Resumen:

Laboratorio Biología II

Sebastián Balarezo
 N°6
OBSERVACION DE ORGANELAS E
INCLUSIONES CITOPLASMATICAS
Fundamento

 Todas las funcione intracelulares son

realizadas gracias a las organelas
 Membranosas: Retículo Endoplasmático,
aparato de Golgi, peroxisomas, mitocondria...
 No membranosas: ribosomas, proteosomas
 Permiten la supervivencia y replicación
 La supervivencia depende de la energía, de
esto se encarga la mitocondria (se presenta
en células animales y vegetales) y los
cloroplastos (exclusivos de células
vegetales y bacterias fotosintéticas).
 Mitocondria oxida moleculas organicas
ATP
 Cloroplastosenergía de la luz ATP
fotosintesis
Procedimiento:
Cromoplastos en pulpa de
TOMATE Cromoplastos: rojo-
anaranjado

Núcleo

Gránulos de
almidón

Vacuolas incoloras
Observación de célula
ELODEA

Se observan los
cloroplasto y su
movimiento

SIN LUGOL
 Se observan
los cloroplastos

CON LUGOL
Observación de mitocondrias en
células epiteliales humanas

Mitocondrias

Núcleo

Célula del epitelio bucal

con VERDE DE JANUS
Cuestionario
¿Qué función cumplen los cloroplastos y
mitocondrias en las células vegetales animales,
respectivamente?
 La principal función de las mitocondrias es generar
energía para mantener la actividad celular mediante
procesos de respiración aerobia.
 Los cloroplastos es donde se tiene lugar la
fotosíntesis. La fotosíntesis se divide básicamente
en 2 partes de desarrollo. La parte dependiente a la
luz y la parte independiente de la luz como veremos
ahora
 ¿Qué función cumple las inclusiones
citoplasmáticas en las células vegetales
y animales, respectivamente?
 Son gránulos de reserva orgánica o
inorgánicos, que están incrustados en el
citoplasma.
 Vegetales, gránulos de glucógeno y
almidón
 Animales, lípidos, proteínas, gránulos de
glucógeno
 N°7
EXTRACCIÓN DE ADN
ELECTROFORESIS
 Extracción de ADN
Fundamento
.
 ADN polimero de desoxiribonucleico 
componente de la cromatina
 ADN se une a histonas, protaminas y
proteínas ácidas
 Para su extracción se emplea solventes
orgánicos como cloroformo, el cual extrae las
proteias dejando insoluble al ADN
 La extracción se basa en que iones salinos
son atraídos hacía las cargas (-) del ADN
1. Liberación del ADN en forma soluble por medio de
la destrucción (lisis por detergentes) de los
sistemas membranosos de los tejidos (membrana
celular y nuclear) usando un tampón (buffer).
2. Separación de los complejos de nucleoproteínas
por desnaturalización de la parte proteica
3. Separación del ADN de las otras macromoléculas
por solubilidad diferencial
4. Precipitación del ADN por insolubilidad en alcohol
y bajas temperaturas
 SDS (dodecilsulfato de sodio): detergente y
libera el ADN
 EDTA: agente quelante de iones Mg.+ e
inactiva las ADNasas
 Citrato: tampón
 NaCl: lisis de núcleo
Procedimiento:
Homogenización del Tejido
 Desintegración del tejido:
 Grandes volúmenes de tejidos blandos  licuadoras
 Menores volúmenes de tejidos blandos  mortero
 Tejido resistente  nitrogeno y pulverización
 Se utiliza el mortero a temperatura ambiente, con lo
cual la ribonucleasas celulares pueden degradar
parcialmente el ARN.
 El detergente usado SDS y el agente quelante de
cationes divalentes EDTA, impidiendo la acción de
las ADNasas (dependientes de Mg.) aunque sin
efectos sobre la mayor parte de la ribonucleasa
Seguir los siguiente pasos:
2. Las células se homogenizarán en un mortero.
3. Se lisara las célula agregando 20ml de la solución
de homogenización por cada gramo de tejido.
SDS permitirá la separación de las proteínas
asociadas a la cromatina y por otra parte la
ruptura de membranas. NaCl las libera de la
cromatina y el EDTA inhibe la ADNasa
4. Incubar en Baño Maria a 60° C por 15min
5. Enfriar en hielo por 10min
 1 2 3 4

Lisis Baño Maria Solución homogenizadota Hielo

Precipitación del ADN

 Permite la purificación y concentración, se

basa en la neutralidad de cargas negativas y
deshidratación de la molécula.
 La precipitación es un fenómeno reversible
Pasos a seguir:
2. Agregar etanol helado por los costados, hasta que
este blanco.
3. Introducir una bagueta y enrollar
4. Reconoce 3 fases
 Alcohol isoamilico
 ADN precipitado
 Tejido triturado
 El ADN que se puede apreciar es
combinado con ARN
ADN y ARN
 Electroforesis
Fundamento
 Se desea causar el mínimo daño a las
.

moléculas
 Se utiliza métodos físicos que causan el
mínimo de desnaturalización, obteniendo la
máxima retención de cualquier actividad
biológica.
 Los métodos electroforéticos están
principalmente basados en diferencias de
tamaño en separación de ácidos nucleicos
Electroforesis en geles de agarosa:
 Es la aplicación de una diferencia de voltaje a una

muestra de ADN, que se encuentra en el gel, y este

bañado en un buffer.
 La diferencia de polos hace que el ADN viaje del

polo negativo al positivo  ADN es un anodo

 La agarosa esta concentrada de un 0.3 a un 2.5%

 Se utiliza geles horizontales los cuales pueden ser

soportados por una lamina de vidrio o plastico

 El gel es fotografiado en un transiluminador, en

presencia de bromuro de etidio

La Electroforesis se
distingue porque a
más lejano del
inicio, más pequeño
es el segmento
analizado.
Discutir con el profesor

 ¿Qué hay en el primer carril?

 Un marcador molecular
 ¿Por qué aparece ARN en el gel y por qué
aparece tan abajo, comparado con el ADN?
 Por ser mas pequeño, por ello viaja más rápido
 ¿Qué significado tiene que algunas bandas
sean más gruesas que otras?
 Mientras mas gruesa la línea, más ADN hay
Cuestionario
 ¿Qué es la agarosa y qué importancia tiene en
Biología Molecular?
 La agarosa es un polisacárido que forma una matriz inerte
y no tóxica que supone una herramienta de técnicas
científicas. Su uso permite ser utilizada para fijar moléculas
como anticuerpos o antígenos.
 ¿Qué es la poliacrilamida y su importancia?
 Es un polímero de ácido acrílico que es un ácido
carboxílico, incoloro, inflamable, volátil y medianamente
tóxico. Se utilizan como inhibidores de sarro, dispersantes
de lodos, dispersantes en sistemas de enfriamiento, como
fillers en materiales para pigmentos o recubrimiento de
papel.
 ¿Qué paso hubiera sido necesario si se
hubiera querido extraer proteínas y lípidos de
la muestra homogenizada?
 Los lípidos y proteínas no tienen estructura
predecible como los ácidos nucleicos, por eso
pude que inclusive no puedan migrar. En este
caso las proteínas se desnaturalizan mediante el
detergen, como el SDS generalmente. El SDS
que se une a la proteína depende del tamaño de
estas. La desnaturalización hace que pierda su
estructura terciaria y por lo tanto su velocidad de
migración es proporcional al tamaño y no a su
estructura terciaria
 N°8
Mitosis y Meiosis
 Mitosis
Fundamento

.
La mitosis es un proceso de reparto equitativo del material
hereditario (ADN) característico de las células eucarióticas.
Normalmente concluye con la formación de dos núcleos
separados (cariocinesis) seguido de la partición del citoplasma
(citocinesis), para formar dos células hijas.
 Dado que cada célula debe contener completa la información
genética propia de su especie, la célula madre debe hacer una
copia de cada cromosoma antes de la mitosis, de forma que las
dos células hijas reciban completa la información. Esto ocurre
durante la interfase, es decir, el período que alterna con la
mitosis en el ciclo celular, y en el que la célula entre otras cosas
se prepara para dividirse.
Procedimiento
1. Hacemos corte de la parte
terminal de la cebolla y
depositamos en una placa
petri
1 2
2. Coloreamos con orceina
por 10 minutos.
 ORCEINA A: interrumpe
la mitosis
 ORECINA B: tiñe la
cromatina
3. Calentar la muestra
4. Trasladar a portaobjetos
3 5. Agregar una gotita de
orceina
5
INTERFASE
Es la fase más larga del ciclo celular, ocupando
casi el 95% del ciclo, trascurre entre dos mitosis y
comprende tres etapas:

Fase G1 (del inglés Growth 1): crecimiento celular

con síntesis de proteínas y de ARN. Tiene una
duración de entre 6 y 12 horas y durante este
tiempo, la célula dobla su tamaño.
Fase S (del inglés Synthesis): se produce la
replicación o síntesis del ADN, como resultado
cada cromosoma se duplica y queda formado por
dos cromátidas idénticas.
Fase G2 (del inglés Growth 2): Al final de este
período se observa al microscopio cambios en la
estructura celular, que indican el principio de la
división celular. Termina cuando los cromosomas
empiezan a condensarse al inicio de la mitosis.
PROFASE
Profase
temprana:
Se produce la
condensación del
material genético
(ADN) que
normalmente
existe en forma
de cromatina, con
lo que se forman
los cromosomas.

Profase tardía:
Desaparece el
nucléolo y se
desorganiza la
envoltura nuclear.
METAFASE
Durante esta fase,
las cromátidas
hermanas,
comienzan a
moverse
continuamente, hasta
que migra a la zona
media de la célula o
plano ecuatorial.
ANAFASE

Anafase temprana:
Las cromátidas se
separan al acortarse los
microtúbulos y gracias a
los cinetocoros.
Anafase tardía:
Que implica .el
acortamiento de las
fibras para dirigir las
cromátidas hacia los
polos.
TELOFASE
En la telofase el nuevo
núcleo se organiza: se
reconstituye la cromatina,
adoptando forma
helicoidal los
cromosomas, aparece el
nucléolo, y se
reconstruye la
eucarioteca a partir del
retículo endoplasmático.
Telofase temprana:
Se comienza a formar los
núcleos
Telofase tardía:
La célula se va
separando
 Meiosis
Fundamento

.
Proceso divisional celular , en el cuál una célula diploide (2n),
experimentará dos divisiones celulares sucesivas, con la
capacidad de generar cuatro células haploide (n).
 Este proceso se lleva a cabo en dos divisiones nucleares y
citoplasmáticas, llamadas, primera y segunda división meiótica o
simplemente Meiosis I y Meiosis II. Durante la meiosis I los
miembros de cada par homólogo de cromosomas se unen
primero y luego se separan y se distribuyen en diferentes
núcleos. En la Meiosis II, las cromátidas hermanas que forman
cada cromosoma se separan y se distribuyen en los núcleos de
las células hijas. Entre estas dos etapas sucesivas no existe la
etapa S (duplicación del ADN).
 En la mitosis se forman 2 hijas con igual cromosomas que la
madre, mientras la meiosis 4 hijas con menos cromosomas que
la madre
Procedimiento
 Anestesiar al animal
 Seccionar los testículos
 Añadir fijador carnoy por 30
minutos
 Añadir carmin acetico en
una luna reloj
 Llevar al mechero hasta
que entre en ebullicion
 Sacar el fragmento de
testículo y colocarlo en un
portaobjetos
 Añadir una gota de carmín
acético y cubrir con un
cubreobjetos.
Profase I
 Leptoteno
 Los cromosomas individuales comienzan a condensar en
filamentos largos dentro del núcleo. A lo largo de los
cromosomas van apareciendo unos pequeños
engrosamientos denominados cromómeros.
 Zigoteno
 Los cromosomas homólogos comienzan a acercarse
hasta quedar apareados en toda su longitud. Esto se
conoce como sinapsis (unión) y el complejo resultante se
conoce como bivalente o tétrada. Producto de la sinapsis,
se forma una estructura observable solo con el
microscopio electrónico, llamada complejo
sinaptonémico, unas estructuras, generalmente esféricas,
aunque en algunas especies pueden ser alargadas.
 Paquiteno
 Una vez que los cromosomas homólogos están perfectamente apareados formando
estructuras que se denominan bivalentes se produce el fenómeno de
entrecruzamiento (crossing-over) en el cual las cromatidas homólogas no hermanas
intercambian material genético. La recombinación genética resultante hace aumentar
en gran medida la variación genética entre la descendencia de progenitores que se
reproducen por vía sexual.
 La recombinación genética está mediada por la aparición entre los dos homólogos de
una estructura proteica llamada nódulo de recombinación. Durante esta fase se
produce una pequeña síntesis de ADN, en el proceso de recombinación.
 Diploteno
 Los cromosomas continúan condensándose hasta que se pueden comenzar a
observar las dos cromátidas de cada cromosoma. Además en este momento se
pueden observar los lugares del cromosoma donde se ha producido la recombinación.
Estas estructuras en forma de X reciben el nombre quiasmas. Cada quiasma se
origina en un sitio de entrecruzamiento, lugar en el que anteriormente se rompieron
dos cromatidas hermanas que intercambiaron material genético y se reunieron. En
este punto la meiosis puede sufrir una pausa.
 Diacinesis
 Esta etapa apenas se distingue del diploteno. Podemos observar los cromosomas
algo más condensados y los quiasmas. El final de la diacinesis y por tanto de la
profase I meiótica viene marcado por la rotura de la membrana nuclear. Durante toda
la profase I continuó la síntesis de ARN en el núcleo. Al final de la diacinesis cesa la
síntesis de ARN y desaparece el nucleolo
Leptoteno Ligoteno

Paquiteno Diploteno

Diacinesis
Metafase I
 Comienza con la rotura de
la membrana nuclear.
 Se forma el huso
acromático a partir de los
centrosomas que se
colocan en los polos de la
célula.
 Las parejas de cromosomas
homólogos se unen al huso
en el centro de la célula a
través de sus centrómeros.
 Los quiasmas son todavía
visibles
Anafase I
 Los cromosomas
homólogos se separan y se
mueven hacia polos
opuestos guiados por las
fibras del huso. Como
consecuencia desaparecen
los quiasmas.
 (Obsérvese que los
cromosomas resultantes
son cromosomas
recombinantes).
Telofase I
 Se forman dos nuevas
membranas nucleares y se
separan las dos nuevas
células haploides (n) con 2n
cromátidas cada una de
ellas.
 Esta parte del ciclo meiótico
varía de unos organismos a
otros, así en algunos no se
forma membrana nuclear y
se pasa directamente a la
segunda división meiótica.
Profase II
 En este momento cada
célula contiene un
número haploide de
cromosomas, cada uno
de ellos con dos
cromátidas.
 La membrana nuclear
se rompe y comienza la
síntesis del nuevo huso
acromático.
Metafase II
 Los cromosomas se
disponen en el centro
de la célula unidos al
huso por su centrómero
y con cada una de las
cromátidas dirigidas a
polos opuestos de la
célula, formando un
estructura llamada
placa ecuatorial.
Anafase II
 Los centrómeros se
separan y las
cromátidas hermanas
son arrastradas hacia
polos opuestos por las
fibras del huso.
Telofase II
 Se vuelven a formar los
núcleos alrededor de los
cromosomas situados en
los polos.
 En esta fase también
desaparece el huso
acromático y los
cromosomas se
descondensan.
 Con esto se habrán
formado cuatro células
haploides con n cromátidas
cada una de ellas.
 N°10
Código genético y
traducción de proteínas
Fundamento
 El proceso de traducción (síntesis de novo
proteínas) se realiza en los ribosomas del RER
 La síntesis requiere de un ARNm sintetizado por el
núcleo y exportado al citoplasma
 El ARNm tiene la información genética, y el ARNt
especifico para cada aminoácido, lleva a cabo la
traducción.
 ARNmcodones ARNtanticodones
 El código genético es la combinación de tripletes
 64 codones (1 inicia/3terminan); 20 aminoácidos
INICIO
PARE
Aminoácidos
Esenciales No
esenciales
1. Triptófano 1. Alanina
2. Fenilalanina 2. Asparagina
3. Valina 3. Cistina
4. Leucina 4. Cisteína
5. Isoleucina 5. Glutámico
6. Treonina 6. Glutamina
7. Arginina (solo en niños) 7. Glicina
8. Histidina (solo en niños) 8. Prolina
9. Metionina 9. Serina
10. Lisina 10. Tirosina