REAKSI POLIMERISASI DIMANIPULASI DENGAN 3 TAHAPAN SUHU : 1. DENATURASI (PERENGGANGAN RANTAI) 2. ANNEALING (PENEMPELAN PRIMER) 3.

ELONGASI/EKSTENSI (PEMANJANGAN RANTAI)

PENGGANDAAN SEGMEN DNA DLM PCR MERUPAKAN PRINSIP DARI PROSES REPLIKASI PADA DNA INTI SEL PEMAHAMAN THD APLIKASI TEKNIK DNA REKOMBINAN TIDAK LAIN ADLH MEMAHAMI & MENGETAHUI PROSES REPLIKASI DNA SHG MENHGASILKAN PRODUK PROTEIN BARU MELALUI TRANSLASI SUATU GEN

REPLIKASI DNA

RNA POLIMERASE MENGKATALISIS SINTESIS PITA PENDEK RNA (100 NUKLEOTIDA). PITA TSB. MENGAND. BASA YG KOMPLEMEN DG. BASA YG TDPT. PD. DNA CETAKAN. BERBEDA DG. DNA POLIMERASE, RNA POLIMERASE TIDAK MEMERLUKAN PRIMER UK, PERMULAAN SINTESIS GUGUS 3 OH DARI RIBONUKLEOTIDA TERAKHIR YG. MENYUSUN PITA RNA MERUP. TEMPAT AWAL SINTESIS DNA. ENZIM YG BERPERAN DLM PROSES INI ADLH DNA POLIMERASE III DNA PRIMER KEMUDIAN DIHIDROLISIS SHG. TINGGAL PITA DNA BARU, HIDROLISIS DILAKUKAN ENZIM DNA POLIMERASE I PADA LAGGINGSTRAND AKAN TERBENT. FRAGMEN KECIL DNA DG. ADANYA ENZIM LIGASE, FRAGMEN TSB. DAPAT DISAMBUNGKAN

5 DNA CETAKAN

3 5
RNA PRIMER

5 3 5 3
RNA PRIMER DNA BARU

3 5

5 5 DNA BARU

3 3

Localization of the DNA in Eukaryotic Cells

DNA Structure
Double helix Basic unit = nucleotide Sugar Phosphate Base (A, C, G, T) Repeating backbone (sugar, phosphate)
Complementary base pairing: Adenine - Thymine Guanine - Cytosine

Anti-parallel strands

Function of DNA
Storage of genetic information Preparation of genetic information for proteinbiosynthesis Heridity of genetic information

KLONING GEN

TAHAP PERTAMA PD. PROSES INI MELIBATKAN PEMOTONGAN DNA INTI MENJADI BERBAGAI POTONGAN. HAL INI DIKERJAKAN DG. MENGINKUBASI DNA DG. ENZ. RESTRIKSI CONTOH DNA MANUSIA YG. DIPOT. DG. ENZ. Bam HI, MEMOTONG URUTAN SEGMEN NUKLEOTIDA GGATCC TAHAP BERIKUTNYA : MENYISIPKAN (INSERT) FRAGMEN DNA INI KE DALAM VEKTOR KLONING ( MISALNYA : pGEM-T) UMUMNYA POTONGAN DNA YG DISISIPKAN KE DLM PLASMID AKAN BERGABUNG KRN AKHIRAN UJUNG UNTAI DNA TSB. KOMPLEMENTER DG. AKHIRAN UUNG PLASMID YG. TELAH DIBUKA. DAN POTONGAN DPT MENYATU (BERINTENGRASI) SECARA KOVALEN DLM LARUTAN YG. MENGANDUNG ENZ. LIGASE (ENZ. PENGGABUNG FRAGMEN DNA DG. PLASMID) PLASMID REKOMBINAN TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN