Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Biologa Celular

El microscopio de campo oscuro fue diseado por el Fsico Ricgard Zsigmond en 1903 cuando realizaba experimentos en qumica de coloides. Este es un microscopio ptico estndar de laboratorio en el que ciertas tcnicas pticas son utilizadas para transformar la forma en la que la luz pasa a travs de la muestra que se observa. Por lo tanto las partes del microscopio son exactamente las mismas que las de un microscopio de campo claro, cambiando nicamente el condensador. La mxima amplificacin til es entonces de 100x, con una resolucin de 200nm. La fuente de iluminacin (Iluminador) puede ser una lmpara de Tungsteno o de Halgeno. El microscopio de campo oscuro es una modificacin al sistema de campo claro, que consiste en bloquear los rayos centrales que alcanzan al condensador, por medio de un disco o algn otro tipo de dispositivo, de manera tal que el cono iluminador es un cono hueco de luz, con mayor apertura numrica que la del objetivo. Esta forma de iluminacin permite que solo aquellos rayos que han sido desviados por la muestra observada, sean captados por el objetivo. Es decir, la imagen microscpica est formada en este caso slo por rayos difractados y constituye un sistema cuyo funcionamiento se basa en el fenmeno de Tyndall. La tcnica de campo oscuro es muy til para observar materiales en suspensin, permitiendo detectar con gran facilidad partculas slidas con ndices de refraccin muy cercanos al del medio en que se encuentran, por esta razn, es un sistema de gran utilidad para realizar conteo de nmero de partculas en una muestra. De igual forma, resulta una herramienta til para visualizar estructuras muy delgadas que rebasan los lmites conspcuos de la clula u organismo observado. Existen varias posibilidades para lograr la iluminacin de campo oscuro, que dependen del tipo del condensador. Existen dos tipos de condensadores: de Refraccin y condensadores de Reflexin. Los condensadores por Refraccin tienen un disco central que obstruye el paso de la luz, formando as un cono hueco de luz. Son relativamente econmicos y dentro de su campo, muy verstiles en el uso para objetivos de poco aumento, hasta 40x. Asimismo, este tipo de condensadores pueden improvisarse aadiendo simplemente un disco de cartn negro sobre la lente frontal del condensador. Para usar objetivos 100x en campo oscuro, estos deben de tener incorporado un diafragma variable tipo Iris que permita reducir la apertura numrica del objetivo.
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Microscopa de Campo Oscuro

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Los condensadores por Reflexin son principalmente de dos tipos: paraboloides y cardioides. En la parte central tienen una superficie reflejante con una curvatura de parbola que refleja lateral y perifricamente los rayos hacia otro espejo que circunda el rea central, esta superficie tiene una inclinacin suficiente para producir un cono luminoso que es el que proporciona y enva la luz hacia la muestra a observar. La ventaja principal de estos condensadores es la alta densidad luminosa de la que proveen a la muestra y la posibilidad de usar aumentos del objetivo superiores a 40x. El condensador paraboloide, consiste en un bloque de cristal en forma de parbola interiormente espejado. Un sistema previo produce luz paralela que despus va estigmticamente al foco del paraboloide, donde se encuentra la preparacin. El condensador cardioide tiene dos superficies espejadas en vez de una, pero es prcticamente el mismo resultado aunque el condensador cardioide tiene mayor amplificacin para Treponemas y adems proporciona correccin cromtica. Una variante de estos condensadores para campo oscuro por reflexiones, la presentan los condensadores tricos o toroides. Estos condensadores tienen una lente trica aadida a un condensador cardioide. Dicha lente concentra el 100% de la luz que llega al condensador y la enva al espejo cardioide de forma tal que el objeto sea iluminado con el 100% de la luz que llega del condensador. Se puede decir que este tipo de condensador es el mejor, cuando las condiciones de trabajo involucran aumentos superiores a 40x en los objetivos. VENTAJAS Permite ver partculas dispersas en un medio homogneo. Hace posible la observacin del movimiento Browniano de las partculas. Se puede utilizar para la observacin de preparaciones sin colorear. Visualiza los bordes destacados delas muestras. Tcnica valiosa para observar microorganismos de tipo Treponema Pallidum, espiroquetas con dimetros superior a 0.2 m.

| DESVENTAJAS Presenta imgenes con poca resolucin debido a la difraccin. Difcil acceso al microscopio que posea el condensador especial por su alto costo. No deja visualizar estructuras celulares especficas, solo bordes de clulas o partculas.

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APLICACIONES Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin matar o teir la muestra. Las preparaciones que se utilizan deben ser frescas pues se requieren organismos activos para observar su movimiento. En el laboratorio Clnico se utiliza para el examen de organismos como Treponema Pallydum, Bornelia y Leptospira (agentes de cuadros sistemticos) estas bacterias tienen un grosor de menos de 0.15 m por lo que no se ven en campo claro. Esta tcnica es til para observar autoradiografias y cristales en la orina. La tcnica de campo oscuro puede combinarse con otras como la microscopia en fluorescencia y la polarizacin, sumndose las ventajas de estas tcnicas de campo oscuro.
BIBLIOGRAFA

Anton Roca, Joan. Corominas, Nuria Tomas. ptica instrumental. (1996). 1 Edicin. Editorial UPC. Barcelona, Espaa. Pg. 191-193.
Martnez M. Alejandro. El Microscopio de Campo Oscuro. (1988).Revista de Difusin CIENCIAS.UNAM. http://www.ejournal.unam.mx/cns/no12/CNS01210.pdf

Karp Gerard. Biologa Celular y Molecular. (1991). 2 Edicin. McGraw Hill. Mxico.

ULTRAMICROSCOPIO

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