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Methodologie de l'Antibiogramme FIN-1

Methodologie de l'Antibiogramme FIN-1

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05/20/2013

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Réalisation del’antibiogramme
Dr Nathalie Guessennd
Unité des antibiotiquesguessennd@yahoo.fr,
L’ ANTIBIOGRAMMEL’ ANTIBIOGRAMME
Guérir Guérir rapidementrapidement
BUT :BUT :
Trouver untraitementefficace pour lemalade
Définition (1)
Antibiogramme permet de mesurer lacapacité d’un antibiotique à inhiber la
Il doit être réalisé selon lesméthodesstandards
Définition (2)
antibiogramme = outil validé par unbiologiste médical
médecin de choisir le bon antibiotique,ou l'association d'antibiotiquespermettant de traiter efficacement unpatient.
Du prélèvement àl'antibiogramme
On recueille les bactéries:
o
dans le sang (hémoculture).
o
dans les urines, 
o
ans es sees, es excrmens anmaux,
o
dans les crachats, les lavages broncho-alvéolaires,
o
dans le liquide céphalo-rachidien,
Les bactéries sont mises en culture et ensuiteidentifiées ets'il est nécessaire de réaliserun antibiogramme (décision du biologiste).
STANDARDISATION :STANDARDISATION :
-
de l'inoculumde l'inoculum : quantité dePour être fiable la méthode doitPour être fiable la méthode doitêtre standardiséeêtre standardiséeactries-de la gélose Muellerde la gélose Mueller--HintonHinton : composition du milieu-de l'épaisseur de la gélosede l'épaisseur de la gélose :diffusion de l'antibiotique-de la charge d’antibiotique dude la charge d’antibiotique dudisquedisque
 
La standardisation permet:
un antibiogramme reproductible etfiable
 
 
un minimum de variation
une bonne lecture
une bonne interprétation
Différentes méthodes
Concentration minimale inhibitrice(CMI)
De dilution meu soemilieu liquide
De diffusion
disques
E-test®
 
Antibiogrammedisques
 
L’antibiogramme repose surla notion de:
 inhibitrice
Concentration Minimale inhibitrice(CMI)CMI= plus faible concentrationd’antibiotiques capable d’inhiber
in 
souche étudiée pendant unepériode de temps définie
Elle s’exprime en mg/l ou µg/ml
Méthodes (1)
la méthode par diffusion desdiffusion desdisquesdisques imprégnésd’antibiotiques et la mesure desdiamètres ou méthode de KirbyBauer est celle recommandéepar l’OMS
 
Méthode standardisée
Selon le Comité de l’antibiogramme de la SociétéFrançaise de Microbiologie
(http://www.sfm.asso.fr/nouv/general.php?pa=2)
 
 
 Epaisseur 4 mm et horizontal etbonne composition
Inoculum
des colonies adjacentes maisnon confluentes
Pré-diffusion et pré-incubation
Méthode de diffusion enMéthode de diffusion engélosegélose
Utilise des disques de papier filtre(buvard) sur lesquels un antibiotique a étéincorporé, séché et stabilisé
inoculation de toute la surface de la gélose
les disques sont placés sur la surface de laboîte.
les antibiotiques
diffusent dans lagélose
zone d'inhibitionPrincipe de la diffusion d’un antibiotique enmilieu gélosé à partir d’un disque
Disque
surfaçefondDiffusionradialeen profondeur 
Principe de l’antibiogrammepar diffusion
Disqueantibiotique(6mm
)Charge connue
Inoculation par étalement en
Gélose MuellerHinton (4mm)
Zone d’inhibitiondela culture
CultureCulture
surface de la gélose
Gradient de diffusionet zone d’inhibition
C1
Gradientd’antibiotiquedécroissantDisqued’antibiotique
Zoned’inhibitiondela culture
Colonies
 
C1 > C2 > C3 > C4
 C3C4
Diamètred’inhibition
Démarche méthodologique
Démarche de qualitéStandardisation
Milieu Mueller Hinton
Composition, épaisseur(4mm), horizontalité
Inoculum
Choix des antibiotiques
Dépôt des disques et incubation
lecture et interprétation

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