Lecciones de Biología Celular y MolecularHugo GonzálesFigueroa
METODOS DE ESTUDIO DE LA BIOLOGIA CELULAR y MOLECULARTamaño y biologíaTamaños de células, virus, y otras cosas pequeñas
La biología es un área muy rica visualmente. Sin embargo muchas de las estructuras yeventos biológicos más interesantes son más pequeños de lo que el ojo humano puedever sin ayuda. En realidad el ojo humano tiene una resolución de cerca de 100 µm. En elcuadro de abajo note que de todas las estructuras listadas, solamente la célula vegetalestá escasamente dentro de nuestra resoluciónDesde hace unos 25 años el perfeccionamiento de varios métodos ha facilitado unconocimiento mejor de la estructura y función de los componentes del sistema celular.
Métodos de preparación de células y tejidos para observar estructura, actividadfisiológica, comportamiento y ultraestructura.
Estos métodos requieren de aparatos que prolonguen el poder de resolución del ojohumano a magnitudes muy pequeñas.El poder de resolución de todo aparato óptico es la capacidad de resolver dos puntossituados uno cerca de otro. Todo aparato óptico tiene una distancia mínima de resolución,que se denomina
límite de resolución.
Dimensiones que pueden ser discriminadas por:
•
ojo humano: de 100 metros a 0,1 milímetro
•
microscopio óptico: de 0,1 mm a 0,25
µ
m (micras)
•
microscopio electrónico: de10
µ
m a 0,1 nm (manómetro)
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La microscopía óptica utiliza como fuente de poder la luz visible (natural o artificial).El microscopio ópticotiene un limiteresolución de cerca de200 nm (0.2 µm ).Este limite se debe ala longitud de onda dela luz (0.4-0.7 µm ).Las célulasobservadas bajo elmicroscopio ópticopueden estar vivas ofijadas y teñidas. Imagen cortesía de WebPath(wwwmedlib.med.utah.edu/WebPath/webpath.html)La microscopía electrónica utiliza como fuente de poder el flujo de electrones en vacío.
El Microscopio Electrónico de Transmisión(MET)
El microscopio electrónico detransmisión (MET) tiene unlímite de resolución de cercade 2 nm. Esto es debido alimitaciones del lente usadopara enfocar electrones haciala muestra. Un MET mira areplicas de células muertas ,después de haber sidofijadas y teñidas con ionesde metales pesados. Loselectrones son dispersadoscuando pasan a trabes deuna fina sección delespécimen, y luegodetectados y proyectadoshacia una imagen sobre unapantalla fluorescente.Imagen cortesía de WebPath(www-med.utah.edu/WebPath/webpath.html)
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El Microscopio Electrónico de Barrido (MEB)
El microscopio electrónicode barrido (MEB) tambiéntiene un límite de 2nm. Aligual que el MET, el MEBpermite mirar a célulasmuertas, después de haber sido fijadas y teñidas coniones de metales pesados.Con esta técnica loselectrones son reflectadossobre la superficie delespécimen. Imagen cortesía de WebPath(wwwmedlib.med.utah.edu/WebPath/webpath.html)Para ambos microscopios son indispensables:I.Un sistema de condensación para iluminar el objeto.II.Lentes del objetivo que proyectan la imagen agrandada del objeto sobre el planode la primera imagen (en el microscopio electrónico se emplean lentesmagnéticas).III.Lentes de proyección que proyectan el plano de la imagen sobre el plano de lasegunda imagen.En el microscopio óptico las lentes de proyección pueden ser la combinación de un ocular y el ojo humano o la lente de una cámara, en cambio en el microscopio electrónico laslentes de proyección sólo pueden combinarse con una cámara. La observación directa dela muestra se hace a través de una pantalla fluorescente.En la práctica los microscopios ópticos tienen lentes que permiten obtener una granapertura, alta resolución y disminución de las aberraciones cromáticas.El poder de resolución en los microscopios compuestos resulta de las amplificacionesobtenidas con las lentes del objetivo y las lentes de proyección. Las amplificaciones deutilidad máxima de ambos microscopios están limitadas por la difracción y alcanzanvalores de 200 000X para el electrónico y 2000X para el óptico.En la microscopía óptica la luz es desviada por medio de materiales de diferentes índicesde refracción, y es posible enfocar cambiando la distancia entre el objetivo y el objeto.La microscopía confocal examina un punto de difracción limitada de luz, casi siempregenerada por un rayo láser, a través de la muestra. La luz emitida, reflejada o trasmitidade la muestra pasa por un objetivo de apertura muy fina. Por esta apertura pasa sólo laluz del plano focal de la muestra. Debido a que el plano focal es muy estrecho, elmicroscopio genera secciones ópticas de la muestra, casi siempre se forman muchas
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