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Carlos M.

Gaspar Reis

Biologia Molecular

4. TRANSCRIO E PROCESSAMENTO DO RNA

Sumrio

Introduo Transcrio em procariotas Transcrio em eucariotas Processamento alternativo

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4.1 Introduo Gene: segmento de DNA que contm a informao necessria para levar sntese de uma cadeia polipeptdica ou de um RNA funcional A informao contida no genoma de um organismo s se torna evidente aps uma srie de reaces bioqumicas que leva expresso dos genes. Transcrio: Primeira etapa da expresso dos genes em que h a sntese de um cpia de RNA utilizando como modelo uma das cadeias de DNA. A maioria dos genes codifica molculas proteicas e os RNAs intermdios que lhes do origem chama-se RNAs mensageiros: mRNAs.

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Expresso gnica O fluxo da informao gentica: do DNA protena. Como o DNA, um cido ncleico, especifica para uma protena constituda por aminocidos?

O mRNA funciona como molcula intermdia entre o DNA e a sntese proteica.

Transcrio = sntese de RNA a partir de cadeia molde de DNA

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Tipos de RNAs mRNAs tRNAs rRNAs (80% do RNA total celular) Pequenos RNAs Procariotas: tmRNAS presidem marcao de protenas incorrectas para degradao Eucariotas: snRNAS (small nuclear RNAs) intervm no processamento dos transcritos primrios snoRNAs (smal nucleolar RNAs) intervm no processamento dos prRNAs ribossomais
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A transcrio o processo em que uma molcula de RNA produzida a partir da cpia de parte de uma das cadeias de nucletidos (a cadeia molde ou antisense) do DNA.
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Cadeia sense (sense strand) Cadeia molde ou antisense (antisense strand) DNA

Cada sequncia de trs bases azotadas (codo) do mRNA complementar ao anticodo do tRNA o qual transporta um aminocido. 1959 - Samuel Weiss 1959 descoberta da enzima RNA polimerase. A enzima RNA polimerase responsvel pela sntese do RNA a partir de uma das cadeias de nucletidos do DNA (cadeia molde ou antisense).
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4.2 A transcrio em procariotas Em bactrias o DNA est em contacto directo com o citoplasma. As bactrias possuem uma nica RNA polimerase constituda por 5 subunidades: , , , 2 . Em E. coli o enzima completo tem 450 kDa. As subunidades e proporcionam a base cataltica e o stio activo para a transcrio. Adicionalmente uma outra subunidade (sigma) necessria par que se d o incio da transcrio.

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Etapas da transcrio: Iniciao, elongao e terminao Em bactrias a ligao da RNA polimerase ocorre quando a subunidade (sigma) reconhece locais na cadeia molde de DNA que se designam promotores. A enzima liga-se cadeia molde numa regio abrangendo cerca de 60 nucletidos do DNA, 40 dos quais esto localizados acima do local de incio da transcrio. A subunidade (sigma) desempenha um papel importante no reconhecimento do promotor e ligao da RNA polimerase cadeia molde ou antisense.
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As sequncias consenso (consensus sequences), so sequncias de DNA existentes nos promotores, que so semelhantes em diferentes genes do mesmo organismo ou em genes de organismos relacionados. Duas regies promotoras existem em bactrias correspondentes a sequncias consenso: - Sequncia 5 TATAAT 3, localizada 10 nucletidos acima do local de incio da transcrio (regio 10 ou de Pribnow); - Sequncia 5 TTGACA 3, localizada 35 nucletidos acima do local de incio da transcrio (regio 35). Ao contrrio da DNA polimerase, a RNA polimerase no necessita de um primer para iniciar a sntese da cadeia de RNA. Os nucletidos so colocados na direco 5 3 por complementaridade cadeia molde de DNA.
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DNA
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mRNA

(Grelha de leitura aberta)

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Aps a adio de alguns nucletidos de RNA, a subunidade dissociase, prosseguindo a elongao a uma velocidade de aproximadamente 40 nucletidos/segundo, a 37 C. A transcrio termina quando, aps o ltimo codo, surge uma regio de terminao constituda por aproximadamente 40 pb (sequncia palindrmica rica em GC seguida de 6 a 8 bases U no transcrito). Nalguns casos a terminao est dependente de uma protena, a rho. Em bactrias esto frequentemente adjacentes no cromossoma os genes cujos produtos proteicos fazem parte da mesma via metablica. Durante a transcrio em bactrias, uma longa molcula de mRNA produzida, a qual contm informao para mais do que uma protena mRNA policistrnico. Nos procariotas o mRNA no sofre processamento e a traduo ocorre imediatamente a seguir transcrio.
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Os mRNA procariotas so policistrnicos

Em bactrias a traduo ocorre imediatamente a seguir transcrio

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4.3 A transcrio em eucariotas A transcrio em eucariotas difere da transcrio em procariotas. A transcrio ocorre no ncleo. Existe um desfasamento no espao e no tempo entre a transcrio e a traduo. A transcrio em eucariotas ocorre no ncleo existindo trs diferentes formas de RNA polimerase.

Ao contrrio dos procariotas, nos eucariotas o transcrito s se associa a ribossomas aps o final da transcrio, processamento do mRNA e seu transporte para o citoplasma.
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O fluxo da informao gentica em eucariotas e procariotas

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/
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Regies promotoras associadas aos genes eucariotas - Sequncia TATAAAA (TATA box), localizada 30 nucletidos acima do local de incio da transcrio (regio 30 ou de GoldbergHogness ); - Sequncia GGCCAATCT (CAT box), localizada 80 nucletidos acima do local de incio da transcrio (regio 80). A iniciao da transcrio envolve a ligao ao promotor de vrios factores de natureza proteica (factores gerais de transcrio-GTF), s depois ocorre a ligao da RNA polimerase. Adicionalmente existem unidades de controlo da transcrio designadas estimuladores (enhancers) e silenciadores (silencers) que podem, respectivamente aumentar ou diminuir a eficincia da transcrio.

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Os mRNAs de eucariotas so monocistrnicos, isto , cada gene transcrito individualmente a partir do seu promotor, havendo separao espacial entre genes que codificam protenas relacionadas. Sequncias estimuladoras (enhancers) do DNA, localizadas a milhares de pb do local de incio da transcrio, so locais de ligao de protenas activadoras que provocam uma dobra no DNA, interactuam com o complexo de incio da transcrio, e regulam positivamente a transcrio.

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Estrutura de um gene eucariota

Os genes eucariotas so constitudos por exes e intres. Durante o processamento do pr-mRNA, os intres so removidos e os exes so ligados.
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A maturao do mRNA eucariota a partir do transcrito primrio, RNA heterogneo (hnRNA) ou pr-mRNA, envolve um conjunto de processos designados de processamento (splicing).

UTR regio no traduzida


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Numa primeira fase verifica-se a adio de uma 7-metilguanosina (7mG) cap extremidade 5, e uma cadeia poli-A extremidade 3. Aos pr-mRNAs so retiradas depois as sequncias no codificantes, os intres. Posteriormente verifica-se a ligao das sequncias codificantes, os exes. Este mecanismo envolve a formao de uma ansa onde actuam pequenas ribonucleoprotenas nucleares (snRNPs). O complexo mRNAsnRNPs designado spliceosoma.

As snRNPs so formadas por 5 snRNAs (U1, U2, U4, U5 e U6) associados a vrias protenas.
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4.4 Processamento alternativo (alternative splicing) Mecanismo biolgico existente nas clulas eucariotas que permite a produo de uma variedade larga de protenas a partir de um pequeno nmero de genes. Um nico gene contm vrios exes que podem ser ligados de diferentes maneiras, pelo que a partir do mesmo gene diferentes protenas podem ser produzidas.
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http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/T/Transcription.html

Por ex. na espcie humana admite-se a existncia de apenas 25.000 30.000 genes, contudo estima-se que o nmero de protenas diferentes produzidas pelo menos 10 x superior. Mais de 50% dos genes originam pre-mRNAs que sofrem processamento alternativo.
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