Universit Abou Bekr Belkaid Tlemcen

Enseignants : F.Lahfa & A.Bedrane

Extraction et mise en vidence de la quantit de glycogne prsent dans le foie

BUT : On se propose de dterminer par la mthode colorimtrique, la quantit de glycogne pralablement extraite d'un chantillon de foie le plus frais possible, plus l'abattage de l'animal sera rcent, plus le rsultat de la manipulation sera probant. MANIPULATION : La manipulation se droule en deux temps, il faut en premier lieu extraire le glycogne du foie puis dans un deuxime temps raliser le dosage de l'chantillon obtenu par rapport une gamme talon. Extraction du glycogne :

Peser et couper en petits morceaux 10 g de foie frais Faire bouillir le foie dans 100 ml d'eau distille pendant 2 minutes goutter l'aide d'une passoire puis le broyer avec un mixeur Ajouter 50 ml d'eau distille et faire bouillir 5 minutes Filtrer sous vide sur Buchner Prcipiter le filtrat rcupr avec 5 gouttes d'HCl concentr, (si un prcipit important se forme, filtrer nouveau afin d'liminer l'excs protique). Traiter le filtrat rcupr par 4 fois son volume d'alcool 95 puis filtrer sous vide Rcuprer le filtre, le laisser goutter puis reprendre celui-ci avec 5 ml d'eau distille Tester la prsence de glycogne en prenant 3 gouttes du liquide obtenu et rajouter une goutte d'eau iode*, (on doit obtenir une

couleur brun-acajou). *Eau iode : dissoudre 1 g d'iode dans 2 g d'iodure de potassium puis complter 100 ml avec de l'eau distille Dosage de l'chantillon par colorimtrie:

La loi de Beer-Lambert obit la relation suivante DO = E . l . C

DO ou densit optique correspond une absorbance E (Epsilon) correspond au coefficient d'extinction molaire, (il est constant pour un produit donn) l est l'paisseur du milieu travers, (ici, il s'agit d'une cuve carr de 1 cm de cot) C correspond la concentration du produit tudier E et l sont tout les deux constants, on peut donc dire que l'absorbance sera proportionnelle la concentration

Prparation de la gamme talon

On prpare 100 ml d'une solution mre de glycogne 10 g/L partir de glycogne du commerce (Refrence au catalogue Jeulin : 117036, puret 85%, conserver au rfrigrateur 4). Il faut tenir compte de la puret du produit pour raliser les solutions. On ralise les dilutions suivantes : Dilutions Concentration de glycogne en mg/ml 1/2 1/4 1/8 1/16

Les cuves se prparent de la manire suivante : 1 ml de solution de glycogne + 3 ml d'eau distille + 1 goutte d'eau iode Les mesures se font avec une longueur d'onde de 470 nm (filtre bleu)

Avant de raliser le dosage, vrifier que la coloration de l'chantillon de foie se situe bien dans la gamme RSULTATS : La courbe peut tre ralise sur du papier millimtr. On place ensuite l'chantillon de foie dans le colorimtre, on mesure l'absorbance, on la reporte sur la courbe talon et on dduit ainsi la concentration en glycogne de nos 10 g de foie du dpart.