TEMARIO

2 Mtodos y tecnicas microbiologicas basicas 2.1 Aislamiento y seleccion de microorganismos 2.1.1 Reservorio de microorganismos 2.1.1.1 Agua, suelo y aire 2.1.1.2 Animales y plantas 2.1.1.3 Colecciones 2.1.2 Metodos y tecnicas de aislamiento y seleccion 2.1.2.1 Estria en placa 2.1.2.2 Vertido en placa 2.1.2.3 Extension en placa con varilla de vidrio 2.1.2.4 Enriquecimiento poblacional 2.1.2.5 Diluciones en serie 2.1.2.6 Micromanipulacion 2.1.2.7 Otros 2.1.3 Seleccion de microorganismos de interes industrial screening 2.2 Cultivo de microorganismos 2.2.1 Clasificacion de los microorganismos con base a sus requerimientos nutricionales 2.2.2 Tipos de nutrientes 2.2.2.1 Macronutrientes 2.2.2.2 Micronutrientes 2.2.2.3 Factores de crecimiento 2.2.3 Medios de cultivo 2.2.3.1 Evolucion y clasificacion de los medios de cultivo 2.2.3.2 Preparacion de medios de cultivo 2.2.4 Metodos de cultivo 2.2.4.1 Cultivo mixto 2.2.4.2 Cultivo puro o axnico 2.2.4.3 Cultivos en ambiente controlado 2.2.5 Esterilizacion y asepsia 2.2.5.1 Conceptos e importancia 2.2.5.2 Metodos de esterilizacion 2.2.5.3 Muerte termica valores D y Z 2.3 Criterios utilizados en la identificacion de microorganismos 2.3.1 Caracteres morfologicos y fisiologicos 2.3.2 Pruebas bioquimicas 2.3.3 Caracteres quimiotaxonomicos 2.3.4 Antigenos microbianos 2.3.5 Caracteres geneticos 2.4 Preservacion de microorganismos 2.4.1 Objetivos de la preservacion 2.4.2 Concepto y utilidad del cepario 2.4.3 Metodos de mantenimiento y preservacion y su viabilidad

2.1 Aislamiento y Seleccin de Microorganismos

2.1.1 RESERVORIO DE MICROORGANISMOS 2.1.1.1 Agua, Suelo y Aire Diversidad en Ambientes Raramente podemos encontrar a los microorganismos como cultivos puros. Cada especie de cada microorganismo se encuentra en diferentes ambientes donde existen las condiciones necesarias para su crecimiento: agua, suelo y aire, por lo que tambin las tcnicas de aislamiento ser diferente para cada ambiente y para cada especie de microorganismo. Agua El agua es un amiente donde existen diferentes microorganismos y cada uno de ellos realizan diferentes actividades en el ambiente. Tambin, los microorganismos forman parte esencial en la cadena alimenticia, as mismo, tambin son instrumentos en el proceso de reciclaje de elementos presentes en el agua. Llamaremos por agua a los ambientes acuticos a todas las extensiones de agua presentes en el globo terrqueo: mares, ros, arroyos, aguas domsticas, aguas residuales, etc. Distribucin de los Microorganismos Plancton Es una forma de vida flotante y a la deriva en extensiones de agua. Son mviles debido a las caractersticas de flotacin que presentas, algunas de ellas estn cubiertas por gotas de aceite o simplemente por la estructura que presenta. Existen dos grupos principales: fitoplancton, que son todas las algas; y el zooplancton, lo constituyen los protozoos y los animales vivos diminutos. Microorganismos Bentnicos Esta clase de microorganismos habitan en el fondo de una masa grande de agua y sta a su vez es la regin ms rica en microorganismos de un estuario marino puesto que contiene millones de microorganismos por gramo de agua. El Papel de los Microorganismos Algas: Son productores primarios Predominan en el fitoplancton Por fotosntesis cambian energa radiante en compuestos qumicos.

Protozoos: Se alimenta del fitoplancton Evita la luz y hace migraciones diurnas Presentes en la regin del zooplancton

Plancton: Fuente de alimento de peces, ballenas, calamares. Capacidad de producir materia orgnica fertilidad delos ocanos. Crecimiento dependiente de energa radiante, CO2, N2 orgnico y de compuestos de fsforo. Producen color caracterstico de algunos mares.

Suelo El suelo es otro de los ambientes donde abundan los microorganismos. Debido a que en este medio se depositan diversos residuos, ocurren cambios en la naturaleza y ambiente, todos estos cambios, sin embargo, son modulados y controlados por diferentes clases de microorganismos. Bacterias, hongos, algas, protozoos y virus son abundantes y se presentan en cantidades de miles de millones de organismos por gramo de suelo. Debido a la gran diversidad de microorganismos, al realizar un cultivo muestra slo se puede recuperar un pequeo sector de todos los miles de microorganismos presentes. Es por ello que se requiere de muchos estudios para conocer y clasificar a los microorganismos. Esta es una labor extenuante porque, como ya mencionamos, existe un gran nmero de microorganismos por cada gramo de suelo. Los microorganismos principalmente realizan los cambios de materia mediante un proceso bioqumico: cambios qumicos de compuestos orgnicos e inorgnicos y los procesos cclicos del ciclo del nitrgeno y la fijacin del nitrgeno.

Fijacin de Nitrgeno Transformacin del N2 atmosfrico en nitrgeno de un compuesto. Microorganismos no simbiticos: Viven libres en independientes en el suelo Microorganismos simbiticos: Viven en races de algunas plantas Bacterias del gnero Rhizobium Se establecen en las clulas de hospedador (raz) Fijacin Simbitica del Nitrgeno Clulas aumentan tamao formando ndulos Leguminosas, bacterias y ndulos= sistema de fijacin. Bacterias hacen el nitrgeno aprovechable por la planta Bacterias utilizan nutrientes de los tejidos de la planta.

Aire

Este ambiente es distinto de los anteriores. Ac los microorganismos no cuentan con las condiciones necesarias para su crecimiento ni reproduccin sino slo servir como vehculo o medio de transporte que las esparcir por los diferentes ambientes, ya sea en forma de gotitas o acompaadas de polvo. La cantidad de microorganismos presentes en el aire est en funcin de las fuentes de contaminacin y la sobrevivencia de los microorganismos est definida por las condiciones atmosfricas, humedad, luz solar y temperatura. Contenido microbiolgico del Aire Dentro de los edificios Est influido por las corrientes de ventilacin, generalmente los microorganismos son depositados en el aire en pequeas gotitas que fluyen de la nariz y la boca, estas partculas micromtricas quedan en el aire que posteriormente se desplazarn por la presencia de corrientes de aire y las partculas ms grandes quedarn fijadas en el. Tambin depender del nmero de personas dentro del edificio, poco nmero de personas indica que tambin habr poco nmero de microorganismos, a mayor nmero de personar la cantidad de microorganismos tambin aumentar. Atmsfera El contenido microbiano estar definido por partcula de polvo proveniente del suelo, gotas de agua provenientes de masas de agua, agentes contaminantes generados por actividades industriales, agrcolas y domsticas. Las esporas de hongos son las ms abundantes en este ambiente.

2.1.2 Animales y Plantas Animales En los animales tambin podemos encontrar diferentes microorganismos, algunos son dainos para la salud produciendo enfermedades, alguna curables y otras no, pero tambin encontramos a los que estn relacionados o qu la sobrevivencia depende de la relacin microorganismo-animal. Debido a la alimentacin de cada animal, se dice que estos no pueden sobrevivir con preses pequeas en relacin a su tamao: microorganismos. Los microorganismos que habitan en los animales generalmente son hospedadores de los tractos intestinales donde estos microorganismos contribuyen a la digestin y algunos a la produccin de vitaminas y los desechos de los animales forman parte del ciclo del nitrgeno donde nuevamente los microorganismos desempean un papel importante.

No todos los microorganismos son benficos para los animales, algunos tienen interacciones negativas. Existen las depredaciones por hongos y nematodos; las que alteran el habitad: Eutroficacin: agota el oxgeno disuelto y puede provocar la muerte de los peces, alteraciones en los alimentos (bioacumulacin), la produccin de toxinas y las que causan infecciones.

Plantas Las plantas son un habitad microbiano que varia dependiendo de la temperatura de las plantas a lo largo del da como del ao. Los microorganismos no se transfieren fcilmente de planta a planta y stos se hospedan principalmente en las races de la misma donde realizan las funciones simbiticas. Los microorganismos satisfacen sus requerimientos bsicos para su crecimiento y reproduccin; as como los microorganismos se benefician con las plantas, las plantas tambin tienen influencia de los microorganismos: el reciclado y la solubilizacin de los nutrientes minerales; sntesis de vitaminas, aminocidos, auxinas, citoquinas y giberelinas; sntesis de sustancias alelopticas (antagnicas) inhiben crecimiento de otras plantas.

2.1.2 MTODOS Y TCNICAS DE AISLAMIENTO Y SELECCIN Una vez conocidos los habitad de los microorganismos, podemos extraer algunos de ellos para su estudio, al aislamiento de un microorganismos en un medio de cultivo se le conoce como cultivo puro. Los cultivos puros se pueden lograr por diferentes tcnicas de muestreo y aislamiento. Tambin es menester mencionar que se debe tener cuidado en contar con las condiciones adecuadas para el crecimiento de las bacterias: pH, nutrientes requeridos, temperatura para el crecimiento y reproduccin, etc.

2.1.2.1 Estra en Placa. El inculo se siembra sobre la superficie de un medio del tipo del agar nutritivo, en una caja Petri, haciendo estras con una aguja enmangada o con una asa bacteriolgica. El mtodo ms utilizado es por cuadrantes (ya sea por dilucin o conservacin).

2.1.2.2 Vertido en Placa El inculo se deposita en mezclas de agar fundido, posteriormente son vaciadas en cajas petri. Algunas de las colonias crecern en la superficie del medio despus del periodo de incubacin.

2.1.2.3 Extensin en Placa con Varilla de Vidrio Se coloca una gota de inculo en el centro de una caja petri con un medio del tipo agar nutritivo y utilizando un tubo de vidrio doblado o con un asa Diralsky se extiende el inculo sobre la superficie del medio. Puede utilizarse la misma varilla de vidrio para inocular una segunda placa para asegurar una adecuada dispersin de las clulas. En algunas cajas aparecern colonias aisladas.

2.1.2.4 Enriquecimiento Poblacional

Para mejorar la probabilidad de aislar un organismo que posee una caracterstica fisiolgica o bioqumica nica, se puede sembrar por estra, por extensin en placa o en masa, pasando el inculo a travs de una serie de transferencias, a un medio de una composicin (y condiciones de incubacin) que favorezcan el desarrollo del microorganismo deseado. El procedimiento de enriquecimiento aumenta en efecto la proporcin del organismo deseado en relacin con la que estaba presente en el inculo inicial.

2.1.2.5 Diluciones en Serie

Est mtodo permite reducir la concentracin de los microorganismos cuando ste crezca demasiado. Este es uno de los mtodos mas sencillo y barato y se pueden obtener un nmero definido de colonias.

2.1.2.6 Micromanipulacin Mediante un micromanipulador se puede usar una micropipeta para obtener un solo microorganismo de una suspensin de clulas en un lquido, mientras se

examina la preparacin con el microscopio. La clula aislada es luego transferida a un medio estril.

Micromanipulador

2.1.3 SELECCIN DE MICROORGANISMOS DE INTERS INDUSTRIAL: SCREENING Deteccin y aislamiento de microorganismos de inters industrial de entre una poblacin compleja de organismos utilizando procedimientos selectivos. Screening Primario: potencialmente tiles. Deteccin y aislamiento de microorganismos

Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening primario para separar los que tienen inters potencial de los que tienen inters real y mejorar estas cepas seleccionadas.

Para llevar a cabo un screening primario generalmente se parte de una poblacin mixta (suelo, fermentaciones naturales, etc.) donde existe tanto una gran cantidad como variedad de microorganismos potencialmente tiles que debemos seleccionar. Para ello lo primero que hacemos es utilizar medios selectivos donde crezca el tipo de microorganismo que nos interesa aislar. A este medio se le pueden aadir inhibidores para eliminar los que no nos interesan. Por ejemplo, si queremos obtener un microorganismo aerobio lo creceramos en presencia de O2 con lo que los anaerobios no creceran; o bien si queremos seleccionar hongos, aadiramos cloranfenicol, antibitico que acta frente a bacterias pero que no afecta a los hongos. Los parmetros generales que tenemos que tener en cuenta son la fuente de carbono, fuente de nitrgeno, aireacin, temperatura, pH e inhibidores. Posteriormente se reaslan en cultivo puro aquellos microorganismos que hemos aislado para su posterior estudio.