TRANSLAIA INFORMAIEI GENETICE

Proteinele sunt macromolecule liniare, alctuite din aminoacizi. Secvena aminoacizilor din protein numit structur primar este determinat de structura unei gene specifice. Proteinele cu structur primar se mai numesc i polipeptide, deoarece ntre aminoacizi se realizeaz legturi peptidice. n compoziia proteinelor se gsesc 20 de tipuri de aminoacizi diferii. Ordinea acestora n structura primar determin configuraia tridimensional i n final, funcia specific a proteinei. Deoarece exist 20 de tipuri de aminoacizi, exist 20 x 20 400 tipuri de dipeptide diferite i nu mai puin de 20 x 20 x 20 8.000 tipuri de tripeptide diferite. O protein de mrime medie este alctuit ns, din 300 400 de aminoacizi. Proteinele ndeplinesc numeroase funcii n celule. O bun parte dintre ele ndeplinesc funcia de catalizatori (enzime), care controleaz viteza i sensul tuturor reaciilor dintr-un organism. Structura proteinelor este programat genetic i se conserv din generaie n generaie, moleculele proteice sintetizndu-se de mai multe ori n acelai organism, fr abateri eseniale de la succesiunea dat a aminoacizilor. Aceast exactitate deosebit este asigurat de ctre mecanismele moleculare ce stau la baza cilor de biosintez proteic. Biosinteza proteinelor este unul dintre cele mai complexe procese i necesit: un model, furnizor de informaie, care este ARNm; un sistem de lectur, reprezentat de ribosomi; adaptori, adic molecule de ARNt, ce asigur corespondena dintre aminoacizi i codonii din ARNm; un stoc celular de aminoacizi; un furnizor de energie, sisteme enzimatice, proteine care condiioneaz funcionarea ribozomilor. La baza procesului complex de biosintez a proteinelor st aa-numitul principiu al sintezei complementare pe (template) matri, principiu ce se mai ntlnete att la replicarea ADN ct i la biosinteza ARN. n procesul de biosintez a proteinelor se folosete drept matri ARNm, acesta fiind purttorul informaiei genetice de la ADN la ribosomi, organite subcelulare ce reprezint sediul sintezei proteice. Determinarea genetic a procesului biosintetic vizeaz structura primar a proteinelor nou sintetizate, adic succesiunea aminoacizilor din catenele polipeptidice. Aceast succesiune este n concordan cu secvena dezoxiribonucleotidelor din segmentul de ADN ce codific informaia necesar biosintezei unei anumite proteine. Relaia dintre acizii nucleici i proteine este mediat de aa-numitul sistem biochimic de codificare-decodificare. n sens strict, prin translaia informaiei genetice se nelege traducerea secvenei de nucleotide din ARNm, ntr-o secven de aminoacizi, acesta din urm constituind structura primar a unei anumite proteine. Procesul propriu-zis de biosintez a proteinelor se realizeaz la nivelul ribosomilor n mai multe etape: activarea aminoacizilor, iniierea translaiei, elongarea, terminarea translaiei i modificarea post-translaional a proteinelor.

1. Activarea aminoacizilor Aceast etap const n faptul c, fiecare tip de aminoacid din citoplasm recunoate prin intermediul unei enzime specifice, un ARNt specific, alturi de care formeaz un complex activ de tipul aminoacil-ARNt. Aceast recunoatere este nalt specific n sensul c fiecrui aminoacid proteinogen i corespunde un anumit ARNt i se realizeaz datorit naltei
1

specificiti de substrat a enzimei ce catalizeaz aceast reacie, enzim care se numete aminoacil-ARNt-sintetaz. Respeciva enzim conine trei situsuri de legare, din care dou sunt nalt specifice: un situs de legare al aminoacidului, unul pentru ARNt i al treilea situs (cu o specificitate mai larg) pentru legarea ATP-ului. Formarea complexului aminoacil-ARNt debuteaz prin activarea aminoacidului cu ajutorul energiei din ATP, procesul avnd loc sub aciunea acelorai aminoacil-ARNt-sintetaze. Se formeaz deci complexul hiperreactiv dintre enzim i dou din cele trei substrate, adic aminoacidul i molecula de ATP. Acest complex interacioneaz apoi cu cel de-al treilea substrat care este ARNt specific al aminoacidului activat. Sub aceast form, aminoacizii sunt api de a intra n procesul propriu-zis de biosintez al proteinelor (Figura 1).

Figura 1 Activarea aminoacidului (triptofan)

n concluzie, legarea aminoacidului de ARNt prin intermediul enzimei aminoacil-ARNtsintetaza, se realizeaz n dou etape, care implic existena ATP:
1. Enzim aminoacid ATP Enzim-(aminoacil-AMP) Pirofosfat 2. ARNt Enzim-(aminoacil-AMP) aminoacil-ARNt AMP Enzim

Exist 20 tipuri de sintetaze, cte una pentru fiecare tip de aminoacid proteinogen. Recunoaterea de ctre sintetaz a ARNt adecvat se datoreaz att nucleotidelor din braul de ataare al aminoacizilor, ct i nucleotidelor din bucla anticodon. Dei moleculele de ARNt servesc ca adaptori finali pentru conversia secvenelor de nucleotide ntr-o secven de aminoacizi, sintetazele au o importan egal cu ARNt n procesul de decodificare, ntruct asocierea fiecrui codon din ARNm cu aminoacidul potrivit se face prin activarea combinat a ARNt i a sintetazelor. Reacia catalizat de sintetazele care ataeaz aminoacizii la captul 3 al ARNt este, aa cum am mai precizat, o reacie cuplat cu hidroliza ATP, care elibereaz energie i determin generarea unei legturi macroergice ntre ARNt i aminoacizi. Energia acestei legturi este folosit ntr-o etap ulterioar a sintezei proteice pentru a lega aminoacidul de lanul polipeptidic n cretere. Deci, codul genetic este translatat de dou seturi de adaptori, care acioneaz secvenial i cu mare specificitate: aminoacil-ARNt-sintetaza care leag un anumit aminoacid la ARNt corespunztor i molecula de ARNt care se ataeaz prin anticodon, la codonul corespunztor din secvena ARNm.

2. Iniierea translaiei n etapa de iniiere a translaiei au loc: recunoaterea semnalului de start din catena polinucleotidic a ARNm, asocierea subunitilor ribosomale, legarea complexului aminoacil - ARNt corespunztor la aceste subuniti formarea complexului ribosomal activ. Complexele aminoacil-ARNt sintetizai n citoplasm, sunt transportai spre ribosomi unde are loc procesul propriu-zis de biosintez al lanurilor polipeptidice ce vor alctui viitoarele molecule proteice. n acest caz, ribosomii au rol de suport-catalizator al biosintezei proteice. Ribosomii pot fi ataai membranei reticulului endoplasmatic, sau pot fi neataai (ribosomi liberi). Un ribosom conine patru situsuri de legare pentru macromoleculele de ARN: unul pentru macromolecula de ARNm i trei numite A, P i E pentru ARNt (A, de la aminoacil- ARNt; P, de la peptidil-ARNt i E, de la exit ieire) (Figura 2). ARNm se leag de subunitatea mic (de 30 S la procariote, respectiv de 40 S la eucariote) printr-o secven pe care o conine, secven ce precede regiunea ce codific proteina propriu-zis, numit i situs de legare la ribosom (RBS Ribosome Binding Sequence). La acest situs se formeaz un complex de iniiere la care se ataeaz subunitatea mare.

Figura 2 Situsurile unui ribosom

Subunitatea mare catalizeaz formarea legturii peptidice ntre aminoacizi. Ea conine trei situsuri: A, P, E. Situsul A, numit i situs acceptor, sau aminoacilic, sau situs de intrare, ine legat o macromolecul de ARNt care corespunde codonului ARNm ataat de ribosom. nainte ca aminoacil-ARNt s intre, acest situs expune codonul care reprezint urmtorul aminoacid ce trebuie s fie adugat la lanul polipeptidic. Situsul P, numit i situs donor, sau situs peptidilic, leag primul aminoacil-ARNt n momentul iniierii sintezei proteinei, apoi va conine lanul polipeptidic n cretere. Situsul E marcheaz locul de eliberare al ARNt din ribosom. Situsul de legare al ARNm, situat pe subunitatea mic, asigur asocierea ARNm cu ribosomul n aa fel nct, doi codoni succesivi din ARNm s fie dispui exact n dreptul situsurilor A i P. Situsurile A i P sunt suficient de apropiate, nct cele dou molecule de ARNt legate la ele s fie forate s formeze perechi de baze azotate cu codoni adiaceni de pe molecula de ARNm. Iniierea biosintezei proteice debuteaz prin asocierea moleculei de ARNm la suprafaa subunitii mici a ribosomului, ntr-un punct situat la aproximativ 10 nucleotide de captul 5 al catenei, deoarece citirea programului genetic stocat n ARNm se face n sensul 53. Locul unde ncepe sinteza proteic este esenial deoarece stabilete cadrul de citire pentru ntregul
3

mesaj. O eroare de un nucleotid n orice sens n acest stadiu va provoca citirea greit a codonului urmtor, rezultnd o protein nefuncional cu o secven de aminoacizi denaturat. Etapa de iniiere a biosintezei proteice este extrem de important ntruct este ultimul punct n care celula poate decide dac ARNm va fi tradus i dac proteina va fi sintetizat. Translaia unui ARNm ncepe cu codonul AUG, iar pentru iniierea translaiei este necesar un ARNt special, numit ARNt iniiator. n cazul eucariotelor, ARNt iniiator poart ntotdeauna o metionin, iar la bacterii, ARNt iniiator poart formil-metionina. De aceea, lanurile polipeptidice au ntotdeauna metionina, respectiv formil-metionina ca prim aminoacid al captului aminoterminal. Se admite c ARNt iniiator este diferit de ARNt normal care poart metionina. La eucariote, ARNt iniiator este ncrcat mai nti n subunitatea ribosomal mic liber nc n citoplasm, mpreun cu alte proteine numite factori de iniiere (IF) cu rol de catalizatori (Figura 3). Pn n prezent, s-au descoperit ase asemenea factori i au fost notai cu IF1, IF2...IF6. Numai un ARNt ncrcat se poate lega strns de subunitatea mic. Apoi, subunitatea ribosomal ncrcat se leag la captul 5 al unui ARNm care este recunoscut n parte datorit acoperirii sale de ctre 7 metil-guanozin trifosfat. Subunitatea mic se mic n direcia 53 de-a lungul ARNm cutnd prima secven AUG (secvena START). Cnd a ntlnit AUG, factorii de iniiere se disociaz de subunitatea ribosomal mic fcnd loc subunitii ribosomale mari, care se asambleaz cu cea mic formnd ribosomul funcional. Pentru c ARNt iniiator este legat de situsul P, sinteza proteinei este gata s nceap odat cu legarea urmtorului ARNt cuplat cu aminoacidul su. La bacterii, mecanismul pentru selectarea unui codon start este diferit. ARNm bacterian nu are un capt 5 acoperit care s semnaleze ribosomului de unde s nceap translaia. El are ns secvene specifice pentru legarea ribosomilor, secvene cu o lungime de ase nucleotide care sunt localizate cu cteva nucleotide naintea codonului AUG de la care ncepe translaia. Spre deosebire de ribosomul eucariot, ribosomul procariot se poate lega direct de un codon start din interiorul ARNm, dac acesta este precedat de cteva nucleotide fa de situsul de legare al ribosomilor. ARNm procariot este policistronic, adic deine informaia necesar pentru sinteza mai multor proteine diferite care pot rezulta din aceeai macromolecul de ARNm. Spre deosebire de procariote, ARNm de la eucariote poart informaia pentru sinteza unei singure proteine, deci este monocistronic.

Figura 3 Iniierea biosintezei proteinelor la eucariote

3. Elongarea lanului polipeptidic Procesul elongrii lanului polipeptidic pe ribosom, poate fi considerat ca un ciclu n care se succed trei etape (Figura 4): 1. n prima etap, o molecul de aminoacil-ARNt se leag la situsul A vacant de pe ribosom (adiacent situsului P ocupat), prin formarea bazelor perechi dintre ARNt (anticodonul) i cele din codonul de pe ARNm expus n acest situs. 2. n etapa a doua, captul carboxil (-COOH) al lanului polipeptidic este decuplat de pe ARNt din situsul P (prin ruperea legturii macroergice dintre ARNt i aminoacid) i legat printr-o
5

legtur peptidic la gruparea amino liber a aminoacidului legat la ARNt din situsul A. Respectiva reacie este catalizat de enzima peptidil-transferaz, care aparine ARN din subunitatea mare a ribosomului. Reacia catalizat de peptidil-transferaz este nsoit de alunecarea subunitii mari, fa de subunitatea mic. Prin aceast alunecare cei doi ARNt se deplaseaz n situsurile E i P ale subunitii mari. 3. n etapa a treia, subunitatea mic se deplaseaz exact cu trei nucleotide n lungul lanului ARNm spre captul 3 i se altur la subunitatea mare, iar ARNt prsete situsul E. Aceast etap necesit energie i are loc datorit unor schimbri conformaionale ale componentelor ribosomale induse de hidroliza unei molecule de GTP. Deci, situsul A rmne liber, legnd un nou aminoacil-ARNt corespunztor codonului ARNm expus n acest situs. Acest ciclu n trei etape se repet de fiecare dat cnd un aminoacid este adugat n lanul polipeptidic care crete de la captul amino la captul carboxil, pn cnd ntlnete un nou codon.

Figura 4 Elongaia unui lan polipeptidic 6

4. Terminarea sintezei lanului polipeptidic Sinteza unui lan polipeptidic este oprit printr-un semnal determinat de prezena codonilor STOP: UAA, UAG, AGA (Figura 5). Acetia nu pot fi recunoscui de nici un ARNt i nu specific un aminoacid. Rolul codonilor stop este de a semnaliza ribosomului s opreasc translaia. Proteinele numite factori de eliberare se leag de codonul stop care ajunge n situsul A al ribosomului. La procariote sunt doi factori de eliberare, notai: EF1 i EF2. Factorul EF1 recunoate codonii UAA i UAG, iar factorul EF2 recunoate codonii UAA i UGA. Celulele eucariote conin doar un singur factor de terminare notat CRF care recunoate toi cei trei codoni stop. Deseori se ntlnete situaia cnd doi codoni stop sunt localizai succesiv pentru o mai bun garanie a terminrii translaiei. Interaciunea factorilor de eliberare cu codonul stop afecteaz activitatea peptidiltransferazei i o determin s adiioneze o molecul de ap la peptidil-ARNt n locul unui aminoacid. Aceast reacie desprinde captul carboxil al lanului polipeptidic n cretere de pe ARNt i ca urmare lanul polipeptidic este eliberat n citoplasm. Ribosomul elibereaz ARNm i se disociaz n cele dou subuniti, care se pot asambla pe o alt molecul de ARNm pentru a ncepe un nou ciclu de sintez proteic. ARNm poate fi tradus simultan de mai muli ribosomi, att la celulele eucariote, ct i la cele procariote. Odat ce un ribosom s-a deplasat de pe situsul de iniiere, un alt ribosom se poate lega de ARNm i poate ncepe sinteza unui nou lan polipeptidic. n aceast manier, un ARNm este tradus de o serie de ribosomi aezai la intervale de 100-200 de nucleotide (Figura 6). Grupul de ribosomi ataai la o macromolecul de ARNm este numit poliribosom sau polisom. Fiecare ribosom din grup funcioneaz independent pentru a sintetiza un lan polipeptidic separat.

Figura 5 Terminarea biosintezei unui lan polipeptidic

Figura 6 Poliribosom

Acest mecanism de biosintez a catenelor polipeptidice demonstreaz faptul c doar structura primar a proteinelor este codificat genetic. Nivelele superioare de organizare structural ale proteinelor, fiind condiionate n mod direct de structura lor primar, se desvresc post-translaional datorit interaciunilor specifice dintre aminoacizii ce intr n alctuirea catenelor polipeptidice respective.

5. Particulariti ale biosintezei lanurilor polipeptidice

Ribosomii lucreaz cu o eficien remarcabil, n sensul c viteza de biosintez proteic este foarte mare. Sinteza complet a unei proteine de mrime medie dureaz 20-60 de secunde. Ribosomii bacterieni ncateneaz ntre 20 i 40 de aminoacizi pe secund, iar cei de tip eucariot, unul sau doi aminoacizi pe secund. Dei biosinteza proteinelor are loc cu o vitez mare, aminoacizii sunt condensai n lanurile polipeptidice n succesiunea strict indicat de structura primar din ARNm prin mperecherea codonilor acestuia cu anticodonii din ARNt. Uneori pot avea loc inserri greite ale aminoacizilor. Acest fapt poate fi explicat prin aceea c orice codon din ARNm se cupleaz antiparalel cu anticodonul din ARNt. Primele dou nucleotide din codon, ncepnd cu captul 5 sunt constante, iar ultimul nucleotid, cel de la captul 3 poate fi diferit. Acest grad de libertate explic parial degenerarea codului genetic. De pild, cei patru codoni care codific treonina au ntotdeauna secvena AC la captul 5, dar se deosebesc prin nucleotidul din poziia 3 care poate fi U, C, A sau G. Acest aspect al degenerrii codului genetic este cunoscut sub numele de ipoteza concordanei neechivalente. Anticodonii unor ARNt conin deseori nucleotide modificate la captul 5 cum ar fi acidul inozinic (IMP). Acestea corespund poziiei neechivalente n codon. Prin urmare, o anumit molecul de ARNt poate recunoate unul, doi sau chiar trei codoni diferii n care primele dou nucleotide sunt identice.

6. Modificri posttranslaionale ale proteinelor

Lanurile polipeptidice eliberate de pe ribosom sufer procese de maturare, numite modificri posttranslaionale. La procariote este ndeprtat gruparea formil de la aminoacidul formil-metionin cu care ncepe procesul biosintetic. Att la procariote ct i la eucariote se realizeaz frecvent hidroliza specific a metioninei (primul aminoacid al polipeptidului), chiar i n timpul elongrii, sub aciunea unei aminopeptidaze specifice. Dup ncheierea translaiei pot avea loc i alte modificri n structura catenelor polipeptidice cum ar fi: formarea punilor disulfidice, hidroxilarea prolinei i lizinei n cazul colagenului i altor proteine, ataarea resturilor glucidice la asparagin n cazul glicoproteinelor, fosforilarea grupelor OH ale resturilor de serin sau treonin, legarea gruprilor prostetice de apoproteine etc. Fiecare modificare are loc n compartimente celulare specifice, n care proteinele sunt transportate. n urma acestor modificri se contureaz structura spaial final a proteinelor, de aceasta depinznd modul n care ele i vor exercita funciile biologice specifice.

10