Universidade Federal do Vale do So Francisco Roteiro de Aula Prtica: Carboidratos 1.

Teste de Molisch

Reao geral para carboidratos A ao desidratante de cidos concentrados sobre os monossacardeos leva formao de furfural e derivados. As aldopentoses formam o furfural e as hexoses produzem o hidroximetilfurfural. Os aldedos de furano podem se condensar com fenis e aminas dando compostos coloridos do tipo trifenilmetano. Este o fundamento da reao que considerada geral para carboidratos e conhecida como teste de Molisch. Reagem pentoses e hexoses no apenas como monossacardeos livres, mas tambm so positivos no teste todos os compostos que levam carboidratos ligados: polissacardeos, glicoprotenas, glicolipdeos e outros, que so hidrolisados pelo cido sulfrico concentrado.

Tcnica: Marcar 4 tubos e distribuir neles: - Tubo 1: 2 mL de soluo de glicose 1 % - Tubo 2: 2 mL de soluo de sacarose 1 % - Tubo 3: 2 mL de soluo de amido 1 % - Tubo 4: 2 mL de gua destilada (tubo controle)

Aos 4 tubos adicionar 5 gotas de soluo de alfa-naftol. Misturar por leve agitao. Pipetar com muito cuidado cerca de 2 mL de cido sulfrico (extremamente corrosivo, no aspirar o cido, usar pipeta de 10 mL) e deixar o cido escoar lentamente pela parede do tubo sem agitar, a fim de se formar uma camada de cido por debaixo da soluo teste. Sem agitar, colocar o tubo na estante. A reao positiva quando aparece um anel violeta na interfase. O surgimento de colorao esverdeada na camada inferior devido a impurezas do naftol. Anotar o resultado em forma de tabela. 2. Teste de Benedict

Reao para identificar carboidratos redutores. Os monossacardeos e alguns dissacardeos possuem em suas estruturas grupos aldedo ou cetona, livres ou hidratados. Estes podero reduzir certos ons metlicos contidos em reagentes especiais. A maioria desses reagentes contm sais de cobre e so usados para pesquisa de acares redutores.

Um destes reagentes o de Benedict que contm sulfato cprico, carbonato de sdio e citrato de sdio. Este ltimo composto produz um complexo azul com cobre divalente e isto evita a formao de hidrxido cprico insolvel no meio alcalino.

Sob ao de um agente redutor, o cobre divalente reduzido a cobre monovalente que no pode formar um complexo solvel com o citrato. Consequentemente, o cobre precipita sob a forma de hidrxido cuproso, de cor amarela. Por aquecimento, o hidrxido cuproso passa a xido cuproso de cor vermelha. Tcnica: Marcar 4 tubos e colocar em cada um 3 mL do reativo de Benedict. - Tubo 1: adicionar 1 mL de soluo de glicose - Tubo 2: adicionar 1 mL de soluo de sacarose - Tubo 3: adicionar 1 mL de soluo de amido - Tubo 4: adicionar 1 mL de gua destilada (tubo controle) Colocar todos os tubos no banho-maria fervente por 3 minutos. Retirar os tubos e anotar os resultados em forma de tabela. 3. Hidrlise do amido Teste de iodo

Identificao de polissacardeos. Alguns polissacardeos reagem com o iodo formando produtos coloridos. Com o amido, a cor azul, com o glicognio castanho-avermelhado. Os monossacardeos no reagem. No amido, a frao no ramificada (amilose) que responsvel pela formao do complexo da cor azul. A amilopectina reage de forma semelhante ao glicognio. Tcnica: Marcar 4 tubos e distribuir neles. - Tubo 1: 2 mL de glicose 1 % - Tubo 2: 2 mL de sacarose 1 % - Tubo 3: 2 mL de amido 1 % - Tubo 4: 2 mL de gua destilada (tubo controle) Aos 4 tubos adicionar duas gotas da soluo de lugol (o reativo de lugol uma soluo de poliiodetos, produzidos por dissoluo de iodo metlico numa soluo de iodeto de potssio, e ele reage como se fosse iodo elementar). Anotar os resultados em forma de tabela.

Reverso da reao do iodo pelo calor

Colocar 1 tubo do ensaio anterior no banho-maria fervente por alguns minutos at o desaparecimento da cor azul. Resfriar em gua corrente. O que se observa? A cadeia da amilose (frao no ramificada do amido) tem a conformao de uma hlice que absorve o iodo no interior da espiral. Este complexo forma-se por interaes fracas que podem ser desfeitas pelo calor. Hidrlise do amido

O amido quando tratado por um cido a quente, sofre uma hidrlise sucessiva, dando vrias dextrinas e como produtos finais, maltose e glicose. As dextrinas tm tamanhos diferentes, mas conservam, em princpio, a estrutura em hlice do amido. Em conseqncia, as dextrinas absorvem o iodo e suas reaes com o reativo de lugol geram solues coloridas, as diferenas de colorao permitem classificar as diferentes dextrinas. As cores observadas so: amido (azul); amilodextrina (roxa); eritrodextrina (alaranjada) e acridextrina (no d cor).

Tcnica: Preparar um banho de gua fervente e numerar 7 tubos de ensaio. Num erlenmeyer, colocar 30 mL da soluo de amido a 15 % e 7 mL de HCl 2N. Transferir 3 mL dessa mistura para cada um dos tubos. Ao tubo 1 adicionar 1 gota do reativo de lugol e observar a cor azul que se desenvolve. Colocar os tubos restantes no banho de gua fervente. Cada tubo ser retirado ao trmino dos perodos de tempo indicados no quadro abaixo e, depois de resfriado em gua corrente, receber uma gota de lugol, com exceo do tubo 7. Ao tubo 7 adicionar 3 mL do reativo de Benedict e retornar ao banho de gua fervente. O aparecimento de um precipitado vermelho ou alaranjado indica a presena de substncia redutora, no caso maltose ou glicose. Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Minutos de reao 0 2 5 10 15 20 25 Cor com iodo Produtos identificados