1

I.

INTRODUCCION

Los aceites esenciales se han usado desde la antigedad para tratar enfermedades, en productos de belleza, adoracin a varios dioses y hasta en el proceso de momificacin. Estos maravillosos aceites poseen muchas propiedades beneficiosas. Cada aceite tiene una identidad, un aroma y unas caractersticas propias que muchas veces se usan en la industria de alimentos. El limn es muy conocido en la actividad culinaria, en la Industria alimentaria e incluso en la parte curativa, ya que es un antisptico, astringente, calmante, antirreumtico, ayuda al sistema nervioso, depurativo diurtico, antianmico, expectorante, ayuda a combatir la acidez

gastrointestinal, antiescorbtico, y tonificante. El aceite de limn en general es un aceite que se mezcla bien con otros ingredientes y tiene usos muy variados, siendo un ingrediente de un sin nmero de alimentos segn los hbitos de consumo. Pero el limn rugoso no tiene mucha aceptacin ni como jugo, ni como sub productos y es la cscara que ocupa un buen porcentaje del fruto que notoriamente tiene un considerable contenido de aceites esenciales, que desconocemos su rendimiento y sus caractersticas fisicoqumicas, que nos permitan darle uso industrial y medicinal o en todo caso darle uso en la ingeniera de los alimentos como un producto nutracutico. A la fecha no se han reportado investigaciones o estudios realizados, a esta variedad de limn, ya sea en el producto principal que es el jugo o en los

2 sub productos, siendo uno de ellos la cscara del cual podemos obtener aceites esenciales. En nuestra zona la cscara de limn rugoso son desechadas, esto nos indica que no se aprovecha ntegramente el sub producto presente en la cscara, que es el aceite esencial que tiene gran demanda en nuestro pas y en el exterior, la cual puede ser utilizada para el beneficio econmico de la regin, ante lo expuesto nos planteamos los siguientes objetivos: Caracterizar la materia prima y el sub producto a utilizarse. Determinar el procesamiento ptimo para la obtencin de aceite esencial a travs de destilacin en corriente de vapor a partir de cscara de limn rugoso. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial obtenido de la cscara de limn rugoso (Citrus limonia).

II.

REVISIN BIBLIOGRAFICA

2.1. Antecedentes ROTHSTEIN G. E. Y ROLDN V. J.C. (2010), manifiestan que dadas las nuevas tendencias basadas en produccin ms limpia, cero desperdicios y productos verdes, muchos productos que hasta ahora slo son desecho se han convertido en un factor importante de la industria. De la intencin de contribuir por medio de las corrientes mencionadas al desarrollo de sistemas productivos ms amigables con el ambiente nace este proyecto que pretende utilizar de una mejor manera el desperdicio de una empresa productora de zumo: cscara de naranja. A esta se le hace un proceso en el cual se le extraen aceites esenciales. Los desperdicios resultantes del proceso son finalmente utilizados en una planta de concentrados para animales. El aceite esencial de la cscara de la naranja se denomina limoneno, este producto es utilizado como materia prima para la fabricacin de productos cosmticos, farmacuticos, qumicos, agropecuarios, entre otros. Existe diversidad de mtodos de extraccin de acuerdo con la pureza que se requiera del producto, ya que para cada finalidad la calidad puede variar. El mtodo de extraccin que genera un producto de mayor pureza es por medio de fluidos supercrticos. El precio del limoneno depende de la calidad del producto, el cual es determinado por el grado de pureza, siendo tan sensible que puede llevar a que el proyecto sea viable o no segn como se encuentre el mercado.

4 La tecnologa para alcanzar mediana o alta pureza es bastante costosa, lo que ha llevado al usuario final a hacer importacin de esta materia prima y se han dejado de aprovechar las ventajas que se tienen en Colombia para el cultivo de naranja. Es importante anotar que el proyecto se basa solo en la extraccin de aceite esencial, y los dems procesos que pueden generar ahorro econmico le darn un valor agregado a la cadena, mas no se involucraron para as hacer el anlisis de factibilidad del proyecto como tal. ALBALADEJO M. Q. (1999) dice que adems de las determinaciones habituales de caractersticas fsico-qumicas del aceite esencial de limn, se introducen las de color mediante el colormetro digital, y de densidad, mediante densmetro electrnico. El estudio gas cromatogrfico para determinar el orden de elucin caracterstico, se realiza en columnas capilares de slice fundida: OV-101 apolar, CPWax-52-CB muy polar y HP-5 ligeramente polar. Comparando los resultados, se logra la identificacin de setenta y cuatro componentes, ya que son complementarias en cuanto a separacin de algunos de ellos. As mismo, se determinan las condiciones cromatogrficas que mejoran la resolucin. Observando las evoluciones de los distintos componentes del aceite esencial durante la campaa de elaboracin, se deducen relaciones entre constituyentes mayoritaria y minoritaria. Se fijan los valores mximos y mnimos encontrados para los distintos componentes y los porcentajes por grupos funcionales para el aceite esencial de limn espaol.

5 La importancia tecnolgica y econmica que tiene la determinacin de las normas de calidad de un producto como el aceite esencial de limn, justifica el inters de la presente memoria de Tesis doctoral. Ser preciso que los organismos internacionales determinen, junto con las normativas comunes de tcnicas analticas hasta ahora recogidas, unas bases de datos, que permitirn conocer la influencia de los distintos factores externos sobre las campaas anuales y, en concreto, las relaciones entre distintos componentes. Por ltimo se aportan los valores para colaborar en la elaboracin de la norma de calidad para aceite esencial de limn obtenido en Espaa.

2.2. Caractersticas del limn Gracias a la acidez del limn que se cultiva en el Per, los derivados de este producto cuentan con caractersticas especiales que los hacen ms provechosos frente a los de otros pases del mundo.

Nombre vulgar: Limn Nombre cientfico: Citrus limonum Risso, Citrus limon (L.) Burm Familia: Rutceas Hbitat: Cultivado por sus frutos y como rbol de jardn en zonas clidas mediterrneas junto al mar. Probablemente deriva de las especie " Citrus medica L.", natural de la India. El Limonero Citrus limonium es un pequeo arbolillo perteneciente a la familia de las Rutceas, de ramas de corteza verde y provistas de espinas.

6 Las hojas son elpticas, coriceas y con el borde finamente dentado. Las flores son muy olorosas, con los ptalos gruesos y de color blanco, aunque suelen presentar un tinte rosado en su cara exterior. El fruto, llamado limn, es ovoide terminado en un mameln, con una corteza de color amarillo plido que puede ser rugosa o lisa. Es ms sensible al frio que la mayor parte de los ctricos, por lo que su cultivo comercial se restringe a reas con temperaturas invernales benignas. El Limn se cultiva ante todo por su sabor cido. Su jugo, muy rico en vitamina C, se utiliza en bebidas y tiene varios empleos culinarios. Tambin se utiliza bastante en gaseosas de marca. Los principales productos secundarios son el cido ctrico, que se extrae del jugo, y el aceite del limn, que se saca de la cscara.

2.3. Componentes Qumicos Bsicamente tiene los siguientes compuestos qumicos: limoneno, citral, canfeno, pineno, felandreno, citronelal, terpinol, aldehdo etlico, acetato, de linalilo, acetato de geranilo, citropteno.

2.4. Importancia econmica y distribucin geogrfica Principales pases productores: Italia, U.S.A., Mjico y Espaa. Le sigue en importancia a la mandarina espaola, con una superficie de unas 45.000 hectreas y una produccin de alrededor de 750.00 toneladas, de las cuales el 50 % est destinado a la exportacin, el 20 % para la industria y el 30 % restante para consumo en fresco en el mercado nacional. La principal regin productora es Murcia (vega del Segura), que es una zona algo ms fresca de

7 lo que sera conveniente para la naranja. En Andaluca casi toda la produccin se recoge en Mlaga. En cuanto a los costes de produccin, ni la poda ni la recoleccin son muy representativos, sino que los costes estn asociados a la fertirrigacin (presenta numerosas deficiencias en macro y micronutrientes) y a los tratamientos fitosanitarios. Los precios obtenidos son similares para las tres especies, al igual que los rendimientos, aunque resultan algo superiores en mandarina y limn.

2.5. Material Vegetal

2.5.1.

Variedades Los criterios de seleccin de la variedad se basan en el

contenido de zumo, su calidad, y

presencia de

semillas. Entre las

variedades destacan: Verna (70 % de la produccin; recoleccin en febrerojulio), Fino (20 % de la produccin; se recolecta de octubre a febrero) y Eureka.

Verna rbol: Vigoroso con pocas espinas; frutos: El peso es de unos 130 gramos. Forma oval. Color exterior amarillo intenso. Pocas semillas. Corteza gruesa, lo que favorece el transporte y la manipulacin. Recoleccin de febrero a junio. Puede producir adems otra cosecha en verano de gran inters comercial.

8 Fino rbol: Muy vigoroso y de tamao muy grande. Tendencia a la emisin de brotes con espinas. Frutos: Tamao mediano de unos 110 gramos. Forma variable pueden ser esfricos u ovalados. Sin cuello en la base, mameln corto y puntiagudo. Ms semillas y piel ms fina que la variedad Verna. Recoleccin en primavera y segunda temporada (octubrefebrero). Gran calidad para consumo en fresco y para la industria. Su caracterstica ms importante es la precocidad ya que su permanencia en el rbol y su resistencia al manipulado son menores que en el Verna.

Eureka rbol: Tamao y vigor medio. Pocas espinas; frutos: Tamao mediano a grande de unos 120 gramos de peso. Forma elptica u oblonga. Cuello pequeo en la base y mameln apical delgado. Pocas o ninguna semilla. Corteza de espesor medio. Zumo muy cido, pulpa de color verdeamarillento. Rpida entrada en produccin. Puede producir dos cosechas, la primera, ms importante, se recolecta cuando el Fino o un poco antes. Variedad muy productiva. Es sensible al fro y al caro de las maravillas.

2.5.2.

Aplicaciones del Limn (Citrus Limonium)

A partir de la corteza del limn se obtiene la esencia, que es empleada en perfumera. Las flores proporcionan otra esencia an ms

9 apreciada. El zumo es bactericida por excelencia y sirve adems para quitar las manchas de tinta y da brillo al bronce y objetos metlicos, la corteza se emplea en pastelera. El aceite esencial del limn (citrus limonium) es uno de los aceites ms ricos en vitaminas, contiene sobretodo vitamina C y caroteno, que es un forma de vitamina A. Contiene tambin terpenos (limoneno, felandreno, pineno, sequiterpenos, citrol, citronelol, linelol), acetatos de linalol y geraniol, aldehdos, etc.). La esencia es obtenida presionando la parte exterior del pericarpio o corteza de la fruta. Son necesarios 4000 limones para obtener 1 Kg de aceite esencia. Tiene innumerables propiedades: es el ingrediente bsico en la industria de perfumes y se utiliza adems, en jabones, desinfectantes y productos similares. Tambin tiene importancia en la medicina, tanto por su sabor como por su efecto calmante del dolor y su valor fisiolgico. En caso de los aditivos, son combinados con los alimentos para producir ciertas modificaciones que impliquen conservacin, color, reforzamiento del sabor y estabilizacin, los cuales van a ayudar a efectuar una mejora sorprendente en nuestros suministros alimenticios, as como a disminuir el trabajo en la cocina.

2.6. Aceites Esenciales

Los aceites esenciales, son productos qumicos que forman las esencias odorferas de un gran nmero de vegetales. El trmino aceite esencial se aplica tambin a las sustancias sintticas similares preparadas a

10 partir del alquitrn de hulla, y a las sustancias semi sintticas preparadas a partir de los aceites naturales esenciales. Proceden de las flores, frutos, hojas, races, semillas y corteza de los vegetales. El aceite de espliego, por ejemplo, procede de una flor, el aceite de pachul, de una hoja, y el aceite de naranja, de un fruto. Ejemplo del aceite esencial procedente de un fruto, se demuestra el estudio realizado por R. Grosse y otros (2000), donde extraen el aceite

esencial de la naranja cajera citrus. El aceite esencial recuperado de la piel de naranja se usa en las industrias de saborizantes, materiales de limpieza, cosmtico y perfumes. La extraccin del aceite esencial de la piel de Naranja Cajera se realiz con un equipo de extraccin con CO2 supercrtico, a una temperatura constante de 35 a presiones de 100, 200 y 300 atmsferas y velocidades de flujo de 115 y litros/minutos en modo esttico y esttico dinmico. Los extractos obtenidos fueron analizados con un cromatgrafo de gases. Se observa un mejor rendimiento de extraccin a medida que se aumenta el flujo y se aumenta la presin. Entre los compuestos obtenidos se encuentran: benzaldehdo, terpineno, limoneno, linalool, canfor, acetato de benzilo, nerol, acetato de linalilo, acetato de geranilo, entre otros. Los aceites se forman en las partes verdes (con clorofila) del vegetal y al crecer la planta son transportadas a otros tejidos, en concreto a los brotes en flor. Se desconoce la funcin exacta de un aceite esencial en un vegetal; puede ser para atraer los insectos para la polinizacin, o para repeler a los

11 insectos nocivos, o puede ser simplemente un producto metablico intermedio. Los aceites esenciales son lquidos voltiles, en su mayora insolubles en agua, pero fcilmente solubles en alcohol, ter y aceites vegetales y minerales. Por lo general no son oleosos al tacto. Pueden agruparse en cinco clases, dependiendo de su estructura qumica: alcoholes, steres, aldehdos, cetonas y lactosas y xidos. Los aceites esenciales se utilizan para dar sabor y aroma al caf, el t, los vinos y las bebidas alcohlicas. Son los ingredientes bsicos en la industria de los perfumes y se utilizan en jabones, desinfectantes y productos similares. Tambin tienen importancia en medicina, tanto por su sabor como por su efecto calmante del dolor y su valor fisiolgico. Los aceites esenciales ms importantes estn bajo las formas siguientes: Esteres. Principalmente de cido benzoico, actico, saliclico y cinmico. Alcoholes. Linalol, geraniol, citronelol, terpinol, mentol, borneol. Aldehdos. Citral, citronelal, benzaldehdo, cinamaldehdo, aldehdo cumnico, vainillina. cidos. Benzoico, cinmico, mirstica, isovalrico todos en estado libre. Fenoles. Eugenol, timol, carvacrol. Cetonas. Carvona, mentona, pulegona, irona, fenchona, tujona, alcanfor, metilnonil cetona, metil heptenona.

12 Esteres. Celo, ter interno (eucaliptol), anetol, safrol. lactosas. Cumarina. Terpenos. Canfeno, pineno, limoneno, felandreno, cedreno. Hidrocarburos. Cimeno, estireno (feniletileno).

2.7. Procesos Qumicos para la extraccin de aceites esenciales

Los aceites esenciales se obtienen por alguno de los mtodos siguientes: destilacin en corriente de vapor, desterpenacin, extraccin con disolventes voltiles, expresin a mano o a mquina y enfleurage, proceso en el cual se utiliza grasa como disolvente. Hoy los aceites esenciales sintticos u obtenidos de fuentes naturales por cualquiera de esos cuatro mtodos, se purifican normalmente por destilacin al vaco. Los aceites esenciales en su mayor parte insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos, aunque una buena parte del aceite se alcanza a disolver en agua para proporcionar un intenso olor a la solucin. Estos

aceites tiene la volatilidad suficiente para destilarse intactos en la mayor parte de los casos y tambin son voltiles con vapor. Varan desde el color amarillo o caf hasta incoloros. Los ndices de refraccin de los aceites son altos, con un promedio de 1.5. Estos aceites muestran una gran variedad de actividad ptica y rotan en ambas direcciones. Los aceites voltiles se pueden obtener de las plantas o frutos por varios mtodos: por el acto de exprimir, por destilacin, por extraccin con disolventes voltiles, por enflurage y por maceracin. La mayor parte de los aceites se obtienen por destilacin, generalmente con vapor, pero ciertos

13 aceites se pueden daar con altas temperaturas. Los aceites esenciales de ctricos, tal como concibe Ojeda, y otros (1990) son mezclas complejas de compuestos terpenicos que contienen alrededor de 100 componentes (p. 336). Los aceites ctricos destilados son de calidad inferior por lo tanto se obtienen al exprimir Para ciertas flores que no liberan aceite por destilacin o lo hacen con deterioracin del aceite, se emplean los tres ltimos mtodos. Sin embargo, la extraccin con disolventes voltiles, un proceso relativamente reciente, ha sustituido a la maceracin (extraccin con grasas calientes) para todos los propsitos prcticos y est remplazando al enflurage. La extraccin por disolventes es el proceso ms avanzado en cuanto al aspecto tcnico y produce olores verdaderamente caractersticos, pero es ms costoso que la destilacin.

2.7.1.

La destilacin por vapor Generalmente se lleva a cabo a presin atmosfrica: si los

componentes del aceite pueden sufrir hidrlisis, el proceso se efecta a presin reducida. Gran parte de la destilacin de aceites esenciales se realiza en el sitio de recoleccin en alambiques muy toscos. Estos alambiques son tambores de aceite o cazuelas de cobre transformados y equipados con tubos condensadores que pasan a travs de una tubera de agua. Se cargan los materiales y agua en el alambique y los materiales secos, extrados con destilaciones anteriores, se queman en fuego directo para proporcionar calor. Su eficiencia es baja, y el aceite se contamina con productos de pirolisis como acrolena, trimetilamida y sustancias derivadas de la cerosota. Los

14 aceites crudos obtenidos de alambiques algunas veces se tratan nuevamente antes de su uso por rectificacin al vaco, por congelacin fraccionaria, por lavados con hidrxido de potasio para eliminar cidos libres y compuestos fenlicos, para eliminar aldehdos y cetonas deseadas o no deseadas a travs de la formacin de compuestos de adicin de sulfito o por formacin

de productos insolubles especficos, como la reaccin de cloruro de calcio con geraniol.

2.7.2.

Enflurage El proceso de enflurage es un proceso de extraccin de grasas

en fro que se aplica solo en algunos tipos de flores delicadas (Jazmn, tuberosa, violeta, etc) y que produce aceites que de ninguna forma se podran obtener por destilacin. La grasa o base consiste en una mezcla altamente purificada de una parte de sebo y dos partes de manteca, con 0.6% de benzona como conservador. Este mtodo ya no se emplea de modo comercial. Para la obtencin del aceite esencial del limn los procesos utilizados son: El de Expresin, Extraccin con disolventes voltiles, Desterpenacin y la destilacin al vaco.

2.7.3.

Exprimido Por maquinas puede producirse un aceite casi idntico al

producto exprimido a mano y es el mtodo aplicado en forma comercial. De los procesos de exprimir a mano, el proceso de esponja es el ms importante,

15 ya que produce el aceite de mayor calidad. Aqu la fruta se parte, y la piel se monda y se sumerge por varias horas; cada cscara se prensa contra una esponja y el aceite se absorbe en ella, que se exprime peridicamente. Una persona puede preparar solo 680 g de aceite de limn por da siguiendo este mtodo, aunque se practica especialmente en Silicia.

2.7.4.

Extraccin con disolventes voltiles. El factor ms importante para lograr xito en este mtodo es la

seleccin del disolvente. El disolvente debe: Ser selectivo, esto es disolver rpida y totalmente los componentes odorferos, con solo una parte mnima de materia inerte, Tener un bajo punto de ebullicin. Ser qumicamente inerte al aceite. Evaporase completamente sin dejar cualquier residuo odorfero. Ser de bajo precio, y de ser posible, no inflamable.

Se han empleado muchos disolventes, pero el mejor es el ter de petrleo altamente purificado y el benceno es el que sigue. El equipo de extraccin es complicado y relativamente costoso; consiste en alambiques para fraccionar el disolvente, bateras para extraer las flores y recipientes para concentrar las soluciones de aceites florales. Los dos tipos de extractores usados son el estacionario y el rotatorio.

16 En algunos aceites existe una gran cantidad de terpenos. Esto sucede especialmente con los aceites de limn y naranja, que contienen hasta 90% de d limoneno en su composicin normal. No solo son de poco valor los terpenos y sesquiterpenos para la fuerza y carcter de los aceites, sino que tambin se oxidan y polimerizan rpidamente en reposo para formar compuestos de un sabor fuerte y semejante a la trementina. Adems, los terpenos son insolubles con la baja intensidad del alcohol empleado como disolvente, por lo que forman soluciones oscuras que se aclaran con dificultad. De aqu que sea deseable eliminar los terpenos y sesquiterpenos de muchos aceites. Este tipo de aceite por ejemplo el de naranja, es 40 veces ms fuerte que el original y produce una solucin transparente en el alcohol diluido. El aceite tiene ahora una pequea tendencia a enranciarse, aunque no tiene la frescura original. Debido a que cada aceite tiene una composicin diferente, la desterpenacin requiere de un proceso especial. Se pueden aplicar dos mtodos, ya sea la eliminacin de terpenos, sesquiterpenos y parafinas por destilacin fraccionada a presin reducida, o la extraccin de los compuestos oxigenados ms solubles, con alcohol diluido u otros disolventes.

2.7.5.

Destilacin al Vaco Es un mtodo para destilar sustancias a temperaturas por

debajo de su punto normal de ebullicin es hacer el vaco parcial en el alambique. Por ejemplo, la anilina puede ser destilada a 100 C extrayendo el

17 93% del aire del alambique. Este mtodo es tan efectivo como la destilacin por vapor, pero ms caro. Cuanto mayor es el grado de vaco, menor es la temperatura de destilacin. Si la destilacin se efecta en un vaco prcticamente perfecto, el proceso se llama destilacin molecular. Este proceso se usa normalmente en la industria para purificar vitaminas y otros productos inestables. Se coloca la sustancia en una placa dentro de un espacio en el que se ha hecho el vaco y se calienta. El condensador es una placa fra, colocada tan cerca de la primera como sea posible. La mayor parte del material pasa por el espacio entre las dos placas, y por lo tanto se pierde muy poco.

2.8. Aparato de destilacin. Tcnicamente el trmino alambique se aplica al recipiente en el que se hierven los lquidos durante la destilacin, pero a veces se aplica a todo el aparato, incluyendo la columna fraccionadora, el condensador y el receptor en el que se recoge el destilado. Este trmino se extiende tambin a los aparatos de destilacin destructiva o craqueo. Los alambiques de laboratorio estn hechos normalmente de vidrio, pero los industriales suelen ser de hierro o acero. En los casos en los que el hierro podra contaminar el producto se usa a menudo el cobre, y los alambiques pequeos para la destilacin de whisky estn hechos por lo general de vidrio y cobre. A veces tambin se usa el trmino retorta para designar a los alambiques.

18

III.

MATERIALES Y MTODOS

3.1. Lugar de ejecucin. El presente trabajo se realizo en la Universidad Nacional Agraria de la Selva, situada en la ciudad de Tingo Mara, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco, con una temperatura promedio anual de 24 C y una variacin de temperatura entre 17 C Y 32 C, con 82% de HR. Se trabajo en los ambientes del Laboratorio de anlisis de alimentos, Laboratorio de Anlisis Sensorial y planta piloto de la Facultad de Ingeniera en industrias alimentarias.

3.2. Materia prima. La materia prima empleada para los experimentos preliminares y definitivos fueron la cascara de limn rugoso, se acopio en fundo La Quinta Bedela, ubicado en la localidad de Naranjillo.

3.3. Equipos, materiales y reactivos

3.3.1.

Equipos de Laboratorios Balanza analtica OHAUS Galaxy 160 sensibilidad 0.0001g Germany. Cocina elctrica de plataforma Barnstead / Thermolyne. U. S. A. Refrigeradora Icebeam Door Cooling LG GR-5392QLC.

19 Desionizador de agua modelo D 7035 (Barnstead) Germany. Espectrofotmetro Genesys 6 (Thermo Electrn Corporation) U. S. A. Homogenizador modelo VORTEX GENIE-2 (Scientific industrias SITM) U. S. A. Centrifuga modelo MIKRO R22 (Hettich Zentrifugen) Germany. Bao mara modelo YCW-010E (Associated With Cannic, Inc, USA) Digestor de protena. Digest Automat K-438 BCHI labortechnik. AG. Equipo Soxhlet, Gerhardt. Germany. Bureta automatica. Horno Mufla LABOR Mszeripari Mvek temperatura regulable de 250 C a 900 C. Secador cilndrico LABOR Mszeripari Mvek temperatura regulable de 40 C a 250 C. Potencimetro de Inolab. Co, Alemania Refractmetro LABOR MIN, Hungria pH- metro.

3.3.2.

Materiales de laboratorio. Tubos de plstico con tapa de 15 y 20 mL.

20 Cubetas de poliestireno, Gene Mate (1cm x 1cm x 4.5cm) Tubos de ensayo Pirex USA. Microtubos (1.5 2.0 mL.) Vasos de precipitacin (1000 mL., 500 mL., 100 mL., 50 mL., 10 mL.) Fiolas (1000 mL., 500 mL., 100 mL., 50 mL., 10 mL.) Gradillas Probetas de 10, 100 y 500 mL. TermmetrosTips de 200 y 1000 ul. Micropipetas regulables de 10 100 l y de 100 1000 l. Matraces erlenmeyer de 50 y 250 mL. Kimax USA Campana de desecacin con perlas de silicagel. Crisoles de porcelana, cap. 50 ml. Haldenwanger Berln. Papel filtro Watman N 42 Esptulas metlicas.

3.3.3.

Reactivos y solventes. ter de petrleo Cloroformo. Acido actico 1N. Cloruro de clcio 1N. Nitrato de plata 1%. Yoduro de potasio. Agua destilada desionizada (H2Odd).

21 PBS-Solucin buffer (50mM fosfato; 0,9% NaCl, pH 7,4). L(+)-cido ascrbico QP, Sigma Chemical. Acido oxlico dihidratado p.a. ASC, ISO. Sigma Chemical. Folin-ciocalteus, Merck. Germany. Carbonato de Sodio (Na2CO3) p.a. ISO. Scharlau. Hexano p.a. Merck. Germany.Acido sulfricos 95 97% p.a. Merck. Germany. Hidrxido de sodio (NaOH) em lentejas p.a. ISO. Merck. Germany. cido clorhdrico fumante 37% p.a. Merck. Germany.

3.4.

Mtodos de obtencin y anlisis

3.4.1.

Proceso de obtencin de aceite esencial de la cscara de limn rugoso Los aceites esenciales de la cscara de limn rugoso fue

obtenido por destilacin en vapor de agua. La operacin se hizo para separar materiales voltiles de los no voltiles. En su forma ms

simple, la mezcla es calentada hasta que las sustancias voltiles se desprendan en forma de vapor, el cual es condensado en un condensador. Como sabemos los aceites esenciales constan de un gran

nmero de componentes, la mayora de los cuales hierven entre 100 y 150C si ellos son destilados a temperaturas muy altas, muchos de los

22 componentes pueden descomponerse, oxidarse o resinificarse. La destilacin con vapor de agua es un proceso muy suave que ocasiona pocos cambios drsticos en el aceite esencial, esto debido a que los lquidos voltile que no son solubles hierven juntos a una temperaturaz ms baja del punto de ebullicin que de cada uno en forma aislada. De esta forma cada componente voltil de un aceite esencial pudo ser captado por el vapor de agua y la mezcla teniendo un punto de ebullicin ligeramente inferior a 100C. (STAMN. 1989).

3.4.2.

Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial de cscara de limn rugoso. Se realizaron algunos anlisis para caracterizar el aceite

esencial de la cscara de limn rugoso, estos anlisis fueron:

Residuo

de

evaporacin,

mtodo

indicado

por

(INDECOPI, 1974).

ndice de perxido, mtodo consiste en medir la facilidad de enranciamiento del aceite.

Color, mtodo consiste en la determinacin organolptica.

ndice de acidez, mtodo indicado por (INDECOPI, 1974).

23 ndice de refraccin, mtodo indicado por (INDECOPI, 1974).

3.5. Metodologa experimental

3.5.1. Caracterizacin de la materia prima y del sub producto Se realizo los siguientes controles: Determinacin del tamao y peso del fruto. Determinacin de humedad. Determinacin de protena total. Determinacin de cenizas Determinacin de slidos totales. Determinacin del grado de madurez. Determinacin del pH. Determinacin de la densidad del jugo.

3.5.2. Proceso de obtencin de aceite esencial de la cscara de limn rugoso. Se realizo el proceso de obtencin de aceite esencial por el mtodo de extraccin por arrastre de vapor.

24 Las operaciones que se realizaron en la extraccin de aceite esencial de cscara de limn rugoso se indican en el flujograma de la figura 1, como se ve las operaciones realizadas fueron:

Limpieza El fruto fue limpiado mediante frotamiento con una tela remojada en agua fra con el objeto de eliminar toda materia extraa adherida en el fruto.

Seleccin Se selecciono los frutos verde, maduro y sobre maduro en buen estado sanitario.

Pelado Los frutos fueron pelados manualmente con cuchillos de acero inoxidable.

Cortado Se corto la cscara en pequeos trozos para aumentar la superficie de contacto, con la finalidad de facilitar la extraccin.

25

MATERIA PRIMA

LIMPIEZA

SELECCION

PELADO

CORTADO

PESADO

EXTRACCION

SEPARACION

ENVASADO

Figura 1. Flujo general tentativo para la extraccin de aceite esencial de cscara de limn rugoso por el mtodo de arrastre de vapor.

Pesado Obtenida la cascara cortada se procedi al pesado en una balanza marca Ohaus, con capacidad de 10 Kg. Se pesaron cargas de 2 kg, 4 kg y 6kg para cada ndice de madurez.

26 Extraccin La cscara se acondicion en el extractor acondicionado para realizar la operacin de destilacin a vapor de agua para arrastrar el aceite esencial.

Separacin Se realizo por diferencia de densidades, con la ayuda de una jeringa hipodrmica de inyectar, para extraer el aceite.

Envasado Se realiz el envasado en frascos de vidrio de color mbar con capacidad de 15 ml.

3.5.3.

Caracterizacin del aceite esencial de la cscara de limn rugoso. Se realizo el anlisis fisicoqumico del aceite esencial de la

cscara de limn rugoso tal como lo indicamos en el acpite 3.4.2.

3.6. Diseo experimental Para extraer el aceite esencial de la cscara de limn rugoso por arrastre de vapor, se considero un diseo experimental de una variable con tres niveles, considerando tres repeticiones trabajando en tres etapas

27 experimentales: primero se trabajo estableciendo el mejor rendimiento segn el ndice de madurez manteniendo constante la cantidad, luego se trabajo con la variable superficie de contacto manteniendo constante la cantidad y finalmente se trabajo con las cantidades para de esta manera establecer el flujograma optimo. En la figura 2 se tiene el diseo experimental, la finalidad de este diseo fue encontrar el mejor tratamiento en base a la cantidad de aceite extrado en funcin al ndice de madurez y a la cantidad de la muestra.

CASCARA FRESCA

A1

A2

A3

R1

R2

R3

R1

R2

R3

R1

R2

R3

Extraccin

Aceite esencial Mejor tratamiento (Rendimiento de aceite)

Figura 2. Diseo experimental para la extraccin de aceite esencial de cascara de limn rugoso.

28 En el Diseo experimental Primera Etapa: Donde: A1: Verde A2: Maduro A3: Sobre maduro R1: 1ra repeticin R2: 2da repeticin R3: 3ra repeticin

Segunda Etapa: Donde: A1: 1,0 cm2. A2: 1.5 cm2. A3: 2,0 cm2. R1: 1ra repeticin R2: 2da repeticin R3: 3ra repeticin

Tercera Etapa: Donde: A1: 2 kg. A2: 4 kg. A3: 6 kg. R1: 1ra repeticin R2: 2da repeticin R3: 3ra repeticin

3.7. Anlisis estadstico Para el anlisis estadstico se utilizara el diseo completo al azar, simple, cuyo modelo aditivo lineal es el siguiente:

Donde:

29 = observacin el j - simo ndice de maduracin en el i - simo cantidad de muestra. i Bj Eij = Medio Poblacional. = efecto del simo rendimiento por tratamiento. = efecto j - simo repeticin = Error experimental

Hiptesis H0 = Ai = 0 Hi = Ai 0 1 = 2 = 3 = 1 2 3

Nivel de Significancia: = 5 %

30

IV.

RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1. Caracterizacin del limn rugoso

4.1.1.

Grado de madurez En el Cuadro 1, se muestran los indicadores de madurez del

limn rugoso.

Cuadro 1. Indicadores de madurez del limn rugoso.

5.

Color Fruta Verde Pintona (amarillento) Sobremaduro (amarillo anaranjado) A.T = Acidez Titulable

pH 2,4 2,7 3,0

Bx 6,7 7,9 8,8

A.T (%) 0,86 0,88 0.92

I.M 7,79 8,97 9,56

I.M = ndice de Madurez

La relacin Bx/acidez titulable aumenta cuando avanza la maduracin, a esta relacin se le denomina ndice de madurez. Para el desarrollo experimental del presente trabajo, se utiliz limn rugoso pintn cuyo ndice de madurez fue 8,97, este ndice coincide con el rango del ndice de madurez de 5,5 a 10 mayor a 10 cuando se trata de naranjas, reportado bibliogrficamente por Yfera (1998).

31
4.1.2. Determinacin de los componentes

En el Cuadro 2, se muestran los pesos promedios de 3 limones, en tres estados de madurez (verde, pintn y sobremaduro) escogidos al azar de un lote de 15 limones. En este cuadro se aprecia que el contenido de cscara es mayor para el limn que se encuentra en estado de madurez pintn con un contenido de 19,58 % y el menor contenido de cscara corresponde al limn sobre maduro con 17,68 %.

Cuadro 2. Componentes del limn rugoso por grado de madurez en gramos

5.

ESTADO DE MADUREZ Verde Pintn Sobre maduro

WX Pulpa 180,81 181,92 170,87

WX Cascara 34,08 35,62 30,20

Pulpa 81,15 80,42 82,32

Cascara 18,85 19,58 17,68

WX = Peso Promedio de 3 muestras de limn.

4.1.3.

Composicin qumico proximal de la cscara de limn rugoso

En el Cuadro 3, se muestran los resultados del anlisis qumico proximal de la cascara de limn rugoso

32 Cuadro 3. Composicin qumica proximal de la cascara de limn rugoso. COMPONENTE Agua Protena (N x 6.29) Grasa Fibra Cenizas Carbohidratos BH = Base hmeda %BH 74,28 1,03 0,70 7,56 1,06 21,01 3,48 2,63 25,57 3,58 71,07 %BS

BS = Base seca

Del cuadro anterior, se puede afirmar que la cscara de limn rugoso tiene 1,03 % de protena, mayor a lo obtenido por PRAROLAN (1977), quin reporta un valor de 1,24 %. Tambin contiene 0,70 % de grasa, mayor a lo reportado por PRAROLAN (1977), quin reporta un valor de 0,42% confirmado por YUFERA (1999), quin manifiesta que los la cscara de citricos poseen bajo contenido en grasa. As mismo contiene en base hmeda 1,06% de ceniza que equivale a 3,58 % en base seca, que es similar a lo reportado por YUFERA (1999). Finalmente un contenido de fibra corresponde a 7,56% y carbohidratos de 21,01%, lo cual demuestra que la cscara de limn rugoso ocupa un buen porcentaje del fruto.

33 4.1.4. Composicin fsico qumica de la cascara de limn rugoso En el Cuadro 4, se presentan los resultados del anlisis fsico qumico efectuado en la materia prima.

Cuadro 4. Composicin fsico qumica de la cscara de limn rugoso. ANLISIS pH Slidos solubles (Brix) Slidos totales (%) Acidez total (%) * Azcares reductores (%) Pectina (%) Expresado en % de cido ctrico CANTIDAD 5,05 13,17 30,50 0,30 1,56 0,38

En el Cuadro, se observa un pH de 5,05 valor mayor al zumo de limn y un contenido de slidos solubles de 13,17 Bx, lo que indica una concentracin de azcar en la cascara reportado, tambin por YUFERA (1999). La acidez total expresado en cido ctrico es de 0,30%, comparado con otras frutas es relativamente bajo (PRALORAN, 1977).

34 4.2. Proceso de obtencin del aceite esencial de cscara de limn rugoso por arrastre de vapor

4.2.1. Pruebas para la obtencin del aceite esencial Los resultados que a continuacin se describen sirvieron para determinar los parmetros tecnolgicos ptimos de extraccin de aceites esenciales de cascara de naranja valencia, como son: ndice de madurez, rea de partcula y Cantidad de muestra en kg.

Cuadro 5: Rendimiento de aceite esencial de cscara de limn rugoso segn el ndice de madurez. ndice de Madurez Repeticiones 1 2 3 X Verde 0,190 0,188 0,186 Pintn 0,202 0,200 0,198 Maduro 0,172 0,178 0,170

Cuadro 6. ANOVA para rendimiento de aceite esencial de cscara de limn rugoso segn el ndice de madurez Fuente Tratamientos Intra grupos Total (Corr.) S.C. 0,00107 0,00005 0,00112 G.L. 2 6 8 C.M. 0,00053 0,000008 F calculado 63,37 P valor 0,0001

35 Como se aprecia los rendimientos de los tratamientos en relacin al ndice de madurez salen altamente significativos, lo cual fue necesario someterlo a una prueba de rangos mltiples segn Tukey tal como se aprecia en el cuadro 7

Cuadro 7. Pruebas de Tukey HSD para Rendimiento segn el ndice de madurez Nivel Repeticiones Media Grupos Homogneos 3 1 2 3 3 3 0,17333 0,18800 0,20000 A B C

Segn la prueba de Tukey ningn tratamiento es igual cuando se refiere al ndice de madurez, siendo el mejor el ndice de madurez pintn que tiene mayor rendimiento. En el cuadro 8 se tiene los rendimientos segn el rea de las partculas, observndose que es mayor el rendimiento a mayor rea de la partcula. Se trabajo con cscara de limn pintn ya que fue el ptimo en la experimentacin anterior, se tomo una cantidad de 4 kg de muestra. Para ver la diferencia estadstica se hizo el ANOVA del cuadro 9 donde se aprecia que el P valor es menor que 0,05 por lo tanto existe diferencia significativa, tal como lo podemos ver en el cuadro 9.

36 Cuadro 8: Rendimiento de aceite esencial en funcin del rea de contacto para una masa de 4 kg de cscara de limn. reas (cm2) Repeticiones 1 2 3 X 1,0 0,210 0,205 0,208 1,5 0,200 0,184 0,190 2,0 0,175 0,180 0,178

Cuadro 9. ANOVA para el rendimiento segn rea de las partculas Fuente Tratamientos Intra grupos Total (Corr.) S.C. 0.00135 0.00015 0.00151 G.L. 2 6 8 C.M. 0.00067 0.00003 F calculado 26.03 P valor 0.0011

Se hizo en el cuadro 10 la prueba de diferencia observndose que el mejor tratamiento corresponde a la menor rea que es de 1 cm 2, ya que ningn tratamiento es igual

Cuadro 10. Pruebas de Tukey para el rendimiento por rea de partcula Nivel Repeticiones Media Grupos Homogneos 3 2 1 3 3 3 0.177667 0.191333 0.207667 A B C

37 En el cuadro 11, tabulamos los rendimientos obtenidos segn la cantidad de muestra utilizada viendo que a mayor muestra mayor el rendimiento. Se hizo el ANOVA en el cuadro 12 observndose que si existe diferencia significativa para cada cantidad utilizada en la extraccin, siendo el mejor para 6 kg de muestra establecido segn la prueba de Tukey del cuadro 13.

Cuadro 11. Rendimiento de aceite esencial en funcin de la cantidad en kg de cscara de limn. Cantidad (kg) Repeticiones 1 2 3 X 2,0 0,170 0,175 0,180 4,0 0,230 0,235 0,240 6,0 0,250 0,260 0,265

Cuadro 12. ANOVA para Rendimiento por Cantidad de muestra. Fuente Entre grupos Intra grupos Total (Corr.) S.C. 0.011089 0.000216 0.0113056 G.L. 2 6 8 C.M. 0.00554 0.000036 F calculado 153.54 P valor 0.0000

En el cuadro 13 se tiene la prueba de diferencia de Tukey y apreciamos muy claramente que no existe tratamientos iguales como ya mencionamos.

38 Cuadro 13. Pruebas de Tukey para Rendimiento segn la cantidad Cantidad Repeticiones Media Grupos Homogneos 1 2 3 3 3 3 0.175 0.235 0.258333 A B C

Finalmente podemos decir que, el ndice de madurez optimo para extraer aceite esencial de cscara de limn rugoso es el pintn, teniendo menor rea de las partculas que garantizan una mayor superficie de contacto y utilizando cantidades mayores donde actu el vapor

4.2.2. Flujograma de operaciones y balance de materia del proceso de obtencin de aceite esencial Las operaciones realizadas en la extraccin de aceite esencial de cascara de limn rugoso, se indican en la Figuras 3.

4.2.2.1. Flujograma de operaciones En la Figuras 3, se muestra grficamente las operaciones de extraccin de aceites esenciales por arrastre de vapor, en donde notamos que en el mtodo arrastre de vapor la muestra hmeda es cortado en tres diferentes tamaos, para luego ser expuestos a la extraccin. As mismo obtenemos aceite ms agua condensada, el cual destilamos.

39

ACOPIO

Limn pintn

LIMPIEZA

Manualmente con trapo hmedo Frutas sanas y uniformes Manual con cuchillo de acero inxidable

SELECCIN

PELADO

PESADO

Balanza

CORTADO

En cubos de 1 cm2

EXTRACCIN

Extractor de vapor

Aceite + agua condensada

Residuo

SEPARACIN

Destilador

Aceite

Agua condensada

ENVASADO

Frascos ambar

Figura 3.

Flujo final para la extraccin de aceite esencial de cscara limn rugoso, por arrastre de vapor.

40 4.2.2.2. Balance de materia En el Cuadro 14, se presenta el balance de materia referente a la extraccin del aceite esencial de cascara de limn rugoso, a partir de 50 Kg de limn pintn (80,42 % de pulpa y 19,58 % de cascara), por el mtodo arrastre de vapor. En la operacin de limpieza no existe prdida significativa, mientras que en la seleccin existe una prdida del 3 %, ingresando al pelado 48,5 Kg de limones, de los cuales se obtuvieron 9,49 kg de cscara, en el cortado no hemos considerado perdida alguna, pero en la operacin de extraccin hemos agregado agua en proporcin de 1:2.5, que corresponde a a la relacin cscara/agua. En la separacin se pierde 23,73 kg de agua y 9,47 kg de residuo que corresponde a un 339,30% . Finalmente se tiene un rendimiento por proceso de 0,26 %, rendimiento mayor a lo obtenido por JEFFERSON (1973), mediante el mtodo del raspado.

41

Cuadro. 14. Balance de materia de la extraccin de aceite esencial de cscara de limn rugoso, por el mtodo arrastre de vapor. Operaciones Kg Acopio Seleccin Pelado Cortado Extraccin (se agrega Agua: 1cscara/2.5 agua) Separacin 50,00 50,00 48,5 9,49 33,22 97,00 97,00 339,55 ----Agua= 23,73 Resid. =9,47 Envasado
5.

Entra % 100,00 Kg ---

Pierde % --1,50 39,01 3% 80,42 -----

Continua kg 50,00 48,50 9,49 9,49 33,22 % 100,00 97,00 19,58 100,00 339,55

Rendimiento Rendimiento por por proceso operacin 100,00 97,00 100,00 97,00 19,58 100,00 100,00 19,58 339,55

33,22 0,023

339,55 100,00

339,30 ---

0,023 0,023

0,25 0,25

0,07 100,00

0,25 0,25

---

4.3. Caracterizacin del aceite esencial de cscara de limn rugosos En el Cuadro 15, se presentan los resultados de la caracterizacin fsico qumica, del aceite esencial de cascara de naranja Valencia extrado por el mtodo arrastre de vapor.

Cuadro 15. Caracterizacin fisicoqumica del aceite esencial extrado por arrastre de vapor. COMPONENTE Residuo de Evaporacin ( % ) ndice de Perxido (me / kg) Densidad (g/ mi) ndice de Refraccin ndice de Acidez (%) * Expresado en % de cido ctrico CONTENIDO 4,740 0,880 0,850 1,480 0,196

En el Cuadro 23, se reporta un residuo de evaporacin de 4,740 %, valor caracterstico de un buen aceite esencial, segn la farmacopea de EE.UU y Francia, mencionado por JEFFERSON (1973), y as mismo una densidad de 0,850 (g/ml) y un ndice de refraccin de 1,480; similares a los valores encontrados en el aceite esencial de naranja espaola (RAFOLS, 1984). El ndice de perxido tiene un valor de 0,880 (me/kg), este resultado es menor, a lo considerado para aceites y grasas comestibles, cuyo valor

lmite mximo es de 10 (meq/kg), de oxgeno peroxdico (FAO, 1993). La acidez total en porcentaje es de 0,196 %, valor que nos indica un bajo ndice de cidos libres, que coincide tambin con el bajo ndice de perxido.

43

44

V.

CONCLUSIONES

De acuerdo a las condiciones de trabajo y a los resultados obtenidos, se ha llegado a las siguientes conclusiones: 1. Se caracterizo la materia primas y la cscara de limn rugoso, dndonos valores que estn dentro de los estndares de calidad. 2. Los parmetros tecnolgicos ptimos para la extraccin de aceite esencial de la cscara de limn rugoso por el mtodo de arrastre de vapor fueron: ndice de madurez pintn; rea de la partcula 1,0 cm2 x 0,35 cm de espesor; cantidad de muestra: 6 kg. Llegndose a un rendimiento en aceite esencial de 0,25 %. Realizndose las siguientes operaciones: Acopio, limpieza, seleccin, pelado, cortado, extraccin, separacin y envasado 3. De acuerdo a las evaluaciones fsico qumicas realizadas en el aceite esencial por el mtodo arrastre de vapor se obtuvieron valores de Residuo de Evaporacin 4,740 %, ndice de perxido 0,88, Densidad 0,850, ndice de Refraccin 1,480, ndice de Acidez 0,196 %.

45

VI.

RECOMENDACIONES

Considerando que el aceite esencial de cscara de limn rugoso, es un producto de gran potencial en la regin se recomienda: 1. Utilizar la cscara de limn rugoso para la extraccin de aceites esenciales, a escala industrial, previo estudio del costo de produccin a nivel de planta piloto con los parmetros hallados en el presente trabajo. 2. Ampliar e! estudio tecnolgico sobre la cascara de limn rugoso en la elaboracin de nuevos productos como t filtrante, piensos, melazas y otros. 3. Realizar un estudio de mercado y de costo de produccin con la finalidad de crear una industria de aceites esenciales en la zona de Tingo Mara. 4. Usar el mtodo arrastre de vapor para la extraccin de aceites esenciales de la cascara de limn rugoso en cantidades industriales o semi industrial, previo estudio de costos.

46

VI.

BIBLIOGRAFIA

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