Read without ads and support Scribd by becoming a Scribd Premium Reader.

Language:

Download

Go BackAdd Note

Link

Embed

Save for later

Histología(anatomía microscópica)

•Objetivo:Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía decélulas, tejidos yórganos, y correlacionar la estructura con su función.

Técnicas de microscopía óptica más usadas:•Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por ej.,Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory)•Histoquímica(Fosfatasa ácida, PAS

[ácido periódico-Schiff]

)•Inmuno-histoquímica(uso de Ac contra estructuras específicas,conjugados con moléculas fluorescentes[IFD e IFI]o con enzimas)Microscopía electrónica de transmisión(MET)y de barrido(MEB)

Hematoxilina-Eosina:Técnica de coloración

•Fijación de la muestra con Formalina(solución acuosa tamponada deformaldehído). Detiene elmetabolismoy conserva laestructuradel tejido (proteínas pero no lípidos

⇒

mal fijador de membranas).•Lavado y deshidratación(serie desoluciones alcohólicasde concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol conXileno, luego inclusión dela muestra con parafina fundida(miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina

⇒

Taco

⇒

cortesde 5-15

de espesor conmicrótomoque se montan sobre portaobjetos.•Coloración con Hematoxilina:extracción de la parafina con Xileno,re-hidratacióndel corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, ytinción con solución acuosa deHematoxilina.•Coloración con Eosina:deshidratacióndel corte con soluciones alcohólicas deconcentración creciente, y tinción con solución alcohólica deEosina. Lavadocon Xileno, agregado de unlíquido de montajeno acuoso, y cobertura con uncubre-objetospara lograr un preparado permanente.

Hematoxilina-Eosina:Fundamento de la coloración

La Eosinaes uncolorante ácido(predomina densidad decarga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, talescomo:filamentos citoplasmáticos(como los de células musculares);membranas intracelulares; yfibras extracelulares(por sus aminoácidos básicos ionizados). La Hematoxilinase asocia conmordientespara actuar comouncolorante básico, por locual se asocia y coloreaestructuras aniónicas(que posean fosfatos, sulfatos y/ocarboxilos ionizados):•Heterocromatina y nucléolos•RNA ribosomal•Matriz extracelular (por lossulfato de los GAG)