo en el fondo. Color Cuestionario 1. Que es el agar y de donde se obtiene?, cules son los

nutrimentos que proporciona a los microorganismos?

2.

Cul es la composicin qumica de los medios EMB, KTP, MM?

3.

cules son los componentes o propiedades responsables de su

funcin como medios selectivos o diferenciales?

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4.

Por qu el agar nutritivo es un medio de uso general para el

cultivo de bacteria? Proponga algunas sustancias que se le agregaran para hacerlo selectivo para bacterias Gram negativas?

Fichas catologrficas del material bibliogrfico sugerido que se encuentran en la biblioteca de la UMAR Ficha No. 2768 CLASIFICACION 571. 638293 M507 ISBN: Ttulo: Manual de Medios de Cultivos / Publicacin patrocinada por MERCK Autor: Editorial: Alemania: E. MERCK, 1990 Descripcin: 355 p. TEMAS: 1. MICROBIOLOGIA - CULTIVOS - MANUALES \ 2. MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL - INDUSTRIA QUIMICO FARMACEUTICA - INVESTIGACION Y DESARROLLO \ 3. MEDIOS DE CULTIVO GRANULADOS - PREPARACION CONSERVACION Notas: Incluye referencias bibliogrficas e ndice Ficha No. 1416 CLASIFICACION 616.014 M507p ISBN: 968-7157-10-0 Ttulo: Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica / Jean F. Mac Faddin, Irma Lorenzo trad. Autor: Mac Faddin, Jean F. Editorial: Mxico : Mdica Panamricana, 1990 Descripcin: 301 p. TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - LABORATORIO, REACTIVOS DE - VIRUS \ 2. MICROORGANISMOS - OBSERVACION - MANUAL \ 3. BACTERIAS IDENTIFICACION - LABORATORIO

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Notas: Fotocopia de original