Latin American Journal of Pharmacy (formerly Acta Farmacutica Bonaerense) Lat. Am. J. Pharm.

26 (2): 280-7 (2007)

Notas tcnicas Recibido el 14 de octubre de 2006 Aceptado el 4 de diciembre de 2006

Validao de Mtodos de Lavagem de Vidraria Utilizando Vitamina B12 como Marcador de Limpeza
Aureanna Nairne NEGRO 1, Cibele BUBA 1, Thais BARBOZA 1, Silvio M. FRANCHI 1 & Cntia M. RIBAS DE OLIVEIRA 1,2* Ncleo de Controle de Qualidade e Desenvolvimento, Curso de Farmcia. Mestrado Profissional em Gesto Ambiental - Centro Universitrio Positivo (UnicenP), Rua Professor Pedro Viriato Parigot de Souza 5300. CEP 81280-330 - Curitiba - Paran (Brasil)
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RESUMO. O objetivo do trabalho foi a validao de procedimentos de limpeza de vidrarias, utilizando determinao espectrofotomtrica de resduo de vitamina B12, como marcador, para avaliao da eficcia de tal procedimento. Aps ter sido impregnada com o marcador de limpeza, cada vidraria testada foi submetida aos agentes de limpeza (detergente neutro 2%, soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N, cido sulfrico 50% (v/v), cido sulfrico concentrado, cido ntrico 30% (v/v) e hidrxido de sdio 5% (p/v)). Para limpeza de bquer e pipeta volumtrica, o mtodo utilizando detergente 2% foi eficaz. Para limpeza de bales volumtricos, os mtodos que mostraram total eficincia foram os com cido sulfrico concentrado, cido ntrico 30% (v/v) e hidrxido de sdio 5% (p/v). SUMMARY. Glass Cleaning Validation Method using Vitamin B12 as a Marker Substance. Any analytical procedure strongly depends on an appropriate cleaning of glass apparatus. In the present research it was studied a glass cleaning validation procedure using a spectrophotometric method for quantitative determination of residual vitamin B12, employed as cleaning efficacy marker. Each tested glass apparatus was impregnated with the marker solution, and cleaned using conventional cleaning agents (2% detergent, 0,5 N alcoholic potassium hydroxide, 50% (v/v) sulfuric acid, concentrated sulfuric acid, 30% (v/v) nitric acid and 5% (w/v) sodium hydroxide). The 2% detergent was appropriate to clean beakers and volumetric pipettes. The volumetric flasks were successfully cleaned with concentrated sulfuric acid, 30% (v/v) nitric acid and 5% (w/v) potassium hydroxide.

INTRODUO O sucesso em conduzir ensaios com resultados confiveis depende da limpeza adequada da vidraria utilizada. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi validar metodologia para limpeza de vidraria, desenvolvendo procedimento operacional padro para tal metodologia. A importncia do uso de procedimentos apropriados para a limpeza de vidrarias tem sido destacada para a obteno de resultados exatos e precisos em anlises de laboratrio. Diferentes so os mtodos de limpeza empregados, em funo do tipo de anlise a ser conduzida, conforme pode ser exemplificado a seguir. De acordo com a Farmacopia Americana 26 edio 1, os agentes de limpeza mais eficazes so a soluo de cido ntrico a quente e a mis-

tura sulfocrmica. A mistura sulfocrmica contm, porm, cromo hexavalente (cromo VI), que integra a listagem da EPA (Agncia Ambiental dos EUA) dos 129 poluentes mais crticos. Essa substancia considerada um potente carcinognico humano 1-3. Agentes alcalinos de limpeza, tais como fosfato trissdico e detergentes sintticos, so amplamente utilizados, mas requerem prolongados enxges para que se evitem acmulos de resduos do agente de limpeza 1. Para determinao de cdmio em meio aquoso, Moraes et al. 4 empregaram a limpeza de vidrarias por meio de uso da seqncia detergente, cido ntrico 10% (v/v) e gua deionizada. Dias & Satte 5, para determinao de arsnio em amostras orgnicas por meio de absoro atmica, utilizaram para limpeza de vi-

PALAVRAS CHAVE: Espectrofotometria, Limpeza de vidraria ,Validao , Vitamina B12, . KEY WORDS: Glass cleaning , Spectrophotometry, Validation, Vitamin B12.
* Autor a quem correspondncia deve ser enviada. E-mail: cmara@unicenp.edu.br

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ISSN 0326-2383

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drarias a seqncia cido ntrico 0,28 mol/L (24 h), gua deionizada (5 vezes) e imerso por 24 h em gua deionizada. Para limpeza de vidrarias em estudos de polimerizao de 1,3- butadieno, Fraga et al. 6 utilizaram soluo de potassa alcolica e cido clordrico 5%, seguido de enxgue com gua destilada. Para determinao de sdio no controle de qualidade de bebidas carbonatadas, a exigncia em relao limpeza de vidrarias estabelecida, conforme descrito por Ferrari e Soares 7, pela utilizao de gua e detergente, seguida de enxge e imerso em cido ntrico 10% (por uma noite) e enxge com gua deionizada (3 vezes). Em laboratrios de anlises clnicas, a limpeza de vidrarias recebe tambm ateno especial, como pode ser observado em procedimentos descritos por Gold Analisa Diagnstica 8 e In Vitro Diagnstica 9 para determinaes de ferro e triglicrides, respectivamente. Para os ensaios de eficincia de limpeza, os marcadores utilizados podem ser tanto heparina sdica, quanto vitamina B12 (cianocobalamina). A cianocobalamina o marcador mais utilizado, por possuir um elevado coeficiente de absortividade molar na regio do ultravioleta 1. Muito embora procedimentos de limpeza sejam destacados em trabalhos analticos, no so citadas referncias sobre a validao dos mtodos. Faz-se, portanto, necessria a realizao de estudos que estabeleam o uso de marcadores de limpeza como determinantes para a validao de mtodos de limpeza de vidrarias em laboratrio. MATERIAL E MTODOS Reagentes e vidraria Os reagentes utilizados para os experimentos foram de grau p.a. A cianocobalamina (vitamina B12) 99%, da marca Sigma, foi utilizada como marcador de limpeza. Como diluente do marcador de limpeza empregou-se soluo de lcool etlico 25% (v/v). Os agentes de limpeza escolhidos para o ensaio foram baseados em revises bibliogrficas, sendo eles: soluo de detergente neutro 2% (diludo em gua destilada); soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N 10; soluo de cido sulfrico 50% (v/v); cido sulfrico concentrado; soluo de cido ntrico 30% (v/v); soluo de hidrxido de sdio 5% (p/v). A vidraria utilizada para a verificao de limpeza foi: balo volumtrico de 10 mL, bquer de 250 mL e pipeta volumtrica de 5 mL. Foram utilizadas 6 unidades-teste para cada um dos materiais.

Equipamentos Os procedimentos de pesagem foram conduzidos em balana analtica (Boeco Germany). Os ensaios espectrofotomtricos foram realizados em espectrofotmetro UV-Vis, modelo UV1601 (Shimadzu). Escolha do marcador de limpeza O marcador utilizado para a impregnao das vidrarias foi vitamina B12 (Sigma), pelo fato desta substncia possuir elevado coeficiente de absortividade molar na regio do ultravioleta 1. Utilizou-se nos experimentos a vitamina B12 em soluo de lcool etlico a 25% (v/v). Determinao do comprimento de onda mximo (mx) de vitamina B12 em lcool etlico 25% (v/v) Foi determinado o mx da soluo de vitamina B12 a 1,0 g/mL em lcool etlico (25%, v/v), por meio de varredura de comprimento de onda de 260 a 610 nm, em espectrofotmetro UV/Vis, segundo recomendado pela Farmacopia Portuguesa VII 11. Determinao da curva padro para vitamina B12 em lcool etlico 25% (v/v) Foi preparada uma soluo estoque de vitamina B12 contendo 10,0 g/mL, em lcool etlico 25% (v/v), e diluda a 0,02 g/mL, 0,05 g/mL, 0,1 g/mL, 0,2 g/mL e 0,5 g/mL. Realizou-se a leitura das absorbncias de tais solues no mx determinado, a partir do que foi estabelecida curva padro, com sua respectiva equao da reta por regresso linear. O experimento descrito foi conduzido em triplicata. Identificao da concentrao tima de vitamina B12 para emprego como marcador de limpeza Determinou-se experimentalmente a concentrao de vitamina B12 necessria para validar a eficcia de limpeza. Foram testadas trs concentraes diferentes deste marcador. Bales volumtricos de 10 mL foram impregnados com soluo de vitamina B12 a 1,0 mg/mL, 10,0 mg/mL e 20,0 mg/mL, isoladamente e em duplicata para cada concentrao. O mesmo procedimento foi realizado para unidades de bquer de 250 mL. Essas solues foram mantidas nas vidrarias por 30 minutos e lavadas com os diferentes agentes de limpeza selecionados. A vidraria seca foi preenchida com lcool etlico a 25% (v/v) e agitada para dissoluo de vitamina B12 residual. Para identificao do res-

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duo de vitamina B12, realizou-se a leitura das absorbncias das solues alcolicas no mx determinado. Partindo da equao da reta, foram obtidas as concentraes do marcador residual presente nas vidrarias. Este teste preliminar de limpeza foi realizado utilizando detergente a 2%, devido a seu amplo emprego como agente de limpeza em laboratrios. Impregnao da vidraria com a soluo do marcador Determinada a concentrao tima do marcador de limpeza, as vidrarias balo volumtrico de 10 mL, bquer de 250 mL e pipeta volumtrica de 5 mL foram mantidas, por 30 min, em contato com a soluo de vitamina B12, seguido de descarte e procedimento de limpeza. Limpeza da vidraria de acordo com o agente de limpeza Limpeza da vidraria utilizando detergente 2% Limpeza de bquer de 250 mL. Aps descarte de soluo de vitamina B12, o recipiente foi preenchido com gua, adicionadas, aproximadamente, 5 gotas do detergente a 2%. Em seguida, procedeu-se escovao do recipiente de vidro. Aps esta lavagem, a vidraria foi enxaguada 7 vezes com gua corrente, 2 vezes com gua destilada e seca sob ar comprimido. Limpeza de balo volumtrico de 10 mL. A soluo de vitamina B12 foi descartada, e o balo preenchido com gua, seguido da adio de aproximadamente 5 gotas do detergente a 2%. Agitou-se vigorosamente por 30 segundos. Aps esta lavagem, os bales volumtricos, enxaguados 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada, foram secos com auxlio de ar comprimido. Limpeza de pipeta volumtrica de 5 mL. A soluo de vitamina B12 foi descartada e a pipeta colocada em equipamento prprio para limpeza deste material. No lavador, foram realizadas 2 lavagens, em dias diferentes, utilizando aproximadamente 5 mL de detergente a 2%, em processo de lavagem de 3 h por dia e imerso por uma noite. Aps este procedimento, a vidraria foi enxaguada 2 vezes com gua destilada e seca sob ar comprimido. Limpeza da vidraria com cido sulfrico 50% (v/v) A soluo de vitamina B12 foi descartada e as vidrarias, aps enxaguadas 3 vezes com gua corrente, foram preenchidas com soluo de cido sulfrico 50% (v/v), mantendo-se em con282

contato por um perodo de 2 h. No caso de pipetas, optou-se por deix-las imersas em proveta contendo cido sulfrico 50% (v/v), pelo mesmo tempo de contato. Aps este perodo, a soluo de limpeza foi descartada, e o material enxaguado 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada. A secagem foi realizada sob ar comprimido. Limpeza da vidraria com soluo lcolica de hidrxido de potssio 0,5 N A soluo de vitamina B12 foi descartada e a vidraria enxaguada 3 vezes com gua corrente. A vidraria foi preenchida com soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N, mantendo-se em contato por um perodo de 2 h. Aps este perodo, o agente de limpeza foi descartado, e o material enxaguado 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada. A secagem foi realizada com ar comprimido. Limpeza da vidraria utilizando cido sulfrico concentrado Aps impregnao com a soluo do marcador de limpeza, seguida de descarte, a vidraria foi enxaguada 3 vezes com gua corrente e preenchida com soluo de cido sulfrico concentrado, mantendo-se em contato por um perodo de 2 h. O agente de limpeza foi descartado, e a vidraria enxaguada 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada. A secagem foi realizada com auxlio de ar comprimido. Limpeza da vidraria utilizando cido ntrico 30% (v/v) A soluo de vitamina B12 foi descartada, e a vidraria enxaguada 3 vezes com gua corrente. Em seguida, o recipiente foi preenchido com soluo de cido ntrico 30% (v/v), mantendo-se em contato por um perodo de 2 h. A soluo de limpeza foi, ento, descartada, e o material enxaguado 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada. A secagem foi realizada sob ar comprimido. Limpeza da vidraria utilizando hidrxido de sdio 5% (p/v) Aps descarte da soluo do marcador de limpeza, a vidraria foi enxaguada 3 vezes com gua corrente e preenchida com soluo de hidrxido de sdio 5% (p/v), mantendo-se em contato por um perodo de 2 h. Aps este perodo, a soluo de limpeza foi descartada e a vidraria enxaguada 7 vezes com gua corrente e 2 vezes com gua destilada. A secagem foi realizada sob ar comprimido.

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Tratamento da vidraria para a determinao espectrofotomtrica Aps a secagem, a vidraria foi preenchida com a soluo de lcool etlico 25% (v/v) e agitada para dissoluo de vitamina B12 residual. Partindo-se dessa soluo, realizou-se a leitura das absorbncias no mx determinado e com a equao da reta obteve-se a concentrao residual do marcador de limpeza. RESULTADOS Determinao do comprimento de onda mximo (mx) da vitamina B12 em lcool etlico 25% (v/v) Realizada varredura de comprimento de onda entre 260 e 610 nm, para a soluo de mercador de limpeza, 3 picos de absoro foram observados, respectivamente a 279, 361 e 550,5 nm, conforme apresentado na Tabela 1.
(nm) Absorbncia

Figura 1. Curva padro da vitamina B12 em lcool etlico a 25% (v/v).

A linearidade do mtodo foi observada, conforme construo da curva padro, de modo a alcanar a deteco de concentraes residuais de vitamina B12 entre 0,02 e 0,5 g/mL. Identificao da concentrao tima de vitamina B12 para emprego como marcador de limpeza A concentrao tima do marcador de limpeza foi obtida testando, em dois diferentes tipos de vidraria, diferentes concentraes de vitamina B12 em lcool etlico 25% (v/v), conforme procedimento descrito no item MATERIAL E MTODOS. A quantifi-cao residual de vitamina B12 foi determinada por espectrofotometria no ultravioleta a 279 nm (Tabela 3). Os resultados de testes com concentraes superiores a 20,0 mg/mL apresentaram-se similares esta concentrao. De acordo com os resultados apresentados na Tabela 3, a concentrao de escolha do marcador vitamina B12 para os ensaios de validao de limpeza foi de 20,0 mg/mL em lcool etlico 25% (v/v). Verificao da eficincia do procedimento de limpeza Para testar a eficincia do procedimento, foram utilizadas 6 unidades de cada tipo de vidraria, para cada um dos mtodos de limpeza utilizados. Determinada a concentrao tima de 20,0 mg/mL de marcador de limpeza, os diferentes tipos de vidraria estudados foram impregnados com essa soluo e tratados conforme a metodologia descrita para cada agente de limpeza. A vidraria, aps secagem com ar comprimido, foi preenchida com lcool etlico 25% (v/v) e agitada para dissoluo da vitamina B12 residual. A absorbncia da soluo resultante foi determinada a 279 nm, para identificar a presena ou no do marcador residual. Partindo-se da equao da reta (Y= 0,0072 X +0,0042), determinou-se a concentrao de vitamina B12 presente em cada um dos tipos de vidraria estudados.

279,0 361,0 550,5

0,5032 0,1848 0,0569

Tabela 1. Valores mximos de absorbncia observa-

dos para soluo de vitamina B12 a 1,0 g/mL em lcool etlico 25% (v/v).

O pico de maior absorbncia correspondeu ao comprimento de onda de 279 nm, que foi definido com o mx para os ensaios seguintes. Determinao da curva padro da vitamina B12 em soluo de lcool etlico 25% (v/v) a 279 nm A viabilidade de utilizao de soluo de lcool etlico (25% v/v) de vitamina B12 como marcador de limpeza foi avaliada partindo-se da anlise espectrofotomtrica a 279 nm, com intuito de se avaliar a faixa de sensibilidade do mtodo de determinao residual de tal marcador, conforme ensaios para construo de curva padro (Tabela 2, Fig. 1).
Concentrao (g/mL) Absorbncia a 279 nm

0,02 0,05 0,1 0,2 0,5 etlico a 25% (v/v) a 279 nm.

0,0043 0,0045 0,0052 0,0056 0,0078

Tabela 2. Curva padro da vitamina B12 em lcool

283

NEGRO A.N., BUBA C., BARBOZA T., FRANCHI S.M. & RIBAS DE OLIVEIRA C.M.

Concentrao de Vitamina B12 (mg/mL)

Vidraria

N de Unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

1,0

balo volumtrico de 10 mL bquer de 250 mL balo volumtrico de 10 mL bquer de 250 mL balo volumtrico de 10 mL bquer de 250 mL

1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2

0,0004 0,0006 -0,0002 -0,0005 0,0024 0,003 -0,0024 -0,004 0,0055 0,0062 -0,0044 -0,0048

nd*

10,0

20,0

0,181 0,278 nd*

Tabela 3. Resultados da impregnao da vidraria com soluo de vitamina B12 a 1,0 mg/mL, 10,0 mg/mL e 20,0 mg/mL em lcool etlico 25% (v/v), aps limpeza com detergente a 2%. *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

Limpeza da vidraria utilizando detergente 2% Os resultados de absorbncia e, conseqente, concentrao residual do marcador de limpeza das vidrarias limpas com detergente 2% esto apresentados na Tabela 4. Conforme os resultados, a limpeza com detergente 2% foi eficaz para a vidraria do tipo bquer de 250 mL e pipeta volumtrica de 5 mL. Para balo volumtrico de 10 mL, no entanto, esse agente de limpeza no se mostrou satisfatrio. Limpeza da vidraria utilizando cido sulfrico 50% (v/v) Na Tabela 5, esto apresentadas as absorbncias e as concentraes residuais de vitamina B12 para a vidraria limpa com cido sulfrico 50% (v/v). De acordo com os resultados obtidos, a limpeza com cido sulfrico 50% (v/v), tanto para bquer de 250 mL, como para pipeta volumtrica de 5 mL, foi eficiente, pois no foram detectados resduos do marcador. Para balo volumtrico de 10 mL, entretanto, quatro de seis unidades testadas apresentaram-se limpas, e, em duas, foram detectados resduos do marcador. Limpeza da vidraria utilizando soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N Os resultados de absorbncia e, conseqente, concentrao residual do marcador de limpeza das vidrarias limpas com soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N esto apresentados na Tabela 6. Utilizando-se este mtodo de lim-

Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

balo volumtrico de 10 mL

1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6

0,0055 0,0062 0,0038 0,0056 0,0084 0,0172 -0,0044 -0,0048 -0,0096 -0,01 -0,0125 -0,0118 -0,0001 -0,0024 -0,0031 -0,0027 -0,0038 -0,0062

0,1805 0,2777 nd* 0,1944 0,5833 1,8056

bquer de 250 mL

nd*

Pipeta volumtrica de 5 mL

nd*

Tabela 4. Concentrao residual de vitamina B12 na vidraria aps limpeza com detergente a 2%. *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

peza, em pipeta volumtrica de 5 mL, no foi observado resduo do marcador em nenhuma das unidades testadas. Na mesma condio, no caso de vidraria tipo bquer de 250 mL, houve resduo de vitamina B12 em apenas uma das seis unidades testadas. Para vidraria tipo balo volumtrico de 10 mL, alcanou-se limpeza adequada em quatro das seis unidades testadas.

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Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

balo volumtrico de 10 mL

1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6

0,0001 0,0008 0,004 0,0041 0,0052 0,0056 0,0023 -0,0004 -0,0013 -0,001 0,0014 0,0023 -0,0144 -0,0114 -0,0157 -0,0015 -0,0017 -0,0011

nd*

0,1389 0,1944

balo volumtrico de 10 mL

1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6

0,0015 0,0034 0,0041 0,0036 0,0057 0,0055 0,0053 -0,0041 -0,0059 -0,0063 0,0024 -0,0051 -0,0121 -0,0124 -0,0135 -0,0138 -0,0144 -0,0147

nd* 0,2083 0,1806 0,1528 nd*

bquer de 250 mL

nd*

bquer de 250 mL

pipeta volumtrica de 5 mL

nd*

pipeta volumtrica de 5 mL

nd*

Tabela 5. Concentrao residual de vitamina B12 na

vidraria aps limpeza com cido sulfrico 50% (v/v). *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

Tabela 6. Concentrao residual de vitamina B12 na vidraria aps limpeza com soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N. *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

Considerando que todos os mtodos anteriormente citados foram ineficientes, total ou parcialmente, para a limpeza de bales volumtricos de 10 mL, foram testados, para este tipo de material, os mtodos de limpeza com agentes oxidantes fortes, tais como, cido sulfrico concentrado, cido ntrico 30% (v/v) e hidrxido de sdio 5% (p/v). Limpeza da vidraria utilizando cido sulfrico concentrado Na Tabela 7, esto apresentadas as absorbncias e concentraes de vitamina B12 residuais para a vidraria limpa com cido sulfrico concentrado. De acordo com os resultados, todas as unidades ensaiadas foram adequadamente limpas. Limpeza da vidraria utilizando cido ntrico 30% (v/v) As absorbncias e concentraes de vitamina B12 residual, para a vidraria limpa com cido ntrico 30% (v/v), esto apresentadas na Tabela 8. Conforme os resultados mostrados na tabela, todas as unidades testadas apresentaram limpeza adequada. Limpeza da vidraria utilizando hidrxido de sdio 5% (p/v) Na Tabela 9, esto apresentadas as absorbn-

Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

balo volumtrico de 10 mL

1 2 3 4 5 6

-0,0101 -0,0003 -0,0117 -0,0075 -0,0138 -0,0132

nd*

Tabela 7. Concentrao residual de vitamina B12 na vidraria, aps limpeza com cido sulfrico concentrado. *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

balo volumtrico de 5 mL

1 2 3

-0,0021 0,0028 -0,0053

nd*

Tabela 8. Concentrao residual de vitamina B12 na vidraria, aps limpeza com cido ntrico 30% (v/v). *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

cias e as concentraes residuais de vitamina B12, para a vidraria limpa com hidrxido de sdio 5% (p/v). De acordo com os resultados, toda a vidraria testada mostrou-se adequadamente limpa.

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NEGRO A.N., BUBA C., BARBOZA T., FRANCHI S.M. & RIBAS DE OLIVEIRA C.M.

Vidraria

N unidades

Absorbncia a 279 nm

Concentrao (g/mL)

balo volumtrico de 5 mL

1 2 3

-0,0055 -0,0081 -0,006

nd*

Tabela 9. Concentrao residual de vitamina B12 na vidraria, aps limpeza com hidrxido de sdio 5% (p/v). *nd = no detectado (abaixo do limite de sensibilidade do mtodo).

DISCUSSO Para validao do mtodo de limpeza, um requisito necessrio o marcador de limpeza. Inicialmente, avaliou-se o emprego da cafena como marcador, porm, pelos resultados obtidos, observou-se que a faixa de sensibilidade do mtodo seria muito alta, o que impossibilitaria a identificao e quantificao de quantidades mnimas de resduos, para constatar a ineficincia do processo de limpeza do material. Muito embora a recomendao da vitamina B12, como marcador de limpeza, esteja indicada na 26 ed. da USP 1, nenhum trabalho foi encontrado na literatura descrevendo o uso desta substncia como marcador de limpeza. De acordo com os resultados da Tabela 4, o mtodo de limpeza utilizando detergente 2% mostrou-se eficaz para a limpeza de bqueres de 250 mL, uma vez que seu formato permite facilmente escovao e enxge apropriados remoo de resduos. Vidraria do tipo pipeta volumtrica de 5 mL tambm foi limpa satisfatoriamente por este mtodo, devido possibilidade de passagem contnua de gua pelo interior do material, no equipamento lavador de pipetas. No entanto, em bales volumtricos de 10 mL, detectou-se resduo do marcador de limpeza aps lavagem com detergente 2%. Justificase este fato pela impossibilidade de escovao e dificuldade de enxge, neste tipo de vidraria. Mtodos mais drsticos foram testados, portanto, para a limpeza eficiente de vidraria do tipo balo volumtrico de 10 mL. Conforme resultados apresentados na Tabela 5, o agente de limpeza cido sulfrico 50% (v/v) demonstrou-se eficiente tanto para bqueres de 250 mL como para pipetas volumtricas de 5 mL, no sendo detectados pelo mtodo, resduos do marcador nos lquidos de lavagem deste tipo de vidraria. No caso de balo volumtrico de 10 mL, tal soluo de limpeza mostrou-se parcialmente eficaz, pois, das seis unidades testadas, duas delas apresentaram resduos do mar-

cador. A soluo cida testada tambm no proporcionou limpeza eficiente para a vidraria do tipo balo volumtrico. Os resultados mostrados na Tabela 6 indicam que o mtodo de limpeza utilizando soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N mostrouse eficiente para pipetas volumtricas de 5 mL, no apontando resduo de vitamina B12 em nenhuma das unidades testadas. No caso de bqueres de 250 mL, de seis unidades testadas, uma apresentou resduo do marcador de limpeza. A vidraria balo volumtrico de 10 mL ficou adequadamente limpa em 4 unidades, porm duas apresentaram resduo de marcador de limpeza. Considerando que todos os mtodos anteriormente citados foram ineficientes, total ou parcialmente, na limpeza de balo volumtrico de 10 mL, testaram-se para este frasco mtodos de limpeza com agentes oxidantes fortes, tais como, cido sulfrico concentrado, cido ntrico 30% (v/v) e hidrxido de sdio 5% (p/v). Os resultados obtidos por esses mtodos foram satisfatrios para todas as unidades de bales volumtricos testadas. Com esses estudos ficou evidente que, para cada tipo de vidraria, um mtodo de limpeza deve ser adaptado. Assim sendo, a escolha do agente de limpeza de extrema importncia, pois se faz necessria a limpeza eficaz do material, evitando-se, ao mesmo tempo, a gerao de resduos que podero ocasionar contaminao ambiental. CONCLUSES Para limpeza adequada de vidraria tipo bquer de 250 mL, verificou-se que o mtodo ideal o que utiliza o detergente 2%, seguido de escovao e enxge com gua. A limpeza deste frasco com cido sulfrico 50% (v/v) tambm foi satisfatria, porm o uso de detergente apresenta-se mais incuo dermatologicamente do que de cido sulfrico. Alm disso, o resduo do detergente menos agressivo ao meio ambiente do que o de cido sulfrico. A vidraria do tipo pipeta volumtrica de 5 mL pde ser convenientemente limpa, tanto com detergente a 2%, em lavador de pipetas, quanto por imerso em cido sulfrico 50% (v/v) ou soluo alcolica de hidrxido de potssio 0,5 N. Sugere-se, dentre estes, o mtodo do detergente a 2%, como mtodo ideal de limpeza, pelos mesmos motivos citados anteriormente para o caso de vidraria tipo bquer de 250 mL. Para a vidraria do tipo balo volumtrico de

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10 mL, apenas o emprego de cido sulfrico concentrado, cido ntrico 30% (v/v) e hidrxido de sdio 5% (p/v) permitiram eficincia de limpeza. Os demais mtodos testados foram considerados pouco eficientes na limpeza deste tipo de frasco, uma vez que, das seis unidades testadas por mtodo, algumas acusaram resduo de vitamina B12. Embora o emprego destas solues represente risco de queimadura para o manipulador, bem como gerao de resduos txicos para o ambiente, no foram validados outros mtodos melhores para limpeza de bales volumtricos de 10 mL. Sugere-se que o operador, ao empregar alguns destes mtodos, faa uso obrigatrio de equipamentos de proteo individual (EPI) e de proteo coletiva (EPC), alm de descartar adequadamente o resduo da lavagem. Conforme Birch 2 destacou em seu texto, agentes de limpeza alcalinos atacam a slica da superfcie da vidraria, tornando o vidro opaco, devendo o mesmo ser usado com certa moderao. Estudos posteriores podero ser realizados para a verificao do reaproveitamento contnuo das solues cidas e alcalinas nos procedimentos de limpeza, evitando, dessa maneira, o excesso de resduos gerados pelos agentes de lavagem, que devem passar por tratamentos especiais para eliminar o risco de contaminao ambiental.
A g r a d e c i m e n t o s. Ao Centro Universitrio Positivo (UnicenP), Curitiba - Paran (Brasil), onde o presente trabalho foi conduzido, por fornecer a infra-estrutura e demais condies de suporte financeiro para a realizao do presente estudo.

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