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Mueller Hinton AgarEl Agar o Agar-Agar es un polisacrido sin ramificaciones

obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los gneros Gelidium, Euchema y Gracilaria entre otros actuando como pigmento que da un color caracterstico a cada una. La palabra agar viene del malayo agar-agar, que significa jalea. Qumicamente el agar es un polmero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterognea de dos clases de polisacridos: agaropectina y agarosa. Tambin es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, cola de pescado japonesa, etc. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiologa, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza.
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.

Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomend su uso en forma rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio slido, debido a una serie de factores que se detallan a continuacin: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Frmula (en gramos por litro) Infusin de carne Peptona cida de casena Almidn Agar pH final: 7.3 0.1 Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitacin frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (2530 ml en placas de 9 cm de dimetro).

300.0 17.5 1.5 15.0

Siembra
Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa apropiada.

Incubacin
Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa apropiada.

Resultados
Consultar Notas: 1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: Evaluating production lots of dehydrated Mueller Hinton agar. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibicin en las pruebas de difusin son generalmente ms grandes, quedan fuera de los lmites de control de calidad y pueden dar resultados errneos. 2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo as zonas de inhibicin mas pequeas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de timidina del lote de agar Mueller Hinton, se prueba la cepa de control de calidad: Enterococcus faecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se produce una zona clara de inhibicin de 20 mm o ms. 3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar Mueller Hinton es que las variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucsidos cuando se ensayan cepas de Pseudomonas spp. Por tal motivo, se deben cumplir los lmites de control de calidad publicados por el NCCLS. 4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de control para evitar datos aberrantes debido al medio de en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa apropiada.

cultivo. Para aquellas cepas que fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar Mueller Hinton no suplementado, se agrega sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado, a una concentracin final al 5% (v/v). Para S. E. P. E. Para E. coli evaluar el el control de precisin y exactitud del agar de Mueller Hinton se ATCC ATCC ATCC ATCC inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la cepa usan las siguientes cepas control: 25923 25922 27853 29212 control:

aureus coli aeruginosa faecalis desempeo de

ATCC 35218

Caractersticas
Medio

del
preparado:

medio
mbar.

Almacenamiento
Medio Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100 g Cdigo: B02-137-05 6 x 50 ml Cdigo: B04-137-84 deshidratado: a 10-35 C.

x 500 g Cdigo: B02-137-06 12 x 100 ml Cdigo: B04-137-06

Agar sabouraud
El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificacin a la frmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patgenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentracin de dextrosa y la acidez del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos. Con la adicin de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es tambin utilizado para la determinacin microbiolgica en cosmticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrgeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa acta como fuente de energa y el agar es agregado como agente solidificante.

AGAR SABOURAUD DEXTROSA


Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patgenas y no patgenas. Composicin Digerido enzimtico de casena 10,0 g Dextrosa 40,0 g Agar 15,0 g Agua destilada c.s.p. 1000 mL pH final 5,6 0,2 Preparacin Suspender 65 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para disolver completamente los ingredientes. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilizacin. Fundamento El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los

hongos y ligeramente inhibitorio para las bacterias. En caso de requerirse un incremento en la inhibicin del crecimiento de bacterias, se recomienda aadir agentes antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro de accin.

Sabouraud

Glucosado

Agar

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.

Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento. Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona Glucosa Cloranfenicol Instrucciones Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121C. Mantener en lugar fresco, pues la exposicin al calor hidroliza los componentes. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermtico

10.0 40.0 0.05

Agar

15.0

pH final: 5.6 0.2

Siembra
Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa. Consultar referencias de mtodos recomendados.

Incubacin
El tiempo de incubacin depender del microorganismo que se est buscando aislar.

Resultados

Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231

Crecimiento Bueno Bueno Bueno

Caractersticas
Medio preparado: mbar claro, ligeramente

del
opalescente sin ningn

medio
precipitado.

Almacenamiento
Medio Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-150-05 deshidratado: a 10-35 C.

x 500g :Cdigo: B02-150-06

6x50ml: B04-150-84

El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:
1. 2. 3. 4. Fermenten o no glucosa. Fermenten o no lactosa o sacarosa. Produzcan o no cido sulfhdrico. Produzcan o no gas.

Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:


1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecer de color rojo. 2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar de color rojo. 3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. 4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.

Composicin
Peptona 15g

Extracto de levadura 3g Extracto de carne 3g

Proteosa de peptona 5g

Glucosa Lactosa Sacarosa Sulfato de hierro Cloruro sdico Tiosulfato de sodio Rojo fenol Agar

1g 10g 10g 0,20 5g 0,30g 0,024g 12g

TSI

Agar

Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido 3+ sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro. Frmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Glucosa Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar pH final: 7.3 0.2 Instrucciones 3.0 20.0 5.0 10.0 10.0 1.0 0.2 0.2 0.025 13.0

Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico. Microorganismo Pico/Fondo Produccin de gas Produccin sulfhdrico decido

E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 P. aeruginosa ATCC 27853 A: K:

A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K

+ + + + -

+ + + cido alcalino

Caractersticas
Medio

del
preparado:

medio
rojo

Almacenamiento
Medio Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-134-05 deshidratado: a 10-35 C.

x 500g :Cdigo: B02-134-06

El agar LIA se debe leer en la superficie y el fondo del tubo. En el medio se evala la decarboxilacin de lisina que se evidencia en el fondo del tubo por el viraje a violeta del indicador prpura de metacresol. Tambin se evala la deaminacin de la lisina la cual ocurre en la parte superior del tubo y se evidencia con un color violeta-rojizo. La Fermentacin de la glucosa produce acidificacin del medio y un cambio de color del indicador de violeta a amarillo. Eventualmente se puede observar la Produccin de cido sulfhdrico (H2S) por la presencia de color negro. El agar Citrato Si se utiliza el citrato como fuente de carbono, se incrementa el pH del medio y el indicador vira de verde a azul. Cuando no se utiliza el citrato, el indicador de ph azul de bromotimol permanece de color verde El agar TSI En el tubo TSI debe leerse siempre la superficie y el fondo. La fermentacin de glucosa se observa en el fondo del tubo por el cambio de color del indicador de rojo a amarillo. Tambin puede observarse la fermentacin de lactosa y sacarosa en la superficie del tubo, por el cambio del indicador de rojo a amarillo. La produccin de H2S se observa por la aparicin de un precipitado negro, debido a las sales de hierro presentes Agar Sim La motilidad se observa por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal. En este medio tambin puede observarse la formacin de H2S por el ennegrecimiento del medio

SIM

Medio

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2. Frmula (en gramos por litro) Triptena Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Instrucciones 20.0 6.1 0.2 0.2 Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemlisis y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

Agar pH final: 7.3 0.2

3.5

Solidificar en posicin vertical.

Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

Incubacin
Durante Luego 24 de la incubacin, horas, agregar a 3-5 gotas 35-37 de reactivo C, de en Kovacs o de aerobiosis. Erlich.

Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de siembra. Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra. Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color. Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich. Cepas indol negativas: sin cambio de color. Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 S. enteritidis ATCC 13076 S. flexneri ATCC 12022 Movilidad + + + + Indol + Produccin sulfhdrico + + + de cido

Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difcil de observar. -Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la produccin de cido sulfhdrico.

Caractersticas
Medio preparado: mbar.

del

medio

Almacenamiento
Medio Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-131-05 deshidratado: a 10-35 C.

x 500g :Cdigo: B02-131-06

Lisina Hierro Agar.


Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro. Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-cetocarbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Frmula (en gramos por litro) Peptona de gelatina Extracto de levadura Glucosa Lisina Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Prpura de bromocresol Agar pH final: 6.7 0.2

Instrucciones 5.0 3.0 1.0 10.0 0.5 0.04 0.02 15.0 Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolucin completa. Distribuir y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la puncin.

Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.

Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.

Resultados
1-Prueba -Prueba 2-Desaminacin Decarboxilacin Positiva: Negativa: de Pico Pico de la violeta/fondo violeta/fondo la lisina: violeta. amarillo. lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. 3-Produccin de cido sulfhdrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo) Microorganismos Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Providencia spp. Citrobacter freundii Morganella spp.* Edwarsiella spp. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Escherichia coli ATCC 25922 Color en el pico de flauta Rojo Prpura Prpura Rojo Prpura Rojo Prpura Prpura Prpura Color en la base del tubo Amarillo Prpura Prpura Amarillo Amarillo Amarillo Prpura Prpura Prpura Ennegrecimiento del medio Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

Caractersticas
Medio preparado:

del
color

medio
violeta.

Almacenamiento
Medio Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-106-05 deshidratado: a 10-35 C.

x 500g :Cdigo: B02-106-06

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