Journal de Mycologie Mdicale 15 (2005) 220229

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ARTICLE ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE

tude de lactivit antifongique de divers extraits de cannelle Antifungal activity of different cinnamon extracts
O. Senhaji a,*, M. Faid b, M. Elyachioui c, M. Dehhaoui b
Laboratoire de recherche et danalyses mdicales de la gendarmerie royale, avenue Ibn-Sina-Agdal, Rabat 101008087, Rabat Maroc b Institut agronomique et vtrinaire Hassan-II, PO Box 6202 Rabat, Maroc c Universit Ibn-Toufail, facult des sciences de Kenitra, PO Box 133, Kenitra, Maroc
Reu le 28 juin 2005 ; accept le 11 juillet 2005
a

MOTS CLS Cannelle ; Activit antifongique ; Aspergillus ; Candida ; Penicillium

Rsum Objectif. Lactivit antifongique de divers extraits aqueux, hexanique, mthanolique et thanolique de cannelle est tudie sur diverses souches de champignons lvuriformes et filamenteux. Matriel et mthodes. La cannelle est extraite cinq fois par puisements. Les extraits de cannelle sont tests en utilisant trois techniques diffrentes ; la technique de dilution en glose pour la dtermination des extraits actifs, une micromthode de dilution en milieu liquide pour dterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des extraits sur la croissance des levures et enfin, une macromthode de dilution en milieu liquide permettant lvaluation des extraits sur la production de la masse myclienne des souches filamenteuses. Rsultats. Les rsultats obtenus montrent que tous les extraits ont une activit sur les levures. Par ailleurs, la dtermination des CMI des extraits a mis en vidence des niveaux daction variables. La CMI na pas t influence par le nombre dpuisement et lextrait 5 tait aussi inhibiteur que lextrait 1. Lanalyse statistique rvle que lextrait hexanique est le plus actif avec des CMI comprises entre 2 % (v/v) et 6,2 % (v/v), suivi de lextrait mthanolique et lextrait aqueux pour lesquels les CMI se situent entre 2,5 % (v/v) et 12,5 % (v/v), et enfin lextrait thanolique avec des CMI variant entre 5 % (v/v) et 12,5 % (v/v). Par ailleurs, les essais prliminaires montrent que presque tous les extraits ont une activit sur les moisissures. Lvaluation des effets des extraits sur la production myclienne montre que lextrait hexanique est le plus actif. En effet, lextrait hexanique, utilis la concentration de 10 % (v/v) induit une inhibition totale de la croissance des moisissures testes. Lanalyse statistique de la variance rvle que Penicillium cyclopium est la moisissure la plus sensible suivie dAspergillus parasiticus, A. niger et enfin A. flavus. Conclusion. Parmi les diffrents extraits de cannelle tudis, les extraits hexaniques prsentent la meilleure activit antifongique sur les levures et moisissures testes. 2005 Publi par Elsevier SAS.

* Auteur correspondant. Adresses e-mail : senhajiwafae@yahoo.fr (O. Senhaji), faidmohamed@yahoo.fr (M. Faid). 1156-5233/$ - see front matter 2005 Publi par Elsevier SAS. doi: 10.1016/j.mycmed.2005.07.002

tude de lactivit antifongique de divers extraits de cannelle

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KEYWORDS Cinnamon; Antifungal activity; Aspergillus; Candida; Penicillium

Abstract Objective. This study was undertaken to determine the antifungal activity of cinnamon bark. Material and methods. Extract from cinnamon with water, hexan, methanol and ethanol were tested on fungi using the method of microtitration assay. Cinnamon was extracted with water, hexan, methanol and ethanol five times and the extracts of each solvent were tested separately for their antimicrobial activity. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined. The extracts were tested on fungal strains using three different techniques; the agar dilution test for the determination of the active extracts, a microtitration method to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of the extracts on growth of yeasts and finally a macrodilution test allowing the evaluation of the extracts on the mycelial mass production by the fungal strains. Results. The results showed that all the extracts displayed antifungal activity on yeasts. In addition, the determination of the MIC of the active extracts revealed different levels of action. However, the MIC was not influenced by the number of extractions and the fifth extract was as inhibiting as the first one. Finaly, statistical analysis revealed that the hexanic extract was the most active with the MIC varying from 2% (v/v) to 6.2% (v/v), followed by the methanol and water extracts whose the MIC ranged from 2.5% (v/v) to 12.5% (v/v), and the ethanolic extract whose MIC ranged from 5% (v/v) to 12.5% (v/v). Preliminary tests showed that almost all the extracts displayed antifungal activity on moulds. Evaluation of the effects of mycelial production showed that the hexanic extract had the best antifungal effect with a concentration of 10%, and that all 5 extracts were able to totally inhibit the growth of all the species tested. These observations were confirmed by a statistical analysis of variance which revealed that Penicillium cyclopium was the most sensitive mould followed by Aspergillus parasiticus, A. niger and finally A. flavus. Conclusion. Among the different extracts of cinnamon studied, hexanic extracts were shown to be the most active on the yeasts and moulds tested. 2005 Publi par Elsevier SAS.

Introduction
Les candidoses sont des maladies dues au dveloppement, chez lhomme ou lanimal, de levures du genre Candida dont lespce la plus connue et la plus redoutable pour lhomme est Candida albicans. Au cours de la dernire dcennie, un grand intrt a t rserv ltude des candidoses, tant de point de vue biologique, que de point de vue nosologique et thrapeutique. Cette importance donne ltude des candidoses fait suite lapparition de la rsistance des souches aux mdicaments les plus communment utiliss [2,11,18,20] et aux complications que ces germes produisent chez des patients profil clinique particulier [7]. Ainsi les candidoses autrefois qualifies de banales, sont maintenant classes parmi les infections graves pouvant engendrer un taux lev de mortalit et de morbidit chez les immunodprims et les diabtiques. La chimiothrapie antifongique a montr une grande efficacit contre les candidoses superficielles. Cependant, les atteintes profondes restent les plus difficiles traiter compte tenu de la cytotoxicit des antifongiques systmiques. On assiste ces dernires annes un regain dintrt pour les plantes mdicinales et aromatiques et pour leurs extraits, face la mfiance accrue suscite

par lusage des produits chimiques, aussi bien dans le domaine thrapeutique que dans le domaine alimentaire. Lactivit antimicrobienne de nombreuses plantes et de la cannelle en particulier, trs connue pour son effet antimicrobien [9,19]. Lutilisation des plantes ou de leurs extraits pourrait constituer une excellente alternative aux problmes de rsistance et de cytotoxicit des antifongiques. Aussi, le but de ce travail est de contribuer ltude du pouvoir antifongique des extraits aqueux et organiques de cannelle.

Matriel et mthodes
Prparation des extraits de cannelle
Extraits organiques Des extractions successives avec des solvants organiques (50 ml) de polarit croissante (hexane, thanol et mthanol) sont ralises sur les broyats des corces de cannelle (10 g). Aprs trois heures de macration sous agitation, le mlange est filtr sur papier Wattman no 4. Le gteau restant est rcupr et lopration est renouvele cinq fois afin de raliser cinq puisements pour chaque solvant que nous avons gards sparment.

222 Les extraits obtenus sont stocks 4 C et labri de la lumire jusquau moment de leur utilisation. Extrait aqueux Paralllement, un extrait aqueux est prpar par macration dun broyat de cannelle chaud dans de leau distille pendant 15 minutes. Nous avons procd de la mme manire que pour les extraits organiques. Les extraits obtenus sont stocks 4 C et labri de la lumire jusquau moment de leur utilisation.

O. Senhaji et al. certain nombre de groupes chimiques rputs pour leurs effets antimicrobiens. Recherche des substances stroliques La recherche est fonde sur la raction de Lieberman-Burchard. Trois grammes de broyat de plante sont mis macrer dans 15 ml de chloroforme pendant 20 minutes. Le mlange est ensuite filtr, puis concentr 2 ml. Un millilitre danhydride actique, puis 1 ml dacide sulfurique concentr sont successivement additionns. La prsence de composs stroliques donne une coloration rouge-brune virant au brun-violac.

Microorganismes tests
Lactivit antifongique des diffrents extraits de cannelle est value sur les souches suivantes : C. albicans HSZ01, C. albicans IP4872, C. albicans, Candida glabrata, Aspergillus flavus IP1202-1, Aspergillus. niger ATCC16404, Aspergillus parasiticus NRRL2999 et Penicillium cyclopium IP1231-80. Ces souches ont t obtenues auprs des laboratoires de bactriologie de lhpital des spcialits otoneuroophtalmologie de Rabat, de microbiologie de linstitut national dhygine (Rabat) et de microbiologie alimentaire et biotechnologie de linstitut agronomique et vtrinaire Hassan-II (Rabat).

Recherche des saponosides

Elle est effectue selon la technique dcrite dans la pharmacope franaise (IX d), se fondant sur la dtermination de lindice de mousse. Dans une fiole conique de 500 ml, on introduit 100 ml deau bouillante et 2 g de broyt de plante. Lbullition est maintenue pendant 30 minutes. Le mlange est filtr, refroidi et ajust 100 ml. Dans une srie de dix tubes essai, sont introduits successivement 1, 2, 3, 4,...10 ml du dcoct, tous les tubes sont complts 10 ml avec de leau distille et agits vigoureusement pendant 15 secondes. Aprs un repos de 15 minutes, la hauteur de la mousse est mesure. Si cette dernire est gale 1 cm, la dilution de la substance dans ce tube correspond lindice de mousse recherch. Un indice suprieur 100 est considr comme une raction positive tmoignant dune richesse de la plante en saponosides.

Prparation des suspensions des microorganismes

Les suspensions de levures sont prpares partir du bouillon denrichissement Yeast Extract Sucrose (YES) (Bio-Rad, Marnes-la-Coquette, France) des diffrentes souches incubes pendant 24 heures 30 C. 9 ml deau physiologique strile, on ajoute 100 ll du bouillon denrichissement. Pour les moisissures, les suspensions sont prpares partir dune culture de 10 jours sur milieu yeast extract glucose (YEG) (Bio-Rad). Les suspensions sont prpares dans de leau physiologique contenant du tween 80 et ajuste 105 conidies/ml pour les moisissures et 106 cellules/ml pour les levures aprs comptage la cellule de Malassez.

Recherche des coumarines

Un infus 10 % ou un extrait alcoolique est examin la lumire UV. Une fluorescence bleute indique une raction positive. Remarque : dautres composs prsentent galement une fluorescence nette aux UV. Cette mise en vidence ne correspond donc qu une indication, et non une identification.

Recherche des flavonodes

Deux millilitres dinfus sont ajouts 2 ml dalcool chlorhydrique et 0,2 g de poudre de magnsium. Une coloration orange rouge apparat en prsence des flavonodes.

Tests prliminaires sur ltude de la composition chimique de lcorce de cannelle

Les essais phytochimiques ont t mens selon les techniques classiques dcrites par Paris et Moyse [17], Bouquet [3] et Debray et al. [4]. Ces essais consistent mettre en vidence la prsence dun

Recherche de flavanes
Deux millilitres dinfus 10 % sont mlangs dans lacide chlorhydrique concentr renfermant 2 % de

tude de lactivit antifongique de divers extraits de cannelle vanilline. Lapparition dune coloration rouge indique une raction positive.

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Recherche des anthocyanes

Deux millilitres dinfus sont ajouts 2 ml dacide chlorhydrique 2 N. Lapparition dune coloration rose-rouge qui vire au bleu-violac par addition dammoniac indique la prsence danthocyanes.

Recherche des proanthocyanidols

2 ml dinfus sont additionns 2 ml dacide chlorhydrique concentr ; le tout est laiss pendant cinq minutes dans un bain-marie bouillant ; lapparition dune coloration rouge indique une raction positive.

de dilutions successives de demi en demi sont alors ajouts chacun des puits. Chaque puits est ensuite ensemenc par 10 ll de la suspension microbienne 106 cellules/ml. la fin de la priode dincubation la temprature adquate, le MTT est prpar extemporanment 0,4 mg/ml dans de leau physiologique strile. Dix microlitres de la solution MTT sont rajouts dans chaque puits. La plaque est rincube pendant 10 30 minutes 37 C. Les puits o une croissance a eu lieu montrent une couleur bleu-violette. Les tmoins ngatifs ont t prpars dans des puits isols par ajout des souches testes aux milieux adquats sans inhibiteur. Effet sur la croissance myclienne (macromthode) Leffet antifongique des diffrents extraits sur la croissance des champignons filamenteux a t valu par une macromthode en milieu liquide, rapporte par Jong-Gyu et al. [10]. Dans des flacons contenant le milieu yeast extract sucrose (YES) et le produit tester diffrentes concentrations, nous ensemenons 0,1 ml de la suspension fongique contenant 105 conidies/ml. Le volume final de chaque flacon est de 20 ml. Aprs 14 jours dincubation 28 C, chaque chantillon est filtr puis autoclav, le poids sec du myclium est ensuite dtermin. La CMI relative chaque extrait est dtermine comme tant la plus faible concentration de lextrait qui inhibe totalement la croissance fongique.

valuation de lactivit antifongique

Technique de diffusion en glose Ltude de lactivit antifongique est ralise par la technique dcrite par Grange et Davery [6]. Un millilitre de chaque extrait de la plante est ajout 9 ml de glose de Sabouraud (Becton Dickinson, Royaume-uni) maintenu 45 C. Le mlange est ensuite vers dans des botes de Ptri. Ces dernires sont mises scher pendant 15 minutes 37 C. Cent microlitres de la suspension de microorganismes 105 conidies/ml pour les moisissures et 106 cellules/ml pour les levures, sont ensemencs par inondation en surface de la glose nutritive. Les boites de ptri sont incubes 30 C pendant 48 heures pour les levures et 72 heures pour les moisissures. Sont considres positives les cultures o il y a une croissance fongique visible lil nu. Les tmoins ngatifs ont t prpars par ajout des souches testes aux milieux adquats sans inhibiteur. Effet sur la croissance des levures (micromthode) Pour chaque extrait la CMI est dtermine comme tant la concentration minimale de lextrait qui inhibe totalement la croissance du champignon test. La dtermination des CMI des extraits de plantes vis--vis des souches de Candida sp. est ralise selon la technique de microtitration sur plaques striles fond plat (Bio-Rad), dcrite par Eloff et al. [5], en utilisant le ttrazolium (MTT : 3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide (Sigma, Saint-Louis, MO) comme indicateur de viabilit. On dpose 100 ll de RPMI 1640 2 % de glucose tamponn pH 7 dans chaque puits. Quatre-vingt dix microlitres du produit tester ou

Analyses statistiques
Lobjectif de ces analyses est de vrifier si leffet observ est : souche dpendant et/ou extrait dpendant. Lanalyse approprie est une analyse de la variance trois critres de classification modle crois mixte (logiciel SAS). Il est noter que linfluence du facteur filtration na pas t tudie car considre comme alatoire et a de ce fait servi comme facteur bloc .

Rsultats
Effet des extraits de cannelle sur les levures
Les rsultats manant des tests par la mthode de dilution en glose ont montr que presque tous les extraits sont dous dune activit inhibitrice sur C. albicans lexception de la quatrime filtration de

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Tableau 1 Effet inhibiteur des extraits de cannelle sur la croissance de Candida Table 1 Inhibitory effect of different extracts of cinnamon on Candida growth. Extrait Extrait hexanique F1 F2 F3 F4 F5 F1 F2 F3 F4 F5 F1 F2 F3 F4 F5 F1 F2 F3 F4 F5 C. albicans 1/40 = 2,5 % 1/32 = 3,1 % 1/16 = 6,2 % R 1/16 = 6,2 % 1/32 = 3,1 % 1/8 = 12,5 % 1/8=12,5 % R 1/16 = 6,2 % 1/10 = 10 % 1/8 = 12,5 % R R 1/10 = 10 % 1/16 = 6,2 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % R 1/16 = 6,2 % C. albicans IP4872 1/40 = 2,5 % 1/32 = 3.1 % 1/16 = 6,2 % R 1/16 = 6,2 % 1/32 = 3,1 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % R 1/16 = 6,2 % 1/10 = 10 % 1/8 = 12,5 % R R 1/10 = 10 % 1/16 = 6,2 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % R R C. albicans HSZ01 1/40 = 2,5 % 1/32 = 3,1 % 1/16 = 6,2 % R 1/16 = 6,2 % 1/32 = 3,1 % 1/8 = 12,5 % 1/32 = 3,1 % R 1/16 = 6,2 % 1/10 = 10 % 1/8 = 12,5 % R R 1/10 = 10 % 1/16 = 6,2 % 1/8 = 12,5 % 1/8 = 12,5 % R 1/16 = 6,2 %

O. Senhaji et al.

Extrait mthanolique

Extrait thanolique

Extrait aqueux

C. glabrata 1/50 = 2 % 1/40 = 2,5 % 1/30 = 3,3 % 1/16 = 6,2 % 1/30 = 3,3 % 1/40 = 2,5 % 1/40 = 2,5 % 1/16 = 6,2 % R 1/8 = 12,5 % 1/20 = 5 % 1/16 = 6,2 % R R 1/16 = 6,2 % 1/40 = 2,5 % 1/20 = 5 % 1/20 = 5 % R 1/16 = 6,2 %

Les rsultats correspondent aux CMI exprimes en v/v ; R : souche rsistante aux plus fortes concentrations testes.

chaque extrait et de la troisime filtration thanolique qui sont sans effet au niveau des souches de Candida testes. Par ailleurs, la dtermination des CMI relatives aux extraits actifs a mis en vidence des niveaux dactivit antifongique variables selon lextrait utilis. Ainsi, lextrait aqueux montre des CMI de lordre de 1/40 = 2,5 % (v/v) 1/8 = 12,5 % (v/v). Pour les extraits organiques, nous remarquons que lextrait hexanique est le plus actif ; en effet, les CMI sont de lordre de 1/50 = 2 % (v/v) 1/16 = 6,2 % (v/v), suivi de lextrait mthanolique dont les CMI varient de 1/40 = 2,5 % (v/v) 1/8 = 12,5 % (v/v) et enfin, lextrait thanolique dont les CMI vont de 1/8 = 12,5 % (v/v) 1/20 = 50 % (v/v) (Tableau 1). Les rsultats retranscrits dans le Tableau 2 suggrent que linteraction est non significative
Tableau 2 Analyses statistiques de leffet antilevures des extraits de cannelle (p > F). Analyse de la variance Table 2 Statistical analysis of effects of different extracts of cinnamon on the growth of yeasts. Variance analysis. Source de variation Souches de levures (F1) Extraits (F2) Interaction : F1 F2 Carrs moyens 402,80 2080,08 209,31 Degr de libert 3 3 9 p > Fa 0,5439 0,0155 0,9413

(p = 0,9413 > 5 %), le facteur souche sest avr non significatif (p = 0,5439 a > 5 %). En revanche, le facteur extrait sest rvl significatif (p = 0,0155 < 5 %). Pour affiner davantage lanalyse dans le but didentifier lextrait le plus actif, une comparaison particulire des moyennes par la mthode de Student Newman et Keuls a t ralise. Cette comparaison a rvl que lextrait hexanique est le plus actif (Fig. 1).

Effet des extraits de cannelle sur la croissance des moisissures

Les diffrents extraits ont t galement tests sur certaines espces de moisissures pathognes ou opportunistes. Lessai dinhibition sur milieu solide a montr que presque tous les extraits ont une activit antifongique, hormis quelques filtrations, comme la cinquime filtration de lextrait mthanolique et la quatrime filtration de lextrait aqueux.

a Le test est significatif si (p > F) < 5 %. The test is significant if (P > F) < 5%.

Figure 1 volution de la moyenne des sommes des CMI en fonction de lextrait. Figure 1 Evolution of the MIC sum as a function of the extract.

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Tableau 3 Effet des extraits de cannelle sur la croissance dAspergillus niger Table 3 Effect of different extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus niger.

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Concentration

Extrait hexanique

F1 F2 F3 F4 F5 Extrait F1 mthanolique F2 F3 F4 F5 Extrait F1 thanolique F2 F3 F4 F5 Extrait aqueux F1 F2 F3 F4 F5 Contrle 310

Aspergillus niger ATCC16404 Poids du myclium 10 % 4% 2% 1% mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage inhibition inhibition inhibition inhibition (%) (%) (%) (%) 0 100 0 100 198 36 299 96 0 100 89 71 245 21 315 0 0 100 95 69 304 2 325 0 0 100 108 65 322 0 335 0 0 100 124 60 335 0 340 0 0 100 0 100 201 35 325 0 0 100 0 100 225 27 352 0 0 100 125 60 341 0 366 0 0 100 201 35 352 0 365 0 314 0 320 0 360 0 366 0 0 100 0 100 102 67 286 8 0 100 0 100 203 34 298 4 0 100 123 60 315 0 342 0 0 100 245 21 356 0 389 0 0 100 302 3 389 0 401 0 0 100 0 100 132 57 214 31 0 100 112 64 233 25 288 7 0 100 135 56 289 7 322 0 189 39 265 15 321 0 402 0 0 100 255 18 356 0 425 0

Lvaluation des effets des extraits sur la production de la masse myclienne des moisissures (Tableaux 36) montre que lextrait hexanique possde le meilleur effet antifongique. la concentration de 10 % (v/v) et pour toutes les filtrations, il inhibe totalement la croissance de toutes les espces de moisissures testes. la concentration de 1 % et pour la premire filtration, il rduit la croissance myclienne dA. niger, dA. flavus, dA. parasiticus et de Penicillium cyclopium respectivement de 96, 30, 25 et 17 %. En revanche, la concentration de 4 % et pour la cinquime filtration, le pourcentage dinhibition de la croissance myclienne est compris entre 54 % et 71 %. la concentration de 2 % et pour la premire filtration, lextrait mthanolique diminue la masse myclienne dA. parasiticus, dA. flavus, de P. cyclopium et dA. niger respectivement de 100, 58, 56 et 35 %. la concentration de 1 % et pour la premire filtration, un effet modr a t obtenu par lutilisation de lextrait aqueux. Les pourcentages dinhibition de la croissance myclienne sont compris entre 11 et 29 %. la concentration de 4 % pour la premire filtration les diffrents extraits montrent une inhibition de 100 % de toutes les moisissures testes.

Ces observations sont analyses par une tude de variance (Tableau 7). Il y a un effet souche (p = 0,0000 < 5 %). Le facteur extrait est significatif (p = 0,0014 < 5 %). La comparaison des moyennes par le test de Newman-Keuls fait ressortir quatre groupes diffrents, cest--dire que la sensibilit des quatre moisissures vis--vis des diffrents extraits nest pas la mme. Ainsi, le champignon le plus sensible est P. cyclopium suivi dA. parasiticus, A. niger et enfin, A. flavus. Ces rsultats concordent avec ceux rapports par Beraoud (1990). Concernant linteraction moisissure extrait, on remarque que vis--vis de P. cyclopium, lextrait hexanique est le plus actif, suivi des extraits mthanolique, aqueux et thanolique. Pour A. parasiticus, lextrait le plus actif est lextrait aqueux suivi des extraits hexanique, thanolique et mthanolique. Pour A. niger lextrait hexanique est le plus actif puis les extraits thanolique, aqueux et mthanolique Enfin, pour A. flavus, on note que lextrait hexanique est le plus efficace suivi des extraits mthanolique, thanolique et aqueux. Ainsi lextrait le plus actif et la moisissure la plus sensible sont respectivement lextrait hexanique et Penicillium cyclopium. Ces observations sont confirmes par les Figs. 2 et 3.

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Tableau 4 Effet des extraits de cannelle sur la croissance dAspergillus flavus Table 4 Effect of extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus flavus.

O. Senhaji et al.

Concentration

Extrait hexanique

F1 F2 F3 F4 F5 Extrait F1 mthanolique F2 F3 F4 F5 Extrait F1 thanolique F2 F3 F4 F5 Extrait aqueux F1 F2 F3 F4 F5 Contrle 435

Aspergillus flavus IP 1202-1 Poids du myclium 10 % 4% 2% 1% mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage inhibition inhibition inhibition inhibition (%) (%) (%) (%) 0 100 0 100 102 76 305 30 0 100 0 100 154 64 402 7 0 100 76 82 204 53 425 2 0 100 132 69 356 18 455 0 0 100 124 71 366 16 460 0 0 100 0 100 181 58 294 32 0 100 0 100 267 38 300 31 0 100 140 68 276 36 402 7 155 64 298 31 325 25 425 2 205 53 300 31 402 7 465 0 0 100 0 100 292 33 325 25 0 100 0 100 302 30 322 26 0 100 269 38 386 11 386 11 0 100 298 31 425 2 465 0 0 100 325 25 475 0 478 0 0 100 0 100 140 68 307 29 0 100 0 100 221 49 465 0 0 100 0 100 255 41 486 0 315 27 374 14 386 34 496 0 390 33 377 13 378 13 475 0

Tableau 5 Effet des extraits de cannelle sur la croissance dAspergillus parasiticus Table 5 Effects of different extracts of cinnamon on the growth of Aspergillus parasiticus. Aspergillus parasiticus NRRL 2999 Poids du myclium 10 % 4% 2% 1% mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage inhibition inhibition inhibition inhibition (%) (%) (%) (%) 0 100 0 100 0 100 190 25 0 100 0 100 190 50 286 25 0 100 0 100 260 32 376 1 0 100 114 70 325 14 425 0 0 100 148 61 386 0 478 0 0 100 0 100 0 100 214 44 0 100 0 100 0 100 298 21 0 100 196 48 258 32 325 14 245 35 300 21 326 14 478 0 265 30 325 14 386 2 489 0 0 100 0 100 0 100 264 30 0 100 0 100 180 52 286 2 0 100 0 100 148 61 376 1 0 100 264 30 296 22 389 0 0 100 284 25 324 15 425 0 0 100 0 100 0 100 232 13 0 100 0 100 0 100 325 14 0 100 0 100 199 48 399 0 189 50 235 38 287 24 405 0 0 100 0 100 223 41 415 0

Concentration

Extrait hexanique

F1 F2 F3 F4 F5 Extrait F1 mthanolique F2 F3 F4 F5 Extrait F1 thanolique F2 F3 F4 F5 Extrait aqueux F1 F2 F3 F4 F5 Contrle 380

tude de lactivit antifongique de divers extraits de cannelle

Tableau 6 Effet des extraits de la cannelle sur la croissance de Penicillium cyclopium Table 6 Effect of different extracts of cinnamon on the growth of Penicillium cyclopium.

227

Concentration

Extrait hexanique

F1 F2 F3 F4 F5 Extrait F1 mthanolique F2 F3 F4 F5 Extrait F1 thanolique F2 F3 F4 F5 Extrait aqueux F1 F2 F3 F4 F5 Contrle 225

Penicillium cyclopium IP 1231-80 poids du myclium 10 % 4% 2% 1% mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage mg/20 ml Pourcentage inhibition inhibition inhibition inhibition (%) (%) (%) (%) 0 100 0 100 87 61 187 17 0 100 0 100 86 62 209 7 0 100 0 100 91 59 256 0 0 100 98 56 104 54 276 0 0 100 103 54 165 27 287 0 0 100 0 100 98 56 104 54 0 100 0 100 103 54 123 45 89 61 112 50 124 45 226 0 102 55 125 44 153 32 236 0 135 40 146 35 163 27 276 0 0 100 0 100 0 100 190 15 0 100 0 100 167 26 190 15 125 44 146 35 205 10 264 0 135 40 163 27 234 0 286 0 0 100 147 35 265 0 298 0 0 100 0 100 112 50 201 11 0 100 0 100 156 31 234 0 0 100 0 100 203 10 256 0 98 56 134 40 243 0 276 0 0 100 105 53 236 0 287 0

Discussion
La gravit des candidoses, couple linsuffisance en mdicaments efficaces, nous a conduits nous intresser linpuisable source de produits naturels vertu thrapeutique : les plantes mdicinales. ct des mdicaments synthtiques prescrits dans le traitement des candidoses, de nombreux produits naturels ont t tests dans le but de
Tableau 7 Rsultats des analyses statistiques de leffet antimoisissures des extraits de cannelle (p > F) analyse de la variance Table 7 Statistical analysis of effects of different extracts of cinnamon on the growth of fungal. Variance analysis. Source de variation Souches de moisissures(F1) Extraits (F2) Concentration (F3) Interaction : F1 F2 Interaction : F1 F3 Carrs moyens 151300,17 Degr de libert 3 p > Fa 0,0000

trouver un antifongique efficace, sans effet nfaste et moins cher [1316,21,22]. Cest dans cette optique que des extraits de cannelle ont t tests contre la croissance de levures du genre Candida. Ainsi les rsultats manant des tests dinhibition des Candida sp. montrent que tous les extraits tests ont une activit antifongique. Concernant lextrait aqueux nous remarquons quil a une activit inhibitrice trs prononce. En effet, Beraoud (1990) a effectu une analyse chimique de lextrait aqueux de cannelle et a mis en vidence la prsence de cinnamaldhyde et deugnol qui sont les

21293,67 1375332,13 8143,17 26688,92

3 3 9 9

0,0014 0,0000 0,0324 0,0000 Figure 2 volution de la somme du poids du myclium en fonction de lextrait. Figure 2 Evolution of the weight sum of mycelia as function of the extract.

The test is significant if (P > F) < 5%. a Le test est significatif si (p > F) < 5 %

228

O. Senhaji et al.
Tableau 8 Dtermination de la composition chimique des corces de cannelle Table 8 Chemical composition of cinnamon barks. Substances chimiques Substances stroliques Flavonodes Flavanes Coumarines (UV) Anthocyanes Leucoanthocyanes Drives quinoniques Saponines Polyphnols Tanins + : prsence, : absence. +: presence, : absence. Broyats des corces de cannelle + + + + + + + +

Figure 3 volution du poids moyen du myclium en fonction de la moisissure. Figure 3 Evolution of the weight sum of mycelia as function of the moulds.

composs majeurs, ce qui laisse supposer que leffet antifongique de cannelle est d en partie, au passage de ces deux composs dans lextrait au cours de linfusion. Le mme auteur a mis en vidence la prsence des tannins dans lextrait aqueux, et a dmontr quils ont un effet antifongique. Pour les extraits organiques lextrait hexanique est le plus actif (Fig. 1). Cette efficacit serait lie au pouvoir du solvant solubiliser plusieurs composs contenus dans le broyat de la plante [12]. Concernant la cinquime filtration de tous les extraits qui est aussi inhibitrice que la premire filtration, le phnomne peut tre expliqu par le fait quil y a des composs qui sont actifs, mais qui sont solubiliss aprs un certain temps de contact avec le solvant. Ainsi, lactivit antifongique est non seulement fonction de nature chimique de lextrait [25], mais aussi de la mthode dtude utilise [12,23]. Concernant leffet des extraits de cannelle sur la croissance des moisissures, nous remarquons que la cannelle est doue dune forte activit antifongique [12]. Ainsi, une concentration de 1 % les diffrents extraits sont toujours actifs, et une concentration de 10 % il y a une inhibition totale de tous les champignons tests avec toutes les filtrations. Nos rsultats concordent avec ceux rapports par Bachmann [1] qui a dmontr que la cannelle est efficace sur trois genres de moisissures : Alternaria, Penicillium et Aspergillus. Hitokoto et al. [8] ont tudi leffet de 13 plantes aromatiques et sept pices sur la croissance des espces suivantes : A. parasiticus, A. flavus et A. versicolor. Sur les 20 chantillons tests, lcorce de cannelle a inhib totalement la croissance fongique. Hitokoto [8] et Beraoud (1990) ont tudi leffet antifongique des extraits aqueux des pices ; ils ont rapport que lextrait aqueux de cannelle 20 % a pu inhiber totalement la croissance et la toxinogense dA. pararsiticus, A. flavus et A. versicolor.

Enfin Beraoud (1990) a trouv aussi que sur huit pices tudies, la cannelle est celle qui prsente le pouvoir antifongique le plus puissant. En comparant leffet de la cannelle sur la croissance des moisissures testes, nous avons observ que A. niger est plus rsistant que A. flavus, alors que A. parasiticus et P. cyclopium sont plus sensibles. Ces activits antifongiques des diffrents extraits peuvent tre dues aux composs biologiquement actifs quils contiennent. Le criblage phytochimique des corces de cannelle (Tableau 8) a montr labsence de coumarines. En revanche, ces corces contiennent, entre autres, des substances stroliques, flavonodes, des flavanes, saponines, anthocyanes et leucoanthocyanes ; ces substances ont t identifies comme produits antimycotoxiques et/ou antifongiques. En effet, les saponines se sont montres capables dinhiber la croissance fongique [24]. Dune manire gnrale, aussi bien pour les levures que pour les moisissures, lextrait le plus actif est lextrait hexanique. Cette efficacit serait lie au pouvoir du solvant solubiliser un ou plusieurs composs chimiques contenus dans le broyat de la plante.

Conclusion
Les rsultats obtenus sont encourageants et confirment lintrt de lutilisation des extraits de cannelle en mdecine locale comme agent antifongique et en biotechnologie comme agent conservateur. Il est donc intressant de continuer cette tude dans le but de dterminer le mode daction des extraits de cannelle sur les levures et les moisissures.

tude de lactivit antifongique de divers extraits de cannelle

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