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Aplicaciones en genética: Trabajos de investigación

Aplicaciones en genética: Trabajos de investigación

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Published by Romulo Aycachi Inga
Como parte del curso de Ingenieria genética y enzimología microbiana, había que tomar un trabajo aplicativo en genética, leerlo y explicarlo. Aquí están los trabajos de investigación que fueron tomados para dicho tarea.
Como parte del curso de Ingenieria genética y enzimología microbiana, había que tomar un trabajo aplicativo en genética, leerlo y explicarlo. Aquí están los trabajos de investigación que fueron tomados para dicho tarea.

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 ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA 
Trabajos Aplicativos en Enzimologíay Genética Microbiana
ASIGNATURA:
Seminario: Enzimología y GenéticaMicrobiana
DOCENTE:
MSc. Martha Vergara Espinoza
ALUMNOS:
Rómulo Aycachi Inga
¿???????CICLO:
2008 - I
 Lambayeque, 18 de setiembre de 2008.
 
AVANCES EN LA TRANSFORMACIÓN EN PAPA PARAINDUCIR RESISTENCIA A TIZÓN TARDÍO
María Luisa Guevara FujitaBióloga; MSc.Centro Internacional de la Papa – Departamento de Mejoramiento y RecursosGenéticos.INTRODUCCIÓN:La producción de papa en el mundo es afectada por enfermedadescausadas por bacterias, hongos y virus. El tin tardío, causado po
Phytophthora infestans
, ocasiona pérdidas de más de 15% en la producciónmundial de papa. El mejoramiento convencional, que combina el uso deprogenitores altamente resistentes a tizón tardío se ve dificultado por lacomplejidad de las características genéticas del patógeno, que son heredadasde forma cuantitativa. Recientemente, además, se ha observado la presenciade nuevas cepas del patógeno y recombinación sexual, lo cual produciríanuevos genotipos, potencialmente más virulentos.La introduccn de genes foneos que confieran resistencia a laenfermedad es altamente deseable. En este sentido, este trabajo hace uso degenes que expresan proteínas con efecto antifúngico y antimicrobiano. Con laidea de incrementar las respuestas defensivas de la planta frente al ataque depatógenos. Se espera obtener un efecto sinérgico en la acción de estos genescuando se usan más de dos genes por evento de transformación. Se utilizóosmotina, lisozima (bovina y del fago T4) y glucanasa. La osmotina es unaproteína que se expresa en las plantas en respuesta a situaciones de estrés(salinidad, estímulo hormonal, ataque de patógenos). Se sabe que pertenece auna familia de genes que se encuentra altamente conservada en lasSolanaceas y trabajos previos, indican que incrementa la resistencia ainfecciones causadas por hongos en las plantas de papa. La glucanasa, por otro lado, es una proteína que cataliza la hidrólisis de polisacáridos presentesen la pared celular del hongo y la lisozima es conocida como una proteína conactividad antimicrobiana, a nivel de la pared celular de las bacterias.MATERIALES Y MÉTODOS:
o
Se desarrollaron construcciones genéticas que llevan uno, dos y tres delos genes mencionados.
o
Se hicieron clonamientos a partir de un DNAc de osmotina pA13 de
Solanum commersonii 
en un vector binario de transformación como es elpMOG800.
2
 
o
A este, se le adicionaron, la lisozima bovina c2 y la lisozima del fago T4.Estos genes, con sus respectivos promotores y terminadores, han sidoaislados en ambos sentidos de orientación respecto al vector inicial.
o
El gen de la glucanasa es un DNAc (clon G46) de
Solanum tuberosum
.Para este gen se escogió el promotor ubiquitin 3. Este gen ha sidoinsertado entre la osmotina y lisozima en una sola orientación.
o
Una vez obtenidos los nuevos vectores, se procedió a la transformaciónde las plantas. Para ello, se seleccionó la variedad Amarilis INIA, quetiene resistencia moderada a tizón tardío.
o
Estos genes se introdujeron en la cepa LBA4404 de
 Agrobacterium
. Laeficiencia de transformación en esta variedad es relativamente baja.
o
Se hicieron modificaciones a los medios de regeneración y la seleccióncon el antibiótico kanamicina, también fue modificada (de 100 mg/L a 50mg/L), debido a que los explantes en dosis altas sufrían necrosis ymuerte.
o
Los regenerantes obtenidos fueron colocados en medio con antibiótico,Km50 mg/L y luego fueron pasados a magentas.
o
Las neas putativamente transgénicas obtenidas de estos sietevectores, han sido chequedas por pruebas de callos y PCR. Se usandosis altas de kanamicina y se observa la formación de callos en hojasresistentes al mismo y que por lo tanto son consideradas transgénicas.
o
Para la prueba de PCR, se usó primers de kanamicina, seleccionandolas líneas donde se amplificó un producto.RESULTADOS Y DISCUSIÓN:Los resultados obtenidos nos permiten ver que se ha logradotransformar algunas líneas. Sin embargo, la eficiencia de transformación paraesta variedad de papa es baja, del orden del 30% (32/107 líneas chequeadas).Estas líneas obtenidas serán después sometidas a infección por elpatógeno, tanto a nivel de laboratorio como a nivel de campo.Se espera además poder aumentar el número de genes en aquellascontrucciones que sean prometedoras, en terminos de números de líneastransgénicas producidas y en cuanto al comportamiento que presentenfrente ala infección usando por ejemplo otros genes de interés que puedan incrementar la resitencia a
Phytophthora
.
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