hplc

 HIGH –PRESSURE LIQUID-SOLID CHROMATOGRAPHY

 CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA RESOLUCION
 CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA
VENTAJAS

 El proceso cromatográfico es rápido pudiéndose resolver mezclas muy complejas en

minutos.
 Permite la separación de sustancias termolábiles.
 Se puede lograr resolución de sustancias con peso molecular de 54 a 450.000
Diagrama de los componentes del HPLC

BOMBAS
Los instrumentos de HPLC deben tener un sistema que suministre la presión adecuada,
para que se alcance un caudal suficiente a su salida.
• Bombas reciprocas
• Bombas de jeringas o desplazamiento
• Bombas neumáticas o de presión constante
Requisitos para un sistema de bombeo
• Generación de presión por encima de 6000 psi
• Flujo libre de pulsaciones
• Intervalo de caudal de 0.1 ml a 10 ml
• Componentes resistentes a la corrosión

Gradiente de caudal:

Es la variación del caudal durante el proceso cromatográfico.

Muestras de características hidrosolubles
VITAMINAS

INYECTORES
Actualmente se disponen de inyectores automáticos.
Los manuales son:
* Sistema de bucle Volumen de muestra de 5 a 500 ul.
7000 psi

• Resistencia hidrodinámico

COLUMNAS PARA HPLC

 Se construyen de acero inoxidable.
 Presentan una longitud de 10 y 30 cm. El mas frecuente es de 25 cm.
 El diámetro es 4 a 10 mm.
 El tamaño de la partícula de la fase estacionaria es de 3.5 y 10um
Precolumna
 Aumenta la vida de la columna analítica
 Satura la fase móvil con la fase estacionaria.
 La composición de la fase estacionaria debe ser semejante a la columna analítica
 El tamaño de partícula es mayor

Clasificación de la columna según su relleno

  En función de su consistencia
 Según la porosidad de las partículas
 En función de la forma de la partícula
 En función del diámetro medio de la partícula.
Columnas
 La parte interna de las columnas presentan surcos concéntricos revestidos con
una capa de glicerina para dar uniformidad a la fase estacionaria empacada.
Cromatografía de fase normal
 Retardo por interacción de la superficie polar de la fase estacionaria con partes
polares de las moléculas.
 SIO2, Al2 O3, AMINO,-CN, -NO2
Cromatografia de fase normal
 Heptano, hexano, ciclohexano, cloroformo diclorometano, dioxano, metanol
 Separación de sustancias no iónicas apolares hasta semipolares (hidrocarburos
--- Ac. Carbónicos)
Cromatografía fase inversa
 Retardo por interacción de la cadena apolar hidrocarbonada de la fase
estacionaria con partes apolares de las moléculas de la prueba
Cromatografía fase inversa
 n – octadecilo (RP-18) n-octilo , etilo fenilo polímeros hidrófobos.
 Metanol o Acetonitrilo/agua o tampón
 Separación de sustancias no iónicas apolares hasta semipolares. Mayor resolución de
separación.
Condiciones que debe reunir el detector
 Respuesta universal con todos los solutos
 Sensibilidad alta (10-12 – 10-11g/ml
 Ruido de fondo muy bajo
 Celda del detecto de menor volumen
 No debe destruir la muestra
 Debe ser capaz de funcionar durante mucho tiempo.
Clasificación de los detectores
 Fluorescencia
 Electroquímico
 Índice de refracción
 Conductividad
 Absorbancia
 Espectrometría de masas
Detector de absorbancia
 Definida por la ley de Lambert-Beer
 Utiliza lámparas de vapor de mercurio
 Celda de flujo para 10 ul
 Son de doble haz
 Deberá tener regiones electromagnéticas de la luz ultravioleta y visible.
Detectores de diodos en serie photodiode array
 Detectan dos tipos de compuestos que absorben a distintas longitudes de onda
 Los datos espectrales se registran en la memoria del computador en fracciones de
segundo.
 Proporciona gráficos tridimensionales
 Sistema de diodos
Campos de aplicacion
 Alcaloides
 Anestésicos locales
 Anticarcinógenos
 Anticuagulantes
 Antimicrobianos
 Acidos biliares, colorantes biliares
  Azucares
 hormonas

Letra De Basta Ya!

Desde hoy
he prohibido a mis ojos
el mirarte de nuevo a la cara.
Tienes algo que acaba conmigo
que a mi mente
de mi alma separa.
Tengo que renunciar a quererte
antes ya no tenga remedio
si mi vida dejara a tu suerte,
mi camino sera un cementerio.
Y basta ya
de tu inconciencia
de esta forma tan absurda.
De ver a diario
como hechas a la basura
mi corazon,
lo que te doy,
con tanta fe de ver en ti felicidad.
Me llevare
la dignidad de no caer mas en tu juego.
Hare de todo mi interior nuevos senderos,
y llorare hasta lograr
que algun dia ya no te pueda recordar.