56

INDICATORI MICROBIOLOGICI DE POLUARE A MEDIULUI AMBIANT

56.1. D E F I N I R E A INDICATORILOR M I C R O B I O L O G I C I DE POLUARE

Examenul microbiologic al elementelor de mediu arc ca scop aprecierea prezenei sau lipsei In acestea a microorganismelor care prezint pericol pentru sntatea omului. Aprecierea calitii elementelor mediului ambiant se face nu direct, prin depistarea agenilor patogeni ai bolilor infecioase (acetia nu se ntlnesc permanent, sunt sensibili Iu aciunea multor factori, cantitatea lor este relativ mica), ci indirect, prin determinarea gradului de contaminare cu reprezentani ai microflorci normale, care se elimina la mediu cu excreiile omului t animalelor. E.g. depistnd microorganisme care normal reprezint microflora intestinului, putem concluziona despre o poluare fecala si, deci, nu se exclude posibilitatea eliminrii cu materiile fecale a agenilor patogeni ai dizenteriei, febrclor lifoparatifoidice etc. Izolarea reprezentanilor microflorei normale servete ca un indice al strii sanitare a elementelor de mediu, ceea ce permite aprecierea pericolului potenial al acestor clemente pentru sntatea omului. Asemenea microorganisme au fost numite in dicatori microbiologici. Insa nu tnatp microorganismele din flora normal a corpului uman si animal pot fi indicatori microbiologici. n urma unor multiple investigaii au fost formulate o serie de condiii pe care trebuie s Ic ndeplineasc microorganismele indicatoare, i anume: s fie prezente constant In excreiile omului i animalelor i s se elimine In mediul extern in cantiti masive; s nu aib alt rezervor natural dect organismul omului i animalelor; s supravieuiasc In mediul ambiant timp mai ndelungat In comparaie cu microbii patogeni; s lipseasc sau s fie redus capacitatea de multiplicare In mediul extern; s fie mai rezisteni la aciunea factorilor din mediul extern dect microbii patogeni; s fie suficient de tipici, pentru a fi uor difereniai i s nu-i modifice caracterele biologice; s fie uor depistai prin metode uzuale, simple i accesibile. Analizele de laborator se efectueaz in conformitate cu standardele de stat (STAS), indicaiile i recomandrile metodice, care sunt strict obligatorii pentru toate laboratoarele. Aceste documente prevd: a) metodele de recoltare a probelor; b) cantitatea de produs recoltat; 395

c) condiiile de expediere; d) melodica examinrii; e) criteriile de interpretare a rezultatelor analizei. Fiecare prob recoltata e nsoit de o fia. In care indicm: denumirea probei, locul recoltrii i cantitatea, dara recoltrii (anul, luna, ziua, ora), scopul analizei, instituia care va efectua analiza, numele persoanei care a recoltat proba. In prezent, In funejie de elementul de mediu examinat, indicatorii microbiologici includ microorganisme ca Escherichia coli, coliformii, enterococii, Proteus, stafilococii, Bactllus cereus, Pseudomonas .a. Aprecierea calitii elementelor mediului ambiant se face de asemenea prin deter minarea numrului total de microorganisme (NTM) pe unitate de volum sau suprafa. Pentru fiecare element sunt stabilii indicatorii microbiologici, conform crora se apreciaz starea sanitar a lui. E.g. pentru ap: E.coli, coliformii; pentru aer: stafilococii i streptococii etc. In investigaiile microbiologice sanitare trebuie s se respecte urmtoarele principii; a) recoltarea, conservarea i expedierea corect a probelor; b) efectuarea analizelor In serie (din diferite sectoare); c) recoltarea repetat a probelor, d) utilizarea metodelor standard de analiza; e) aprecierea datelor tn coroborare cu alte rezultate ale examenului igienic (chimice, fizice, organoleptice); f) responsabilitatea medicilor pentru exactitatea analizelor i motivaia concluziilor despre starea sanitar a elementului examinat.

56.2. C A R A C T E R I S T I C I A L E INDICATORILOR MICROBIOLOGICI 5 6 . 2 . 1 . Grupul coliformilor

Noiunea de coliformi sau coliformi totali include Enterobacteriaceae din genurile Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella .a., caracterizate ca bacili gramnegativi, ncsporulai, oxidazonegativi, care degradeaz glucoza cu producere de acid i gaz la temperatura de 37C In interval de 2448 ore. Acest grup este prezent In cantitate mare in fecalele omului i animalelor cu snge cald. Bacteriile coliforme care i manifest caracterele metabolice i la temperatura de 44 0 , 5 C se numesc coliformi fecali sau termotoleranli. Coliformii fecali, care degradeaz lactoza cu acid i gaz la 44 0,5C i nu cresc pe mediul cu citrat (mediul Simmons), sunt considerai a fi E.coli, un indicator incontestabil al unei poluri fecale recente. Diferenierea genului se Urnita, pn nu demult, la testele IMVEC, care includeau urmtoarele caractere: producerea indolului (I), reacia cu rou metil (M), reacia Voges-Proskauer (V), creterea in mediul Eijkman (E) la temperatura de 4344C i creterea pe mediul cu citrat <C). Aceste tesle s-au dovedit a fi insuficiente, deoarece coliformii izolai din apa clorinat nu fermenteaz glucoza cu gaz la 43C i aceste teste nu prevd testul oxidazei. Astzi iden tificam coliformii prin urmtoarele caractere difereniale: 396

a) 1 ni ii ba rea culturilor numai la 37C. b) Caracterul creterii pe mediul Endo: se iau In consideraie numai coloniile rounchis cu sau fara luciu metalic. c) Bacili gram nega tivi. d) Testul oxidazei. Pentru identificarea ulterioara selectam numai colonii oxidazonegative, pentru c cele oxidazopozitive includ bacterii gramnegative, care aparin pseudomonadclor, aeromonadelor sau vibrionilor. c) Degradarea glucozei cu formare de acid i gaz.

56.2.2. Enterococii (streptococii fecali)

Enterococii fac parte din microflora normal a intestinului omului i animalelor i se elimin In mediu ambiant In cantiti destul de mari, I0 8 ~" 9 UFC/g de fecale, dar aproximativ de zece ori mai puin In comparaie cu coliformii. Enterococii sunt al doilea indicator microbiologic, dup coliformi, cnd examinm apa din zonele de recreaie, din bazinele de inot, apele reziduale .a. Dup structura antigenic aceti streptococi sunt inclui in grupul D Lancefield. Se deosebesc dou specii: Enterococcus faecalis cu variantele liuuefaciens i zymogenes i E. faecium cu varianta durans.
Enterococii aunt coci ovali, diapuai icotoi, In perechi sau lanuri acurtc, erampocitivi,

in general imobili i nesporulai. Pe medii solide formeaz colonii mici, transparente, bombate, rotunde, cu margini regulate l suprafa lucioas. Sunt catalazoncgativi. li difri-clicni de ali streptococi prin urmtoarele teste: a) Cresc In bulion biliat 4 0 % . b) Se dezvolt In prezena azidei de sodiu (inhibitor pentru coliformi i alte bacterii gramnegative). c) Cresc la pH 9,6 i in bulion cu 6 , 5 % clorura de sodiu. d) Cresc intre 10 i 45C. c> Reduc albastrul de metilen din lapte. Sunt rezisteni la aciunea clorului, coloranilor i unor antibiotice. E. faecalis i E. faecium se difereniaz dup capacitatea de fermentare a giicerinei: primul o descompune In condi|ii aerobe i anaerobe, al doilea numai in condiii aerobe. E. faecalis reduce trifcniltcrazolcloridul (TTC), din care cauz pc medii cu TTC formeaz colonii roii-viinii, pc cnd S. faecium crete sub form de colonii incolore (uneori cu centrul roz). Pentru c enterococii mor mai repede dect coliformii i nici nu se multiplica In mediul ambiant (exceptnd unele alimente), ci sunt considerai ca indicator microbiologic al unei poluri fecale recente.

56.2.3. Clostridii

sulfitoreductoare

Clostridiile, ca i enterococii i coliformii, fac parte din microflora intestinal nor mal a omului i unor animale cu snge cald i se elimin In mediu cu fecalele. Concentraia lor ajunge pn la 10 UFC/g de fecale. Indicator microbiologic este specia C.perfhngcns, capabil s reduc sulfitul In sulfura feroas la 45C dup 1214 ore. C.perfnngens aparine familiei Bacillaceae i apare ca bastonac lungi, imobile, sporulate i, ln organismul gazd, capsulate. Cultiv pc medii uzuale. Intens zaharolilic,
397

degradeaz glucidele cu formare de acid i gaz. Coaguleaz repede laptele <25 orc), formnd cheag spongios aruncat spre dopul eprubetei din cauza gazului. Avantajul acestei specii ca indicator microbiologic este depistarea ei prin metode simple, rapide i lipsa necesitaii identificrii ulterioare. Totodat, C.perfringens fiind sporogen are rezisten sporit in mediul extern, din care cauz este considerat ca indicator al polurii fecale mai vechi. O cantitate crescut de clostridii depistat Ins alturi de coliformi indic o poluare fecala recenta. Determinarea acestui indicator este recomandat la examenul microbiologic al solului, apelor reziduale, depunerilor din bazinele acvatice, la selectarea sursei de aprovizionare cu ap .a.

56.2.4. Stafilococii
Stafilococii sunt reprezentani ai microflorei normale a corpului uman. Colonizeaz pielea, cile aerodigestive superioare, In special nasul; sunt prezeni i in intestin. In timpul vorbirii, tusei, strnutului i cu scuamele ei se elimin uor in mediul nconjurtor: n aer, pe obiecte; In ap In timpul scldatului. Stafilococii sunt considerai ca un indicator al polurii aerului din ncperile nchise (staionar** chirurgicale, de copii, secii de reanimare i terapie intensiv, materniti). Totodat, lund in consideraie rezistena stafilococilor la substanele dezinfectante, ei sunt i indicatori ai polurii apei In zonele de recreaie, In bazinele de not, unde numrul de stafilococi poate ajunge la zeci de mii UFC/litru. Stafilococii aparin familiei Micrococcaceae, genul Staphylococcus cu trei specii mai frecvent izolate: S. aureus, 5. epidermidis i S. saprophytics. Sunt coci sferici, grampozitivi, aezai In ciorchini, nesporulai, necapsulai i imobili. Cresc pe medii uzuale. Pe getoz-snge unele tulpini sunt hemolitice. Formeaz colonii rotunde, bombate, netede, lucioase i pigmentate in auriu, galben sau alb. S. aureus, specia cu cel mai mare potenial patogen, produce coagulaz, lecitinaz, ADN-az; unele tulpini elaboreaz enterotoxin termorezistent. Ca indicatori microbiologici, stafilococii se depisteaz uor, prin metode obinuite. Testele uzuale pentru identificarea stafilococilor sunt: a) Capacitatea de a crete in medii cu concentraii sporite de NaCI ( 7 1 0 % ) . b) Determinarea coagulazei. c) Fermentarea manitei in condiii anaerobe. d) Determinarea sensibilitii la novobiocin. e) Producerea de lecitinaz i fosfataz. In cazul investigaiilor epidemiologice, pentru determinarea sursei de infecie i a cilor de rspndire, se determin fagovarul cu ajutorul setului internaional constituit din 20 fagi.

5 6 . 2 . 5 . Streptococii
Streptococii sunt gzduii In cile aerodigestive superioare ale omului i multor animale, mai ales la persoane cu infecii respiratorii cronice, eliminndu-se In aer cu saliva, sputa. In timpul vorbirii, tusei, strnutului. Genul Streptococcus include un mare numr de specii aia! saprofite, ct i patogene, n patologia omului importan mai mare arc S. pyogenes. Streptococii sunt coci sferici, 398

grampozitivi, aezai in lanuri, imobili, nesporulai; unele tulpini patogene sunt capsulate. Nu cresc pe medii uzuale. Cultiv in bulion glucoza! i pe gcloz-snge. In bulionul glucozat cresc pe pereii i la fundul eprubetei, lsnd mediul transparent. Pegeloz-snge formeaz colonii mici, albc-ccnuii, opace. Dup capacitatea hemolitic deosebim: streptococii /3-hemolitici, cu coloniile nconjurate de o zon larg de hemoliz complet, clar; streptococii a-hemolitici, care transform hemoglobina In mcthrmoglobin i nverzesc mediul In jurul coloniilor; streptococii y sunt nehemolitid i nu modific mediul cu snge. Mai perfecta este clasificarea streptococilor dup structura aniigcnic, propus de Lancefield. Sunt cunoscute 19 serogrupuri de streptococi i un mare numr de serovaruri. Majoritatea streptococilor piogeni aparin grupului A cu 57 serovaruri. In mediul ambiant streptococii sunt reprezentai de regula dc streptococii <rhcmolitici, pe care Ii gzduim constant. Streptococii ^-hemolitici se gsesc mai puin frec vent in faringele oamenilor sntoi. Depistarea lor in aer are important sanitar i epidemiolgica, pentru c indic prezena bolnavilor sau purttorilor sntoi. Depistarea i identificarea streptococilor se face ceva mai complicat, dar utiliznd n mare parte testele descrise la identificarea enterococilor. 5 6 . 2 . 6 . Genul Proteus

Bacteriile din genul Proteus sunt foarte rspndite in natur, unde particip la procesele dc descompunere. Se ntlnesc In ape poluate, alimente alterate, In special In carne i derivate. In cazul unei contaminri masive a produselor alimentare, aceste bacterii pot cauza toxiinfeejii alimentare. Rspndirea bacteriilor din genul Proteus este posibil prin intermediul obiectelor de uz curent, prin acrul ncperilor In care sc gsesc bolnavi cu procese inflamatorii sau infecii intestinale cauzate de bacterii din acest gen. Speciile de Proteus servesc ca indicator microbiologic in industria alimentar, demonstrnd o contaminare fecal recent survenit In diferite etape ale circuitului alimen telor. Genul Proteus cate inclus In familia Enterobacteriaceae i sc disting 4 specii, dintre care mai frecvent se izoleaz P. vulgahs i P. mirabilis. Sunt bacili scuri, gramnegativi, dispui in perechi sau lanuri mici, mobili cu cili peritrichi, nesporulai i necapsulai. Cresc pe medii uzuale. 0 particularitate tipic pentru aceste bacterii este capacitatea de roirc*: pe medii solide formeaz un vl fin, care se extinde pe toat suprafaa mediului. Izolarea se face uor prin Insmn|area produsului de examinat n apa de condensare a tuburilor cu geloz nclinat (metoda Schukevici). Sc observ o cretere specific serpinginoas (fenomen dc crarc). Identificarea culturilor izolate se efectueaz dup unele teste biochimice: producerea indolului i H2S, prezena fenilalanindezaminazei, hidroliza ureei, creterea pe mediul cu citrat .a. Identificarea antigenic se face prin reacii de aglutinare cu serurile specifice O i H. 56.2.7.

Pseudomonas (eruginosa

Aceast specie, larg rspndit In natur, este inclus In genul Pseudomonas, familia Pstudomonadaceae. Se izoleaz din apele de suprafa i reziduale, din sol, de pc plante, din intestinul i de pc tegumentele omului, din diverse preparate medicamentoase. Este 399

agentul infeciei piocianice intraspitaliceti. Cauzeaz la om diverse procese supurative: otite, pielite, cistite, cheratite, meningoencefalite, septicemii, infecteaz plgile i arsurile. In mai multe ri s-au elaborat standarde pentru supravegherea calitii apelor folosite In scopuri recreaionale in care ca indicator microbiologic este recomandat depistarea P. eruginosa. Prezint interes i pentru aprecierea condiiilor igienice de preparare in spitale a unor forme medicamentoase, a alimentelor pentru nou-nscui. Depistarea acestei specii este recomandat i pentru analiza calitii apelor minerale mbuteliate. P.acruginosa este un bacii polimorf, gramnegativ, dispus izolat, In perechi sau lanuri scurte, foarte mobil, cu I3 flageli polari, nesporulat i, de regul, necapsulat. tsste strict aerob, cultiv pe medii uzuale, formnd pe geloz colonii mari, S, pigmentate In verdealbstrui sau rou-brun. Nefermenlativ, nu produce indol, lichefiaz gelatina i serul coagulai, reduce nitraii In nitrii, esle oxidazopozitiv. Aceste caractere biochimice i pigmentogeneza stau la baza identificrii tulpinilor izolate In laborator.

56.2.8. Enterofagii
Enterofagii sunt virusuri care paraziteaz i se reproduc In enterobacterii vii. Ajung n mediul ambiant din intestinul omului. Aceasta permite s-i utilizm ca indicatori ai contaminrii mediului i cu enterobacterii patogene. Multiplele investigaii sanitarovirusologice au demonstrat posibilitatea folosirii entcrofagilor i ca indicator al polurii virale cu enterovirusuri, virusul hepatitei A, adenovirusuri .a. Cu ajutorul enterofagilor s-a studiat eficiena diverselor metode de epurare i dezinfecie a apei potabile, apelor reziduale i se stabilesc criteriile pericolului epidemiologie al apelor pentru sntatea omului. Enterofagii, ca i coliformii i enterococii, servesc ca indicator al polurii fecale a apei. In bazinele acvatice enterofagii pot fi i indicatori ai proceselor de autoepurare; cu ajutorul lor se pot depista sursele i cile de rspndire a impurificrii organice. In examenul microbiologic sanitar al apei uzual se utilizeaz bacteriofagul antitific Vi i bacteriofagul anti-co/i. Izolarea bacteriofagilor respectivi, capabili s se multiplice numai pe tulpinile omoloage de bacterii, demonstreaz evident i prezena acestor bacterii In probele examinate cu o vdit importan epidemiolgica. Depistarea prezenei enterofagilor In elementele mediului ambiant se poate face in orice laborator bacteriologic, utiliznd dotrile obinuite (medii de cultur uzuale etc.J. Determinarea litrului enterofagilor se efectueaz prin metoda bistratificat pe geloz, care permite aprecierea cantitativ a fagilor In uniti formatoare de plaje (UFP) ntr-o unitate de volum sau mas a materialului de examinat (ap, sol .a.). 5 6 . 2 . 0 . M i c r o o r g a n i s m e termofile In grupul microorganismelor termofile sunt incluse bacterii grampozitive, coci, bacili, spirili, actinomicete i unele specii de ciuperci care au capacitatea s se multiplice activ la 60C sau mai mult, in majoritate fiind aerobe. Prezena acestui grup n elementele mediului ambiant (sol, bazine acvatice, conserve .a.) indica o impurificare cu dejecte i excreii, cu deeuri solide menajere i agricole In care pot fi depistate i microorganisme patogene 400

periculoase pentru sntatea omului. De aceea microorganismele termofile sunt considerate ca un indicator microbiologic de poluare a mediului nconjurtor. In materiile fecale ale omului si animalelor concentraia lermofililor este dc regul redus <I0 germeni/g) i nu servesc ca indicator al polurii fecale a mediului. Impurificarea solului i a bazinelor acvatice cu germeni termofili are loc in cazul polurii cu deeuri menajere care conin materie organic In diferite stadii de descompunere. Prezenta microorganismelor termofile In sol demonstreaz o impurificare mai veche cu deeuri. Despre o impurificare fecal recent vorbete titrul nalt al coliforrailor i o concentraie mic de termofili. Materialul prelucrat in laboratoarele de microbiologic conine ageni infecioi cu risc pentru personalul de laborator i pentru colectivitate. Clasificarea acestor ageni infecioi dup gradul de risc a fost prezentat In partea nti, 1.5.