Artculo No.

1 Ttulo del artculo: Validacin de una metodologa por cromatografa lquida de alta eficiencia para la determinacin simultnea de vitaminas A, D3 y E en inyectables de uso veterinario

Resumen: El artculo presenta los resultados del desarrollo y de la validacin de una metodologa analtica para la cuantificacin simultnea de vitamina A palmitato, vitamina D3 y vitamina E acetato en inyectables de uso pecuario. Se realiz una separacin por cromatografa lquida de alta eficiencia (CLAE) en fase inversa empleando como fase mvil una mezcla de acetonitrilo, metanol, agua (45:50:2.5), una columna C 18 a 45 C y se hizo la deteccin a una longitud de onda de 280 nm. Se evalu la selectividad, linealidad, precisin y robustez, por lo que se encontr que el mtodo es selectivo, lineal y preciso. Debido a esto se considera que el mtodo es adecuado y conveniente para la determinacin de los componentes anteriormente mencionados.

Identificacion de: Fase estacionaria

Columnas Bondapack C18 3,9x300 mm, 5 m C8 3.9x150 mm, 5 m Se realizaron ensayos a 25, 35 y 45 C Fase mvil

Mezcla de acetonitrilo, metanol, agua (45:50:2.5) Mezclas de metanol y agua en proporciones 99:1, 96:4, 94:6, 95:5 y 90:10 Tipo de cromatografa segn relaciones de polaridad (normal o reversa)

Cromatografa en fase inversa

Tipo de elucin: isocrtica Tcnica de deteccin o revelado

Deteccin por espectrofotometra ultravioleta a 280 nm Tipo de analitos

Vitaminas Tipo de muestra

Se prepararon las muestras a partir de tres soluciones inyectables que contienen los analitos, las diluciones necesarias para su anlisis final se realizaron con la fase mvil, las concentraciones fueron 120 UI/mL, 2 UI/mL y 70 g/mL para las vitaminas A palmitato, D3 y E acetato, respectivamente.

Explicacin breve del orden de elucin de los analitos Bajo las condiciones previamente sealadas, los tiempos de retencin para las tres vitaminas fueron aproximadamente 6,1, 7,9 y 16,6 minutos para la vitamina D3, vitamina E acetato y vitamina A palmitato, respectivamente.

Comentario acerca de la seleccin de condiciones de anlisis (fase estacionaria, fase mvil, flujo, gradiente de solventes, gradiente de temperatura, tipo de deteccin, etc) El mtodo validado se aplic para la determinacin de las vitaminas en tres productos inyectables de uso veterinario y, como pudo observarse, las caractersticas y relativa sencillez del mtodo lo hicieron adecuado y conveniente para el objetivo propuesto. Variando las condiciones del sistema, se fue observando cmo en algunos casos la separacin o resolucin de las seales debidas a las vitaminas no fue adecuada, en otros casos las seales fueron asimtricas, mientras que en otros los tiempos de corrida para una separacin adecuada fueron demasiado altos. Sin embargo, la misma practicidad del mtodo permiti la manipulacin de diversas variables que permitieron manifestar la precisin, linealidad, reproducibilidad y selectividad de la metodologa descrita en la determinacin de las mencionadas vitaminas.

Era de esperar la seleccin de una fase estacionaria C18 debido a la elevada aplicabilidad y versatilidad de la misma en este tipo de anlisis, as como la elucin con fases mviles de diferente polaridad que permitieran evaluar los distintos tiempos de elucin. La utilizacin de un gradiente de temperatura proporcion al mtodo an mayor especificidad y el tipo de deteccin utilizado es, sin duda, de elevada confiabilidad y aplicabilidad.