CULTIVO

DEL
ESPECIMEN
Cultivos primarios

 Medios no selectivos
 Medios selectivos con
antibioticos
Medios no selectivos

 Sabouraud dextrosa
 Sabouraud infusion cerebro-
corazón (BHI)
 Sabouraud infusion cerebro-
corazón con sangre
Medios no selectivos

Sabouraud Dextrosa Agar

- Dextrosa, polipeptona en agar

- Tiene pH de 5.6 y es nutricionalmente pobre
- Medio clásico para el primoaislamiento
- También para mantenimiento de cultivos
- Se incuban a 30° durante un mes antes de descartar
- No es util para H. Capsulatum y N. asteroides
Medios no selectivos

Agar infusion cerebro-corazón

-Es nutricionalmente mas rico que SDA

-Para H. capsulatum y B. Dermatitidis no es muy util
-Para converison de S. schenckii
-Se incuba a 30° durante 1 mes antes de descartar
 Medios no selectivos

Agar infusión cerebro-corazón con sangre

-Tiene mas nutientes que BHI

-Se reserva para especimenes de stios esteriles o actino-
micetos anaerobicos
-Los granos se lavan con agua esteril antes de inocularlos
-Se incuban en camara anaerobica a 37° por 7-10 dias
antes de descartar
 Medios selectivos con
antibioticos
 Mycosel agar
 IMA
 BHIS con Gentamicina y
Cloramfenicol
 BHIS con Gentamicina,
Cloramfencol y Cicloheximida
 DTM
 Medios selectivos

Mycosel agar
- Agar con cicloheximida y cloranfenicol
- Utilizado para aislar patógenos de especimenes clínicos
- Inhibe el crecimiento de oportunistas
- Se incuba a 30° por 6 semanas
Medios selectivos
IMA

- Medio con Gentamicina que inhibe crecimiento de

bacterias, pero permite el crecimiento de levaduras,
hongos oportunistas y patogenos
 Medios selectivos
Infusion cerebro-corazón con sangre,
Gentamicina y Cloramfenicol
- Inhibe crecimiento bacteriano
- Es util para H. Capsulatum y B. Dermatitidis y otros
oportunistas
Medios selectivos
Infusion cerebro-corazon con sangre,
Gentamicina, Cloranfenicol y cicloheximida
- Inhibe crecimiento de bacterias, actinomicetos aerobi-
cos y hongos oportunistas
- Es ideal para H. capsulatum de sitios no esteriles
 Medios selectivos
Medio para dermatofitos (DTM)
- No es 100% especifico, pero es de utilidad en el consul-
torio.
- Tiene como indicador rojo fenol, que en presencia de
dermatofitos cambia de amarillo a rojo
 Otros medios de
cultivos
 Medio de alpistle negro para C.
neoformans
 Biggy agar para primoaislamiento de
levaduras
 Arroz agar para esporulacion de
dermatofitos
 Medios de caseina para hidrolisis por
Actinomicetos
 Medios de xantina, hipoxantina y tirosina
para pruebas fisiologicas de
actinomicetos.
 7H11 para Nocardia
 Consideraciones
especiales
Se prefiere el uso de tubos a las cajas de Petri,
por conservar humedad

Si se sospecha C. immitis nunca usar cajas

Si se sospecha actinomicetos no agregar

antibioticos
 Cultivo de
especimenes
Sangre y Candida sp.
Medula osea Histoplasma capsulatum
(Wright) Cryptoccocus neoformans
Blastomyces dermatitidis

BHI con sangre o medios comerciales de cultivo de

sangre.
 Cultivo de especimenes
Liquido Coccidioides immitis
cefalorraquideo Histoplasma capsulatum
(Wright, T. Actinomyces
china, sol. Nocardia
salina) Candida sp.
Criptoccocus neoformans
Oportunistas (repetidos)

BHI con sangre aerobico y anaerobico

 Cultivo de
especimenes
Pelo Trichophyton
(KOH, Microsporum
Calcofluor)
Piedraia hortai
Trichosporon beigelii

IMA, DTM
Cultivo de especimenes

Raspados Candida sp.

Mucocutaneos Paracoccidioides brasiliensis
(Gram, sol. Rhinosporidium seeberi
salina, LFCB)

SBHI, BHI con sangre, gentamicina y cloram-

fenicol, BHI con sangre, gentamicina, cloramfeni-
col y cicloheximida.
Cultivo de especimenes

Raspados Candida sp.

De uñas Trichophyton
(KOH) Epiderophyton
Aspergillus
Scopulariopsis

IMA, DTM
 Cultivo de
especimenes
Raspados Candida sp.
Cutaneos Trichospoum
(KOH, Microsporum
PMS) Epidermophyton

Crypococcus C. immitis
Malassezia H. capsulatum
E. wernwkii Cromomicosis
B. dermatitidis Micetoma
P. brasiliensis
Cultivo de especimenes

Raspados cutaneos

IMA
DTM
SBHI con aceite de oliva para Malassezia
BHI, con sangre, gentamicina, cloramfe-
nicol y cicloheximida
Cultivo de especimenes
Esputo Candida sp.
Lavado Aspergillus
bronquial Rizophus
(Sol. , Salina Mucor
Gram, LFCB) Penicillium
Geotrichum
Nocardia H. capsulatum
C. neoformans S. schenckii
B. dermatitidis
C. immitis
Cultivo de especimenes
Esputo, lavado bronquial

SBHI
IMA
BHIS con gentamicina, cloranfenicol y
cicloheximida
Agar alpistle
Medio para nocardia
Cultivo de especimenes
Lesiones sub- Candida sp.
cutaneas y ab- Oportunistas
scesos. Cromomicosis
(KOH, Micetoma
LFCB, S. schenckii
Gram) C. immitis
B. dermatitidis
H. capsulatum
Wangiella
Cultivo de especimenes

Lesiones subcutaneas y abscesos

SBHI
IMA
BHIS con gentamicina, cloranfenicol
BHIS con gentamicina, cloranfenicol,
cicloheximida.
Cultivo de especimenes

Faringe Candida sp.

(LFCB,
Gram) Geotrichum candidum
Saccharomyces cereviciae

SBHI
Cultivo de especimenes
Tejido P.brasiliensis
(LFCB, Zygomicosis
Gram, HyE Micetoma
Otras histo- Cromomicosis
logicas)
Rhinosporidium seeberi

SBHI, IMA, BHIS con gentamicina, cloranfenicol,

BHIS, gentamicina, cloranfenicol, cicloheximida;
Medio para nocardia.
Cultivo de especimenes

Orina Candida sp.

(LFCB,
Gram) B. dermatitidis
C. immitis
H. capsulatum
C. neoformans

SBHI, IMA, BHIS con gentamicina, cloranfenicol;

BHIS Gentamicina, cloranfenicol, ciclohximida;
Agar alpistle negro.
Cultivo de especimenes
Vagina, Candida sp.
Utero y Cx T. glabrata
(LFCB,
Gram, PAP) Geotricum candidum

SBHI, IMA.
Cultivo de especimenes
Heridas Candida sp.
(LFCB, Oportunistas
Gram)

SBHI, IMA, BHIS gentamicina, cloramfenicol;

BHIS gentamicina, cloranfenicol, cicloheximida.
 Temperatura de
incubacion

- Por lo general a 30°

- Si se busca la fase levaduriforme de un
hongo dimorfico, primero aislarlo de su fa-
se filamentosa, despues incubar a 37°
 Tiempo de incubacion

Hongos de crecimeinto rapido (<5 dias)

- Hongos oportunistas. Candida, Criptococo, Sporotrix,
Actinomyces, Nocardia, Streptomyces, Actinomadura
 Tiempo de
incubacion
Hongos de crecimiento intermedio (6-10 dias)
Algunos dermatofitos, fase micelial de C. immitis
fase levaduriforme de H. capsulatum
 Tiempo de
incubacion
Hongos de crecimiento lento (11-21 dias)
Algunos dermatofitos, agentes de cromomicosis, fase
micelial de B. dermatitidis, H. capsulatum, P. brasi-
liensis. Fase levaduriforme de P. brasiliensis.
 Crecimiento en los
cultivos
Crecimiento Hongo Micosis
Rapido Filamentoso Oportunistas
Intermedio- Filamentoso Dermatofitos
lento Superficiales
Rapido Levaduras
Intermedio- Filamentoso
lento dimorfico Subcutaneas
Actinomicetos
Intermedio- Dimorfico Profundas
lento
EXAMINAND
O LOS
CULTIVOS
 Metodos de
observacion
 Metodo de montaje directo
 Metodo de la cinta adhesiva de
celofan
 Metodo de cultivo en laminilla
 Metodo modificado de cultivo en
laminilla
 Tecnica de sandwich con
cubreobjetos
 Metodo de montaje
directo

Con aguja de inoculacion tomar una porcion

del agar que inclya micelio aereo y vegetativo,
de la porcion intermedia de la colonia
 Metodo de montaje
directo
Colocar en un portaobjetos y agregar Lactofenol
Azul-algodon, presionar con cubreobjetos, pue-
de dejarse como preparacion permanente.
 Metodo con cinta de
celofan

•Con la cinta se recoje de la superficie de una

•colonia, las estructras de esporulacion
•Se colocan sobre un portaobjeto con una gota
•de LFAA
•No sirve como preparacion permanente
Metodo de cultivo en
laminilla

Metodo que permite observar mejor la morfo-

logia de los hongos, ya que se pretende repro-
ducir una colonia con su arquitectura respetada
Tiene desventaja de ser lento y requiere expe-
riencia para su preparacion
Metodo de cultivo en
laminilla
Montaje de un trozo de agar PDA, en un
portaobjetos, el cual sera inoculado por
sus lados con una colonia de primoais-
lamiento.
 Cultivo en laminilla

La laminilla se coloca con tecnica esteril

en caja de Petri sobre una base, para en su
interior agregar agua esteril.
 Cultivo en laminilla

Papa Dextrosa Agar es el mejor medio para

esporulacion
 Cultivo en
laminilla

De manera individual se inocula muestra

en cada lado
 Cultivo en laminilla

Se coloca un cubreojeto y se cierra la caja

Cultivo en laminilla

Cuando esta listo se desecha el agar

antes desinfectandolo
Cultivo en laminilla

La laminilla desprendida se coloca en

portaobjetos con LFCB
 Cultivo en laminilla

Al portaobjetos utilizado tambien se le

aplica LFCB y se cubre.
 Sandwich de
cubreobjetos
Con este metodo se pueden incubar mas de una
preparacion al mismo tiempo
Tambien conservan bien la arquitectura de la
colonia
Tambien requiere un primoaislamiento previo
y practica para realizarlo
 Sandwich de
cubreobjetos

Despues de haber colocado el inoculo

se incrustan los cubreojetos en angulo
de 45°
 Sandwich de
cubreobjetos

Cuando la colonia esta madura se remueven

 Sandwich de
cubreobjetos

Sobre un portaobjetos con LFCB se monta el

cubreobjerto
 Sandwich de
cubreobjetos

Se vuelve a colocar LFCB sobre el cubreobeto

y se cubre con un cubreobjeto mas grande
Preservacion de cultivos

Para manterer el cepario se llevan a cabo algu-

nas tecnicas como congelacion y liofilizacion.
La mas sencilla es, despreder las estructuras de
esporulacion con agua esteril, la cual se conser-
va en un tubo con tapa de rosca, a temperatura
ambiente o en refirgeracion (97% a 5 años)
 ESTUDIOS
COMPLEMENTARIOS
 Estudios
complementarios
 Pruebas cutaneas
 Seromicología
 Pruebas de DNA
 Pruebas cutaneas

Mide la respuesta tisular de tipo Hipersen-

sibilidad tardia.
Se usa extracto de antigenos, aplicacion
subcutanea; lectura 24-48 hrs despues.
Se lee midiendo el tamaño de eritema e in-
duracion.
Interfiere con los estudios serologicos
Pruebas cutaneas

Coccidioidina
Histoplasmina
Candidina
Aspergilina
Seromicologia

El objetivo es detectar la presencia de anti-

cuerpos, en el suero del paciente; o antige-
nos en especimenes clinicos o cultivos
Seromicologia
Para detectar anticuerpos

Inmunodifusion
Aglutinacion de latex
Fijacion de complemento
IF indirecta
CIEF
ELISA
Seromicologia
Para detectar anticuerpos

Zygomicosis
Histoplasmosis
Paracoccidioidomicosis
Coccidioidomicosis
Candidiasis diseminada
Seromicologia

Inmunodifusion
Seromicologia

Inmunodifusion
Seromicologia

Fijacion de
complemento
Seromicologia

IF indirecta
 Seromicologia

CIEF

Esta prueba, al igual que la inmuno-

difusion se relaiza sobre agar, pero se ayuda
de corriente electrica que acelera el proceso.
Seromicologia

ELISA o EIA

Deteccion de
antigeno
Seromicologia

ELISA o EIA

Deteccion de
anticuerpo, no
competitiva
Seromicologia

ELISA o EIA

Deteccion de
anticuerpo,
competitiva
Seromicologia

ELISA o EIA

Deteccion de
anticuerpo,
de captura
Seromicologia
Para detectar antigenos

Inmunodifusion con exoantigens

Aglutinacion de latex indirecta
Fluorescencia directa
Inmunoensayo enzimatico
ELISA
Seromicologia
Para detectar antigenos

Blastomicosis
Coccidioidomcosis
Paracoccidioidomicosis
Candidiasis
Criptococosis
Pruebas de DNA
Con un fragmento de DNA, el cual esta u-
nido a una molecula luminiscente, es po-
sible detectar la presencia de RNA de un
hongo.

H. Capsulatum, B. Dermatitidis
C. Immitis, C. Neoformans
New perspectives in the diagnosis
of systemic fungal infections

Richardson MD, Kokki MH.

Ann Med 1999, vol 31, 327-35
Clinical utility of in vitro
antifungal suceptibility testing

A. Espinel-Ingroff
Division of Infectious Diseases
Medical College of Virginia
Revista Española de
Quimioterapia
D- arabinitol: a marker for
invasive candidiasis

B. Christensson, et al.
Medical Mycology, vol 37,
number 6
Fecal fungal flora in healthy
volunteers and inpatients

R. Khatib, et al.
Mycoses, vol 44, number 5