METODOLOGA EXPERIMENTAL PRCTICA 2: HOMOGENEIZACIN Y CENTRIFUGACIN NOTA: TODO EL MATERIAL Y SOLUCIONES QUE SE UTILIZAN PARA REALIZAR HOMOGENADOS DEBEN

ESTAR PREVIAMENTE ENFRIADOS A 4C A) TIPOS DE HOMOGENEIZADORES

1. MANEJO DE LA MUESTRA Pesar 3 porciones de 1g Cortar en trozos pequeos

4. HOMOGENEIZACIN EN MORTERO 5 mL de solucin isotnica de Previamente enfriada a 4C Dejar sobre hielo

5. CENTRIFUGACIN Formar parejas con los tubos de los homogenados Comparar tamaos y caractersticas de pastillas y sobrenadante

Verificar que las parejas pesen lo mismo

Mortero Colocar en vasos pp previamente enfriados a 4C Homogenizar durante 3 min

Equilibrar cada una de las parejas y centrifugar

2500 rpm X 10 min

Virtis

Potter

Mortero

2. HOMOGENEIZACIN EN VIRTIS 5 mL de solucin isotnica de Previamente enfriada a 4C Dejar sobre hielo

3. HOMOGENEIZACIN EN POTTER 5 mL de solucin isotnica de Previamente enfriada a 4C Dejar sobre hielo Transferir los sobrenadantes con una pipeta de 10 mL y medir volumen

Observar a contraluz los sobrenadantes de los tejidos y comparar.

Virtis

Potter

Transferir Proponga cul es el mejor mtodo de homogenizacin para el tejido.

Homogenizar durante 3 min

Homogenizar en 15 pasos

D1: Los trozos de los tejidos , sedimentos y cualquier otro residuo slido debern depositarse en una bolsa que le proporcionar su asesor la que ser depositada por algn alumno en un bote de basura fuera del laboratorio. R1: Las soluciones resultantes de los homogenados sern vertidos en la tarja.

D1, R1

METODOLOGA EXPERIMENTAL PRCTICA 2: HOMOGENEIZACIN Y CENTRIFUGACIN NOTA: TODO EL MATERIAL Y SOLUCIONES QUE SE UTILIZAN PARA REALIZAR HOMOGENADOS DEBEN ESTAR PREVIAMENTE ENFRIADOS A 4C B) EFECTO DE LA RELACIN VOLUMEN DE SOLUCIN DE HOMOGENIZACIN VOLUMEN DE TEJIDO

Pesar 3 porciones de 1g Cortar en trozos pequeos

Describir de cada homogenizado las diferencias que observa. Colocar en tubos de ensaye previamente enfriados a 4C

D1, R1

1:3

1:5

1:10

3 mL de solucin isotnica de

5 mL de solucin isotnica de

10 mL de solucin isotnica de

1:3 1:3 1:3 1:5 1:10

1:5

1:10

Transferir por separado Homogenizar en 15 pasos

Centrifugar las tres muestras siguiendo las instrucciones del Apartado 5 (seccin A)

D1: Los trozos de los tejidos , sedimentos y cualquier otro residuo slido debern depositarse en una bolsa que le proporcionar su asesor la que ser depositada por algn alumno en un bote de basura fuera del laboratorio. R1: Las soluciones resultantes de los homogenados sern vertidos en la tarja.

METODOLOGA EXPERIMENTAL PRCTICA 2: HOMOGENEIZACIN Y CENTRIFUGACIN NOTA: TODO EL MATERIAL Y SOLUCIONES QUE SE UTILIZAN PARA REALIZAR HOMOGENADOS DEBEN ESTAR PREVIAMENTE ENFRIADOS A 4C C) EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE LA SOLUCIN DE HOMOGENIZACIN EN EL TEJIDO

Pesar 3 porciones de 1g Cortar en trozos pequeos

Describir de cada homogenizado las diferencias que observa. Colocar en tubos de ensaye previamente enfriados a 4C

D1, R1

0.2%

0.9%

1.5%

3 mL de solucin al 0.2%

3 mL de solucin al 0.9%

3 mL de solucin al 1.5%

0.2% 1:3 0.2% 0.9% 1.5%

0.9%

Transferir por 1.5% separado Homogenizar en 15 pasos

Centrifugar las tres muestras siguiendo las instrucciones del Apartado 5 (seccin A)

D1: Los trozos de los tejidos , sedimentos y cualquier otro residuo slido debern depositarse en una bolsa que le proporcionar su asesor la que ser depositada por algn alumno en un bote de basura fuera del laboratorio. R1: Las soluciones resultantes de los homogenados sern vertidos en la tarja.