Desafios da Fecundao In Vitro Comercial

Queiroz, L.M.V.; Peixer, M.A.S.; Malard, P.F.; Santana, G.M.; Xavier, M.C.; Sousa, R.R. BIO Biotecnologia em Reproduo Animal Ltda. SMPW Quadra 5 Conj. 05 Lote 01 Casa C - Braslia-DF luismauro@biotecnologiaanimal.com.br Introduo A produo in vitro de embries bovinos em escala comercial apresenta gargalos em sua linha operacional que a tornam distinta do modelo de produo in vitro sistematizado pelos laboratrios acadmicos estatais. O sucesso comercial da Fecundao In Vitro (FIV) passa pela transposio de vrias barreiras encontradas em seu caminho, desde aspectos relacionados ao tratamento comercial com o cliente at a seleo de receptoras e a transferncia dos embries produzidos, passando pelos desafios da rotina laboratorial. Estes pontos fazem da FIV uma tcnica repleta de armadilhas, que sem muita ateno e muito siso est fadada a obter baixos resultados. O objetivo deste artigo apresentar os pontos crticos relacionados produo in vitro de embries bovinos comercial na tica observada pelo Laboratrio BIO. Produo

In

Vitro

de

Embries

Bovinos

Eleio

de

um

Eficiente

Protocolo

de

FIV

Diferentes protocolos de FIV so encontrados na literatura, cada qual com sua particularidade e seus respectivos resultados. Entretanto, a linha dorsal a mesma, busca-se a maturao ovocitria in vitro, a preparao espermtica, a fecundao propriamente dita e o cultivo in vitro. A diferena encontrada nos protocolos dos diferentes laboratrios comerciais so os desafios a que se propem alcanar. Para o Laboratrio BIO, localizado em Braslia-DF, o mercado que se busca mais amplo que a regio do entorno do Distrito Federal e o estado de Gois. Para tanto, buscamos elaborar um sistema de transporte de ovcitos eficiente, que nos permita chegar ao Laboratrio aps 16 horas do incio da sesso de puno folicular. Para analisar a interferncia do tempo na produo in vitro de embries separamos os dados de acordo com tempo despendido entre o incio da puno folicular e a chegada ao Laboratrio, a saber: Grupo 1) 1 a 2 horas; Grupo 2) 3 a 5 horas; Grupo 3) 6 a 9 horas e Grupo 4) 10 a 16 horas. A taxa de produo de embries do Grupo 1 (48%) foi superior aos Grupos 2, 3 e 4 (38%, 40% e 36%, respectivamente). Contudo outro desafio foi lanado: estabelecer um protocolo de transporte de embries que no interferisse significativamente na taxa de prenhez. Assim, buscamos desenvolver um sistema pelo qual o embrio deveria ser mantido por at 18 horas entre o momento do envase e a sua transferncia. No foram observadas diferenas estatsticas significativa quando comparamos as taxas de prenhezes entre os Grupos 1, 2 e 3 (41%, 40% e 37%, respectivamente), entretanto, houve diferena significativa quando comparamos com o Grupo 4 (34%). Analisando a taxa de aproveitamento de ovcitos em prenhez, foi possvel observar diferena estatistica significativa quando comparamos os Grupos 1 (20%) com os Grupos 2, 3 e 4 (16%, 15% e 12%, respectivamente). Apesar de observarmos diferenas nas taxas de produo de embries e de prenhezes, o Grupo 4 apresenta ndices comerciais positivos, o que significa que o custo da prenhez est em nvel aceitvel. Particularidades Funcionais do Smen

O processo da fecundao in vitro propriamente dita iniciado com a separao espermtica, abordagem necessria para remoo dos espermatozides mortos, lquido seminal e do meio de criopreservao. Normalmente, a amostra de smen descongelada submetida a centrifugao, para que os espermatozides vivos passem por um gradiente de densidade, livrando-se do material indesejvel. No entanto, estas centrifugaes podem incidir indesejavelmente sobre a estrutura da membrana plasmtica e acrossmica dos

espermatozides e a sua cromatina. Alguns touros encontrados no mercado, com excelentes taxas de prenhezes em programas de inseminao artificial, possuem uma predisposio para estes efeitos deletrios da FIV, fazendo com que apresentem baixas taxas de fecundao, por conseguinte, clivagem e produo de embries. O ambiente da FIV tambm gera cuidados, visto que incide diretamente na performance dos espermatozides. O meio base de FIV, a concentrao de heparina, uso de antioxidantes, possuem efeitos distintos entre os touros. A grande dificuldade, neste caso, estabelecer um protocolo nico para toda a rotina laboratorial. Cultivo

In

Vitro

Existem vrios modelos de cultivo in vitro, que na literatura apresentam excelentes resultados. Entretanto, buscando um modelo comercial, no podemos pensar em elaboraes, como o uso de hospedeiros intermedirios, ou sofisticaes, como o uso de atmosfera com baixo teor de oxignio. O protocolo de cultivo in

vitro deve ser sucinto e eficiente.

Transferncia dos Embries Produzidos

In

Vitro

Um dos pontos que mais interferem no resultado final de um programa de FIV a qualidade da receptora no momento da transferncia dos embries. Para que a receptora esteja em condio ideal alguns pontos devem ser seguidos: 1) Um eficiente controle sanitrio deve ser estruturado procurando evitar a entrada e estabelecimento de diversas doenas infecto-contagiosas, tais como, brucelose, tuberculose, leptospirose, IBR, BVD e clostridiose. 2) Adequada estratgia de mineralizao e alimentao, principalmente nas pocas de seca. 3) Atualmente, diferentes protocolos de sincronizao de cio de receptoras so utilizados com objetivos distintos. Dependendo da disponibilidade de receptoras e da freqncia de sesses de FIV, pode-se optar pelas seguintes metodologias: a) Aplicao de 1 dose de prostaglandina, apresenta uma taxa de sincronizao de cio de 40%, entretanto possui um custo baixo; b) implante de progestgeno + estrgeno + prostaglandina, possui ndice de sincronizao de cio de 65% dos animais tratados; c) implante de progestgeno + estrgeno + prostaglandina + eCG, apresenta a maior taxa de sincronizao de cio, entretanto o maior custo. Este protocolo indicado para usos de receptoras em programas seqenciados ou em fazenda com restrio de receptoras. Caractersticas das Doadoras Destinadas para Puno Folicular

Normalmente, as doadoras que so candidatas a integrar um programa de FIV possuem alguns pr-requisitos, como por exemplo: mrito gentico reconhecido, performance produtiva comprovada, histrico em pistas de julgamento, alto valor financeiro, expectativa de venda em curto prazo e patologia reprodutiva adquirida. Exceto pelo ltimo ponto citado, este perfil faz com que a doadora merea um tratamento especial, normalmente com um manejo nutricional com alto teor de protena e energia, e mantidas em baias. O resultado disto um aumento de peso da doadora, pelo acmulo excessivo de tecido adiposo. Para a FIV, no existe combinao pior. H diminuio do nmero de ovcitos viveis (aumento do nmero de ovcitos desnudos e degenerados) e da taxa de produo in vitro de embries. No entanto, as doadoras com patologias reprodutivas adquiridas, exceto em anestro, apresentam taxas irregulares de produo de ovcitos, embries e prenhezes que, por si s, justifica o uso da tcnica. Concluso A gama de aplicaes da fecundao in vitro, bem como o crescimento dos seus ndices de produtividade e o fortalecimento do mercado pecurio nacional vem, a cada dia, colaborando para a expanso da tcnica em programas de multiplicao animal nas mais diversas regies do Brasil.