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Guia Practica BioquÍmica 2007-II

Guia Practica BioquÍmica 2007-II

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FILIAL NORTE
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
ASIGNATURA: BIOQU\u00cdMICA
GU\u00cdA DE PR\u00c1CTICA
SEGUNDO A\u00d1O
II Semestre
2007
1
P
INSTRUMENTACI\u00d3N
CENTRIFUGACI\u00d3N
rocedimiento por el cual se aplica laFUERZA CENTR\u00cdFUGA para
separar part\u00edculas que se encuentran en suspensi\u00f3n en un

medio l\u00edquido. El incremento de la fuerza centrifuga condicionar\u00e1 que las part\u00edculas migren alej\u00e1ndose del eje de rotaci\u00f3n de la centrifuga. El proceso migratorio de las part\u00edculas se denomina sedimentaci\u00f3n y la velocidad con que sedimentan es proporcional a la fuerza centrifuga expresada como incrementos de la gravedad (G).

La constante gravitatoria es proporcional a la velocidad de giro del rotor \u2013 soporte del medio que se centrifuga \u2013 y del radio del mismo. El radio del rotor de la centrifuga depende si \u00e9sta es del tipo \u00e1ngulo fijo o flotante. En el primer caso es un promedio entre el radio m\u00ednimo y el m\u00e1ximo, y en el segundo es la distancia entre fondo del tubo y el eje.

La velocidad de la sedimentaci\u00f3n se altera por la fuerza centr\u00edfuga, pero adem\u00e1s por la forma de las part\u00edculas, y por la viscosidad del medio l\u00edquido que las suspende. Tambi\u00e9n depende de la temperatura en cuanto \u00e9sta altere la viscosidad del medio o de las cargas el\u00e9ctricas de las part\u00edculas.

Los equipos que permiten la centrifugaci\u00f3n se llaman centr\u00edfugas y constan de un motor con controles, que mueven un rotor que sostiene los tubos de centrifugaci\u00f3n. Los rotores son de dos clases, de \u00e1ngulo fijo y flotantes, tal como se ve m\u00e1s arriba.

2

La mayor\u00eda de la centr\u00edfugas de laboratorio alcanzan las 5000 rpm, aunque algunas alcanzan los 16 000 rpm. Algunas centr\u00edfugas tienen refrigeraci\u00f3n lo que permite separar part\u00edculas biol\u00f3gicamente activas tales como factores de coagulaci\u00f3n, enzimas, etc.

Las ultracentr\u00edfugas son centr\u00edfugas con vac\u00edo, refrigeraci\u00f3n y velocidades de m\u00e1s de 500 000 x g. Permiten la separaci\u00f3n de los componentes tisulares, tal como se aprecia en el cuadro adjunto y poder estudiar cada uno de ellos a partir del homogenizado de un tejido cualquiera.

Para evaluar con certeza la capacidad de una centr\u00edfuga para separar los componentes celulares debemos manejar gravedades en lugar de revoluciones por minuto, por lo que frecuentemente usamos el nomograma de Dole y Cotziar que presentamos a continuaci\u00f3n.

3
Suspender el tejido al 10%
Homogenizar en Potter E.
Centrifugar a 600g x 10\u00b4
Sedimento: n\u00facleos, restos
celulares
Centrifugar el sobrenadante
a 4000g x 15\u00b4
Sedimento:
mitocondrias
Centrifugar el sobrenadante
a 16 500g x 15\u00b4
Sedimento:
lisosomasCentrifugar el sobrenadante
a 100 000g x 40\u00b4
Sedimento:
microsomasSobrenadante: citosol

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