ELISA (Ensayo ImmunoSorbant ligados a enzimas)

El objetivo de ELISA es determinar si una protena particular, est presente en una muestra y si es as, cunto. Hay dos variantes principales de este mtodo: se puede determinar la cantidad de anticuerpos en una muestra, o se puede determinar la cantidad de protena est vinculado por un anticuerpo. La distincin es si usted est tratando de cuantificar un anticuerpo o alguna otra protena. En este ejemplo, vamos a utilizar un mtodo de ELISA para determinar la cantidad de un anticuerpo particular, est presente en una sangre individuos. ELISA se realizan en placas de 96 pocillos que permite resultados de alto rendimiento. La parte inferior de cada pozo est cubierto con una protena a la que se unir el anticuerpo que desea medir. La sangre entera se deja coagular y las clulas se centrifugan a cabo para obtener el suero claro con anticuerpos (llamados anticuerpos primaria). El suero se incuba en un pozo, y as cada uno contiene un suero diferentes (ver figura abajo). El suero de control positivo y un suero de control negativo se incluiran entre las 96 muestras que se estudia.

Despus de algn tiempo, el suero se extrae y dbilmente anticuerpos adherentes se lavan con una serie de enjuagues de amortiguamiento. Para detectar los anticuerpos de la envolvente, un anticuerpo secundario se aade a cada pocillo. El anticuerpo secundario se unira a todos los anticuerpos humanos y se produce tpicamente en un roedor. Junto al anticuerpo secundario es una enzima como la peroxidasa o fosfatasa alcalina. Estas enzimas pueden metabolizar sustratos incolora (a veces llamado chromagens) en productos de color. Despus de un perodo de incubacin, la solucin de anticuerpo secundario se elimina y sin apretar los adherentes se lavan como antes. El ltimo paso es la adicin del sustrato de enzimas y la produccin de productos de color en los pocillos con anticuerpos secundarios de la envolvente. Cuando la reaccin enzimtica es completa, toda la placa se coloca en un lector de placas y la densidad ptica (es decir, la cantidad de producto de color) se determina para cada bien. La intensidad del color producido es proporcional a la

cantidad de anticuerpo primario unido a las protenas en la parte inferior de los pozos. La Universidad de Arizona cuenta con una excelente animacin de QuickTime y prueba si desea ms informacin. Web de la clula Front Page Genmica Esquema del curso y Plan de Estudios Calendario de Genmica Biologa molecular del curso Biologa Materiales del Curso Biologa Pgina de inicio

Copyright 2002 Departamento de Biologa, Davidson College, Davidson, Carolina del Norte 28036 Enve sus comentarios, preguntas y sugerencias a: macampbell@davidson.edu
ELISA
MedlinePlus Temas Infecciones virales Imgenes

Anlisis de sangre Leer ms Anticuerpo Antgeno Enzima ELISA significa alternancia inmunoensayo enzimtico. Es un laboratorio de ensayo utilizado habitualmente para la deteccin de anticuerpos en la sangre. Cmo se realiza el examen La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte interior del codo o del dorso de la mano. El sitio se limpia con un medicamento antisptico (antisptico). El mdico coloca una banda elstica alrededor del antebrazo con el fin de aplicar presin el rea y hacer que la vena se llene de sangre.

Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena. La sangre se recoge en un frasco hermtico o en un tubo adherido a la aguja. La banda elstica se retira del brazo. Una vez que la sangre ha sido recogido, se retira la aguja, y el sitio de puncin para detener cualquier sangrado. En los bebs o nios pequeos, un instrumento puntiagudo llamado lanceta se puede utilizar para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un portaobjetos o una tira reactiva. Un vendaje se coloca sobre el rea si hay algn sangrado. La muestra se enva a un laboratorio donde el anticuerpo (o antgenos ) est vinculada a una enzima . Si la sustancia a estudiar est en la muestra, la solucin de la prueba se torna de un color diferente. Cmo prepararse para el examen No se requiere preparacin especial. Cmo se siente durante el examen Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber una sensacin pulstil. Por qu se realiza el examen Esta prueba se utiliza a menudo para ver si usted ha estado expuesto a virus u otras sustancias infecciosas. Se utiliza con frecuencia para detectar infecciones pasadas o presentes. Normal Resultados Los valores normales dependen del tipo de sustancia que se identific. Los rangos normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Hable con su mdico acerca del significado de los resultados de la prueba especfica. De los resultados anormales Los valores anormales dependen del tipo de sustancia que se identific. En algunas personas, un resultado positivo puede ser normal. Riesgos Las venas y arterias varan en tamao de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro. La obtencin de una muestra de sangre de algunas personas puede resultar ms difcil que de otras. Otros riesgos asociados con la extraccin de sangre son leves, pero pueden incluir: El sangrado excesivo Desmayo o sensacin de mareo Hematoma (acumulacin de sangre bajo la piel) Infeccin (un riesgo leve cada vez que la piel se rompe)

Nombres alternativos inmunoensayo ligado a enzimas; EIA Referencias Y Ashihara, Y Kasahara, RM Nakamura. Inmunoensayo y la inmunoqumica. En: RA Pincus, MR eds McPherson. Diagnstico clnico de Henry y de gestin por los mtodos de laboratorio . 21a ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2006: cap 43.

Fecha de actualizacin: 11/16/2008 Actualizado por: Linda Vorvick, MD, mdico de familia, coordinador de la sede de Seattle, profesor, Fisiopatologa, MEDEX Noroeste Divisin de Estudios de Asistente Mdico de la Universidad de Washington Escuela de Medicina. Realizada por: Zieve, MD, MHA, Medical Director, ADAM, Inc.

ADAM, Inc. est acreditada por la URAC, tambin conocido como American Accreditation HealthCare Commission (www.urac.org). URAC programa de acreditacin es una auditora independiente para verificar que ADAM cumple los rigurosos estndares de calidad y rendicin de cuentas. ADAM es una de las primeras empresas en alcanzar esta tan importante distincin en la salud y servicios en lnea. Aprenda ms acerca de ADAM poltica editorial , proceso editorial y la poltica de privacidad . ADAM es tambin miembro fundador de Hi-Ethics y se adhiere a los principios de la Health on the Net Foundation (www.hon.ch).

La informacin aqu contenida no debe utilizarse durante ninguna emergencia mdica, ni para el diagnstico o tratamiento de alguna condicin mdica. Un mdico certificado debera ser consultado para el diagnstico y tratamiento de cualquiera y todas las condiciones mdicas. Llame al 911 para todas las emergencias mdicas. Los enlaces a otros sitios se proporcionan a ttulo informativo - que no constituyen un aval de los otros sitios. Copyright 1997-2010, ADAM, Inc. La reproduccin o distribucin de la

E nzyme- L entintado me mmuno s orbent Un ssay (ELISA)

ELISA es un mtodo ampliamente usado para medir la concentracin de una molcula en particular (por ejemplo, una hormona o droga) en un fluido, como el suero o la orina. Es tambin conocido como e nzyme i mmunoun ssay o EIA. La molcula es detectado por los anticuerpos que se han hecho en contra de ella, es decir, para el que es el antgeno de . los anticuerpos monoclonales se usan con frecuencia. La prueba requiere: los anticuerpos fijados a una superficie slida, como la superficie interior de un tubo de ensayo; una preparacin de los mismos anticuerpos acoplados a una enzima. Este es uno (por ejemplo, -galactosidasa ) que produce un producto coloreado a partir de un sustrato incoloro. Realizacin de la prueba 1. Los tubos se llenan con la solucin de antgeno (por ejemplo, orina) para ser analizadas. Cualquier molculas se unen al antgeno presente a las molculas de anticuerpo inmovilizado. 2. El conjugado anticuerpo-enzima se aade a la mezcla de reaccin. La parte del anticuerpo conjugado se une a las

molculas de antgeno que se consolidaron con anterioridad, la creacin de un anticuerpo-antgeno-anticuerpo "sandwich". 3. Despus de lavado que elimina el conjugado no unido, la solucin del substrato se aade. 4. Despus de un intervalo establecido, para la reaccin (por ejemplo, mediante la adicin de 1 N NaOH) y la concentracin de producto coloreado formado se mide en un espectrofotmetro. La intensidad del color es proporcional a la concentracin de la envolvente del antgeno. ELISA tambin se puede adaptar a medir la concentracin de anticuerpos . En este caso, 1. Los pozos estn cubiertos con la correspondiente antgeno. 2. La solucin (por ejemplo, el suero) que contiene anticuerpos, se aade. 3. Despus de que hayan tenido tiempo para unirse a la inmovilizacin del antgeno, 4. una enzima conjugado anti-inmunoglobulina , se aade, que consiste en un anticuerpo contra los anticuerpos estn ensayando. Por ejemplo, si humano anti- VIH estn siendo ensayadas anticuerpos, entonces anticuerpos (criado en una cabra o de conejo contra las inmunoglobulinas humanas) se conjugan para la enzima. 5. Despus de un lavado que elimina el reactivo sin reaccionar, el substrato se aade. 6. La intensidad del color producido es proporcional a la cantidad de enzima marcado con anticuerpos unidos (y por tanto a la concentracin de los anticuerpos que se analizaron). literalmente cientos de kits de ELISA se fabrican para investigacin diagnstico humano y veterinario algunos ejemplos: cribado de sangre donada para detectar evidencia de contaminacin viral VIH-1 y VIH-2 presencia de anticuerpos anti-VIH () la hepatitis C (presencia de anticuerpos)

la hepatitis B (prueba para los anticuerpos y un antgeno viral) HTLV-1 y -2 (presencia de anticuerpos)

medir los niveles de la hormona

HCG (como una prueba de embarazo) LH (determinacin del momento de la ovulacin) TSH , T3 y T4 (para la funcin tiroidea)

hormonas (por ejemplo, los esteroides anablicos , HGH ) que pueden haber sido usados ilcitamente por atletas la deteccin de infecciones De transmisin sexual como agentes del VIH , la sfilis y la clamidia la hepatitis B y C

Toxoplasma gondii

la deteccin de alrgenos en los alimentos y del polvo domstico de medicin "factores reumatoides y otros autoanticuerpos en enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso medir las toxinas en alimentos contaminados la deteccin de drogas ilcitas, por ejemplo, cocana

opiceos -9-tetrahidrocannabinol, el ingrediente activo de la marihuana

Bienvenida y anotaciones

20 de agosto 2004informacin contenida aqu Qu le dice el ensayo El ELISA ( Enzyme-Linked ensayo inmunoenzimtico ) se puede utilizar tanto cualitativa como cuantitativamente para medir el antgenoanticuerpo. Dependiendo de lo que se utiliza la variacin, ser detectar el antgeno (hormonas, enzimas, antgenos microbianos, las drogas ilcitas) o anticuerpos (anti-VIH en la prueba de deteccin de infeccin por VIH) en los fluidos corporales o de la cultura supernatents tejido.

Lo que hay que hacer el ensayo antgeno purificado (si usted quiere detectar o cuantificar anticuerpos). anticuerpos purificados (si usted quiere detectar o cuantificar el antgeno). Las soluciones estndar (y negativos los controles positivos). Muestra a analizar. Microtitulacin platos: bandejas de plstico con pequeos pozos en la que se lleva a cabo el ensayo. lquido de lavado (buffer). Enzimas anticuerpo marcado y el sustrato de la enzima. lector de ELISA (espectrofotmetro) para las medidas cuantitativas. Cmo se realiza el ensayo Para detectar anticuerpos ( ELISA indirecto ):

Cubra la placa de microtitulacin con el antgeno purificado dejando una solucin de antgeno se sientan en los pocillos durante 30-60 minutos. Eliminar el antgeno no unido con el tampn y cubrir cualquier sitio que podra no especfica de anticuerpos se unen a protenas no relacionadas (como la solucin de leche en polvo), de nuevo un lavado que elimina las protenas no consolidados. Aadir muestra de suero para la deteccin de anticuerpos especficos frente al plato y permiten anticuerpos especficos para enlazar con el antgeno. Lavar el anticuerpo no ligado. Aadir anti-Ig que se unen a la regin Fc de anticuerpos especficos (por ejemplo,-contra la cadena gamma humana que la voluntad humana IgG se unen). La regin Fc de la anti-Ig es covalentemente con la enzima. Lavar anticuerpo-enzima compleja independiente.

Aadir cromognico sustrato: sustrato incoloro que la enzima se convertir en un producto coloreado. Incubar hasta que el color se desarrolla, el color de medida en un espectrofotmetro. El color ms que se detecta, el anticuerpo especfico contra ms est presente en la muestra desconocida. Los controles negativos son omitir el antgeno

omitir la prueba de antisuero o sustituir con un anticuerpo que no se comprometer con el antgeno. sustitutos de control positivo conocido suero positivo para el suero desconocido. Para detectar el antgeno ( ELISA ):

Cubra la placa de microtitulacin con el anticuerpo al antgeno purificado. Eliminar el anticuerpo no ligado y cubrir cualquier sitio que no especfica podra enlazar con protenas no relacionadas. Aadir a la muestra de la prueba del antgeno a la placa y permita que el antgeno a los anticuerpos se unen. Lavar sin consolidar antgeno.

Aadir enzima marcado con anticuerpos especficos a un eptopo distinto del antgeno para hacer un "sndwich", lavar el anticuerpo no ligado. Aadir el sustrato cromognico para la enzima que se convertir en un producto coloreado. Control negativo omite antgeno desconocido; control positivo usos conocidos antgeno. Cmo interpretar los resultados La cantidad de producto de color es proporcional a la cantidad de anticuerpos en alternancia enzima que se une, que est directamente relacionado con la cantidad de anticuerpo que estuvo presente para obligar a su antgeno o antgenos que estaba presente de obligar a los anticuerpos. Si cantidades conocidas de antgeno o anticuerpo se aaden, una curva estndar se puede construir lo que permitir la cantidad de antgeno o anticuerpo desconocidos que se determine. Comentarios adicionales La prueba ELISA es probablemente el ms utilizado anlisis inmunolgico debido a su versatilidad, la sensibilidad (capacidad para detectar pequeas cantidades de antgeno o anticuerpo),especificidad (capacidad de discriminar entre molculas antignicamente relacionados, pero diferentes de cerca), y la facilidad de automatizacin. Aunque algunos de los sustratos son cancergenos, por lo general se consideran ms seguros que los utilizados en radioistopos RIA (radioinmunoensayo). Al unirse la capa inicial de plstico, un lavado que elimina los reactivos sin consolidar se convierte en rpido y no requiere de equipos costosos - la placa se puede flodded con tampn y sacudido por un vaso de precipitados para quitar el lquido de lavado y el antgeno o anticuerpo no unido. El proceso puede ser fcilmente automatizado para la ejecucin de un gran nmero de pruebas. falsos positivos pueden resultar de reactivos impuros: por ejemplo, cultivo de tejidos cultivados en el VIH utiliza en el ELISA para VIH pueden reaccionar con los anticuerpos a los tejidos obtenidos en cultivos de la influenza en una persona que acaba de tener una vacuna contra la gripe. Sitios web de utilidad proyecto de Biologa tutorial interactivo ELISA: http://www.biology.arizona.edu/immunology/activities/elisa/main.ht ml Virtual interactiva ELISA: http://www.hhmi.org/biointeractive/immunology/vlab.html

Tutoriales ToolBox

MIC419 Inicio

Inicio webMIC419

VSC519 Inicio

http://microvet.arizona.edu/Courses/MIC419/ToolBox/elisa.html Escrito por Janet M. Decker, PhD jdecker@u.arizona.edu ltima modificacin 01 de febrero 2006

ELISA
La prueba de ELISA o el ensayo inmunoabsorcin ligado a enzimas se aprovecha de la respuesta inmune de anticuerpos a la prueba si una persona est infectada con una bacteria o un virus en particular. Hay dos maneras de hacer una prueba de ELISA, de manera directa o de manera indirecta. En la prueba de ELISA directa , los anticuerpos para el patgeno particular, se fijan sobre una superficie. muestras de suero del paciente se han aadido posteriormente y agentes patgenos en el suero se une a los anticuerpos de superficie. La superficie se lava y una solucin que contiene anticuerpos de deteccin se agrega. Estos deteccin de anticuerpos se unen al patgeno (que se obliga todava a los anticuerpos en la superficie de la placa). Adems, estos anticuerpos de deteccin tienen una enzima fundido a ellos. En el ltimo paso enzima sustrato se aade a la superficie. La enzima / sustrato de reaccin provoca un cambio de color en la solucin. Un cambio de color significa que hay patgenos (antgenos) en el suero del paciente. Sin cambio de color indica que no existen agentes patgenos en el suero del paciente. En la prueba de ELISA indirecta , la mayora de los pasos son los mismos excepto las protenas de los patgenos especficos se fijan en la superficie y el suero del paciente que pueden contener anticuerpos se aade a la superficie. En esta variacin que busca la presencia de anticuerpos en el paciente suero en vez del patgeno real. Esto podra ser adecuado si quieres ver si un paciente ha sido infectado con un patgeno con anterioridad pero an no tiene una infeccin activa. En este experimento de laboratorio, que va a utilizar el mtodo directo de ELISA para probar su "fluidos corporales" de la muestra.

Izquierda: Una actividad en lnea sobre el mtodo de ELISA.http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/ELISA.html Ligados a enzimas Ensayo inmunoabsorbente (ELISA) de Perry et al., la vida microbiana 1 / e. Copyright 2002 Sumanas, Inc. y Asociados Sinauer, Inc.

La actividad ELISA en El Proyecto Biolgico , desarrollado en la Universidad de Arizona, tiene ms informacin acerca de ELISA incluyendo animaciones que muestran tanto positivos como negativos resultados, as como un cuestionario interactivo. "Introduccin a la Actividad de ELISA." La biologa del proyecto. 1998. La Universidad de Arizona. 09 de diciembre 2008.http://www.biology.arizona.edu/IMMUNOLOGY/activities/elisa/main.html

La prueba de ELISA puede ser usado en entornos clnicos para detectar muchos tipos de patgenos. Por ejemplo, las pruebas de ELISA han sido desarrolladas para detectar antgenos del virus de la gripe aviar y el virus de Epstein-Barr. La gripe aviar es una cepa peligrosa de virus de la gripe que se ha convertido en una enfermedad humana. El virus de Epstein-Barr es la causa de la mononucleosis o enfermedad de "mono".

Aplicaciones Ambientales
tortugas Gopher ( Gopherus polyphemus) son una especie en peligro de extincin que viven principalmente en la parte sureste de los EE.UU. Este organismo es considerado una especie clave, porque muchas otras especies dependen de la tortuga gopher para la supervivencia. Las madrigueras cavadas por la tortuga tambin se utilizan para refugio de culebras, ranas y pequeos mamferos. Por lo tanto, el peligro que corre la tortuga gopher ha causado una gran preocupacin para los ecosistemas en el sureste. Una de las mayores amenazas para la poblacin de tortuga gopher es la infeccin por la bacteria Mycoplasma . Esta bacteria causa infecciones de las vas respiratorias en las tortugas que son incurables. Una prueba de ELISA se ha desarrollado para detectarMycoplasma en una tortuga gopher. Esta prueba permite identificar a las tortugas que han sido infectadas y la propagacin de la enfermedad lmite evitando la exposicin por otras tortugas saludables .

Relacionado Carreras
Epidemilogo Tcnico de Laboratorio Bilogo Molecular

ELISA (Ensayo ImmunoSorbant ligados a enzimas)

| Tabla de contenidos de la web | ndice del sitio |

Esta es una de las herramientas ms poderosas cualitativo y cuantitativo para hacer frente a molculas complejas. Su poder de discriminacin radica en el hecho de que se basa en la formacin de complejos antgeno-anticuerpo muy especficas. Lo que se da aqu no es un protocolo de ELISA para hacerlo ya que no los tiempos, las concentraciones, las tasas de agitacin, etc, se les da. En cambio, es un esbozo de los motivos para realizar cada paso y lo que sucede en cada paso. Alta en el esquema son cmo algunos de los reactivos "(anticuerpos) se hacen, a pesar de la secundaria, los anticuerpos conjugados, o una enzima vinculada-se pueden adquirir comercialmente.

ELISA
Paso Imagen Comentarios Habitualmente, deber fijar el material que desea probar a una superficie como un portaobjetos de vidrio o una blotten en un tipo de papel de filtro, como de fibra de nitrocelulosa. Puede ser que sea una gota seca, o podra ser un trozo de tejido.

Se tratara de un lado-microscpicas subhabida cuenta de la mancha o una rebanada tissus en un portaobjetos de vidrio. Existen diferentes tipos de molculas se muestran. A modo de ejemplo, estamos interesados en el aqua o turquesa molcula de color. Nuestra pregunta es: "Hay alguna de ese tipo de molcula en esta diapositiva?" Siendo que es tan pequeo que no puede ser visto bajo un microscopio. Nuestra intensin es un anticuerpo para adsorber especficamente para este acua-"antgenos" y no los dems. Por desgracia, si tuviramos que tienen algunos de que el anticuerpo y lo descarga en esta diapositiva, el anticuerpo se adsorben no especfica a la diapositiva as como todos los antgenos que han hecho otros. As que lo que hacemos primero es bloquear todas las posibles no especfica los sitios de adsorcin con otra protena. Por lo tanto, volcado de una solucin de albmina, o incluso ms barato, que las inundaciones de leche descremada en la diapositiva, y luego enjuague. Ver: toda la superficie de la diapositiva est ahora cubierta o "bloqueado" por la leche descremada "bloqueo" del agente. La pregunta ahora es cmo producir el anticuerpo especfico contra altamente que slo se adherir a la acuicultura "antgeno y nada ms. Usted necesita hacer un suero inmune. Bueno, a tus amigos por el pasillo ha aislado y purificado una pequea cantidad de este acua-antgeno (en el tubo a la izquierda, abajo), y se inyecta un poco de esto en un ratn ( laboratorio de socios cooperan producir suero inmune tambin!). Despus de una semana, le dar el ratn una dosis de refuerzo, y pocos das despus de eso, a algunos de los de la sangre del ratn de su vena de la cola. A continuacin, centrifugar a cabo todos los componentes sanguneos celulares (nombre de ellos!) Y lo que tienes es suero inmune, porque est llena de anti-"agua" anticuerpos. (Ver que los extremos inferiores de las simulaciones indican que el reactivo o la combinacin de sitios en la molcula de anticuerpo.) Se le aaden unas gotas del suero inmune a un lote de amigos "original solucin de su aqua, vera la solucin" aglutinan ", o precipitado, como los anticuerpos complejo con el aqua" antgenos para formar un precipitado insoluble, lo que los inmunlogos llaman una " red de precipitacin ", o" precipitacin "para abreviar.

(El "primario" de anticuerpos) ( Haga clic en este de una mejor manera de hacer los anticuerpos primarios ) A continuacin, volcar un poco de este suero inmune en su "bloqueado" borrn. Usted puede imaginar todas las molculas de anticuerpos que fluye alrededor, pero uno de ellos, que se ve aqu, se ha quedado atascado - o absorbidos - al antgeno aqua! Usted lvelas cuidadosamente el portaobjetos con tampn para deshacerse de todos los anticuerpos especficos exceso, as como todas las otras especies de anticuerpos que el ratn pueda tener en su sistema, como los adquiridos en la lucha contra su propia infancia las enfermedades como las paperas ratn y los resfriados. Podemos ver en este diagrama que nuestros pequeos un anticuerpo especfico sigue siendo adsorbidos al anticuerpo aqua. Sin embargo, en la vida real, no podra esperar para ver que una molcula de anticuerpo poco y mucho menos encontrar en la amplia superficie de la diapositiva. Tenemos que encontrar una manera de localizar, y lo hacemos a travs de un mtodo de amplificacin. Las enzimas son amplificadores maravilloso como el de ser una reaccin es autorizado a proseguir el producto ms que tenemos. Qu pasa si dicho producto fuera insoluble? Hay posibilidades! Las ocasiones para la danza de oro Nobel de imaginatiions! (Por lo general, estas reacciones implican un sustrato que consiste en una gran molcula orgnica que es un colorante. Unido covalentemente a la molcula del tinte es una gran carga de fosfato o sulfato para hacer la molcula de

agua en general solubles. Sin embargo, si la enzima fueron capaces de recortar la pieza cargada, el resto se insolubles y se precipitan. enzimas A menudo se utiliza para esto son fosfatasas y sulfatasas - tanto las enzimas digestivas del tracto bastante comn.

Usted es el plan ahora para hacer un anticuerpo que reacciona a todos los anticuerpos de ratn, un ratn-anticuerpo anticuerpo anti, si se quiere. Esto es fcil: coger el ratn locales - cualquier ratn! - Y aislar la fraccin gamma-globulinas de la sangre. (Utilice las tcnicas de laboratorio que ha aprendido - electroforesis, por ejemplo!) Se inyecta esto en una cabra, la cabra dar algunas vacunas de refuerzo, y pronto usted tiene un pie de basura desechable, todo lo que puede producir anticuerpos anti-ratn suficiente para abastecer el mundo. Ir a los negocios! S, hay empresas que hacen esto. Vea el enlace sitios de reaccin sobre el anticuerpo de cabra. Ellos slo obligar a los anticuerpos del ratn: justo lo que necesita.

Su siguiente paso es conectar la enzima "amplificador", en el anticuerpo de cabra molculas. Hay algunos trucos aseado qumica para hacer esto, pero slo s que usted puede ir a los catlogos de la empresa mencionada a comprar estos "Enzyme-Linked-ratn de cabra anticuerpos IgG anti-". Esto le llame a su ligado a enzimas " secundaria "de anticuerpos. Inundaciones diapositiva con este anticuerpo de cabra ligado a enzimas, y mgicamente se pega a donde se encuentra con anticuerpos de ratn. Por supuesto, eliminar todos los excesos antes de ir al siguiente paso. Establecer la diapositiva en una solucin amortiguadora adecuada del sustrato y agitar suavemente. Como las molculas de sustrato encuentro la enzima y los fosfatos o sulfatos son removidos, la porcin restante de la molcula del tinte es insoluble y las nieves a pegarse a las cosas cercanas. Cuanto ms tiempo se permita que se produzca la reaccin, ms la gente de color "nieve" amontonan. You "detener" el desarrollo de la diapositiva simplemente aclarado lejos la solucin de sustrato en exceso. Ahora puede ver su portaobjetos bajo el microscopio y es de esperar los montones de precipitado de color son lo suficientemente grandes como para que usted vea.

10

11

12

Betcha no puede responde a estas preguntas! 1. Usted est interesado en saber dnde se encuentra la fosfatasa cida en las clulas. Usted compr algunas fosfatasa cida de la especie bovina, y se inyecta una pequea cantidad del mismo en un ratn. Despus de la dosis de refuerzo necesarias, se aisl la fraccin de suero de la sangre del ratn, y que contendra el anticuerpo primario. A continuacin, hizo algunas diapositivas de secciones delgadas de hgado de res y corri a travs de los pasos anteriores utilizando el anticuerpo primario nuevo, y ms adelante con un anticuerpo secundario que estaba vinculada a sulfatasa (por qu no

fosfatasa?). Obtener una foto de una clula animal de su texto, y muestran su instructor lo que se vera si la imagen se ELISA sus datos y si la fosfatasa cida fue encontrada solamente en los lisosomas.
2.

Cmo podra usar ELISA para identificar una bacteria desagradable que caus la diarrea? Suponga que usted saba que tena que ser una de estas tres enfermedades: clera, la disentera o la fiebre tifoidea. Imagina que eres un mdico de cabecera de un paciente con un caso severo de las pistas "." Ir paso a paso a travs desagradable todo el procedimiento. (No se ra! Las enfermedades diarreicas son las enfermedades infecciosas que matan a ms seres humanos y el ganado que cualquier otro. Es muy importante que los anlisis que hacerlas bien!) Supongamos que tenemos una placa de Petri en la que cientos de colonias haba crecido. Supongamos ahora que usted cuidadosamente establecido un pedazo de papel de filtro sobre las colonias y los borr la ligera para que unos pocos de cada colonia se pegara al papel en sus respectivas posiciones. Usted sabe que dentro de ese lote haba uno o dos clones que era probable que se produce un antgeno de superficie de nuevo, para el que ya contaba con un antisuero ratn. Cmo puedes utilizar el papel de "mancha" para decir que las colonias, en su caso, estaban produciendo el antgeno de superficie deseada?
| la Mesa de la web de contenidos | ndice de sitio |

3.