PRACTICA N:3 IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS POR MTODOS CROMATOGRFICA

INTEGRANTES: FLORES CHUPILLON, LILIANA TORRES LUQUE, CECI. MIRANDA PORRAS ERICKA PARINANGO COSME, YESSICA VELAZQUE LEIVA, MIGUEL VENTURA MURILLO, KAROL VILCAHUAMAN TAIPE,MARIELA

INTRODUCCION
La hidrlisis completa de la amilosa origina D- glucosa; la hidrlisis parcial da lugar a maltosa. La hidrlisis completa de la amilopectina da nicamente d-glucosa. Ahora bien, la hidrlisis incompleta origina una mezcla de los disacridos maltosa e isomaltosa. Portal motivo el almidn al hidrolizarse total mente produce d- glucosa La hidrlisis de la sacartosa produce -Dglucosa y -D-fructosa En la practica se producir la hidrlisis completa del almidn y la sacarosa para luego realizar identificacin del producto de sus hidrlisis(glucosa y fructosa glucosa) por el mtodo de cromatografa en capa fina. El revelador empleado es la antrona.

RESUMEN

Parte procedimental
1g de sacarosa 1g de almidn

Agregar 10 ml de acido sulfrico 5%

Llevar a bao mara durante 20 `

Reconocimiento de azucares reductores o reconocimiento de la sacarosa

Prueba de yodo

Con
P. BENEDICT O
FEHLING A Y B

en
AMILASA

R. HERAIL O POOZZI SCOTT

AMILOPECTINA

Enfriar los hidrolizados

Sacarosa (Glucosa-fructosa) Almidn Glucosa

Neutralizar (Na2CO3)
Sacarosa (Glucosa-fructosa) Almidn Glucosa

Filtrarlos
Sacarosa (Glucosa-fructosa) Almidn glucosa

Realizar el sembrado en los cromatogramas

Sacarosa (Glucosa-fructosa) Almidn glucosa

ALMIDN
Al tratarlos con agua caliente, se divide en sus dos fracciones principales segn la solubilidad: la amilosa (soluble)y la amilopectina(insoluble)

AMILOSA

Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay cambio de color. La hidrlisis completa de la amilosa origina D- glucosa; la hidrlisis parcial da lugar maltosa como unico disacarido; forman estructuras helicoidales alrededor del yodo.

AMILOPECTINA
La hidrlisis completa de la AMILOPECTINA da nicamente d-glucosa. Ahora bien, la hidrlisis incompleta origina una mezcla de los disacridos maltosa e isomaltosa,

reactivo de Lugol, el cual esta constituido de yodo disuelto en yoduro de potasio, lo cual hace que se forme un complejo fsico de iones triyoduro (I3-), los cuales se sitan dentro de los espacios helicoidales que presenta la Amilosa o la Amilopectina (almidn)

SACAROSA

El enlace glucosdico une al carbono 1 de cada monosacrido y es por parte de la unidad de fructosa y por parte de la unidad de la glucosa. En la sacarosa, ambos carbonos anomricos (y no uno solo) estn implicados en el enlace glucosdico, por lo cual ni la glucosa, ni la fructosa tienen grupo hemiacetlico. Es decir, la sacarosa no esta en equilibrio en solucin acuosa con la forma aldehidica o cetona. Por lo tanto la sacarosa no exhibe mutarrotacin ni es azcar reductor.

glucopiranosa

fructofuranosa

REVELADOR ANTRONA
Cuando un carbohidrato se calienta en

presencia de una acido fuerte, se lleva a cabo una serie sucesiva de reacciones de deshidratacion: las pentosa producen furfural y las hexosas el hidroximetilfurfural. Los disacaridos, polisacaridos y glicosidos, en un medio fuertemente acido, son hidrolizados a los monosacaridos correspondientes y por posterior deshidratacion producen el furfural o el hidroximetilfurfural . Se revela el cromatograma pulverizando con antrona.todos los glucidos dan manchas de color verde de diferente tonalidad

Fundamento: reacciona con el acido sulfrico que acta como catalizador de la reaccin. y este le produce una deshidratacin formndose el 5 hidroximetilfurfural al pulverizarle la antrona se forma un complejo coloreado color verdoso; compuesto cetal.

GLUCOSA

SACAROSA

5 HIDROXIMETIL FURFURAL

5 HIDROXIMETIL FURFURAL

COMPLEJO ACETAL

Otros Reactivos de identificacin

Difenilamina Son cristales con olor a flores, expuesta a la luz se colorea. Forma sales con los cidos fuertes, se utiliza para la deteccin de nitratos ,cloratos y otros oxidantes, con los que en presencia de acido sulfrico ,da color azul. -Identifica a las aldosas y aldopentosas -Las aldosas dan manchas violaceas -Las aldohexosas dan manchas marrones

acido 3.5Dinitrosalisilico
Identifica a los azucares

reductores presentando coloracin marrn sobre fondo amarillo Esta hidrlisis se sigue igual que la cida, es decir, mediante la reduccin de 3-5-dinitrosaliclico a 3-amino-5-dinitrosaliclico (producto coloreado que absorbe a 540 nm). referencial

FUNDAMENTO DE LOS REACTIVOS

Debe tenerse en cuenta que en caso de los reactivos de los glcidos, el desigual comportamiento que presentan frente a los distintos grupos de stos, no slo pueden variar los colores originados sino tambin la intensidad, esto se debe a la estructura qumica del compuesto.
(del pozo )

Cuando se sospecha la presencia de azucares no reductores o derivados que tampoco lo sean , puede ser til el revelado con vapores de yodo que produce , segn los casos, manchas de azul a rojo o pardo, este mtodo no debe usarse si se utiliz el disolvente de tipo pirimidico
*

Resultados
Cromatofolio A: Las muestras tuvieron un recorrido de 1.5cm y el solvente de 3 cm Dando un Rf = 0.5 en las tres muestras,

as mismos pues presentaron manchas en forma de cola

Resultados
Cromatofolio B: Las muestras tuvieron un recorrido de 1.4 cm y el solvente de 2.7 cm, dando un Rf = 0.518. Las manchas del estndar de glucosa y de la muestra problema presentaron

coloracin intensa con el revelador. En cuanto a las manchas de los cristales de glucosa extrados de la chancaca, no presentaron coloracin con el revelador.

DISCUSIONES

DISCUSIN

1. Utilizamos solventes polares porque los carbohidratos presentan polaridad media, si hubisemos

usado solventes apolares el soluto se hubiera quedado retenido en la silica gel y no se hubiera observado recorrido.

DISCUSIN
2. Otros solventes que se pueden

utilizar son: n-butanol, etanol, agua [4:1:5] n-propanol, acetato de etilo, agua [7:1:2] n-butanol, etanol, agua, amonaco (40:12:16:1) Isopropanol/acetato de etilo/agua (60:30:10 o 50:40:10) n-butanol/etanol/agua/cido actico/piridina (6.6:66.2:19.9:0.7:6.6)

DISCUSIN
3. La deformacin de las manchas observadas se debe posiblemente a:
La mala aplicacin en la siembra, esto quiere decir que se sembr en puntos diferentes. No escoger un dimetro adecuado del capilar usado en la siembra. Confundir los capilares de las muestras. La base de la cuba usada no era

perpendicular a la mesa.

Cromatofolio A:

GLUCOSA st

GLUCOSA FRUCTOSA

FRUCTOSA st M.P. SACAROSA

Nuestra muestra problema debi presentar dos manchas, una de glucosa y la otra de fructosa y estas debieron de ser iguales a sus respectivos estndares, siempre y cuando los estos sean qumicamente puros. si hubisemos dejado ms tiempo el cromatofolio en la cuba, se hubiera observado el desplazamiento total de la glucosa y fructosa , de ah la diferencia de los Rf. De cada muestra.

 otra posible

respuesta a las distancias de los Rf es que la fructosa a sufrido transformacin a glucosa.

Cromatofolio B:

GLUCOSA

CRISTALES DE GLUCOSA ALMIDN GLUCOSA

En cromatofolio B el almidn se hidroliz hasta glucosa ya que obtuvimos el mismo Rf que el estndar. La mancha producto de la recristalizacin de la glucosa a partir de la chancaca no presenta coloracin intensa que presenta menor concentracin de glucosa.

BIBLIOGRAFA
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lincografia
http://www.scribd.com/doc/1715

1688/1Hidrolisis-decarbohidratos revisado 15-04-10