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Practica 1 Guia de Diluciones 2

Practica 1 Guia de Diluciones 2

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06/07/2013

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DILUCION.ES
1.-
INTRODUCCrONEIanallsisclinicodemuestrasbiol6gicasoeldesarrollodeproyectosdeinvestigacionenunlaboratorio,requiereque
el
personaldelmismoestesuficienlementeentrenadoenIoquerespectsa'apreparaci6ndesolucionesyditucionesdemuestras,previoafaspruebasconcretas.Obviamente,sisedeseaqueunadeterminadatecnicadelaboratoriolengaundesempenooptima
y
produzcaresultadosprecisos,losreactivos
y
lasmuestrasdebenprepararsecorrectamenle..Ademas,lasmuestrasaanalizar(ej.8uero)debendiluirsecasisiempreantes
de
laspruebas.
La
diluci6nconsisteen
anadira
unvolumen
de
muestrabiol6gicatanlosvolumenesdediluyente(aguadestitada,soluci6nsafina.buffer.entreotros)comoseannecesariosparaobtenerfadilutiondeseada,famismatienecomoconsecueneiainmediataladisminuciondelacortcentraeiondelosdiferentescomponentesdelamuestra.En
el
laboratorio
se
pued'enpresentardiferentescircunstancias
que
obligan
en
unmomentadeterminadoaprepararunadeterminadadiluci6n
de
unamuestra.Acominua.ei6nsedescribiranunaseriedeejemplos,recomendaciones
y
orientacionesconelobjetivodefacilitarlacomprensionyrealizacionde;la8diferentestecnicasparapreparardtluciones-".
UNIDADESDEMEDIDA(VOLUMEN)
Enlamayoria.deloscasosenlaspreparaeionesdelasdilucionesseutilizanpequeiiosvolomenestantodelespecimencomodeldiluyente,estosvolumenesgeneralmenteseencuentranenelordendelosmicfolitros(1-11).ecuerdeque1
ml
esiguala1.000IJI
y
que1pies;iguala0,001
ml.jrate
defamiliarizarseconlasconversionesdemta
iUI
yviceversa(entodocasohagaloscalculosquecorrespondan),tal
y
comosemuestraaconfinuacien:Ul
ml
1OI·d
0,01ml151-.1
J
0,025ml50U-I0,05ml100pi0,1
ml
2001.1
1
I
0,2.mt250IJIa,25ml500
pi
0,5ml
,
750IJIO,75,ml
Ii
900
IJ
O,9ml1.000IJI
1
ml
I
1.500
pi
1,5mlTengaenmentequesiempretienequerealizarsuscalculosHtilizandolamismaunidaddemedidadevolumen(Ej.,pi,{)ml),entodocasorealicelaseonverslonesquetengsn
tugar.
PRINCIPIODELASDILUCIONESSIMPLESParapreoararunadifuci6n,mezeleunvolumenespecfficodelamuestra6especsnen(ej.Suero)conunciertovolumendeundiluyente.Recuerdequeparaprepararladiluci6nsiempre
agregue
primeroel
diluyenteyseguidamentelamuestra(ej.
Suero},
finafmentemezelsenformaadecuada.
 
Enuncasosimple,unapartedesuerounaparteigualdediluyenteproduciranunadlwciande
%
(a1:2).Laexpresion"1:2"representa
ia
relaciondelacantidad
de
partesdesueroconelnumerototaldepartes,enestecasorepresentsunapartedesueroyuna
parte
dediluyenteparauntotaldedos(2)partes.Unamuestrapuradesuero,esdecir,quenocontenganingunapartedeldiluyenteserepresentariaporlarelacion
1/1
(6
1.:1),esdecireltotaldepartesesuna(1)Yestcirepresentadaunicamenteporlamuestra.Esimportantetenerpresente
1.0
enado.yaquealgunaspruebasdelaboratorio
(Ej.•V.D.R.L
cuantitativo).lamuestradelpacienteseanalizaenformapuraydiluida.
CALCULODEDILUCIONES
Unadilueionde
1/100
puedeprepararsemezclando1partedesueroeon99partesdediluyente;porejemplo1ml
+
99ml(totaldepartes:100;volumenfinal100
mil.
Ahorabien,simantenemoslarelaciondevolumendesueroyladedituyentenecesariaparaprepararunadeterminadadilucien(comoenesteejemplo;diluci6n
1/100:
1
+
99),podemosvariarlosvolumenesdecadaunodeellosyseobtendralamismadiluci6n.Supongamosquetenemosqueprepararunadilucion11100ydisponemosdepocosuero(6lascondicionesdelatecnicaimplicanquenohaynecesidaddeutilizarvolumenesrnayores),enbasea
10
expuestopodriamosprepararJ·adiluci6nutilizandotansolo
50
microiitros(I.d)enestesentido,
para
caleular
elvolumendesueromultiplicamos50
x
1,
10
que
obviamentenosda50~Idesueroyparacalcularelvolumendediluyente,multiplicamos50x99,obteniendosecomoresultado4.950
J.l1,
demaneraquemezclandoenun
tuba
deensayo4.950~Idediluyente
y
50~tdesuero,obtendriamosunadiluci6n
1/100,
peroenestecasoelvolumenfinalseriade
4,.95
ml.
Esteprocedimientosepodriaaplicarparaprepararotrasdfluciones(ej.,%,
1120,
1/40,1/320,1/1280).
P"REPARACION
DEUNADILUCIONDELAMUESTRAAUNVOLUMENFINAL
Confrecuenciasepuedepresentarlanecesidaddeprepararunadiluci6ndelamuestra
a
unvolumenfinal
(0
total)determinado,
porejernplo,
pararealizarunapruebainmunoserol6gicaserequierepreparar1.000
J.lt
(1m.)deunadiluci6n1120delamuestradesuerodeundeterminadopaciente,paraeUopodemosprocederdetresmanerasdiferentes,
slendola
primera
la
siguiente:
1,.-
Aplicamos
la
formula:
V1
x
C1
=
V2
x
C2
Donde:
V1
==
1000(.II
C1
=
1120
V2
=
Volumendesueroquetenemosqueaspirar
y
mezelaroonunvolumendeterminadodeldituyenteparaprepararladiluciondeseada.(cuyovolumenfinalesde1.000J..II)C2=111(Recuerdeque-elsueroestapuro,esdecir,nodiluido)Poroonsiguiente:
 
1.000~Ix1120
=
V2x1111.000
~l
x
1120
=
V2V2;:;::1.000~1120V2;:;::50
J-It
desueroComo
et
volumenfinaldeladiluci6nes1.000
J.,II!,
tenemos
quemezciar
950J.,II
dediluyentecan
50
fJldelsuerodelpaciente.
2.-
Otra
alternativa
paracalcular
el
volumendesuerodel.pacientenecesariopara.preparar1.000fJlde
suero
diluido1120,
serlala
siguiente:AplicarlaformuladelFactorde
Dilucion
(FO):
FD
=
Vf
Vm
Oonde:
o;:;::
sla
dilucion
preparada
(si
seexpresacomounacitraentera
es
elfactordediluci6n(FD:20).
Vf
=
Equivalealvolumenfinal
0
totaldeladifucion(volumendesuero
+
volumendediluyente).Vm
=
Corresponde
at
volumeninicialdelamuestraadiluir(enestecaso,suero)quetenemosquemezdarconeldiluyenteparaprepararladilucion
al
Vfdeseado.Ennuestroejemplo:FD(20)
=
1.000t111Vm;por
10
que:Vm
=
1.000
J-I1/20;
Esdecir50fJldesuerodelpaciente.elcuattenemosquemezctarcon950IIIdediluyenteparaprepararladiluciondeseada3.-Finalmente,sepodriaaplicarunaregiadetressimple:Comoserequiereprepararunadiluci6ndelsuero
1/20,
estosignfficaque1partedesueroestacontenidaenuntotalde20partes(suero
+
diluyente)..Loeitadoesequivalenteadecirque1volumendesuerosindiluirestacontenidoen20volamenesdesuerodiluido
(Vf
=
suero
+
dUuyerrte).por
10
que:1volumendesuerosindiluir20volumenesdesuerodiluido
(Vf)
"X"IJIdesuerosindiluir1.000IJIdesuarodilurdo(Vf)Oespejandolaincognita"){"X
=
1.000IJIx1120
=
50fJldesuero

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