UNIVERSIDAD AUTONOMA DE TAMAULIPAS

UNIDAD ACADEMICA MULTIDISCIPLINARIA MANTECENTRO

GRA. LAZARO CARDENAS DEL RIO FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGIA

Practica #1

MEDICIN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I. VALIDACIN DEL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO POR EL MTODO DE PESO SECO CELULAR PARA LA MEDICIN DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

Integrantes De la Cruz Martnez Juan Jos Doria Zuiga Araceli de Jess Ferretiz Torres Marissa Garca Escobar Oscar Jaramillo Perales Jess Martnez Ramos Luis Alberto

[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGA] Practica 1 MEDICIN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I. VALIDACIN DEL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO POR EL MTODO DE PESO SECO CELULAR PARA LA MEDICIN DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

OBJETIVO:
Determinar la cantidad de biomasa de levaduras de panificacin mediante el mtodo de peso seco, encontrar un factor de conversin y los mtodos de peso seco.

INTRODUCCION:
Medida del crecimiento Microbiano Existen varios mtodos para determinar el crecimiento microbiano. Los ms usados son: Determinacin de peso seco celular: el mtodo ms frecuentemente empleado para la medida del crecimiento microbiano es secar el volumen conocido de cultivo celular, lentamente hasta peso constante. En el caso de las levaduras se trata de separar los microorganismos del medio por medio de sedimentacin. El procedimiento consiste en centrifugar (4-6 x 103rpm) un volumen conocido de medio de cultivo en un tubo de centrifuga pre-pesado. El precipitado se separa del sobrenadante y se disuelve con suero salino isotnico (9g ClNa/L). Se vuelve a centrifugar y el precipitado una vez separado del sobrenadante se deja en un horno a 105C durante aproximadamente 10horas. En el caso de cultivos de clulas bacterianas, las muestras se filtraran a travs de membranas hidrofilicas de tamao de poro de 0.2 micras (mm). Las clulas retenidas en el filtro se lavan con suero salino isotnico y se dejan secar en un horno cono en el caso anterior. En ambos casos, el peso de clulas secas se suele expresar en unidades de g/l. una importante fuente de error en la determinacin del peso seco es la adsorcin de humedad atmosfrica por las clulas secas, los tubos de centrifuga o las membranas durante el enfriamiento previo a la medida del peso despus del secado. Para evitar esto, el enfriado a temperatura ambiente debe de realizarse en un desecador. Tambin debe tenerse en cuenta la presencia de slidos en el medio y corregir el peso seco celular resultante. El mayor inconveniente de este mtodo es que es lento y requiere una cantidad grande de muestra (1-5 ml).

Espectrofotometra: las clulas microbianas reflejan la luz. As, existe una relacin directa entra la luz reflejada y el nmero de clulas presentes en el medio de cultivo, siguiendo la ley de Beer. Se utilizan longitudes de onda en torno a 600 nm. Para poder usar este mtodo es necesario calibrarlo, midiendo las mismas muestras utilizando otro mtodo. Normalmente se calibra por el mtodo del peso seco celular. Por regresin lineal obtenemos la ecuacin que nos relaciona la absorcin de la muestra con el peso seco. As, en el futuro con solo medir la 2

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absorbancia en el espectrofotmetro y aplicando la ecuacin obtenemos rpidamente la concentracin de clulas microbianas en el medio. Este mtodo hay que usarlo con cuidado pues el coeficiente de la relacin entre la absorbancia y peso seco puede variar con diferentes estados del crecimiento, o por la presencia de slidos en el medio. As mismo a los altos valores de absorbancia la respuesta deja de ser lineal, por ello hay que diluir muestras hasta estar en el intervalo de linearidad.

MATERIAL, SUBSTANCIA Y EQUIPO: MATERIAL Matraz de 250ml Tubos chicos con rosca Desecador Gradillas Vasos de precipitado Probeta Esptula Pipeta Pasteur SUSTANCIA Agua purificada Levadura para pan EQUIPO Balanza analtica Estufa Espectrofotmetro Computadora Incubadora Computadora

CALCULOS: Concentracin. Solucin 1 2 3 4 5 6 Concentracin 5g/L 10g/L 15g/L 20g/L 25g/L 30g/L g. De levadura 0.25 0.5 0.75 1 1.25 1.5

PROCEDIMIENTOS: Peso seco

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[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGA] Practica 1 1. Pesar los tubos, colocarlos, usando pinzas, en el desecador de 10 a 15 minutos y pesar en la balanza analtica previamente calibrada. Anotar loa cuatro dgitos despus del punto. Etiquetar los tubos. 2. Colocar aproximadamente 2g de solucin correspondiente en cada tubo. Tarar el tubo antes de colocar la muestra. Anotar el peso completo. 3. Centrifugar durante 10 minutos y retirar el sobrenadante. 4. Agregar agua, vortear y centrifugar. Retirar el sobrenadante. 5. Repetir el paso anterior hasta que el sobrenadante no tenga color ni turbidez. Diagrama (Peso seco)
Colocar en el desecador por 10 minutos usando pinzas

Pesar los tubos

Pesar en la balanza analitica

Centrifugar durante 10 minutos

Tarar el tubo antes de colocar la muestra

Agregar 2g de muestra aproximadamente

Agregar agua, vortear y centrifugar

Retirar el sobrenadante

Repetir el paso anteriro hasta que el liquido no muestre color ni turbidez

Espectrofotometra Leer 2 veces cada solucin en el espectrofotmetro a 600nw. Encender el equipo y elegir condiciones Colocar agua purificada en la celda.

Diagrama (Espectrofotometra)

[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGA] Practica 1

Encender el equipo

Elegir condiciones

Leer dos veces cada solicion

Colocar agua puruficada en la celda

OBSERVACIONES: RESULTADOS: CONCLUISIONES: REFERENCIAS: Cuadernillo de trabajo. Fundamentos de Biotecnologa. 8 semestre.