Curs 2.

FIZIOLOGIA MEMBRANEI CELULARE

1.Func ia de transport a membranei celulare Transportul activ
1.1. Transportul activ primar 1.2. Transportul activ secundar 1.3. Pompele ionice

2. Func ia membranei n transferul de informa ie

2.1. Receptorii membranari 2.2. Interac iunea ligand-receptor 2.3. Proteinele G membranare 2.4. Sisteme de semnalizare intracelulare

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ef.lucr.dr.LAVINIA NOVEANU

OBIECTIVELE CURSULUI 2 Studentul trebuie s :

1. Defineasc principalele caracteristici ale transportului activ membranar i ale principalelor tipuri de pompe ionice 2. n eleag diferen a dintre transportul activ i transportul pasiv, dintre transportul activ primar i transportul activ secundar 3. Cunoasc mecanismul general de func ionare i rolurile pompei Na+/K+, pompei de Ca2+, pompei H+/K+ i a pompelor protonice 4. Discute rolul mecanismelor de transport activ n generarea gradientelor fizice care ntre in transportul pasiv 5. Discute importan a transportului activ n schimburile transmembranare la suprafe ele de schimb epiteliale (digestive, renale) 6. Defineasc i s clasifice receptorii membranari 7. Cunoasc diferen a dintre r spunsul celular de tip agonist/ antagonist 8. Defineasc i s descrie schema general de func ionare i rolurile principale ale sistemelor de semnalizare intracelular
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 2

1. FUNC IA DE TRANSPORT A MEMBRANEI TRANSPORTUL ACTIV (TA)

CARACTERISTICI  se desf oar mpotriva gradientului electrochimic
Transport activ

 este specific

necesit o protein transportoare specific necesit scindarea ATP i condi iile de mediu pn la Tmax dependent

 necesit consum energetic

 este dependent de energetica celular  are caracter limitativ se desf oar

numai de capacitatea transportorului  poate fi competitiv pentru substan e nrudite chimic care au acela i transportor (ex:aminoacizii)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 3

ROLURILE transportului activ  asigur transportul moleculelor organice (glucoza, aminoacizi) i a majorit ii ionilor (Na+, K+, Ca2+, PO3-, Fe2+, H+, etc.)  asigur diferen a de concentra ie a substan elor ntre mediul intrai extracelular  ntre ine mecanismele de transport pasiv CLASIFICARE - dup modalitatea de utilizare a energiei  transport activ primar consum direct al energiei  transport activ secundar consum indirect al energiei, prin utilizarea gradientului de concentra ie ionic asigurat prin transport activ primar
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 4

1.1. TRANSPORTUL ACTIV PRIMAR

CARACTERISTICI  este un transport contragradient specific pentru ioni  este asigurat de o proteina transportoare numit POMP IONIC  are situsuri de legare pentru ioni asigur leagarea ionilor  este o ATP-az scindeaz ATP p ADP + Pi + E asigur energia necesar transportului ionilor  clasificare: uniport, cotransport (sinport), antiport TIPURI DE POMPE IONICE 1. 2. 3. 4. pompa Na+/K+ (Na+/K+- ATP-aza) pompa H+/K+ (H+/K+- ATP-aza) pompa de Ca2+ (Ca2+ - ATP-aza) pompele protonice (H+- ATP-aze)
Pompa Na+/K+
5

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

1.2. TRANSPORTUL ACTIV SECUNDAR

CARACTERISTICI  este un transport contragradient pentru substan e organice sau ioni  este asigurat de o proteina transportoare numit CARRIER  are situsuri de legare pentru substane,  nu are funcie ATP-azic nu poate asigura energia necesar transportului  este cuplat cel mai frecvent cu pompa Na+/K+ (cu transportul Na+)  se desf oar n sensul gradientului electrochimic al Na+ ntre inut de pompa Na+/K+ (prin consum de energie)

Pompa Na+/K+

Cotransportori

Schimb tori ionici

CLASIFICARE: n func ie de direc ia de transfer cuplat cu Na+  Cotransport n aceea i direc ie cu Na+  Ex: cotransportor Na+/glucoz , Na+/aminoacizi  Antiport (schimb tor ionic) n direc ie opus cu Na+  Ex: schimb tor Na+/H+, schimb tor Na+/Ca2+

Pompa Na+/K+

Cotransportori

Schimb tori ionici

7

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

SCHIMB TORUL HCO3-/Cl- - transferul depinde de gradientul de concentra ie al HCO3- determinat de activitatea anhidrazei carbonice (CA) CO2 + H20 p H2CO3 p HCO3- + H+  Rol principal: n eritrocit p rol n echilibrul acido-bazic n celula parietal gastric p rol n secre ia de HCl n nefrocit p rol n acidifierea urinii i echilibrul acido-bazic
CA

Eritrocit
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Celula parietal gastric

Nefrocit
8

1.3. POMPELE IONICE  au toate caracteristicile i rolurile transportului activ primar SECVEN A GENERAL DE FUNC IONARE A POMPELOR IONICE 1.Fixarea ionului pe partea unde acesta se g se te n concentra ia mai mic , pe situsurile de legare al pompei 2.Fixarea 1 ATP la nivelul situsului nucleotidic urmat de hidroliz , prin funcia de ATP-az a pompei: ATP p ADP + Pi + E

Pompa de Ca2+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 9

 gruparea fosfat (Pi) este utilizat pentru cre terea afinit ii pompei fa de ion  energia (E) este utilizat pentru modificarea de conforma ie proteinei transportoare 3.Eliberarea ionului pe partea cu concentra ie mai mare  situsul nucleotidic elibereaz produ ii de hidroliz ai ATP  proteina transportoare revine la conforma ia ini ial

Pompa de Ca2+
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 10

FUNC IILE GENERALE ALE POMPELOR IONICE La nivelul celulelor Na+ Glucoz  genereaz gradientul de concentraie intra-/extracelular La nivelul epiteliilor  genereaz gradientul de concentraie intra-/extraceluler prin care ntre ine transportul + Na pasiv transmembranar  rol important n procese de absorb ie/reabsorb ie de la nivelul suprafe elor de schimb epiteliale (digestive, renale) La nivelul neuronului  men inerea i restabilirea echilibrului ionic dup depolarizare (pompa Na+/K+) Na+ Na+ Glucoz La nivelul fibrei musculare  declan area relax rii musculare 11 CURS 2 FIZIOLOGIE (pompa Ca2+) MG ANUL I

(a) Pompa Na+/K+ (Na+/K+- ATP-aza) CARACTERISTICI  cea mai important ATP-az de transport  transport 3 Na+ spre exterior i 2 K+ spre interior pentru 1 ATP  este mare consumatoare de energie - 50% n cazul neuronului i nefrocitului - 10% n cazul fibrei musculare i a hepatocitului STRUCTUR  dou subunit i E cu rol catalitic  dou subunit i F cu rol reglator
12

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Subunit ile E - au rol catalitic  prezint la interior: situsuri de fixare pentru 3 Na+ situs de fixare pentru 1 ATP situs de fosforilare pentru 1 Pi  prezint la exterior: situsuri de fixare pentru 2K+ Subunit ile F - au rol reglator  translocarea pompei din citoplasm n membran  distribu ia polarizat a pompelor pe suprafa a celular p la polul bazal al celulelor
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 13

ROLURILE pompei Na+/K+ asigur HOMEOSTAZIA CELULAR 1.pomp electrogenic p nc rcare electronegativ la interior - men ine poten ialul de repaus - reface echilibrul ionic dup depolarizare - activat n exces hiperpolarizare - inhibat n exces depolarizare u oar 2.asigur gradientul de Na+ necesar  transportului activ secundar  transportului pasiv 3.men inerea volumului celular (H2O urmeaz Na+) REGLAREA ACTIVIT II pompei Na+/K+  activare: insulin , hormoni tiroidieni, catecolamine, cre terea volumului celular  inhibi ie: ouabain (specific), tonicardiace (digoxin)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 14

(b) Pompa de Ca2+ LOCALIZARE: n fibra muscular  la nivelul sarcolemei p expulzeaz 2 Ca2+ n mediul extracelular  la nivelul membranei RS p recapteaz 2 Ca2+ din citoplasm ROL: sc derea Ca2+ citosolic relaxare muscular

RETICUL SARCOPLASMATIC (RS)

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Pompa de Ca2+
15

(c) Pompa H+/K+ LOCALIZARE: n epitelii  transport n celul 1 K+ la schimb cu 1 H+  celula parietal gastric p formarea HCl  nefrocit p acidifierea urinii i echilibrul acido-bazic

Celula parietal gastric

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Nefrocit
16

(d) Pompele protonice (de H+) LOCALIZARE i ROL  membranele mitocondriale p transportul electronilor n timpul fosforil rii oxidative (produc ie de ATP)  nefrocit p acidiferea urinii i echilibrul acido-bazic

Mitocondrie
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Nefrocit
17

2. FUNC IA MEMBRANEI N TRANSFERUL DE INFORMA IE

INFORMA IA = totalitatea semnalelor biochimice transmise de substan e biologic active (mesageri primari, de ordinul I) care interac ioneaz celular specific MESAGERII PRIMARI cu ac iune pe receptori membranari:  Neurotransmi tori - mediatori chimici n cadrul unei sinapse cu receptori specifici i declan eaz un r spuns

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

18

Hormoni endocrini - secreta i n snge (ac iune endocrin )

Hormoni tisulari - secreta i local (ac iune paracrin sau autocrin )

Ac iune paracrin
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Ac iune autocrin
19

2.1. RECEPTORII MEMBRANARI

DEFINI IE: proteine integrale complexe care capteaz , amplific moduleaz informa ia primit de la mesagerii primari r spunsul CLASIFICARE  n raport cu modalitatea de semnalizare intracelular  receptori protein - canal ionic  receptori cupla i cu o enzim membranar  receptori cupla i cu proteina G membranar  receptori enzim (catalitici) i

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

20

(a) Receptorii protein

un canal ionic

canal ionic

CARACTERISTIC : ligandul ata at de receptorul specific deschide flux ionic depolarizant sau hiperpolarizant

EXEMPLU: acetilcolina (ACh) deschide canalele de Na+ din structura receptorului nicotinic situat n membrana postsinaptic a pl cii motorii influx de Na+ cu efect depolarizant

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

21

(b) Receptorii cupla i cu o enzim membranar

CARACTERISTIC : ligandul ata at de receptorul specific determin activarea unei enzime membranare cuplat cu receptorul pe fa a intern a membranei sintetiza unui mesager secundar

EXEMPLU: acetilcolina (ACh) se fixeaz de receptorul muscarinic de la nivelul fibrei musculare netede vasculare activarea guanilatciclazei membranare (GCm) cu formare de GMPc

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

22

(c) Receptorii cupla i cu proteina G membranar

CARACTERISTIC : activeaz ligandul ata at de receptorul specific proteina G membranar care cupleaz RECEPTORUL cu

EFECTORUL: un canal ionic (de Ca2+ sau K+) sau o unitate catalitic (enzim membranar , intracelular ,factori de transcrip ie) EXEMPLU: noradrenalina ac ioneaz pe receptorii F-adrenergici cupla i prin proteina Gs cu adenilatciclaza, iar generarea de AMPc activeaz canale de Ca2+ membranare

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

23

(d) Receptorii catalitici

CARACTERISTICI  ligandul este un hormon de cre tere Exemplu: STH, insulina  fixarea ligandului determin dimerizarea receptorului  are activitate enzimatic intrinsec care modific structura altor proteine intracelulare  moduleaz activitatea unor sisteme complexe de semnalizare intracelular cu rol n reglarea transcrip iei genelor

STH

Insulina

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

24

2.2. INTERAC IUNEA LIGAND-RECEPTOR

DEFINI IE: totalitatea proceselor fizico-chimice declan ate de fixarea ligandului pe receptorul specific ETAPE I.Formarea COMPLEXULUI LIGAND-RECEPTOR ACTIVAT  selec ia steric a ligandului aflat n concentra ii foarte mici (nanograme sau picograme)  fixarea ligandului prin interac iuni fizico-chimice slabe INTERAC IUNEA: bimolecular , reversibil , desf urat secven ial i foarte rapid

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

25

II.Activarea MECANISMULUI DE SEMNALIZARE INTRACELULAR

 modificarea configura iei structurale a receptorului  modificarea func iei receptorului la extremitatea sa distal

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

26

TIPURI DE INTERAC IUNI LIGAND RECEPTOR  De tip AGONIST - formarea complexului ligand-receptor activat determin r spunsul fiziologic specific n propor ie de 80-100%  DE tip AGONIST PAR IAL - formarea complexului ligandreceptor activat determin propor ie de 10 - 40%  De tip ANTAGONIST - formarea complexului ligand-receptor activat NU determin r spunsul fiziologic specific (agonism 0%) r spunsul fiziologic specific n

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

27

2.3. PROTEINELE G MEMBRANARE

DEFINI IE: proteine traductor ata ate de fa a intern = canal ionic (K+ sau Ca2+) i/sau unitate catalitic (enzim ) STRUCTUR proteinei  form inactiv cnd fixeaz o molecul de GDP  form activ cnd fixeaz o molecul de GTP (b) subunit ile F i K - formeaz un complex FK
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 28

membranei, care asigur cuplarea RECEPTORULUI cu EFECTORUL 3 subunit i

(a) subunitatea E = GTP-az care asigur func ia i specificitatea

TIPURI DE PROTEINE G
RECEPTOR Gs Gi F1- adrenergici F2- adrenergici E2 adrenergici colinergici - M2 EFECTOR adenilatciclaza adenilatciclaza Mesager secundar oAMPc (o influxul de Ca2+ ) q AMPc (o efluxul de K+) o IP3, oDAG, o Ca2+- calmodulina

Gq

fosfolipaza C E1 adrenergici colinergici - M1,M3

Receptorii adrenergici ( 1, 2) i F (F1-F3) ligand NA Receptorii colinergici nicotinici (N) i muscarinici (M1 M3) ligand ACh
29

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

ROLURI  activarea unor fluxuri ionice transmembranare (Ca2+, K+) modific ri de poten ial membranar  modularea activit ii unor enzime membranare i intracelulare sinteza de mesageri secundari  modularea transcrip iei unor gene sintez de proteine i modific ri structurale specifice

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

30

2.4.SISTEME DE SEMNALIZARE INTRACELULAR

DEFINI IE: sisteme complexe de proteine membranare i intracelulare care transform informa ia purtat de mesagerii

primari n r spuns celular specific CLASIFICARE  sistemul adenilatciclaz AMPc  sistemul guanilatciclaz GMPc  sistemul deriva ilor de fosfatidil inozitol (IP3, DAG)  sistemul Ca2+ - calmodulin

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

31

SCHEMA GENERAL I.Mesagerul PRIMAR (de ordinul I)

DE FUNC IONARE

 ac ioneaz pe receptori membranari specifici  determin activarea mesagerilor secundari II. Mesagerul SECUNDAR (ordinul II)  amplific informa ia de 10 x  activeaz mesagerii ter iari (PK) III. Mesagerul TER IAR (ordinul III)  amplific informa ia de 100 x  prin activarea masei critice de proteine intracelulare care asigur R SPUNSUL CELULAR = modific ri func ionale, metabolice i structurale ale celulei
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 32

(a) Sistemul adenilatciclaz

CARACTERISTICI

- AMPc
asociat

 cel mai important sistem de semnalizare intracelular receptorilor membranari cupla i cu proteinele Gs i Gi  formarea AMPc are sub ac iunea adenilatciclazei

 degradarea AMPc are sub ac iunea AMPc fosfodiesterazei  are asociat cu proteinkinaza A (PKA) ca mesager ter iar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

33

ROLURI  mediaz efectele celulare ale neurotransmi polipeptidici Neurotransmi tori torilor i hormonilor

- r spunsul postsinaptic - sinteza de proteine neuronale Hormoni polipeptidici - metabolism celular - secre ie celular

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

34

(b) Sistemul guanilatciclaz

CARACTERISTICI

- GMPc

 formarea GMPc are sub ac iunea guanilatciclazei (GC)  form membranar (GCm)  form citoplasmatic sau solubil (GCs)  degradarea GMPc are loc sub ac iunea GMPc fosfodiesterazei  are ata at proteinkinaza G (PKG) ca mesager ter iar

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

35

ROLURI (a) Relaxarea musculaturii netede vasculare  peptidul natriuretic atrial (ANP) activeaz GCm  oxidul nitric (NO) activeaz GCs (b) Mediaz o parte din efectele acetilcolinei asupra receptorilor muscarinici (cupla i cu GCm) deschidera canalelor de K+

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

36

(c) Sistemul deriva ilor de fosfatidil-inozitol

 IP3 i DAG se formeaz din inozitolfosfolipidele (PIP2) membranare sub ac iunea fosfolipazei C membranare, activat de proteina Gq cuplat cu receptorii E1 adrenergici i colinergici (M1,M3)  DAG are ata at ter iar proteinkinaza C membranar (PKC) ca mesager

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

37

ROLURI (a) Regleaz activitatea contractil a fibrei musculare netede  IP3 activeaz canale de Ca2+ din membrana reticulului sarcoplasmatic eliberarea Ca2+ n citoplasm cu activarea contrac iei musculare  DAG activeaz sistemul PKC modularea contrac iei mu chiului neted reglarea metabolismului celular (b) Mediaz efectele celulare pentru:  neurotransmi tori (ex: noradrenalina, adrenalina, etc)  neurohormoni hipotalamici (ex: TRH, ADH, oxitocin , etc)  hormoni gastro intestinali (ex: gastrina, colecistokinina, etc)
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I 38

(d) Sistemul Ca2+ - CALMODULIN

CARACTERISTICI  cel mai complex sistem de semnalizare intracelular  activat prin cre terea Ca2+ citosolic  inactivat prin sc derea Ca2+ citosolic

oCa2+ q Ca2+ Canalul de Ca2+ - sarcolem - membrana RS

CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

Pompa de Ca2+ - sarcolem - membrana RS

39

ROLURI (a) Declan eaz contrac ia fibrei musculare netede prin activarea fosforileaz lan ul u or miozinic myosin light C kinasei (MLCK)

Miozina (b) Mediaz efectele celulare ale hormonilor hipotalamici (c) Moduleaz activitatea enzimelor implicate n sistemele de semnalizare intracelular
CURS 2 FIZIOLOGIE MG ANUL I

CAMPK
40