Biología del Desarrollo

María Eugenia Cabrejos, PhD

Año 2006
Orígenes de la Biología del Desarrollo como Ciencia

• Aristóteles (350 a.C.):

– Analiza embriones de pollos de distintos estadíos de
gestación
• Marcelo Marphigi (1672)::
– Descubrimiento de microscopios e inicio de
observaciones en pollo.
• Nace gran controversia:
– Epigénesis vs Preformación
• Wolff KF (1767):
“fuerza esencial, como la garvedad,
que guía la orgnización del desarrollo
embrionario”
Pander Ch
• describe las tres capas germinales
• indicios acerca del proceso de inducción
• sustenta la epigénesis
von Baer (1828)
– describes notocorda
– describes similitudes en el desarrollo
temprano de vertebrados
 Principio de von Baer

• Las características generaizadas de un amplio grupo de

animales (phylum, clase) se forman al comienzo, mientras
que las especies se van diferenciando más tarde con la
aparición de otras estructuras más complejas.

• Carácter del desarrollo: generalizado  específico.

• Los embriones de distintas especies son similares al de otras

especies, no así los adutos.

• Un embrión “no pasa” por las etapas adultas de animales

menores: ontogenia no recapitula a la filogenia.
 Modelos de la Biología del Desarrollo

D.melanogaster D.rerio X.laevis

M.musculus G.gallus C.elegans

 Métodos Moleculares
I. Analysis II. Overexpression III. Inhibition
•Western Blot •(adding proteins to in •pharmacological
•Proteomics vitro reactions) inhibitors,
•dominant-negative
Protein •immuno- proteins,
histochemisty
•protein chimera • protein depletion
using antibodies
•Northern Blot •microinjection •RNAi &
•RNase protection •siRNA
assays •Morpholinos
RNA •microarrays
•RT-PCR
•in situ Hibrydisation
•Reporter genes •(microinjection) •Knock-out
DNA •Electroporation, •Integrational
(gen) •lipofection, mutagenesis
•transgenics •Classic genetics
Transgenics
 Base experimental de la Embriología

¿Cómo estudiar la relación:

expresión génica en tiempo y espacio vs. respuesta morfogenética?

I. Determinación de mapas de Destino.

• Estudio global de la expresión génica: gen A es expresado

de forma adeucada en un tejido y en una etapa adecuada para
mediar el proceso B.

III. Experimentos de ganancia de función: el producto génico

del gen A es suficiente para mediar el proceso B.

IV. Experimentos de pérdida de función: el producto génico

del gen A es normalmente requerido para mediar el proceso B.

V. Análisis del experimento: evidenciar el fenotipo o expresión

del marcador génico.
Mapa de Destino

de diferentes clases

de vertebrados

en etapade gástrula

temprana.
 Mapa de Destino

de un embrión tunicato.
Observación de embriones “vivos”

Marcadores vitales
Marcación fluorescente o radioactiva
(Transgénicos)

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Marcadores genéticos como trazadores
de linaje celular
(Transplante)

Desarrollo
Inductivo vs Autónomo
 Detección de mRNA en tejidos:
Hibridación in situ
Generación de sondas antisentido

Clonamiento cDNA flanqueado por promotores

de RNA polimerasas virales - ensayo de run off -
uso de ribonucleótidos modificados para facilitar
la detección
 Whole-mount

in situ hybridisation

in X.laevis
Ganancia de función

•Inyección mRNA

•Inyección dsDNA
(con un promotor inducible)

•Electroporación de mRNA, dsDNA

Ganancia de función

•Implantación microesferas embebidas con proteínas

Ensayo de Western blot

Base experimental de la Embriología
Microscopía y reconstrucciones 3D

c)

e)
 Biología del Desarrollo

Objetivos Generales

•Crear diversidad celuar y orden entre cada generación

•Asegurar continuidad de la vida entre una generación y otra
 Desarrollo Temprano en D.rerio
Morfogénesis:
Proceso por el cual las células embrionarias hacen uso de una
variedad de comportamientos para generar un tejido nuevo en
respuesta a señales inductivas.
La inducción y la morfogénesis son eventos mutuamente
dependientes.
Aspectos relevantes:

3. Procesos morfogenéticos en el desarrollo

6. Comportamientos celulares en la morfogénesis

9. Desarrollo embrionario temprano en modelos invertebrados

y vertebrados

* Clivaje
* Gastrulación

4. Aproximación al proceso de neurulación

 Procesos morfogenéticos en el desarrollo
Proceso
Distintas tasas de proliferación
Posicionamiento alternativo y/o
orientación del uso mitótico
Cambio de tamaño celular
Cambio de forma celular
Fusión celular
Muerte celular
Ganancia adhesión célula-célula
Pérdida adhesión célula-célula
Interacción célula-matriz
Pérdida adhesión célula-matriz
Ejemplos
Crecimiento selectivo de primordios
(extremidades vertebrados).
Distintos patrones de clivaje. Divisiones celulares
estereotipadas (nemátodos).
Expansión celular durante epibolia.
Cambio de columnar a cuña durante cierre tubo
neural (aves y mamíferos).
Formación trofoblasto y miotúbulos (mamíferos).
Separación de dígitos (extremidades vertebrados)
Condensación del mesénquima cartilaginoso
(extremidades verteb.).
Delaminación de células del epiblasto
(gastrulación mamíferos).
Migración: células cresta neural y germinales, axón.
Delaminación de células desde lámina basal de
epidermis.
 Comportamientos celulares en el desarrollo

Movimiento de células individuales

Ingresión - Egresión Movimiento de células hacia dentro o fuera

de la superficie
Delaminación Salida de células de la capa epitelial
(aumento número de capas)
Intercalación Movimiento de células dentro de capa
epitelial (disminución número de capas)
Condensación Células dispersas se agregan para formar
epitelio (transición mesenquimal – epitelial)
Dispersión Capa epitelial se desarma en células
mesenquimáticas.
 Comportamientos celulares en el desarrollo

Movimiento de capas celulares en grupos

Invaginación – Evaginación Plegamiento de capas celulares para formar pliegue

o protrución
Involución Curvamiento hacia adentro de capa celular en
expansión. Extensión sobre superficie interna de
capa (generación de segunda capa)
Epibolia Extensión de capa celular dirigida por intercalación
o proliferación celular.

Extensión convergente Combinación de procesos que resulta en

convergencia hacia el organizador y extensión en
eje A-P. Convergencia involucra epibolia (?) e
involución y e xtensión involucra intercalación
extensiva.
Visualización movimientos capas celulares
y células individuales
 Desarrollo embrionario temprano

- Clivaje:
Divisiones celulares del cigoto en blastómeras menores. En general
divisiones rápidas y sincrónicas controladas por productos de genes
maternos (excepción mamíferos).
Tipos de clivaje dependen de:
- orden y orientación de las diferentes divisiones celulares
- cantidad de vitelo en el ovocito

Transición de blástula media:

- activación del genoma cigótico
- enlentecimiento de divisiones celulares
- pérdida de sincronía

- Eventos celulares particulares en algunos modelos.

- Gastrulación:
Serie compleja de movimientos celulares coordinados, que culmina con
la formación de las tres hojas embrionarias y el establecimiento de los
ejes corporales.
 Tipos

De

Clivaje
 Gastrulación zebrafish

Blastula: blastodermo con tres poblaciones celulares - YSL: ciclo cel.

9-10 celulas vegetales se fusionanan con vitelo, EVL: monocapa
epitelial de cel. superficiales, cel. profundas: originarán embrión.

Clivaje meroblástico discoidal

Expresión: no tail - notocorda,
snail - mesodermo paraxial
 Gastrulación Pollo

Línea primitiva: Ingresión de precursores endodérmicos al blastocele y

migración de células desde regiones laterales del epiblasto posterior a
línea media.
Extensión hasta 60-75% largo del embrión.

Nodo de Hensen: Ingresión células individuales desde extremo anterior

de línea primitiva y migración hacia anterior, desplazando hipoblasto
(forma media luna germinal). Ingresan células precursoras de endo
(tubo digestivo) y meso (cabeza y notocorda anterior).

Surco primitivo: Ingresión de células desde regiones laterales a línea. En

blatocele separación en dos poblaciones una capa profunda que desplaza
al hipoblasto lateral (endodermo) y una capa intermedia de células más
“sueltas” (mesodermo).

Regresión del surco primitivo: Nodo de Hensen comienza a regresar a

regiones más posteriores, dejando formada la notocorda a su paso.

Existe también epibolia del ectodermo por proliferación celular.

- Embrión con desarrollo en gradiente.

 Paradigma de la expresión Génica Diferencial

Establecimiento de los ejes: A/P; D/V; D/I

Acción de moléculas de señalización -

factores Paracrinos

• Factores inductores que controlan la formación de órganos.

• Mitógeno que regula la proliferación celular.
• Morfógeno que actúa en forma dosis-dependiente para
regular el destino celular en un campo determinado.
El patrón resultante
puede involucrar la
interpretación de una
información posicional.
Interpretación de Gradientes
Diseño de patrones celulares
Competencia y Diferenciación Celular

Especificación Celular
La madre aporta productos génicos localizados que establecen
polaridad a lo largo de los ejes A/P y D/V del ovocito.

Esta polaridad se traduce en destinos celulares específicos

 Modelo General

de Establecimiento

eje A/P
Expresión Genes

Homeóticos en

Drosophila
Interacción Homeodominio- DNA
Hox-C: genes parálogos
Determinación eje D/V

en Drosophila
Determinación neural en vertebrados

¿Qué parte del embrión se transformará en SN?

¿Cómo se diferencia dorsal de ventral en el tubo neural?
¿Cómo se diferencia anterior vs posterior en el tubo neural?
 Especificación de ejes

En X.laevis

Spemann, 1924
En D.rerio
 Esquema de vía de señalización Nodal
“Flujo”

cyc
Diencéfalo lefty1
pitx2
?

cyc
PLM lefty2
l
e
f
pitx2 t
y

1 A

I D

P
Oep Oep

Tailbud spaw
 A

B
Desarrollo de la médula espinal

Jessell T.M, 2000

Especificación Antero-posterior en cerebro de vertebrados

A Cephalic Caudal P

Wnt’s

II

Fore Mid Hindbrain

III
eye
 Mutantes de la vía Wnt afectan el patrón AP

Fore Mid Hindbrain Wt

eye

Fore Mid Hindbrain mbl/axin1

Especificación neuronal en la médula espinal:
una acción combinada de señales inductivas
y códigos transcripcionales

Jessell T.M, 2000

 Interpretación del gradiente de Shh:
El papel combinatorio de las proteínas con homeodominio de
clase I y clase II define cinco dominios de células progenitoras

Proteínas de clase I (Pax7,Dbx1, Irx3,Pax6 y Dbx2),

Proteínas de clase II (Nkx6.1 y Nkx2.2)…
Proceso en Humanos
Leonardo Da Vinci, (1452-1519)