UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELAFACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIASDEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA VETERINARIACATEDRA DE MICROBIOLOGÍA E INMUNOLOGÍAASIGNATURA
:
MICROBIOLOGÍA
COPROCULTIVO: DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DEINFECCIONES ENTÉRICAS DE ORIGEN BACTERIANO
I.- OBJETIVO GENERAL:
Al finalizar la práctica, el estudiante estará en la capacidad de interpretar el resultado deun coprocultivo.
II.- OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
1.- Enumerar de acuerdo al orden de frecuencia, y las especies animales involucradas,los agentes productores de infecciones entéricas en las principales especies deanimales domésticos.2.- Evaluar la importancia epidemiológica, clínica y sanitaria que tiene la familia
Enterobacteriaceae.
3.- Explicar esquemáticamente los pasos a seguir en el procesamiento de una muestrapara lograr un coprocultivo exitoso.4.- Seleccionar el tipo de muestra a tomar en un paciente con infección entérica ydescribir el procedimiento (discriminando las principales especies de animalesdomésticos) para la correcta toma de una muestra de heces para realizar uncoprocultivo.5.- Identificar en los medios de asilamiento selectivos las colonias presuntivas de
E. coli
,
Salmonella
y otras bacterias productoras de infecciones entéricas, noenterobacterias.6.- Mencionar las pruebas a realizar en la identificación microbiológica (diagnósticopresuntivo y definitivo) de las bacterias productoras de infecciones entéricas7.- Interpretar el resultado de la investigación de leucocitos fecales.8.- Explicar la importancia del coprocultivo en el diagnóstico de toda infección entérica.
III.- CONTENIDOS:DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE INFECCIONES ENTÉRICAS DE ORIGENBACTERIANO
1.- Agentes etiológicos de las infecciones entéricas: Virus, bacterias y hongos.2.- Bacterias más frecuentes productoras de diarreas:
E. coli, Salmonella,Campylobacter, Yersinia, Vibrios
, otros.3.- Diagnóstico Microbiológicoa.- Investigación de leucocitos fecalesProcedimiento
Interpretaciónb.- CoprocultivoToma de muestra, transporte, siembra en medios selectivos y deenriquecimientoAislamiento e identificación bioquímica de los principales agentesbacterianos productores de diarreasc.- Identificación serológica de Salmonella y Shigella
IV.- ACTIVIDADES DEL DOCENTE:
Exposición demostrativa de aproximadamente 30-40 minutos que incluye:1.- Procedimiento a seguir para realizar un coprocultivo: Toma de muestra, siembra enmedios selectivos y de enriquecimiento.2.- Observar y describir los diferentes tipos de colonias presentes en los mediosselectivos: Agar SS, Agar MacConkey, Agar EMB de Levine y Agar XLD3.- Efectuar la siembra de una colonia previamente seleccionada de los mediosselectivos en un medio diferencial de Kliger4.- Realizar la lectura de las reacciones bioquímicas observadas en un medio de Kliger,caldo urea, lisina descarboxilasa, fenilalanina desaminasa, rojo metilo, vogesproskauer, indol y citrato.5.- Describir la importancia de la identificación serológica a partir de una coloniaidentificada presuntivamente como:
Shigella
o
Salmonella
aislados de un coprocultivo
V.- ACTIVIDADES DEL ALUMNO:
1.- Responder las preguntas formuladas en la hoja del ejercicio práctico al final de estaguía.2.- Esquematizar el procedimiento para la identificación del germen aislado a partir deuna muestra de heces3.- Inspeccionar un tubo con caldo tetrationato inoculado con una muestra decoprocultivo.4.- Sembrar en Agar MacConkey, Agar SS, Agar EMB de Levine y Agar XLD a partir deun cultivo de enriquecimiento (Caldo tetrationato) inoculado con una muestra decoprocultivo.5.- Incubar las placas con los medios selectivos sembrados en un ambiente demicroaerofília a 37ºC por 24 horas.6.- Inspeccionar, observar y describir las colonias de
Salmonella
,
Proteus, Klebsiella
y
E. coli
desarrolladas en los medios selectivos sembrados el día anterior.7.- Observar, a partir de una placa de aislamiento, el repique de una colonia al mediodiferencial de Kliger y la siembra de las diferentes pruebas bioquímicas diferenciales:caldo urea, lisina descarboxilasa, fenilalanina desaminasa, rojo metilo, vogesproskauer, indol y citrato
8.- Interpretar los resultados de las diversas pruebas bioquímicas sembradas (Kliger,caldo urea, lisina descarboxilasa, fenilalanina desaminasa, rojo metilo, vogesproskauer, indol y citrato)9.- Preparación de un extendido coloreado con Gram a partir de un cultivo de 24 horassospechoso de Salmonella en medio BHI.10.- Realizar la prueba de catalasa y oxidasa a una colonia aislada a partir de uno delos medios selectivos o a partir del cultivo puro
Salmonella
en caldo BHI.
VI.- EVALUACION:
1.- Discusión grupal en una sesión práctica
VII.- CONSIDERACIONES TEÓRICAS1.- INTRODUCCIÓN
La porción inferior del intestino delgado tiene una flora bacteriana normalexcesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios(bacteroides, bacilos gran positivos y estreptocos, microorganismos entéricos Gram negativosy
Streptococcus faecalis
. Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implicala separación de las especies patógenas, usualmente a través del uso de medios selectivos,diferenciales y de cultivos de pre-enriquecimiento.El diagnóstico bacteriológico de las infecciones entéricas se realiza de acuerdo a supatogenia. En las infecciones diarreicas se utiliza el coprocultivo, pero una vez que lasbacterias invaden el torrente sanguíneo, el diagnóstico debe hacerse además, por elhemocultivo y el estudio serológico (serodiangóstico de Widal)Las enfermedades diarreicas constituyen un problema de salud animal y salud pública.Sin embargo, muchas de estas enfermedades no son notificadas, ya sea porque en sumayoría son autolimitadas y no ameritan la consulta al veterinario, o porque no son reportadasoportunamente por el personal de salud (subregistro). Su etiología infecciosa es diversa,pudiendo ser producida por bacterias, virus, parásitos y hongos.
2.- AGENTES ETIOLÓGICOS
Las principales causas de los trastornos gastrointestinales agudos incluyen: Virus, lastoxinas de diferentes agentes bacterianos gram positivos, bacilos gram negativos invasores,fermentadores lentos de la lactosa y espirales. En las diferentes especies de animalesdomésticos se han encontrado en muestras procedentes del tracto gastrointestinal, lossiguientes patógenos (ver Tablas 1, 2 y 3):
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