NDICE

NDICE..................................................................................................................................1 1. INTRODUO..................................................................................................................2 1.1. Produo de etanol no Brasil.......................................................................................2 1.2 Mandioca......................................................................................................................5 1.3 Fermentao de produtos da mandioca.........................................................................6 1.4 Linhagens recombinantes para a produo de etanol....................................................8 1.5 O Amido........................................................................................................................9 1.6 Enzimas envolvidas na degradao do amido.............................................................10 1. PRODUO DE LCOOL A PARTIR DA MANDIOCA............................................11 2.1 Preparao da Matria-Prima......................................................................................14 Cozimento........................................................................................................................15 Sacarificao ou Hidrlise...............................................................................................16 Sacarificao com cidos................................................................................................17 Sacarificao por Via Enzimtica...................................................................................18 Fermentao.....................................................................................................................21 Agentes de fermentao alcolica....................................................................................23 Fatores que afetam a fermentao....................................................................................24 Destilao.........................................................................................................................25 2. AVALIAO DA CELULASE E PECTINASE COMO ENZIMAS COMPLEMENTARES NO PROCESSO DE HIDRLISE SACARIFICAO DO FARELO DE MANDIOCA PARA A PRODUO DE ETANOL....................................27 Introduo........................................................................................................................27 Rendimento dos processos...............................................................................................33 3. CONCLUSES.................................................................................................................37 4. BIBLIOGRAFIA...............................................................................................................39

1. INTRODUO

1.1. Produo de etanol no Brasil O Brasil foi o primeiro pas a adotar a bioenergia em larga escala, com a implantao do Programa Nacional do lcool (PROLCOOL) pelo decreto n76.596/73 do Governo Federal. Este programa trouxe diversos benefcios, como o desenvolvimento rural e a criao de um combustvel que colabora com a reduo da poluio ambiental (PARRO, 1996). A crise de energia, juntamente com a carncia de alimentos e a ameaa ecologia, estreitamente relacionada, constituem os principais problemas que afligem o homem moderno. Desta forma, fica evidente que a economia mundial est centrada na reduo da dependncia do petrleo por razes tais como: o esgotamento das reservas de petrleo a mdio e longo prazo, o crescimento do efeito estufa causado pela queima de seus derivados e o fato de que suas principais fontes de produo esto localizadas em reas de permanente conflito (CARVALHO, 2002). Na dcada de 80, o Prolcool serviu de estimulante ao uso do produto, motivando o surgimento de destilarias de lcool de mandioca, em diversos Estados do Pas. O custo de produo, e a concorrncia com o lcool de cana, vieram na contramo e provocaram reduo de investimentos nessa corrida. Hoje, no entanto, com o desacerto dos preos do lcool combustvel no mercado brasileiro, o lcool de mandioca volta a atrair ateno de investidores e pesquisadores. Com a crise do lcool, ocorrida no final do Governo Sarney, que perdurou por mais de uma dcada, os automveis a lcool perderam sua atratividade e deixaram de ser produzidos no Brasil. O lcool s entrou em cena novamente com o advento dos veculos bi-combustveis (motores flexveis). Isso afetou todo o setor alcooleiro, analisa o Consultor de Empresas, e especialista em estratgias de projetos de investimentos industriais, Antonio Alcantara, 2

diretor da BIS Brazil Industrial Solutions, com sede em Curitiba/PR, para quem a atrao de plantas industriais para produo do lcool propiciar a criao de novos empregos, e aumentar a arrecadao de impostos de municpios com vocao agrcola para o cultivo de tubrculos. Produtividade X custo - Em termos de produo a mandioca supera a cana, se considerado o rendimento por tonelada. Conforme pesquisas no Departamento Agroindstria e Tecnologia de Alimentos da Esalq, uma tonelada de cana-de-acar, com 140 kg de Acar Total Recupervel (ATR), produz 85 litros de lcool, enquanto que uma tonelada de mandioca, com rendimento de 20% de amido, pode produzir 104 litros de lcool, ou seja, a mandioca produz 19 litros a mais. Apesar desse resultado favorvel mandioca, quando se calcula a produo possvel por hectare situao se inverte. Um hectare de cana-de-acar em So Paulo, com produtividade de 81 t/ha, resultaria em 6.934 litros de lcool. J um hectare de mandioca em So Paulo, produzindo 24,8 t/ha, poderia ser transformado em 2.589 litros de lcool. Outro ponto apontado como desfavorvel mandioca o custo de produo agrcola. Enquanto para produzir a cana custa entre R$ 23,3/t, para a cana de primeiro corte, com produtividade de 120 t/ha, e, R$ 29,3/t, para a cana de quinto corte e produtividade de 75 t/ha; a produo de mandioca custa R$ 117,3/t, para a mandioca de um ciclo com, produtividade de 50 t/ha, e, R$ 113,8/t, para a mandioca de dois ciclos (dezoito meses) e produtividade de 80 t/ha. Avanos necessrios - Diante dos depoimentos obtidos em sua pesquisa, Alves concluram que seriam necessrios alguns avanos no setor como a possibilidade de perodo maior de safra de mandioca, com regularidade na oferta; o aproveitamento de subprodutos como o desenvolvimento de novos usos para a vinhaa, que no apenas a ferti-irrigao destinao para complemento de alimentao animal, por exemplo. A diferenciao com lcoois de outras matrias-primas; investimentos em marketing, mostrando as vantagens do consumo de lcool de mandioca; a consolidao do mercado e diferenciao do produto a ser vendido, so, tambm, aes apontadas por ele como

importantes. O destino ao setor de bebidas seria uma possibilidade, pois possvel a diferenciao de produtos, assim como repasse de custos, caso necessrio, devido maior aceitao do consumidor. Na opinio do engenheiro qumico Jonas Arantes Vieira, responsvel pela coordenao da instalao de quatro destilarias de lcool de mandioca nos Estados de Santa Catarina, So Paulo e Bahia, e atual Scio-Diretor da Agro-Industrial Tarum Ltda., empresa que produz lcool hidratado de cereais e atua na consultoria e projetos de destilarias de lcool de origem amilcea, se a cultura da mandioca tivesse o investimento em pesquisa e desenvolvimento de tecnologias agrcola e industrial que teve a cana-de-acar, com certeza, hoje teria custo de produo equivalente ao da cana. A mandioca ainda tem muito a crescer e poder, no futuro, ser uma matria-prima importante na produo de lcool no Brasil e nos pases de agriculturas tropicais, projeta ele. Vieira ressalta que h tendncia mundial de uso do lcool como combustvel automotivo, em funo da escassez de petrleo e da necessidade de reduo da poluio ambiental, exigida pelo Tratado de Kyoto, que prev a reduo da emisso de gases provenientes do petrleo. Com isso, haver aumento do valor do lcool produzido a partir de biomassas. Assim, em breve, a produo de lcool de mandioca ser realidade, sobretudo considerando-se que as destilarias de lcool de cana ficam ociosas por perodos de cinco a seis meses no ano, devido entressafra da cana, observa. Na anlise de Vieira, as destilarias de lcool de mandioca poderiam operar durante praticamente o ano todo, e utilizar a vinhaa como componente de rao animal. Salienta, contudo, que a viabilidade econmica seria melhorada com um tratamento diferenciado por parte do governo, principalmente com relao forma de comercializao do produto. Ele argumenta que o ideal seria que a venda pudesse ser feita diretamente aos postos, se evitando o passeio do lcool, que ocorre hoje, visto que todo lcool produzido no Brasil enviado para cerca de 30 distribuidoras, em todo o Pas. Se isto acontecesse, se aumentaria s margens de lucro do produtor, diz ele, argumentando que as micros destilarias, tanto de

cana como de mandioca, tm papel importante a cumprir, como geradoras de emprego e renda, principalmente nas regies mais distantes, onde o custo do combustvel muito alto.

1.2

Mandioca

A produo de plantas amilceas supre 4/5 da demanda mundial de alimentos em termos de calorias. A mandioca (Manihot esculenta Crantz), uma raiz com alto contedo de amido apresenta mais de trezentas variedades e originado do Continente Americano, provavelmente Brasil, Amrica Central ou Mxico. Pertence famlia das Euforbiceas, a mesma da mamona e seringueira, por exemplo, (CEREDA, 2001). Nove pases produzem 80% das 168 milhes de toneladas colhidas por ano.O maior produtor a Nigria, seguida do Brasil com 25 toneladas por ano.A mandioca a sexta mais importante planta comestvel no mundo e ocupa o quarto lugar em rea plantada. Possui um bom rendimento agrcola com 13,5 t/ha. A mandioca freqentemente cultivada em solos de textura superficial mdia a arenosa, com baixos teores de nutrientes e de matria orgnica.O crescimento da mandioca feito em 5 fases. A parte area e as partes fibrosas crescem ao mesmo tempo. Aos 28 dias j podem ser encontrados gros de amido nas razes fibrosas de mandioca, porm esse crescimento simultneo traz para a cultura da mandioca uma serie de problemas, como competio pelos produtos da fotossntese entre os rgos vegetativos e armazenamento das reservas. A composio da mandioca varia muito com a espcie, idade e condies de cultivo. Por apresentar elevado teor de amido e baixos teores de gorduras, protenas e cinzas, a mandioca matria prima para obteno, por hidrolise, de derivados. O amido de mandioca o mais suscetvel ao da alfa-amilase bacteriana provavelmente devido sua temperatura de gelatinizao (5875o C) e porque os gros de amido da mandioca possuem uma estrutura interna fracamente ligada.

A cultura da mandioca de fcil propagao, tolerante a pragas e doenas, sendo pouco exigente quanto a condies edafoclimticas. Porm, tem baixa resistncia ao frio e apresenta um perodo de crescimento longo e potencial de deteriorao alto fora do solo. As mudanas ocorrem depois de 2 ou 3 dias da colheita devido a processos fisiolgicos . A conservao pode ser feita por meio do processamento em farinha, raspas secas, polvilho, puba, entre outros produtos (CEREDA, 2001).

1.3

Fermentao de produtos da mandioca.

A mandioca reconhecidamente uma raiz amilcea, onde o amido se encontra juntamente com os outros carboidratos de diferentes pesos moleculares, incluindo desde acares simples at glicosdios e material celulsico. Apesar da pouca contribuio dos outros componentes, tais como protenas, lipdios, vitaminas e sais minerais, eles devem ser considerados devido importncia da raiz como matria prima com elevado teor de umidade, oferecendo condies para instabilidades composicionais tanto na estocagem quanto ao processamento (CEREDA, 2001). Esta instabilidade permite o emprego da raiz para a produo de produtos fermentados, com singular facilidade, so a farinha Puba, o polvilho azedo e a farinha fermentada, alguns desses exemplos. A existncia desses produtos se deve facilidade da utilizao dos componentes da raiz de mandioca, como substratos, pelas enzimas endgenas e exgenas, estas ltimas originrias de bactrias, bolores e leveduras que se instalam durante os processos naturais de fermentao. Fermentados ou no, os principais produtos da mandioca so ricos em amido, constituinte que se apresenta como principal fonte de energia da mandioca. Na Tabela 1, apresenta-se a composio qumica da raiz de mandioca (CEREDA,2001).

De modo geral, o amido de mandioca constitusse do polissacardeo praticamente puro, contendo aproximadamente 0,34% de protena, 0,22% de gordura e 0,06% de cinzas.O amido constitusse de grnulos compactados de amilose e amilopectina. O teor de amilose difere segundo as variedades de mandioca, porm pode estar entre 15,35 e 30%. Esses grnulos so insolveis e incha levemente na gua fria. Arredondada cupuliformes, convexas, bicncavas, sacciforme, e outras, so caractersticas do amido de mandioca, e assim como de outras espcies vegetais, so empregadas para a identificao da presena de determinados amidos em alimentos em geral. Amilose e amilopectina, ligadas por ligaes de hidrognio, entre amiloseamilose, amilopectinaamilopectina ou amiloseamilopectina, formam a ultra-estrutura do grnulo em uma ordem cristalogrfica definida a partir do hilun. Estudos sobre ultra-estrutura do amido granular tm revelado que os grnulos possuem, apesar da ordem cristalogrfica a eles atribuda, regies amorfas, com graus diferenciados de compactao podendo ocorrer em um mesmo grnulo do amido. Estas variaes estruturais dos grnulos podem no ser

observada em uma microfotografia superficial. Porm, estas diferenas na compactao podem ser observadas atravs da tcnica de microfotografia envolvendo fraturas de grnulos congelados. A presena dessa irregularidade resulta em diferentes comportamentos dos amidos ao ataque enzimtico. Muitos amidos sofrem ataques enzimticos superficiais enquanto outros sofrem, atravs de zonas preferenciais enfraquecidas, ataques radiais.Durante a fermentao do amido, vrios cidos orgnicos so produzidos. Observao realizada ao microscpio eletrnico de varredura mostra alguns buracos na superfcie dos grnulos, os quais so caractersticos do ataque enzimtico. O amido possui diversas propriedades tanto qumicas e fsicas como tambm funcionais. So elas: Qumicas: composio bioqumica, amilose, amilopectina e outros constituintes; Fsicas: estrutura, cristalinidade, aparncia, condutibilidade trmica e eltrica e atividade ptica; Funcionais: tratamentos hidrotrmicos, solubilidade, galatinizao, retrogradao e hidrolise.

1.4

Linhagens recombinantes para a produo de etanol

Considerando que o amido constitui uma fonte abundante de energia renovvel, a obteno de cepas de S. cerevisiae que sejam capazes de produzir etanol a partir do amido de grande relevncia tecnolgica (BIROL et al., 1998). Alm disso, a excreo de enzimas amilolticas, traz como vantagens a reduo de custo, permitindo que as etapas de sacarificao (hidrlise do amido em glicose) e fermentao sejam realizadas concomitantemente, melhorando a eficincia de converso do amido (TUBB, 1986).

Vrias linhagens recombinantes de S. cerevisiae j foram estudadas quanto a cintica de produo de enzima e estabilidade (ABUD, 1997) e, no Brasil, dentro da linha de pesquisa de obteno de linhagens recombinantes de S. cerevisiae que expressam enzimas amilolticas, resultados significativos foram alcanados por um grupo de pesquisadores do Laboratrio de Gentica de Microrganismos do Instituto de Cincias Biomdicas da USP e do Laboratrio de Biologia Molecular do Instituto de Cincias Biolgicas da Universidade de Braslia. Das vrias linhagens construdas pelos pesquisadores destes grupos, Faria e colaboradores (1993) desenvolveram a linhagem 36, capaz de expressar simultaneamente as enzimas, amilase de Bacillus subtilis e a glicoamilase de Aspergillus awamori, com um desempenho superior ao das linhagens anteriormente obtidas. Atualmente, vem se estudando uma derivao da cepa L36, denominada L36w4, que se diferencia da primeira pela introduo de cpias adicionais do cDNA da glicoamilase de A. awamori, por intermdio do vetor rDNA5S, o qual permite a integrao da informao gentica da glicoamilase a nvel de cluster de DNA ribossomal no cromossomo XII da levedura, visando o aumento da produo de glicoamolase pela mesma. Este aumento de produo poderia tornar o processo no limitado pela hidrlise, conforme mostrado nos trabalhos anteriores (GUEDES, 1995; ABUD, 1997 e TAVARES, 1998). Costa (2003) mostrou em seu trabalho com a levedura S. cerevisiae L36w4 que a fermentao alcolica utilizando farinha de mandioca, ainda est limitada pela hidrlise.

1.5

O Amido

O amido um carboidrato polimrico constitudo de unidades de -D-glucose resultando. encontrado na forma de gros insolveis (trigo, cevada e arroz) e em razes (mandioca e batata). O amido composto de dois polmeros, amilose (molcula linear) e amilopectina (molcula altamente ramificada com 4% a 6% de ligaes -1,6 nos pontos de ramificao) (Figura 1).

Figura. 1 Estrutura da amilose e amilopectina (MARC & ENGASSER, 1987) Quando os gros de amido so suspensos em gua e a temperatura aumentada gradualmente at ser atingida a temperatura de gelatinizao, h a formao de solues consideravelmente viscosas; uma vez que, as molculas de amilose e amilopectina se desenrolam e se dispersam em soluo (BOBBIO & BOBBIO, 1992).

1.6

Enzimas envolvidas na degradao do amido

Dentre as hidrolases mais comumente usadas, destacam-se a glicoamilase (ou amiloglicosidase) e a alfa-amilase. Elas tm diferentes mecanismos de hidrlise dependendo do tipo de ligao na molcula de amido. A alfa-amilases so usadas para hidrolisar o amido em xaropes de acares, e so produzidas, em geral, por Aspergillus oryzae, Bacillus amyloliquefaciens e Bacillus licheniformis (NIGAM & SINGH, 1995). Na amilose, a hidrlise randmica, levando formao inicial de maltose e maltotriose. Posteriormente, h uma lenta hidrlise dos oligossacardeos com a formao de glicose e maltose como produtos finais (WALKER & HOPE, 1963). Entretanto, o produto final obtido, depende do tipo de amido e da origem da enzima

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utilizada. Na amilopectina, a ao da alfa-amilase restrita pelos pontos de ligao -1,6. Os produtos finais so glicose, maltose e dextrinas alfa-limites (MARC & ENGASSER, 1987). Glicoamilases. So usadas na produo de xaropes de glicose a partir do amido liquefeito e so normalmente obtidas de Aspergillus niger e espcies de Rhizopus. A glicoamilase responsvel pela hidrlise sucessiva dos resduos de glicose terminal dos finais no redutores das cadeias de amido. Tambm atuam nos pontos de ramificao -1,6-D-glicosdeo, mas com uma velocidade muito menor. Os produtos de reao so glicose e pequenas quantidades de polissacardeos (MARC & ENGASSER, 1987). Assim como a alfa-amilase, a glicoamilase mais ativa em cadeias longas do que curtas (FOGARTY & KELLY, 1980).

1. PRODUO DE LCOOL A PARTIR DA MANDIOCA

A necessidade de hidrlise do amido no preparo do mosto, limita o uso da mandioca como matria prima para a produo do lcool. A soluo passa pelo aprimoramento das tcnicas de cultivo de mandioca, visando elevar a produo agrcola e estudar a viabilidade de utilizao da parte area da planta (cepas e ramas) como fonte de combustvel durante o processamento (CEREDA, 2001). Vrios autores de livros sobre lcool ou mandioca defendem a produo de etanol a partir da mandioca, pois produz lcool de qualidade superior podendo apresentar outras aplicaes alm de carburante. A produo de lcool de mandioca poderia ser incentivada em regies nas quais as condies de solo so imprprias para o cultivo da cana de acar e apropriadas para essa raiz, que pouco exigente em fertilidade. A produo pode ser feita em regies de baixa densidade demogrfica e de baixa renda per capita, como forma de melhorar a distribuio de renda no pas (CEREDA, 2001).

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A produo de etanol a partir de mandioca segue uma linha industrial semelhante fabricao desse lcool a partir de cereais (MENEZES, 1980). As principais operaes unitrias envolvidas na manufatura do lcool etlico industrial a partir da mandioca pelo processo cido e enzmico de hidrolise de amido so: a. Pesagem Lavagem Descascamento: Aps a pesagem as razes de mandioca so lavadas e descascadas em descascadores para a eliminao de impurezas como terra e areia, que afetam negativamente o processo. b. Desintegrao: A raiz ralada. A desintegrao da mandioca feita para aumentar a superfcie especifica e facilitar a penetrao do calor, a gelificao e o ataque das enzimas amiloliticas ou do cido, durante a sacarificao do amido. Se a raspa de mandioca usada como matria prima,dispensam-se as operaes de lavagem descascamento. Nesse caso a raspa moda em moinho de martelo. c. Sacarificao: realizada atravs do uso do acido mineral (HCl) ou enzimas comerciais (alfaamilase e amiloglicosidase). d. Fermentao: A fermentao alcolica o processo bioqumico, que ocorre no citoplasma da levedura alcolica, responsvel pela transformao de acar em lcool etlico. e. Destilao: Processo de separao de componentes de uma mistura que est baseado na volatilidade de cada um desses componentes, numa dada temperatura e presso. Na destilao, a mistura aquecida at a ebulio, sendo que os vapores so resfriados at a condensao. Se a mistura heterognea, composta por dois lquidos imiscveis, o destilado ser constitudo pelo liquido mais voltil. No caso de uma mistura homognea, formada por dois lquidos miscveis, o destilado ter em sua composio dois componentes, mas, com predominncia do mais voltil. Misturas hidroalcolicas apresentam presso atmosfrica uma temperatura de ebulio entre 78,35 e 100oC, respectivamente a temperatura de ebulio de etanol e gua. A temperatura de ebulio da mistura hidroalcolica ser to

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mais prxima de 78,35 quanto maior sua riqueza em etanol. No processo de fabricao de lcool a partir de mandioca, o liquido a ser destilado o mosto fermentado ou vinho. Os processos de destilao alcolica so classificados em contnuos e descontnuos. Estes ltimos so conhecidos tambm como batelada e so conduzidos em equipamentos denominados alambiques, utilizados na produo artesanal de bebidas destiladas, como o caso da tiquira (cachaa de mandioca produzida na regio amaznica do Brasil). Na produo industrial, utiliza-se o processo contnuo, com colunas ou torres de destilao, que so compostas por uma srie de caldeiras superpostas, chamadas de pratos ou bandejas. Os rendimentos tericos da fermentao da glicose e do amido podem ser facilmente calculados em 647,0 e 718,9 litros de etanol por tonelada de carboidrato, respectivamente. O maior rendimento terico da fermentao alcolica do amido deve-se ao fato dessa molcula apresentar-se mais desidratada em relao glicose. Na sntese do amido, a partir da polimerizao da glicose, perde-se uma molcula de gua para cada ligao alfa(14) ou alfa(16) realizada. Por ocasio da hidrolise essa gua novamente incorporada (CEREDA, 2001). A literatura cita que o rendimento industrial a partir da transformao amido glicose lcool est entre 600 e 610 litros de lcool por tonelada de fcula proveniente de razes frescas de mandioca. Portanto, com base nos rendimentos terico e pratico apresentado, pode-se calcular a eficincia global do processo industrial de transformao da fcula de mandioca em etanol entre 83,5 e 84,9%. Assim, no processamento de uma tonelada de fcula de mandioca para a produo de lcool, so perdidos no processo aproximadamente 140-150 Kg desse carboidrato (CEREDA, 2001, apud Lima e Marcondes, 1979). O uso de enzimas desramificantes pode reduzir essas perdas, permitindo uma melhor hidrolise do amido e reduo da quantidade de dextrinas limites. Os processos de conduo de fermentao alcolica so classificados em descontnuos (batelada), batelada alimentada

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e contnua. No caso partculas da produo industrial de lcool a partir de mandioca, processos descontnuos e contnuos com recirculao de clulas devem ser utilizados, pois a reciclagem do fermento aumenta a concentrao de levedura no mosto em fermentao, aumentando a produtividade do processo, como pode ser visto na Tabela 2 (CEREDA, 2001).

2.1

Preparao da Matria-Prima

Antes de iniciar o processo, a mandioca recebe os cuidados preliminares com a finalidade de se tornar apta a ser submetida s fases seguintes. As razes devem ser processadas at no mximo 36 horas aps a colheita, para evitar seu escurecimento que provocado pela ao de enzimas sobre as substncias tnicas nelas existentes, dando, em conseqncia, um produto, no caso, o amido, de inferior qualidade. Ao chegar a unidade industrial, a mandioca deve ser pesada, submetida triagem e limpeza, quando so retiradas a terra e impurezas aderentes casca, bem como parte da pelcula da raiz. Trabalhando-se com mandioca fresca, esta em seguida ralada ou cortada, com a finalidade de expor uma maior superfcie de matria-prima ao do calor e das enzimas durante os processos de cozimento, sacarificao e fermentao. A diviso do material permite ainda que a operao nos cozinhadores se faa em menos tempo e com

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menos presso. Por outro lado, o cozinhamento menos energtico diminui a possibilidade de caramelizao dos carboidratos e facilita a descarga da massa cozida, evitando possveis obstrues no sistema de descarga do cozinhador. A caramelizao dos carboidratos provoca a diminuio do rendimento em lcool. Em se tratando de grandes destilarias, estas devem trabalhar tambm com a raspa de mandioca, tendo em vista a necessidade de operao da indstria durante todo o ano. Desta forma, por ocasio da colheita a destilaria trabalha com mandioca fresca, e, simultaneamente, so preparadas as raspas de mandioca para serem armazenadas e trabalhadas durante a entressafra. As raspas so obtidas pela fragmentao da mandioca e posterior secagem. Trabalhando-se com raspa, ou seja, material seco, a operao da diviso do material ser feita atravs de uma moagem. Vale destacar que uma tonelada de raspa contm 700 kg de amido, proporcionando um rendimento em lcool da ordem de 450 litros.

2.2

Cozimento Aps a preparao da matria-prima, segue-se o cozimento e, em seguida, a

sacarificao. Essas operaes tm por finalidade transformar o amido em acares fermentveis. Os gros de amido se encontram no interior das clulas. A primeira operao consiste na transformao de amido em goma, por meio da hidratao e cozimento. Pelo cozimento, as paredes de natureza celulsica que contm os gros de amido so rompidas e estes so postos em liberdade. O amido absorve gua e se gelatiniza. Posteriormente, pela ao das enzimas, o amido transformado em acares fermentveis, como veremos a seguir nas etapas subseqentes do presente trabalho. A hidratao da matria-prima deve ser feita adicionando-se gua em propores variveis, conforme se trate da mandioca fresca ou seca. A seguir promove-se o cozimento da goma em autoclaves, onde, pela ao do vapor e com presso varivel entre 2 a 4 atm, obtm-se a pasta, tambm denominada de mingau. Esta pasta expulsa do cozinhador em forte descarga, facilitando a homogeneizao da massa.

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2.3

Sacarificao ou Hidrlise

O amido gelatinizado obtido na etapa anterior no diretamente assimilvel pelas leveduras Saccaromyces cerevisiae, responsveis pela fermentao alcolica. Torna-se necessrio, portanto, proceder a uma sacarificao, que consiste na transformao do amido em acares, os quais apresentam constituio molecular mais simples. Esta fase realizada em sacarificadores, onde a massa cozida vinda do cozinhador resfriada temperatura desejada. Esta varia de acordo com o agente de hidrlise empregado, seguindo-se ento a adio do referido agente, que pode ser acido, maltes, farelo enzimtico e enzimas purificadas. O meio permanece sob agitao, no sacarificador, at a completa transformao desejada, ou seja, a total sacarificao. A fase da hidrlise requer uma especial ateno, tendo em vista que referida etapa constitui um fator de elevao do custo de produo do lcool da mandioca em comparao com o produto oriundo da cana-de-acar. Sabe-se que, quando o lcool deriva do melao (lcool residual), necessita apenas de uma diluio para torn-lo meio adequado ao trabalho das leveduras. Os processos utilizados para a sacarificao do amido envolvem o uso de cidos diludos ou de preparao enzimtica. Pelo processo dos cidos usa-se o cido sulfrico ou cido clordrico diludo. As enzimas amilolticas podem ser obtidas pela germinao de gros de cereais, principalmente cevada, constituindo o malte. Estas enzimas podem tambm ser obtidas pela multiplicao de determinados microorganismos que podem apresentar-se sob a forma slida, como o caso do farelo de cereal embolorado, ou em forma lquida, a exemplo das culturas submersas de fungos. Finalmente, pode-se obter as enzimas j preparadas de empresas especializadas. Essas colocam no mercado as enzimas necessrias ao processo de

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sacarificao, no caso a alfa ( ) amilase e amilo glicosidase, tambm conhecida como beta () amilase. Para que no haja uma diminuio no rendimento de lcool, a transformao do amido em acar deve ser total, de forma a evitar-se o surgimento de teores indesejveis de dextrinas, compostos dificilmente fermentecveis, oriundos de uma sacarificao ineficiente. Por outro lado, vale ressaltar que o Brasil, como um pas tipicamente tropical, e principalmente o Nordeste, no oferece as condies ideais de clima para produo, em massa e a baixo custo, de malte de cevada, que o agente tradicional de hidrlise na Europa e Estados Unidos. Desta forma, a possibilidade de obter o malte, a partir de cevada, fica praticamente afastada, restando as opes dos cidos e dos agentes enzimticos como o malte de milho, farelo enzimtico ou as enzimas purificadas. O esquema da sacarificao de substncias amilceas pode ser resumido da seguinte forma: cido sulfrico via cida cido clordrico Sacarificao malte de cereais via enzimtica farelo enzimtico enzimas purificadas

2.4

Sacarificao com cidos

Como foi dito anteriormente, usa-se, neste caso, cido sulfrico ou cido clordrico diludo. A substncia amilcea misturada com uma quantidade de gua acidulada, para em seguida sofrer um cozimento durante algumas horas, sob presso elevada. O amido ento hidrolisado e se transforma em acares. Aps sacarificado, o produto resultante conhecido como mosto apresenta-se bastante cido, sendo necessria a adio de hidrxido de amnio

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em quantidade suficiente para se obter um mosto com pH favorvel atividade da fermentao alcolica. Pode ser usado tambm com esta finalidade o hidrxido de sdio, carbonato de sdio ou carbonato de clcio, porm o hidrxido de amnio preferido porque, alm de diminuir a acidez do mosto, atua ainda como fonte de nitrognio para o fermento alcolico. O rendimento obtido de mosto sacarificado com cido sempre mais baixo do que o conseguido a partir de mosto sacarificado com malte ou com preparaes microbianas. O cido ataca certa poro dos acares formados, transformando-os em acares infermentescveis. Trata-se de um processo obsoleto que requer ainda aparelhagem especial, de custo elevado e com alto ndice de desgaste exatamente por trabalhar com substncias cidas. Alm disso, um mtodo altamente poluidor, visto que a hidrlise cida produz resduos inaproveitveis. Os motivos anteriormente relatados fazem com que o mtodo de obteno alcolica por via cida seja preterido em funo dos mtodos que envolvem substncias enzimticas.

2.5

Sacarificao por Via Enzimtica

A sacarificao por via enzimtica tem como agente as enzimas amilase e amilo glicosidase, esta ltima tambm conhecida por amilase. Para se obter a hidrlise por via enzimtica tm-se os seguintes mtodos: a) atravs do malte, principalmente o malte de milho; b) utilizando farelo enzimtico; c) utilizando enzimas purificadas. a) com malte, conhecido o cereal com poucos dias de germinao. Para se obter o malte de cereais, o gro posto a germinar em condies adequadas. Aps a germinao surgem

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as enzimas que so responsveis pela combinao do amido contido no gro, com a gua, resultando da a formao de acares fermentveis, principalmente a maltose. O gro mais utilizado para formao do malte cevado, milho, centeio e trigo. A produo de malte requer cuidados especiais principalmente no que se refere ausncia de luz, visto que o processo se desenvolve na obscuridade. necessrio um rigoroso controle de umidade e temperatura, atentando-se para os cuidados exigidos no sentido de evitar contaminaes. Depois de ponto, o malte esmagado, triturado e lanado no mingau da mandioca. As enzimas do malte, funcionando como catalisadores, provocam a combinao do amido, j cozido e solubilizado, com a gua, produzindo o acar.A sacarificao com malte no parece aconselhvel em nossas condies, mesmo porque os cereais utilizados no so encontrados na regio, exceo feita apenas ao milho. Contudo, para se obter o malte, mesmo sendo de milho, os cuidados necessrios no desenvolvimento do mtodo so suficientes para desanimar a iniciativa. Junte-se a isso o fato de que para se obterem 100 litros de lcool, emprega-se aproximadamente 44 kg de milho na produo do malte necessrio sacarificao da mandioca. , portanto, um processo bastante trabalhoso e de custo elevado em funo de suas necessidades. b) O farelo enzimtico pode ser utilizado em zonas de temperaturas mais elevadas e obtido utilizando culturas de microorganismos em farelo de cereal umedecido. Para a multiplicao destes microorganismos produtores das enzimas necessria a utilizao de reas mais ou menos extensas, o que est levando os rgos interessados no problema a estudarem a propagao dos microorganismos em tambores rotativos, ou em culturas submersas. Em experincia realizada pelo Instituto de Tecnologia de Alimento ITAL utilizando culturas submersas de Aspergillus niger na sacarificao do mosto de raspa de mandioca, foram encontrados timos rendimentos alcolicos. O uso do farelo enzimtico em relao ao malte apresenta as seguintes vantagens principais: 1) maior rendimento alcolico; 2) custo de operao de sacarificao menor do que a da sacarificao pelo malte;

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3) substratos simples podem ser utilizados como meio de cultura para multiplicao dos microorganismos; 4) permite uma hidrlise mais rpida.

Figura. 2 Fluxograma do processo de hidrlise e sacarificao do farelo. c) Pelo mtodo das enzimas purificadas, estas so adquiridas de fornecedores especializados, em condies de serem utilizadas. Sua obteno exige tecnologia mais avanada, aparelhagem para recuperao de insulubrizantes, processos de liofilizao, etc. Devero ser de preferncia produzidas em indstria de grande porte, em condies de remeter para qualquer local do Pas as enzimas em forma de p ou granulada. um mtodo bastante eficiente apresentando uma grande vantagem: permitir que se trabalhe com quantidades reduzidas de material hidrolisante, devido a sua alta potncia, conduzindo formao de mostos extremamente fluidos e manejveis. Atualmente nenhuma empresa brasileira trabalha nesta rea, sabendo-se, no entanto, que alguns grupos estrangeiros e nacionais esto-se articulando nesse sentido. Entre os interessados figura uma grande indstria de enzimas, recentemente inaugurada em Montes Claros (MG), que est disposta a colocar no mercado as enzimas utilizadas neste processo, no caso, alfa amilase e amilo glicosidase.

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Os processos de utilizao de farelo enzimtico e os das enzimas purificadas so, a priori, os mais indicados para utilizao na sacarificao do amido de mandioca, visando a produo de lcool. O Instituto Nacional de Tecnologia realizou estudos envolvendo os agentes, de hidrlise enzimtica, quando foram determinadas as propores e condies timas para os processos de sacarificao e fermentao. Referidos estudos revelaram um ndice mdio de sacarificao da ordem de 97% quando eram usadas como agente sacarificador as enzimas purificadas e 95% de sacarificao mdia para os tratamentos utilizando malte de milho e farelo enzimtico. Estes nmeros vm consubstanciar as afirmativas anteriores de recomendao do farelo enzimtico e das enzimas purificadas, como agentes sacarificadores mais indicados. Vale ressaltar que o processo de hidrlise cida no foi citado no referido estudo em funo de ser um processo obsoleto e no recomendvel. J o processo utilizando o malte de milho, apesar de apresentar o mesmo rendimento observado em relao ao farelo enzimtico, possui os inconvenientes j referidos anteriormente. Recomenda o trabalho do INT um exame detalhado da viabilidade econmica dos dois processos, considerando os diversos fatores especficos, no caso de se procurar definir qual o mais vivel quando da implantao de um empreendimento industrial com a finalidade de produzir lcool a partir da mandioca. Sabe-se que, a nvel industrial, muitos detalhes ainda esto sendo estudados, necessitando, portanto, em muitos casos, de uma definio em termos mais concretos.

2.6

Fermentao

Nesta fase, o mosto da mandioca, anteriormente sacarificado, sofre a ao bioqumica das leveduras, resultando da a converso dos aucares em lcool etlico e CO2, alm de pequenas quantidades de compostos secundrios.

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A fim de efetuar a fermentao do mosto, procura-se inicialmente obter uma rpida multiplicao das leveduras para obter o que se denomina de mosto semente. A seguir, semeia-se o mosto principal, onde se processa a fermentao propriamente dita. A preparao do mosto semente feita a partir de certa quantidade de p de fermentao em aparelhos multiplicadores de fermento. Normalmente usa-se um volume de p de fermentao equivalente a 2 a 5% do volume do mosto a ser fermentado. Utiliza-se, para tanto, cultura pura de Saccharomyces cerevisiae, selecionada, para fermentar o mosto. O fermento dever ser selecionado de modo a apresentar o mximo de atividade nas condies em que vai trabalhar. O fermento comercial, ou seja, o fermento de padaria, tambm pode ser utilizado nesta operao, porm deve-se dar preferncia s raas de leveduras puras, provenientes de culturas desenvolvidas nos laboratrios das usinas e propagadas em volumes crescentes de acordo com a quantidade de mosto da mandioca conforme foi relatado anteriormente. No incio da fermentao, o pH mais elevado e o teor de acares mais alto. No decorrer da fermentao o pH vai caindo sistematicamente, o mesmo ocorrendo em relao ao teor de acar que vai decaindo, em funo de sua transformao em lcool etlico. O fermento alcolico dever possuir uma tolerncia ao lcool etlico para evitar que parte dos acares do mosto no seja fermentada, advindo da um baixo rendimento alcolico. Os fermentos de destilaria trabalham eficientemente quando a temperatura do mosto se mantm entre 28 e 30C. O mosto resultante da sacarificao previamente resfriado e conduzido para as dornas de fermentao. Nas grandes destilarias so usadas dornas fechadas, dotadas de sistemas de circulao de mosto e recuperao do gs carbnico. As dornas so esterilizadas com vapor, antes de receberem o mosto, com a finalidade de evitar o desenvolvimento de bactrias indesejveis. O mosto e o p de fermento so adicionados simultaneamente na dorna de fermentao. Junta-se certa quantidade de gua para se obter uma concentrao ao redor de 18% e o pH ajustado ao redor de 5. A fermentao, a uma temperatura de 30C, dura aproximadamente 65 horas.

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Uma vez determinada a fermentao, as dornas so esvaziadas e o mosto fermentado filtrado e conduzido aos tanques que alimentam as colunas de destilao. O mosto fermentado tem, em sua composio, lcool etlico e dixido de carbono, alm de pequenas quantidades de cidos orgnicos, aldedos, steres e lcoois superiores. Alm desses compostos so encontrados, ainda, leveduras, bagaos, fibras e outras matrias slidas que devem ser separadas por filtrao antes de o mosto fermentado ser enviado s colunas de destilao. Esquematicamente a fermentao ocorre da seguinte maneira;

3.1

Agentes de fermentao alcolica

As leveduras, de um modo geral, so capazes de desdobrar a glicose, com produo de lcool etlico e gs carbnico. Entretanto, o nmero de espcies envolvidas na fermentao industrial bastante reduzido. A levedura empregada na fermentao, depende de vrias circunstncias, entre as quais o substrato ou a matria-prima utilizada, o teor alcolico desejado no produto final, a durao da fermentao, as propriedades do produto, e outros. As espcies mais importantes so: Leveduras a) Saccharomyces cerevisiae Hansen utilizada principalmente na produo de lcool comum, aguardente, cerveja e outras bebidas e na panificao; b) S. ellipsoideus Hansen (S. cerevisiae var. ellipsoideus Dekker) utilizadas na produo de vinho de uva; c) S. calbergensis , para a produo de cerveja. Enzimas amiliticas

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a) Alfaamilase (endoamilase), que ataca as molculas de amilose e amilopectina produzindo dextrinas; b) Betaamilase (exoamilase), hidrolisa as dextrinas produzidas pela enzima alfaamilase, formando maltose em grande quantidade. c) Glucoamilase ou amilo - 1,6 glicosidase, enzima liquidificante e sacarificante, que hidrolisa completamente o amido em glicose a partir de uma extremidade no redutora. a nica capaz de hidrolisar ao mesmo tempo ligaes alfa (14) e alfa (16).

2.8

Fatores que afetam a fermentao

Entre vrios fatores ambientes que afetam a fermentao do amido podemos citar: a) Temperatura, varivel de acordo com o tipo e finalidade do processo; assim, o timo para a produo de lcool, aguardente, vinho e outros produtos se situa entre 26 e 32 C, e para a cerveja, est entre 6 a 20C; b) pH do mosto, tambm varivel entre 4,0 e 4,5 para a produo de lcool, entre 4,0 e 6,0 para a cerveja. O pH baixo inibe o desenvolvimento de bactrias contaminantes, sem prejudicar o desenvolvimento da levedura. c) Concentrao matria prima: se bem que a levedura suporta concentraes de acar em torno de 22 a 24%, nos processos industriais ela varivel de acordo com a finalidade do processo: situa-se entre 12-14% no melao, para a produo de lcool, entre 69% para a produo de cerveja, entre 22-24% no suco de uva para obteno de vinho; d) Teor alcolico do produto, o aumento do teor alcolico do mosto em fermentao inibe o desenvolvimento da prpria levedura: no geral este cessa, concentraes de 11-l2% do lcool. Deve-se terem conta que o teor alcolico depende do teor inicial em aucares, o

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qual, por sua vez, varivel com o fim que se tem em mira. Na produo do lcool industrial, por exemplo, parte-se de uma concentrao baixa de aucares (12-14%) para se obter seu desdobramento total em 24-48 horas, sem que a levedura seja inibida pelo teor alcolico final; e) Oxignio em anaerobiose, o rendimento em lcool maior, uma vez que, em aerobiose, h oxidao total da glicose. f) Elementos minerais; certos tipos de matrias primas requerem a adio de substncias minerais para suprir as necessidades da levedura em certos elementos principalmente P e K (geralmente adicionados sob a forma de K2HPO4).

2.9

Destilao

A destilao um processo fsico pelo qual os diversos componentes de uma mistura so separados em virtude da diferena de seus pontos de ebulio. O princpio da destilao baseia-se no fenmeno de fracionamento dos lquidos, onde os mais volteis, com pontos de ebulio mais baixos separam-se em primeiro lugar, seguidos pelos outros componentes em seqncia correspondente s suas respectivas volatilidades. No mosto fermentado so encontradas substncias volteis e substncias fixas. As substncias volteis contm, alm da gua, diversos lcoois, aldedos, steres e cidos que, na destilao, comeam a separar-se conforme seus pontos de ebulio. Assim que, os mais volteis, conhecidos como lcool de cabea, iniciam o processo, seguindo-se o lcool etlico, o lcool de mau gosto ou cauda e, finalmente, o leo fsel. As substncias fixas so constitudas pelos resduos da destilao que so separadas em forma de vinhoto e gua de lutter. O processo de destilao compreende as seguintes fases: a) pr-aquecimento e aquecimento do vinho at o seu ponto de ebulio;

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b) aquecimento acima desse ponto at a total evaporao de lcool contido no vinho; c) enriquecimento progressivo dos vapores alcolicos; d) condensao dos vapores alcolicos; e) resfriamento do lquido condensado. O mosto fermentado, que nestas condies passam a ser chamado de vinho, contm geralmente teores que variam de 8 a 11% de lcool, aproximadamente. Sua destilao requer cuidados especiais, visto que os aparelhos comuns usados na destilao de melao e caldo de cana fermentado no so adaptados ao trabalho com mandioca, uma vez que com esta aparelhagem se obtm, como resultado da destilao do mosto da mandioca, um lcool de m qualidade, rico em aldedos e acido ciandrico, alm de apresentar um rendimento industrial baixo, ou seja, de 45 a 50%. Utilizando-se o sistema de pasteurizao, possvel obter lcool de qualidade excelente para bebidas, indstrias farmacuticas e de perfumes, os quais so conhecidos como lcoois finos. Este processo evita o acumulo de produto de cabea na parte superior da coluna, permitindo a separao do lcool fino. Seu princpio consta de uma coluna especial de aldedos, onde se concentram as cabeas. A seguir o lcool inferior no pasteurizado separado no condensador do lcool pasteurizado. O destilado proveniente das colunas coletado em tanques de armazenamento situado a certa distncia do edifcio onde esto localizadas as colunas de destilao, tendo em vista tratar-se de material inflamvel. A vinhaa ou vinhoto, proveniente da destilao da mandioca, serve como alimento animal ou para ser usado em adubao, com a grande vantagem de no conter cidos, como ocorre com o vinhoto originado da cana.

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2. AVALIAO DA CELULASE E PECTINASE COMO ENZIMAS COMPLEMENTARES NO PROCESSO DE HIDRLISE SACARIFICAO DO FARELO DE MANDIOCA PARA A PRODUO DE ETANOL

3.1

Introduo

Gerado na etapa de separao da fcula de mandioca, o farelo-massa ou bagao um resduo slido composto pelo material fibroso da raiz e parte da fcula que no foi possvel extrair no processamento. Gerado em grandes quantidades, cerca de 930kg com 85% de umidade para cada tonelada de raiz processada, e com uma composio mdia de 75% de amido e 15% de fibras na base seca, tem se apresentado como um grande problema para os industriais, que doam ou vendem o resduo a preos muito baixos a fazendeiros para a alimentao animal (CEREDA, M. P). Vrias pesquisas esto sendo desenvolvidas no sentido de aproveitar este resduo, visando gerar uma nova receita para as fecularias, alm de beneficiar o meio ambiente. Frente ao elevado teor de amido, uma das linhas de pesquisa que tem suscitado o interesse dos industriais a produo de etanol a partir do farelo. Um dos principais problemas no processo de produo de etanol de farelo a concentrao de slidos, visto que em concentraes de slidos acima de 10% o rendimento baixo, devido a problemas de transferncia de calor, homogeneizao da pasta e sacarificao no uniforme.

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O uso de enzimas complementares no processo de hidrlise do farelo de mandioca advm como uma alternativa para aumentar o rendimento do processo. Diante do elevado teor de fibras tem sido proposto o uso da celulase como enzima complementar no processo de hidrlise e sacarificao. Tambm com o objetivo de aumentar o rendimento do processo vem sendo estudado o uso de pectinases como auxiliares na liquefao da pasta, favorecendo a ao das amilases. Uma outra dificuldade no processo de obteno de etanol a partir de farelo de mandioca que parte dos acares obtidos fica retida no resduo fibroso final. A lavagem deste com gua no demonstrou ser vivel, visto que promove uma diluio acentuada do hidrolisado sendo necessria a concentrao para fermentao ou uso de maior volume de tanques. Portanto, objetivou-se avaliar o uso da celulase e pectinase como enzimas complementares no processo de hidrlise enzimtica do amido e a prensagem como mtodo de extrao dos acares, visando melhorar a eficincia do processo de hidrlise-sacarificao para produo de etanol a partir de farelo de mandioca (LEONEL, M). Foram comparados quatro tratamentos enzimticos de hidrlise e sacarificao do farelo em suspenses de 500g (p/p) de farelo e gua com 12% de amido. No Tratamento 1, utilizou-se o processo enzima-enzima com a -amilase (Termamyl 120L) e amiloglucosidase (AMG 200L) comerciais . No Tratamento 2, foram utilizadas a celulase (Celluclast 1.5 L) e a pectinase (Pectinex Ultra SP-L) como enzimas complementares a T1. No Tratamento 3, utilizou-se a celulase como complementar a T1 e no Tratamento 4, foi utilizada a pectinase como enzima complementar. As enzimas utilizadas foram concedidas pela Novo Nordisk S/A - Araucria-PR, e as condies de uso foram as recomendadas pelo fabricante. A Figura 3 mostra o fluxograma dos processos de hidrlise e sacarificao nos diferentes ensaios.

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Figura 3. Fluxograma dos processos de hidrlise-sacarificao.

Os resduos fibrosos finais resultantes do processo de hidrlise-sacarificao foram caracterizados quanto a: umidade inicial (%), matria-seca (g), cinzas (g), fibras (g), protenas (g) , amido (g), acares totais retidos (g) e seu perfil (g). Os resultados das anlises dos hidrolisados obtidos nos diferentes tratamentos enzimticos so apresentados no Quadro 1.

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O peso mdio do hidrolisado obtido aps a prensagem dos resduos dos diversos tratamentos foi analisado, visando-se avaliar os tratamentos, quanto facilidade de extrao e s quantidades geradas. Os resultados demonstraram no haver diferena significativa entre os Tratamentos T1 e T3 e entre os Tratamentos T2 e T4, portanto, o Tratamento T3 no qual foi utilizada a celulase como enzima complementar no diferiu, quanto a este parmetro, do T1 no qual no foram usadas enzimas auxiliares. J os Tratamentos T2 e T4 apresentaram um rendimento superior aos demais, sendo tambm superior ao obtido por LEONEL, com a lavagem do resduo, evidenciando a maior eficincia da prensagem do resduo aps a drenagem, em comparao ao uso de gua para extrao. Quanto ao Brix dos hidrolisados, a anlise dos resultados demonstrou que quando se adicionou celulase como enzima auxiliar ocorreu um aumento significativo do Brix, quando comparado com T1. Todavia, quando se utilizou a pectinase (T4), o hidrolisado obtido no diferiu quanto a este parmetro do Tratamento T2, evidenciando a maior eficincia desta enzima auxiliar em comparao a celulase. O Tratamento T1 apresentou Brix inferior aos

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demais tratamentos, sendo que T2 e T4, da mesma forma que para o peso, foram os melhores tratamentos. Em relao ao total de acares presentes nos hidrolisados, a anlise dos resultados demonstrou no haver diferena significativa entre T1 e T3 e entre T2 e T4, da mesma forma que para o peso do hidrolisado. Observou-se tambm que os teores de acares nos hidrolisados de T2 e T4 foram quase o dobro dos obtidos em T1 e T3. A anlise desses resultados, em conjunto com os obtidos para o peso e Brix, conduz hiptese de que a pectinase seria a enzima auxiliar responsvel pelo aumento do rendimento do processo de obteno de hidrolisado de glicose, a partir de farelo de mandioca. Os resultados obtidos para o perfil de acares nos hidrolisados demonstraram no haver diferena entre T1 e T3 e entre T2 e T4 para o teor de glicose. Porm, houve diferena para maltose entre T2 e os demais tratamentos, sendo tambm observado neste tratamento teor mais elevado deste acar. No ocorreu diferena significativa para o teor de maltotriose entre os tratamentos e, quanto as dextrinas, o Tratamento T2 foi o que apresentou teor mais elevado. A diferena de perfil de acares do Tratamento T2 levanta a hiptese de que a ao conjunta da celulase e pectinase promoveram uma melhor extrao dos acares totais retidos no resduo fibroso, permitindo que acares de peso molecular maior fossem extrados na prensagem. Os resduos slidos resultantes do processo de extrao foram caracterizados com o objetivo de se avaliar a eficincia do processo de hidrlise. Os resultados da anlise de comparao dos tratamentos para os resduos finais so apresentados no Quadro 2.

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No houve diferena significativa entre os Tratamentos enzimticos T1 e T3 e entre os Tratamentos T2 e T4 para as variveis umidade e matria seca. Isto permite inferir que no tratamento com adio de pectinase como auxiliar (T4), a eficincia do processo de hidrlise da matria seca inicial foi igual obtida no processo onde se utilizaram as duas enzimas complementares (T2), e o dobro da obtida nos demais tratamentos. Observou -se tambm, que nesses tratamentos (T2 e T4) ocorreu uma menor reteno de umidade pelos resduos, o que apia a hiptese de que a adio das enzimas, particularmente da pectinase, torna o processo mais eficiente. Quanto s fibras, os resultados demonstraram no haver diferena significativa entre os Tratamentos T1 e T3. A menor quantidade de fibras nos Tratamentos T2 e T4 leva hiptese de que parte destas tenham sido hidrolisadas ou extradas com a prensagem. As anlises dos teores de amido e acares totais mostraram no haver diferena significativa entre T1 e T3 e, entre os Tratamentos T2 e T4, entretanto, observou-se que em

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T1 e T3 a quantidade de amido no hidrolisada e a reteno de acares foram bastante superiores s encontradas em T2 e T4, o que evidencia a eficincia do processo com pectinase (T4) em comparao aos demais processos de hidrlise e sacarificao do farelo. No Tratamento T3, onde foi utilizada celulase como auxiliar no processo, os resultados obtidos para o resduo final foram bastante semelhantes aos encontrados por LEONEL & CEREDA , que observaram 31,42% do amido inicial retido no resduo final que apresentou 77,6% de umidade e 42,7% de matria seca hidrolisada. A anlise do perfil de acares nos resduos finais mostrou que todos os tratamentos diferiram significativamente quanto ao teor de glicose, sendo este o acar que predominou no resduo em T4 (91,06%). Nos demais tratamentos a porcentagem foi de 59,6% em T1, 78,1% em T2, 75,72% em T3 e 91,06%. Quanto aos acares, maltose, maltotriose e dextrinas, no ocorreu diferena significativa entre T2 e T4, sendo que o Tratamento T1 foi o que reteve maior quantidade destes no resduo. Estes resultados confirmam a hiptese proposta de que a ao das enzimas complementares promoveria uma alterao do perfil de acares no hidrolisado e como conseqncia uma melhor extrao de maltose, maltotriose e dextrina.

3.2

Rendimento dos processos

Atravs da anlise dos resultados obtidos na caracterizao dos resduos finais, bem como dos hidrolisados, estabeleceu-se o balano de massa dos diferentes tratamentos (Figura 4), e observou-se que no Tratamento T1 no qual o processo iniciou com 74,99g de matria seca das quais 60g era amido ; 63,42% do amido, 43, 07% da matria seca e 11,0% das fibras foram hidrolisados, resultados estes bastante semelhantes aos obtidos nas mesmas condies por LEONEL . No Tratamento T2 foi observado que 89,55% do amido, 76,36% da matria seca e 36,42% das fibras foram hidrolisados, resultado superior ao obtido por SRIKANTA et al. na hidrlise de farelo de mandioca, utilizando a -amilase e amiloglucosidase que foi de 76%.

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FIGURA 4. Balano de massa dos processos.

No Tratamento T3, em que se utilizou a celulase como enzima complementar obteve-se hidrlise de 65,42% do contedo de amido, 45,11% da matria seca e 3,03% das fibras. Estas porcentagens foram bastante semelhantes s obtidas no T1, com exceo das fibras, demonstrando pouco efeito da celulase como enzima complementar. Estes resultados esto de acordo com os obtidos por BERTOLINI e por LEONEL & CEREDA. J no Tratamento T4, que utilizou pectinase como auxiliar no processo foi observado que 88,73% do amido, 73,08% da matria seca e 23,9% das fibras foram hidrolisados, o que demonstrou uma eficincia 25% superior obtida nos tratamentos sem enzima complementar (T1) e com celulase (T3).

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Quanto aos acares retidos no resduo observou-se que 27,67% do total obtido ficaram presos ao resduo em T1, 8,99% em T2, 27,37% em T3 e 10,43% no Tratamento T4. SRIKANTA et al. observaram que cerca de 24% do total de acares, obtidos no processo de hidrlise enzima-enzima, ficaram retidos no resduo aps prensagem. De acordo com a composio do farelo e com os dados de balano de massa para o processamento da mandioca em uma fecularia, possvel estimar a produo de etanol a partir do farelo de mandioca para cada tonelada de mandioca processada. A Figura 5 mostra a estimativa terica da produo de etanol a partir dos resultados obtidos no Tratamento T1 (sem enzimas complementares) e no Tratamento T4 (pectinase como enzima complementar).

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FIGURA 3. Fluxograma da produo terica de etanol a partir do farelo por tonelada de mandioca processada nos Tratamentos enzimticos T1 e T4

Analisando-se estes resultados pode-se verificar a eficincia da utilizao de enzimas auxiliares no processo de obteno de hidrolisado de glicose, a partir de farelo de mandioca, para fins de fermentao alcolica, em especial a pectinase como enzima auxiliar promotora do aumento no rendimento do processo.

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3. CONCLUSES
A utilizao da mandioca como fonte de carboidratos para produo de etanol sempre foi considerada tomando-se como referencial a cultura da cana-de-acar, que lhe concorre com vantagens nada desprezveis. De um lado uma cultura, predominantemente, de utilizao na alimentao na forma in natura, ou como farinha, atendendo extensas populaes; de outro, uma cultura praticada intensivamente para produo de acar, que, suprindo a demanda interna, acessa importantes mercados de exportao. Fatores outros determinaram a convergncia de recursos financeiros e humanos no desenvolvimento de tecnologias para a produo de cana-de-acar, e tambm a melhorias no processo agroindustrial, de modo que aps a maturao destes investimentos, principalmente no perodo de 1970 at 1990, a realidade nos oferta um sistema otimizado de produo de acar e/ou lcool de qualidade. O mesmo no aconteceu com a cultura e agroindustrializao da mandioca que tem caminhado com o apoio tradicional de organismos de fomento pesquisa como o CERAT, o IAC, O IAPAR, a EMBRAPA. Para a cultura da mandioca existe ainda muito espao a ser conquistado em termos de produtividade agronmica, enquanto que para cana-de-acar, que h anos vem desenvolvendo seu potencial agronmico, os incrementos em produtividade vo sendo menores e a maiores custos. O requerimento de um pr-tratamento como diferena de processo ainda , primeira vista, uma desvantagem para o amido, mas, por outro lado, esses carboidratos se apresentam em maiores concentraes por unidade de matria-prima vegetal, o que significa uma vantagem, por diminuir, consideravelmente, o manuseio dos significativos volumes mssicos, com implicaes em investimentos; custeio do sistema; custos de logstica, energia, mo de obra, remoo de resduos.

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Como se observa, os amidos so uma importante fonte de carboidratos para processos de fermentao etanlica, e as pesquisas, tanto no desenvolvimento da produtividade agrcola, quanto para otimizao dos sistemas de produo, certamente, iro diminuir ainda mais a lacuna existente na sua utilizao, e traro maior valorizao destas matrias primas representadas pelas tuberosas amilceas, alm que o lcool feito a partir dos resduos da produo de fcula de mandioca pode ser aproveitado como combustvel e tambm nas indstrias farmacutica e de cosmticos, dependendo de seu teor alcolico. Quanto a avaliao da celulase e pectinase como enzimas complementares na produo de etanol, pode-se concluir o seguinte:

O uso da pectinase como enzima complementar no processo de hidrlise do amido proporcionou aumento no rendimento, ocorrendo a hidrlise de 88,73% do amido, 73,08% da matria seca inicial e 23,9% das fibras, demonstrando uma eficincia 25% superior que a obtida nos tratamentos sem esta enzima;

A celulase como enzima complementar no mostrou efeito significativo no rendimento da hidrlise; A produo terica de etanol, a partir do farelo de mandioca para cada tonelada de mandioca processada, seria de 48 litros no tratamento com pectinase, ou seja, 86% superior obtida sem o uso desta enzima no processo de hidrlise-sacarificao.

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4. BIBLIOGRAFIA
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