ESTABILIDAD DEL REACTIVO El reactivo y el estndar son estables cuando se almacenan a 2-8C hasta la fecha de caducidad.

Una vez abierto el reactivo debe evitarse su contaminacin. Lleve el reactivo y estndar a temperatura ambiente antes de usarlos. Con el tiempo el reactivo puede tomar un leve color rosado que no afecta los resultados. Descartar el reactivo si la absorbancia contra el blanco es superior a 0.3 D.O. a 500 nm. MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS PRINCIPIO Y RESUMEN El mtodo enzimtico para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2 utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano, seguida de saponificacin qumica de los steres del colesterol. Roeschlau3 modific esta tcnica y Allain y col4 publicaron los primeros ensayos enzimticos completos, combinando colesterol oxidasa y colesterol esterasa. Este mtodo se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinacin con el reactivo peroxidasa/fenol-4antipirina, de Trinder5. La colesterol esterasa (CE) hidroliza los steres para originar colesterol libre y cidos grasos. El colesterol libre as producido ms el colesterol preformado se oxidan en presencia de colesterol oxidasa (Cox) para dar colest-4-en-3-ona y perxido de hidrgeno. Un cromgeno quinonaimina, con absorcin mxima de 500 nm, se produce cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona, en presencia de peroxidasa (POD) con perxido de hidrgeno. La intensidad del color rojo final es proporcional a la concentracin total de colesterol.
CE Esteres de colesterol COx Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2 POD H2O2 + 4-aminofenazona + pHBs 2H2O + o-quinoemina colorido Colesterol + Acidos Grasos

Stanbio Colesterol LiquiColor

Para la determinacin cuantitativa enzimtica colorimtrica de colesterol total en suero o plasma

Espectrofotmetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 500 nm con 1 cm de paso de luz. Bao de temperatura constante a 37C o portacubeta de temperatura controlada. Pipetas serolgicas o automticas Cubetas o tubos de ensayo Agitador (tipo Vortex) Cronmetro.

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA La sangre debe ser colectada seguida de 12 horas de ayuno. La muestra puede ser suero o plasma colectado con EDTA como anticoagulante. Evitar hemlisis. ESTABILIDAD DE LA MUESTRA El colesterol total y el colesterol HDL se reportan estables durante 4 das a 2-8C, a -20C alcanzan una mayor estabilidad hasta por 3 meses para el colesterol total y 7-14 das para el HDL. De ser posible la muestra debe separarse y analizarse el mismo da de su extraccin. SUSTANCIAS INTERFERENTES Los anticoagulantes como fluoruros y oxalatos dan valores bajos falsos. La prueba no se interfiere con valores de hemoglobina de hasta 200 mg/dL o por bilirrubina hasta de 10 mg/dL. Sin embargo, muestras muy ictricas y hemolizadas se pueden corregir usando un blanco de suero o plasma. (Vase Resultados) PARMETROS DE PRUEBA Longitud de onda 500 nm Punto final Creciente 37C 1:100 3 seg 4 seg 300 seg 0.300 A 2.000 A 120 mg/dL 310 mg/dL 750 mg/dL 7.3 1.0 < 0.300 200 mg/dL Tipo de reaccin Direccin de reaccin Temperatura de reaccin Relacin de la muestra/reactivo Tiempo de equilibrio Tiempo de lectura Tiempo lag Lmite de absorbancia del Blanco Absorbancia mxima Valor Normal bajo Valor Normal alto Linealidad pH Absorbancia inicial Estndar

El reactivo de precipitacin de Stanbio de lipoprotenas de alta densidad (HDL) debe adquirirse por separado. REACTIVOS Colesterol Enzimtico (Lquido): El reactivo contiene los siguientes ingredientes activos a esta concentracin. 4-Aminofenazona Fenol Peroxidasa Colesterol estearasa Colesteroloxidasa Reguladores y estabilizadores Estndar de Colesterol (200 mg/dL): Solucin acuosa de colesterol con estabilizadores, surfactantes y conservadores. 0.25 mmol/L 25.0 mmol/L >5.0 U/mL >0.15 U/mL >0.2 U/mL

Precauciones. Unicamente para uso diagnstico in vitro. Preparacin del reactivo: El reactivo y el estndar estn listos para su uso.

Los parmetros antes mencionados deben ser empleados en la programacin de los analizadores automatizados para Colesterol Total. Consulte su manual del usuario para programar las instrucciones. PROCEDIMIENTO MANUAL 1. Pipetear en cubetas o tubos de ensayo marcados como RB (Blanco de Reactivo), E (Estndar) y M (Muestra) los siguientes volmenes (en mL), mezclando bien. RB Reactivo de color Estndar Muestra 1.0 E 1.0 0.01 M 1.0 0.01

establezca sus propios rangos de valores esperados en vista de que existen diferencias entre instrumentos, laboratorios y poblacin local. Colesterol total Cordn umbilical Recin nacido Infante Nios Adolescentes Adultos Ideal para adultos mg/dL 45-100 53-135 70-175 120-200 120-210 140-310 140-200

Riesgo de CHD (HDL como % del total) Riesgo Peligroso Alto Medio Medio bajo Probable proteccin Hombre <7 7-15 15-25 25-37 >37 > 40 Mujer < 12 12-18 18-27

2. Incube todas las cubetas a 37C por 5 minutos o por 10 minutos a temperatura ambiente. 3. Leer la absorbancia (A) del E y la M frente al blanco de reactivo (RB) a 500 nm dentro de 60 minutos NOTA: Los volmenes pueden ser incrementados al doble si el instrumento requiere un volumen mayor a 1.0 mL para realizar la lectura. CONTROL DE CALIDAD Utilice un suero control comercial o un pool de sueros previamente analizados y divididos en alcuotas congeladas en cada serie de ensayos. RESULTADOS Los valores se derivan de los siguientes clculos:
AM Colesterol total en suero (mg/dL) = AE x 200

HDL COLESTEROL Edad 0-14 15-19 20-29 30-39 >40 Media Hombre 30-65 30-65 30-70 30-70 30-70 45 Mujer 30-65 30-70 30-75 30-80 30-85 55

Raza Negra: Aproximadamente 10 mg/dL ms altos. CARACTERSTICAS

donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estndar respectivamente y 20 es la concentracin del estndar (mg/dL). Cuando se requiera de un blanco de suero (muestra ictrica o hemolizada) incluya otro tubo como BM (vase Procedimiento). Aada 1.0 mL de solucin salina, 0.01 mL de suero, mezcle por inversin, transfiera a la cubeta y lea la absorbancia (Abs) contra agua destilada a 500 nm. Use estos valores para corregir los de la muestra como sigue:
AM - Abs Colesterol total en suero (mg/dL) = AE x 200

Reproducibilidad: Se realiz un estudio sobre control (media = 128 mg/dL) y un suero de pacientes (media = 367 mg/dL) el cual consisti en una serie de 5 ensayos durante 5 das consecutivos. El coeficiente de variacin (CV) del intraensayo de 2.5% y 1.0% y el interensayo 3.5% y 2.9% respectivamente. Correlacin: La determinacin del colesterol por el procedimiento aqu descrito (y) y por el Boeringer-Manheim BMC Colesterol Monotest (x) en 66 sueros (variacin = 125-550 mg/dL) di un coeficiente de correlacin ( r ) de 0.991 y una ecuacin de regresin y = 1.04 x + 10.3. Linealidad: Cuando se realiza como indica, el mtodo es lineal de 0 a 750 mg/dL.
REFERENCIAS 1. Flegg H.M. Ann. Clion. Biochem, 10:79, 1973. 2. Richmond W., Clin. Chem, 19:1350, 1973. 3. Roeschlau P., et al., Z. Klin. Chem. Klin. Biochem, 12:226, 1974. 4. Allain C.C. et al., Lin, Chem 20:470, 1974. 5. Trinder P., Ann Clin. Biochem., 6:24, 1969. 6. Finley P.R. et al., Clin. Chem., 24:931, 1978. 7. Stein E.A., In Textbook of Clinical Chemistry, NW Tiez, Ed. W.B. Saunder, Philadelphia, 1986, p.p. 879-886, 1818, 1829.

NOTA: La muestra con valores de colesterol mayores a 750 mg/dL se diluyen tres veces (1+2) con solucin salina normal (cloruro de sodio 8.5 g/dL), se repite el ensayo y el resultado se multiplica por 3. VALORES ESPERADOS Los datos recientemente presentados muestran rangos normales de acuerdo a la edad para colesterol total y HDL y, como riesgo coronario de enfermedades del corazn (CDH) para colesterol HDL expresados como un porcentaje del colesterol total. Es recomendable que cada laboratorio

Fabricado en EUA por: Stanbio Laboratory 1261 North Main Street Boerne TX; 78006. Distribuido en Mxico por: Laboratorios Licon S.A. Viveros del Roco No. 33 Col. Viveros de la Loma C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de Mxico Tel.: (55) 5362-0299 Fax: (55) 5362-1792