Minta-elkszts felsfokon

A nagy hatkonysg (nyoms) folyadkkromatogrfia (HPLC)

45. rsz: Van, aki forrn szereti!
A kromatogrfia mint azt korbban mr emltettk a sznrs tudomnya. Ezt az elnevezs eredeti grg jelentse okn, lltottuk, s lltjuk most is. Ez az elnevezs azonban, ma mr, lehetne akr refraktometrikus-rs, lumineszcencis-rs, elektrometrikus-rs s gy tovbb. Napjainkban pedig egyre szlesebb alkalmazsi terleten tmegspektrometris-rs. Az eredend s ma is hasznlatos elnevezsrt, az UV/VIS, vagyis az ultraibolya/lthat fny alkalmazsval kialakul komponens sznek, a felelsek. Akrmire is kereszteljk azonban, aktulis kromatogrfis mdszernket, annak lnyege a vizsgland minta komponenseinek a sorbarendezse, vagyis egy megfelel felbontsokkal (RSi,j) rendelkez elvlaszt mdszer kisdolgozsa s alkalmazsa. Ez a felbonts pedig tulajdonkppen nem ms, mint komponenspronknt az elvlaszt (sorbarendez) kromatogrfis rendszernk hatkonysgnak s szelektivitsnak a szorzata (45.1). A megfelel jelzt termszetesen, kizrlag egy adott mintval kapcsolatban kell rteni. Vagyis ltalban megfelel elvlaszt (sorbarendez) rendszer nincs. Egyet, az adott mintra, vagy minta tpusra, az analitikusnak, mindig ki kell dolgoznia. Lehetleg minl jobban, s minl gyorsabban. Persze elmondhatjuk, hogy ltezik egy olyan tpus mdszer, vagy inkbb mdszercsald, amely a tbbinl szlesebb alkalmazsi terlettel rendelkezik. Ez pedig a fordtott fzis folyadkkromatogrfia terlete. Ez az elnevezs pedig kialakult konvencik szerint olyan elvlaszt rendszerre vonatkozik, amely hidrofb(b) ll-, s hidrofil(ebb) mozg-fzis alkalmazsval alakthatunk ki. Ez az emltett szlesebb alkalmazsi terlett a vznek, mint a termszetes vilg oldszernek, ksznheti. Egy kiss, ltalnostva/egyszerstve a krdst. Visszatrve a felbonts krdsre az a (45.1) sszefggs szerint, az a kvetkez: RSi,j = 0.25N0.5(i.j 1)[k/(k + 1)] I II III (45.1)

A kifejezs mint azt jeleztk hrom tnyez (I, II, III) szorzatbl ll. Ezek sorrendben a kvetkezk: hatkonysg (N), szelektivits () s retenci (k). Amennyiben elvlaszt rendszernkre olyan mdszert dolgoztunk ki amely az adott mintnk/mintink komponenseinek sorbarendezsre, megfelel RSi.j rtkeket produkl, s ezt reproduklhatan teszi, akkor egy nagy lpst tettnk feladatunk megoldsa fel. Mondhatni befordultunk a clegyenesbe. De legalbbis, napjaink elvrsai szerint mg nem rtnk a clba. Napjaink kromatogrfija ugyanis egy kidolgozott mdszertl megkveteli az analzis id rvidsgt, vagyis azt, hogy az analzis esetnkben a sorbarendezs, a lehet leggyorsabban legyen vgrehajthat. Ezltal az elvlasztsra kerl mintk szmt az idegysg alatt a vgletekig nvelhessk. Amint az, az analzis kis idszksgletbl automatikusan kvetkezik. De nem csak azrt. A gyorsasggal mint azt ltni fogjuk egyttal nveljk a mdszer rzkenysgt, s cskkentjk a oldszerignyt. Persze nem ingyen. Mondhatjuk, valamit valamirt.

Felbonts

Analzis id

Nyoms

45.1 bra

A 45.1 brn, a kromatogrfia ma mr klasszikusnak szmt hromszge lthat. Amely mg akkor is jellemzje a techniknak, ha a hromszg cscspontjaiban elhelyezett fogalmakkal szemben mra, a korbbinl komolyabb elvrsaink alakultak ki. Klnsen igaz ez a nyoms esetben. Ugyanakkor a fogalmak kztti kapcsolatok ma is rvnyesek. Amennyiben pldul az analzis id cskkentse a cl, akkor nvelni vagyunk knytelen az mozg-fzis ramlsi sebessgt, ami a Knox-egyenlet rtelmben egyrtelmen rontja a mdszer eredeti felbontsait (RSi,j), s nveli a nyomsesst (P) az oszlopon/rendszeren. Mindez, egszen napjainkig, lnyegesen meghatrozta, a sorbarendezs kromatogrfis technikjnak lehetsgeit. A kromatogrfia azonban technikailag kintte ezt a fenti hromszggel kapcsolatos korbbi elvrsainkat. Egyszeren azok ms megvilgtsba kerltek. Mgpedig az elvlaszts-technika, gyakorlatnak a fejldse okn. Ezt egybknt, a kromatogrfis mszerek technikai fejldsnek is tekinthetjk. Mindenesetre, hangslyozni kvnjuk, hogy a kromatogrfia nem elmletileg jult meg. A megnvekedett ignyek kielgtse mint azt, rendszeresen hangoztatjuk folyamatos technikai fejldst provoklt. Az egyre sszetettebb mintk, komponenseinek a sorbarendezse mindenkppen a kromatogrfis rendszer a felbontkpessgnek a javtst ignyelte, illetve persze ignyli ma is. Br esetenknt a mltidimenzionlis analzis alkalmazsa nem elkerlhet. A tovbbiakban, a megllaptsaink jelents rsze, kizrlag izokratikus elvlasztsi krlmnyek kztt rvnyesek! Az RSi,j javtsra azaz nvelsre, a kromatogrfis rendszer hatkonysgnak a nvelsre van szksg. Erre, ktfle mdon van lehetsgnk. Az RSi,j egyrszt egyenesen arnyos, a rendszer hatkonysgnak (N) ngyzetgykvel. Vagyis: RSi,j ~ N (45.2)

Msrszt, miutn a hatkonysg fordtottan arnyos az ll-fzis szemcsemretvel, vagyis N ~ 1/dp A felbonts (RSi.j) teht fordtottan arnyos a szemcsemret ngyzetgykvel. Ezrt RSi,j ~ 1/dp (45.4) (45.3)

Amennyiben, negyedre cskkentjk az ll-fzis szemcsemrett(tmrjt), akkor a kromatogrfis rendszer felbontkpessge azonos szelektivits s retenci mellett a ktszeresre fog nni. A hatkonysg nvelst, a rendszer kinetikai paramterinek a javtsval pldul a hmrsklet nvelsvel rhetjk el. Mint errl az albbiakban, szlni is fogunk. A msik lehetsg, az ll-fzis szemcsemretnek a tovbbi cskkentse. Sem a sorbarendezs hmrskletnek az emelse, sem az ll-fzis aprtsa azonban eredenden nem problmamentes megolds, egy folyadkkromatogrfis rendszer felbontkpessgnek a nvelsre. A HPLC technikjnak, napjainkban vgbemen fejldse(i), elssorban ezeknek, a problmknak a kikszblsre (enyhtsre) irnyul(nak). Kezdjk vizsgldsunkat az utbbival, vagyis a szemcsemret cskkentsnek a krdsvel. Az llfzis rszecskemretnek a cskkentse a kvetkezket okozza: 1. 2. 3. 4. Nagyobb hatkonysg, Gyorsabb analzis, Megnvekedett nyomsess, Nagyobb ignyek a mszerrel szemben.

Megllaptsaink zld sznvel, annak pozitv-, piros sznvel pedig a negatv hatst kvntuk rzkeltetni. Ad. 1. Nagyobb hatkonysg. A Knox-egyenletre mr hivatkoztunk. Ht akkor most nzzk meg mi is az. A Knox-egyenle vgl id egy adott szemcsemret oszlop tnyrmagassgnak a vltozsa a mozg-fzis lineris sebessgnek a fggvnyben, vagyis H = f(u), ahol H = L/N (45.5)

a desztillci technikjbl vett analgival az egysgnyi hatkonysgra es oszlop hosszsg, vagyis a tnyrmagassg, azaz az elmleti tnyrmagassg. Ez mint mr emltettk kzeltleg arnyos az ll-fzis szemcsemretvel, s fgg a mozg-fzis lineris sebessgtl, u-tl, valamint az oszlop s a tltet tulajdonsgra jellemz paramterektl. Azonban mgse teljesen gy. A Knox-egyenlet vgl is a kvetkez: h = Au1/3 + B/u + Cu A (45.6) sszefggsben teht u, a mozg-fzis reduklt sebessge: u = udp/Dm (45.7) (45.6)

ahol az ismert paramterek mellett, a Dm a mozg-fzis diffzis koefficiense. A, B s C az oszlop minsgre jellemz paramterek, a h pedig az oszlop reduklt tnyrmagassga: h = H/dp (45.8)

A (45.6) sszefggsbl nyilvnval, hogy az A, B, C mint az oszlop minsgre (tltsre) jellemz paramterek, akkor jellemeznek, minl hatkonyabb oszlopot, ha minl kisebb rtkek. Persze, mindenkppen nullnl nagyobbnak kell lennik. Az A az n. eddy diffzi llandja, a B a tengely irny diffzi lladja, mg a C tulajdonkppen a tmegtadsi folyamat (fzistmenet) sebessgi llandja. Egy megfelel kpessg oszlop esetben az A 0,4 1,0 kztti, a B 2,0 3,0 kztti, mg a C 0,04 0,10 kztti rtk lehet. A (45.6) egyenlet egybknt ebben az alakjban egy sszetettebb egyenlet egyszerstett alakja. Elmletileg egybknt rdekes s nmikppen nyitott krds, hogy az emltett A, B, C paramterek rtkei, fggenek-e a k rtktl, vagy nem. A klnbz dp rtkekhez azonban, egyrtelmen

klnbz helyzet s alak h-u grbk tartoznak. Ez a tny pedig napjaink folyadkkromatogrfis fejldsben s ilyenformn, jelenlegi trgyalsunkban, igencsak kulcsszerepet jtszik. A H u illetve h u grbk mindegyike 1 minimummal rendelkezik. Ennek a minimumnak a helye s rtke a szemcsemret (dp) fggvnye. Kisebb dp rtkhez rendelhet grbe minimumhoz kisebb H illetve h s nagyobb u illetve u rtk tartozik. Ezen tl minl kisebb dp-j grbrl van sz, annl laposabb a grbe, kevsb les a minimum. Kvetkeztetsek: minl kisebb a tltet szemcsemrete azonos felttelek mellett- annl hatkonyabb az elvlasztsi rendszernk oszlopa, s annl kevsbe romlik ez a hatkonysg, amennyiben, az optimlisnl nagyobb ramlsi sebessget alkalmazunk. Ad. 2. Gyorsabb analzis. Az elbbi okfejts s kvetkeztets alapjn, kis szemcsemret (dp 2m), az analzis sebessge anlkl nvelhet, hogy a hatkonysg lnyegesen cskkenne. Ad. 3. Megnvekedett nyomsess. Br a sorbarendezs idszksglete tnyleg cskkenthet lnyegesen, amennyiben igen aprcska szemcsemret llfzist alkalmazunk a kromatograflsunk sorn, de ezt a lehetsget termszetesen, a fizika nem adja ingyen. Az ilyen akcinak slyos, vagy esetnkben inkbb nyoms kvetkezmnye van. Az alkalmazott ll-fzis szemcsemretnek a cskkentse ugyanis magautn vonja az oszlopon kialakul nyomsess a (45.9) szerinti megnvekedst. P = uL/K0dP2 (45.9)

Amennyiben teht azonos egybb felttel mellett ktszeresre nveljk az ramlsi sebessget, vagy az oszlop hosszt a kialakul nyoms is a ktszeresre n. Ezrt ha gyors kromatogrfit kvnunk elkvetni, a nyomsess megnvekedse nlkl, akkor azonos egybb felttel mellett felre kell cskkenteni az elvlaszt oszlopunk hosszt. Igen m, de akkor a sorbarendezsre ignybe vehet hatkonysg is, a felre cskken, s nem biztos, hogy elegend lesz a feladatunk megfelel megoldsra. Ezrt, a korbbiak alapjn, kisebb szemcsemret ll-fzist kell alkalmazni. Ez azonban, igencsak nyomsnvel megolds. Egy 10m 2m cskkentsi lps, tszrs cskkentst jelent. s mint ilyen ez a (45.9) szerint huszontszrs nyomsnvekedst okoz. Azonos egybb felttelek mellett. A megoldsra kt lehetsg van. Egyrszt ne legyenek azonosak azok a bizonyos egybb felttelek. Msrszt, vagy fogalmazhatunk gy is, hogy s/vagy teremtsk meg a lehetsgt annak, hogy a klasszikus mreteknl trpbb ll-fzis alkalmazsa okozta nyomsnvekeds technikailag elviselhet, legyen. A megolds ezen utbbi megkzeltse egy j folyadkkromatogrfis kszlk tpus kialakulshoz vezetett. Amennyiben az eddigi folyadkkromatogrfok hasznlata 600 bar nyoms felett, technikai s semmikppen sem elmleti okbl, nem volt hasznlhat, mgis HPLC, vagyis nagynyoms folyadkkromatogrf elnevezssel volt dolgunk, akkor az j kszlk tpusok, amelyek minimum 1000 barig zemeltethetk, a VHPLC, vagyis a nagyon nagynyoms folyadkkromatogrf nevet rdemlik. Mg akkor is, ha cgenknt vgl is, ms nvre kereszteltk ket (lsd ksbb!). A msik, elbb emltett megolds, miszerint clirnyosan vltoztassunk az analitiknk egybb krlmnyein szintn jogosan merlt fel a kromatogrfia elmleti s gyakorlati megvalstiban. Amennyiben a (45.9) sszefggs alapjn fennmarad lehetsgeinket, kt fogalom maradt mg, egy tovbbi diszkusszira. A , s a K0 betkkel jelltek. A K0 az kromatogrfis oszlop permeabilitsi koefficiense rtke az oszlop ellenllst illetve inkbb az elektronikbl vett analgival vezetkpessgt jellemzi rtkvel. Ezltal a kromatogrfis tltet, ll-fzis porozitst, teht a tltet jellegt is magba foglalja. Az n. monolitikus, vagyis nem szemcss kromatogrfis ll-fzis elnye ppen sajtos porozitsban rejlik, amelynek a kvetkeztben a permeabilitsa sajtsgosan nagy. Az alkalmazsval, lehetsg nylik, a megszokottnl nagyobb ramlsi sebessgeken trtn kromatograflsra. A az (45.9)-ben a mozg fzis viszkozitst jelli. Az aktulist, mert az mg adott oldszer sszettel esetn sem egy lland rtk. Nagysga fgg az alkalmazs, vagyis az oszloptr hmrsklettl, amennyiben magasabb hmrsklethez azonos sszettel mellett kisebb viszkozits tartozik. Ezt hasznlhatjuk ki amennyiben lehetsges amikor az aktulis kromatogrfis sorbarendezsnket, nagyobb ramlsi sebessggel, s magasabb hmrskleten

vgezzk el. A hmrsklet emelsvel a rtkt cskken, vagyis a (45.9) trt szmlljban kompenzlni tudjuk az u nvelst s a P azonos, vagy csak kiss nagyobb lesz mint szobahmrskleten nvelve a mozg-fzis ramlsi sebessgt. Ad. 4. Nagyobb ignyek a mszerrel szemben. Egy j genercis analitikai folyadkkromatogrfis kszlkkel szembeni technikai elvrsainkat a 45.1 tblzatban foglaltuk ssze. 45,1 tblzat Mszerigny Injektor Pumpa

Oszloptr Detektor sszekt vezetk(ek) Kromatogrfis software

Tulajdonsg Nyomstrs, akr 1000 br nyomsig Oldszerszllts akr 1 500 l/min, s 1000 bar rtkeken is vagy oldszerszllts akr. 5 ml/min s max. 1000 bar rtken Termosztlhatsg, legalbb 200 0C - ig Gyors mkds, kis trfogat, s nyomsll cellval Minimlis bels tmrj, minl rvidebb kapillrisok Gyors PC, gyors software-al

A tblzatban termszetesen, csak a gyors kromatogrfia technikjval kapcsolatos tulajdonsgokat soroltuk fel. s nem tartalmazza pldul az oszloppal, illetve az ll-fzissal kapcsolatos elvrsokat, mivel azokat kln trgyaljuk. gy is szmos kiegsztst fogunk tenni, a tblzattal kapcsolatban. Egy kromatogrf injektora, a kszlk sebessg-meghatroz egysge. Az injektor n. ciklusideje a leghosszabb minden automata kromatogrf esetn. Persze nem azrt mert az injektor a leglustbb egysg, hanem azrt, mert egy ciklus alatt, amely ciklus egy injektlstl, a kvetkez injektlsig tart, az injektornak van a legtbb a ktelezen elvgzend feladata. ppen ezrt az injektor kpessgei br eddig is lnyegesek voltak most mg inkbb azok. Eddig azt vrtuk el egy automata injektortl, hogy pontosan s reproduklhatan vgezze az injektls, majd a kvetkez injektlsig megfelelen mossa tisztra magt. Az elvrsunk azutn mg komolyabb lett, ha az automata injektor egyben automata minta-elkszt is volt. Ma az sszes korbbi elvrst a gyorsasg, vagyis az emltett ciklusid rvidsgnek az ignye is kiegszti. A pumpval szembe is, lteznek konkrt technikai ignyek, a kezdetektl fogva. Ezeket mra a szlltsi sebessg rtkben, de mindenekeltt a maximlisan kialakthat munkanyoms esetben kellett revidelni. Ma egy kromatogrfis pumptl elvrjuk, hogy vagy a l legyen a mkdsi tartomny jellemz egysge, vagy kpes legyen akr 5 ml/min gyors ramlsi rtket produklni s maximlisan az eddigi 400 vagy 600 bar helyett 1000 bar nyomson, mkdni. Az oszloptr egy gzkromatogrf alapvet s dolog termszetnl fogva taln a legfontosabb egysge. A folyadkkromatogrfiban sokig az opcik kategrijba soroltk. Azok kz az egysgek kz, melyek gymond j ha vannak, de a hinyuk nem meghatroz, egy HPLC esetben. Az elvlaszt oszlop termosztlsa, folyamatosan lett a folyadkkromatogrfis mdszerek ignye. Magyarorszgon mr csak a hinyz labor-termosztls okn is. Aztn egyre tbb laboratriumot tettek emberbartt, vagyis termosztltt, az oszloptermoszttok ignye azonban megmaradt. Megmaradt, mert a folyadkkromatogrfia technikjban, az elvlaszts hmrsklete is a krlmnyek egyik vltozja lett. Mindenekeltt a reproduklhatsg fokozsa rdekben. Vgl is a folyadkkromatogrfia, alapveten nemillkony, s/vagy termikusan illkony vegyltek analitikjra, talltatott ki. Aztn, ha valami beindul. Szval a hmrsklet minden korbbinl nagyobb szerepet kapott a folyadkkromatogrfia technikjban (is). Az oszloptermosztt nemcsak a GPC s az ion-kromatogrfia esetben kapott szerepet, de majdhogynem ktelez rsze lett minden HPLC kszlknek. A detektor a kromatogrf mregysge. Mint ilyennek olyan kpessgekkel kell rendelkeznie, hogy megfeleljen tbbi egysg ignyeinek, mind amilyen a sorbarendezs gyorsasga, s a sorbarendezs trfogati ignye. Mskppen fogalmazva, egy modern kromatogrfis detektornak

legyen gyors elektronikja, s bels trfogatval, ne hgtsa, a beraml mozg fzist, de az sem baj, ha a cellja a kis trfogata mellett valamennyi nyomst is elvisel. Az sszekt vezetk(ek)-tl, szintn azt vrjuk el, hogy bels trfogatukkal, ne okozzk az oszlopbl kilp mozg-fzis tlzott/arnytalan hgulst. Ezt a bels tmrjk, s hosszuk korltozsval valsthatjuk meg. Egy modern kromatogrfis software-al szemben felmerl legfontosabb felhasznli igny, egyrszt az, hogy az adatgyjts s az adatfeldolgozs, legyen kompatibilis a mdszernk gyorsasgval, msrszt, hogy a rendszerirnyts rtelemszeren, legyen hasonlan gyors. Persze, a knnyen kezelhetsg szintn nem lebecslend igny egy software esetben (sem). Egy folyadkkromatogrfis mdszer kidolgozsnak a kvetkez lpsei ltezik. 1. Az analitikai feladat, kromatogrfis tfogalmazsa. 2. A kromatogrfis mdszer kivlasztsa. 3. A kromatogrfis oszlop kivlasztsa. 4. A kromatogrfis krlmnyek kivlasztsa. 5. A detektls krlmnyeinek a kivlasztsa. 6. A kromatogrfis rtkels krlmnyeinek a kivlasztsa. 7. Az analitikai feladat krdsnek a megvlaszolsa. Ezek a lpsek nmagukban is tbb lpsbl llnak, s tulajdonkppen egy-egy feladatkrt jelentik a kromatogrfinak. Egyms utn megoldand feladatkreit. Tulajdonkppen mint azt mr annyiszor hangslyoztuk, az 1 6 lpsek addig ignylik az ismtelt meglpsket, amg, a 7. azaz felsorolsunkban a befejez lps maximlis bizonyossggal, meg nem tehet. Ad.1. Az adott tudomnyterlet mveli felteszik, a krdst (felvetik a problmt), az analitiknak. Az analitikusok kiszignljk a krdst/problmt, kromatogrfusoknak. Ez utbbiak, a kapott krdst/feladatot, az elvlaszts-technika nyelvezetre fordtjk le. Ad.2. A kromatogrfis nyelven megfogalmazott krds/feladat megoldsra legkzenfekvbb kromatogrfis technika kivlasztsa. Ad.3. A kivlasztott kromatogrfis technika sorbarendez egysgnek vagy egysgeinek a kivlasztsa. a., Az ll-fzis tpusnak a kivlasztsa. b., Az ll-fzis mreteinek a kivlasztsa. c., az oszlop mreteinek a kivlasztsa. Az ll-fzis konkrt kivlasztsa, elmleti mdon ugyan megtervezhet, de prbafuttats, vagy prbafuttatsok nlkl nem konkretizlhat rtve ez alatt az ll-fzis szemcsemrett, s az oszlop mreteit. Persze a napi gyakorlatban, azzal kell dolgozni, ami rendelkezsre ll. Ad.4. A kromatografls krlmnyeinek a kivlasztsra, nagyjbl hasonl megllaptsok vonatkoznak, mint amiket az elz pontban emltettnk. a., A mozg-fzis kivlasztsa. b., A mozg-fzis sszettelnek pontos (konkrt) megvlasztsa. Egy folyadkkromatogrfis mdszer esetben a mozg-fzis lehet lland sszettel, vagy vltoz sszettel. Az elbbit izokratikus-, az utbbit gradiens mdszernek nevezzk. Az utbbi tovbb klnbzhet a sszettel idbeli vltozsa szerint.

c., Az esetleges gradiens, kezdeti s vgs oldszer-sszettelnek a megvlasztsa. d., A gradiens profil kialaktsa. e., A sorbarendezs hmrskletnek a megvlasztsa. Izoterm elvlaszts esetn. Ilyenkor a hmrsklet lland. f., A gzkromatogrfihoz hasonlan hmrskletvltozs kidolgozsa. A klnbz hmrskletek megvlasztsa, s a vltozs alakjnak a megvlasztsa (ersen kszlkfgg!) Ad.5. A detektor tpust elmletileg a vizsgland anyagok ismerete, illetve tulajdonsgai valamint a feladat ignyei, de gyakorlatilag sajnos legtbbszr a lehetsgeink alapjn vlasztjuk meg A XXI. szzad detektora ha nem kis kizrlag, de egyrtelmen a tmegspektromter valamilyen tpusa. Ez sszetettsgnl fogva a legegyszerbb esetben is ignyli mkdsi paramterek belltst, valamint a mdszernk mozg-fzisnak s a detektorral kompatibilis kivlasztst. Ez persze nem valami jdonsg, hiszen ezt a tbbi detektor tpus esetben rgebben s most is meg kellett illetve kell tenni. Az MS esetben a krlmnyek megvlasztsnak az ignyei taln szigorbbak, mint azt taln ms detektor esetben megszoktuk. Ad.6. A kromatogrfis rtkels ma mr szinte kivtel nlkl, profi mdon vgezhet el. Ehhez szmos megfelel software ll rendelkezsre, s egszti ki az analitikai mszereket. Amennyiben a felhasznlbartisg tekintetben ezek persze nem mindig teljesen egyformk, Egy szmtstechnikailag is kpzett kromatogrfus esetben ez nem klnsebb problma. Az r annl inkbb.(Lsd egy ksbbi folytatsban!) Ad.7. Egy kromatogrfis mdszer eredmnye, csak analitikai eredmny. Ezt mg az eredeti feladat megvlaszolsa rdekben, a megbz tudomnyg nyelvre vissza kell fordtani. Ahogy azt az, az 1. pont alatt tettk, csak fordtva. De ez mr kilps az analitika terletrl. Mg akkor is, ha ma mr a tudomnyterletek igencsak egymsba diffundltak. HMRSKLET A hmrsklet a folyadkkromatogrfia, technikjban sem jlag elrngatott vltozja a sorbarendezsek krlmnyeinek. Nemcsak az elbb mr emltett gl -, s ioncserskromatogrfia terletn alkalmaztak sorbarendezst emelt hmrskleten, de a dolog termszetnl fogva a folyadkkromatogrfia, fizikai-kmiai alkalmazsai sorn is. Azonban az emelt hmrsklet kromatografls, megint csak a dolog termszetbl kvetkezen az emltett folyadkkromatogrfis terletek kivtelvel mgiscsak a gzkromatogrfia sajtja maradt. A folyadkkromatogrfis alaptanknyvek, az illkonysggal s/vagy termikus stabilitssal nem rendelkez vegyletek sorbarendezsre alkalmas mdszernek tekintettk, a kromatogrfia ezen terlett. Az elmlet azonban egyre jobban lett a gyakorlat segtje. Mindezt pedig a terlet mszerezettsge is kvette. Az oszloptermosztt pedig megjelent az analitikai laborokban, mint a folyadkkromatogrfia rsze. Akr mint egy kompakt rendszer rsze (HP 1090), akr mint egy modulrendszer HPLC egyik modulja (Pye Unicam 4000). A kezdeti funkciknt ugyan az oszlop korrekt termosztlst jelltk meg, de a mintastabilitsi problmkon kvl, semmilyen kontraindikcija nem alakult ki a magasabb hmrsklet folyadkkromatogrfinak. Annl is inkbb, mert a nagynyoms folyadkkromatogrfia mkdsi krlmnyei kztt mg j, s rvid oszlop esetben is kialakul akkora nyoms, hogy mg a szerves oldszerek se forrjanak fel, az oszlopban. A hmrsklet emels kromatogrfis hatsa eredenden ketts, gy a folyadkkromatogrfiban is az (45.2 bra).

A hmrsklet emels hatsa

Kinetikai hatkonysg retenci

Termodinamikai szelektivits

45.2 bra

A 45.2 brn, a hmrsklet emels kt elvlaszts-technikai hatst, gymint a kinetikait s a termodinamikait vzoltuk fel. A kinetikai hats mindenkppen a kromatogrfis folyamatok felgyorsulst jelentik emelt hmrskleten, a szobahmrskletihez kpest, ez a komponensek retencijnak a kollektven trtn cskkenst is okozza, amennyiben azokat egybknt termodinamikai hatsok nem befolysoljk (lsd, ksbb). Klnsen biolgiai polimerek, fehrjk, nukleinsavak esetben diffzijnak a nvelse jelents a hmrsklet emelsvel. Amennyiben a gyors folyadkkromatogrfia amit, taln UHPLC-nek is rvidhetnk az Ultra Magas Nyoms Folyadkkromatogrfia angol szavainak kezdbeti alapjn megvalstsnak a szempontjbl tekintjk az elvlaszt oszlop hmrsklett akkor mindenkppen, a gyors, s kis szemcsemret ll-fzison keresztl trtn ramls okozta nyomsess nagysgnak, a fizikai okt kell keresni(45.10). P = Lu/dp2 (45.10)

A (45.10) kifejezs azonos a korbban bevezetett (45.9)-es kifejezssel, amennyiben, a az oszlop ellenllsi faktora s mint ilyen az oszlop tlts illetve a szemcseszer ll-fzis tlthetsgnek a jsgra jellemz, akrcsak a (45.9) kifejezsben szerepl K0. Csak ppen fordtva, mert = 1/K0. A hmrsklet emels kvetkezmnye szempontjbl, a (45.10) azrt rdekes s gyakorlatilag fontos a trt nevezjben szerepl, mint a mozg-fzis viszkozitsa, a hmrsklet emelsvel cskken. Ennek kvetkeztben a mozg-fzis ramlsrt felels nyomsess cskkenthet. Ezzel mind az ramls sebessge (gyors kromatogrfia), mind oszlop hossza, s vagy az ll-fzis szemcsemrete nvelhet illetve cskkenthet (nagy hatkonysg kromatogrfia). Azaz egytt optimlva ezeket. A viszkozits nyomsess hmrsklet viszonynak krdsvel kapcsolatban, e sorok rja a kvetkez sajt kromatogrfis lmnnyel rendelkezik. A minta igen sszetett, az oszlop hatkonysgval szemben az igny teht nagy. Vagyis 25 cmes az oszlop s 5 m-es az ll-fzis szemcsemrete. A prbafuttatsok utn, kivlasztott mozgfzis etanol-vz 20:80 indulskor s lineris alak gradiens profillal 80:20 a kromatografls vgre. A mozg fzis viszkozitsa azonban olyan mrtkben ntt, az etanol tartalom %-os emelkedsvel, hogy a kialakul nyoms meghaladta, a megengedhet rtket (400 bar), amirt a pumpa (HP 1090) automatikusan lellt. Megolds: vgezzk a sorbarendezst t = 60 0C-on termosztlt oszlopon (45.3 bra).

Tekintettel teht arra, hogy magasabb hmrskleten a retencis idk azonos egybb krlmny kztt a folyadkkromatogrfiban is cskkennek, a hmrsklet megfelel emelse, a sorbarendezs utni detektls, vagyis a kromatogrfis mdszer rzkenysgnek, vagy helyesebben kimutatsi hatrainak a cskkenst, azaz javulst okozza. Ezt a hmrskletnvelst, egszen addig folytathatjuk, amg a sorbarendezst el nem romlik. Vagyis a felbontsok mindegyike, vagy tbbsge,el nem tnk, vagyis nullas nem lesz. A hmrsklet tlzott emelsvel a gzkromatogrfihoz hasonlan lesprhetjk az injektlt mintt az oszloprl. Ez egyben lehetsget ad a kromatogrfus szmra, hogy egy mg reverzibilisen elkoszoldott oszlopot, vagyis hasznlt ll-fzist ltalban fordtott bektssel, s megfelelen ers oldszer alkalmazsval, emelt hmrskleten mossa tisztra. Az eljrshoz tartozik, az a gyakorlati tancs ltalnosan igaz, az emelt hmrsklet HPLC alkalmazsa esetn, hogy a hmrskletet elbb kell cskkenteni, mint ahogy az ramlst lelltannk, mert ellenkez esetben az oldszerek (a szervesek mindenkppen!) egyszeren kiforrnak a nyomsvesztett oszlopbl. Ez egybknt a detektor cellt, ha nem valamennyi tlnyomson mkdtethet, szintn fenyegeti!!! Az esetleges visszahts szintn veszlyes lehet, oldhatsgi problmk miatt!!! Ezek a spontn megjegyzsek ismtelten azt jelzik, hogy a dolgokat elre tgondoltan clszer kivitelezni.(szerk.) A mi szeretett Sznrsunk lnyege, hogy a mintnk komponenseit a fizikai(-kmiai) tulajdonsgaik alapjn sorba lltsuk. A sorba llts felttele, hogy a sorbarendez egysg tudjon vlogatni a komponensek kztt, vagyis rendelkezzen szelektivitssal, a minta komponenseivel szemben. Ehhez persze a folyadkkromatogrfiban, ennek a sorbarendez egysgnek az ll-fzisnak nem egyedl kell szelektlgatnia, a komponensek kztt, hanem a mozg-fzissal kzsen. Mert a mozg-fzis, a folyadkkromatogrfiban, nem csak hajtja kifel a komponenseket, desegt a fzistrsnak a minta komponenseinek sorbarendezsben. Mindez azonban, eredenden az alkalmaztl, azaz a kromatogrfustl fgg. Teht a sorbarendezs minsge. Mit tehet egy kromatogrfus? Mr felsoroltuk korbban. Az analitikai feladatbl, kszt egy kromatogrfis feladatot. Ennek a megoldshoz kivlaszt valamilyen ll-fzist, s mozg-fzist. Aztn megtervezi a fzisok megfelel mkdshez szksges krlmnyeket. Ha a minta nem tl komplex, akkor elegend egy tpus ll-fzis alkalmazsa. Ha nem, vagyis tl komplex, akkor tbb (ltalban, kt) ll-fzist kell alkalmazni. s a mozg-fzis is lehet tbb (ltalban kett). Ha a minta sokfle komponens tartalmaz, de mgsem annyira komplex, akkor a sorbarendezshez elegend egy tpus ll-fzis, de nem elg egy mozg-fzis. Az ll-fzis vltozhat folyamatosan. Az ilyen folyadkkromatogrfis mdszert gradiens techniknak hvjuk. Egy gradiens technikt, a mozg-fzis kiindulsi-, kzbls-, s vgs sszettelvel valamint a vltozs, (vagy vltozsok) profiljval s az sszettel vltozs (vagy vltozsok) idejvel, jellemezhetjk. Ha mintnk mg egyszerbb, akkor a sorbarendezs egy ll-fzissal, s mozg-fzissal meg lehet illetve kell prblni megoldani. Az ilyen mdszert rtelemszeren izokratikusnak nevezzk. A lnyeg azonban mindkt esetben teht a szelektivits. s akkor mg mindig itt van a hmrsklet! A hmrsklet, mint szelektl krlmny. A kromatogrfis sorbarendezs alapja, a szelektivits illetve a szelektivits gyakorlati megvalstsa, kromatogrfis kivitelezs, a szelektivits (RSi,j). Ahhoz, hogy az analitikai(!) feladat spektroszkpiai mrs/vizsglat megfelel kivitelezshez sorrendben (lehetleg egyenknt) vehessk az emltett vizsglat trgyv a minta komponenseket, sorszmot kell hzatni velk, azaz a mintt meg kell kromatograflni. Ha ez GC alkalmazsval nem megy, mert , , , , akkor elszr, a HPLC-t kell elvenni mint technikt hogy legyen szves mr megvalstani az elkpzelsnket, s sorbarendezni, a mintnk, mintink, komponenseit. Az elkpzelsnk mindenekeltt a feladatrl legyen, kromatogrfis nyelven. Mint azt mr korbban hangslyoztuk. Azutn jhet az ll-fzis(oszlop), detektor, szval sszellhat a HPLC kszlk. A kvetkez lps, a mozg-fzis idbeli sszettelnek a kialaktsa, megtervezse. Amikor mindezt kiprbltuk, s mg mindig van tennival a szksges szelektivits kialakulsa rdekben, akkor mg mindig ott van a hmrsklet, s ha szerencsnk van a korbbi sorbarendezsek sorn bekvetkezettnl, jobb felbontst ignyl n. kritikus komponensprok szerkezeteivel, akkor a hmrskletvltoztats is segthet.

Az izokratikus krlmnyek kztt, a retenci s a mozg-fzis szerve oldszer tartalma kztt, a lineris oldszer erssgi (LSS) modell alapjn, az sszefggs a kvetkez (45.11): log k = log k0 S(B%) (45.11)

Ebben a lineris sszefggsben a k az adott komponens kapacitsi faktora (k = (tR t0/t0) B% szerves tartalm mozg-fzis esetn, k0 ugyanez 100% vizes eluensre, termszetesen, 0-ra extrapollt rtkknt, S pedig a lineris sszefggs irnytangense. Amennyiben a klnbz komponensek, klnbz meredeksg log k = f(B%) egyenessel rendelkeznek, akkor a szelektivits az ppen B szerepben lv szerves oldszer %-nak a grafikon szerinti vltoztatsval mdosthatunk a szelektivitson. Termszetesen amennyiben ez a nem prhuzamossg nem egyszeren sszetartst jelent, hanem egy konkrt B% tartomnyon belli metszspont ltezs, akkor az mozg-fzis szerves tartalmnak a vltoztatsval sorrendet is vltoztathatunk a kromatogramon. A metszsponthoz tartoz B%-nl, termszetesen a szelektivits nulla. Az sszetarts egybknt a komponensek (45.11) szerinti egyenesei kztt akkor ltezik, teht, egy minta komponensei kztt, ha a szerkezetk hasonl, de legalbb a funkcis csoportokban, nem klnbznek. Az ilyen mintkat egybknt regulris mintknak neveztk el. Biztosan regulris mintt alkotnak pldul, homolg vegyletek. Az egyenesek egybknt egy olyan szerves tartalomhoz tartanak ssze, amely elg ers mozg-fzist alkot (ltalban a vzzel) amely kpes egyben, a komponensek szelekcija nlkl lesprni mintt az oszloprl. Amikor a komponensek kzl legalbb kettnek is olyan LSS egyenesei vannak mint amirl elsknt tettnk emltst amelyek nem egyszeren sszetartanak valahov, de egy konkrt B%-nl metszik egymst, akkor a minta n. irregulris minta. Egy irregulris minta esetben az adott minta komponenseinek (pldnkban az emltett kettnek) a sorrendje, az adott szerves oldszer mennyisgnek (%-nak) a vltoztatsval megfordthat. Amennyiben szerencsnk van s a minta irregularitsa a kritikus komponenspr-tl, vagy komponensprok-tl van, akkor valamennyire j helyzetben vagyunk, amikor optimlnunk kell az oldszer sszettelre a mdszernket. Kritikus komponenspr egybknt az a kt vegylet, amelyre az adott rendszernek (ll-, mozg-fzis) a legrosszabb. Ilyen persze mindig van, de szerencsre az RSi,j rtke, nem mindig kritikus. s akkor jjjn a hmrsklet! Az elbbiek azrt kerltek ismtelten emltsre, mert a hmrsklet vltoztatsa alapveten analg az oldszerek vltoztatsval. Egy minta komponens retencija, a minta izokratikus sorbarendezse sorn a hmrsklettl a (45.12) szerint fgg. log kT = A + B/T (45.12)

A (45.12)-ben, k mint korbban is a komponens kapacitsi faktora, a T hmrskleten, A s B a ez egyenlet koefficiensei. Amennyiben a (45.12) komponensenknt hasonlan klnbznek az irnytangenskben, mint az a log k = f(B%) egyenesek esetben emltettk, s metszik egymst, akkor egyrszt megint lesz olyan ezttal, hmrsklet rtk amelynl a az adott komponensprra a szelektivits nulla, s amely hmrskleti rtk kt oldaln a retenci legalbbis, az adott komponensprra megfordul. A hmrskletvltozs amint azt a 45.2 brn jeleztk ezen hatsa a termodinamikai. Ez a hats teht vltoztathat a sorbarendezs korbban (szobahmrskleten) kialakult sorrendjn. Miutn termodinamikai hatsrl van sz kzeltsk a jelensget termodinamikbl kiindulva. A kromatogrfis folyamatok termodinamikai vizsglathoz vant Hoff nevrl elnevezett sszefggsbl kell kiindulni. A vant Hoff kifejezs kromatogrfis alakja a kvetkez (45.13). ln k = ( -Ho/RT) + (So/R) + ln (45.13)

ahol k ismt csak a kapacitsi faktor, Ho s So a komponensnek a mozg-fzisbl, az llfzisba trtn fzistmenetnek a norml entalpiavltozsa illetve norml entrpiavltozsa. A

 az ll, s mozg-fzis trfogati viszony, az adott kromatogrfis oszlopban, vagy egyszeren csak, a fzisarny. A (45.13) teht a kromatogrfia vant Hoff sszefggse, amely a fzistmenet szabadenergia vltozsbl (45.14a,b), vezethet le. Go = Ho - TSo s Go = - RTlnK (45.14b) (45.14a)

Az ln k az 1/T fggvnyben, egyenes, vagy egyenessel kzelthet (45.12). Ez gy inkbb szk hmrsklettartomnyra igaz, de szlesebbre ltalban nem. A kromatogrfis fzisok egybknt klnbz intermolekulris ktsek kialakulsval/kialaktsval s megszntetsvel/megsznsvel, vesznek rszt a folyamatos (ide-oda) fzistmenetekben. Ami tulajdonkppen, a kromatogrfis folyamat. Egy minta valamennyi komponensnek a kromatogrfis mozgsrt, a folyadkkromatogrfiban ezek az intermolekulris erk a felelsek, hasonlan, ahogy ezek az erk az olds illetve elegyeds sorn mkdnek. A minta minden komponensnek olddnia kell a mozg-fzisban. Ha az injektls utn egy komponens t0 id alatt elhagyja az oszlopot, akkor semmi intermolekulris ktst nem alakult ki kztte s az ll-fzis kztt. De ha egy anyag nem t0 ideig tartzkodik az oszlopban, akkor az ll-fzison is kell tartzkodnia valamennyit. A kialakult intermolekulris erk milyensge a szelektivitsrt az erssge pedig a retencikrt lehetnek felelsek komponensenknt. A dolog azonban eredenden nem ennyire szimpla gy, mr csak azrt sem, mert kt fzis, az ll- s a mozg-fzis verseng az injektlt minta komponenseirt. Gyztes persze nincs ebben a kromatogrfis versengsben. Amennyiben, egy mintakomponens esetben a mozg-fzis az ersebb, gy ez a mintakomponens lerohan az oszloprl, ellenkez esetben pedig lecammog, ha egyltaln lejn. Ebben a hrmas fizikai-kmiai jtszadozsban a kt fzis s a minta komponensei vesznek rszt. Azt, hogy hrmas jtk a folyadkkromatogrfia, s nem ngyes, vagy ts, azt csak azrt nem mondjuk, mert a komponensek kztti jtszadozst ltezst, nem vesszk figyelembe. De ez nem is kevs esetben tnyleg csupn tlegyszerstse a helyzetnek. Pldul a fehrjk analitikjban. Persze ha valamilyen jelensg megmagyarzshoz az elmlet egyszerstett vltozata is elegend, akkor sohasem szabad bonyoltani! Ismtelten hangslyozni kell mintegy sszefoglalva, az elbbieket hogy egy vegylet folyadkkromatogrfis viselkedsrt azok az erk felelsek, amelyek a sorbarendezs sorn kialakulnak a vegylet s a fzisok kztt. Ezekrt, az adott vegylet szerkezete, mindenekeltt funkcis csoportjai, valamint a kt fzis milyensge elssorban de nem kizrlag funkcis csoportjai tehetk felelss. Hozz kell tenni azonban, hogy a fzisok, nem az injektlskor tallkoznak elszr egymssal, vagyis a egy minta sorbarendezsben rsztvev fzisok, a kromatografls sorn mr egyms befolysa alatt vannak. A hmrsklet hatsa akkor lehet egy vizsglt minta komponenseinek a sorrendjre, ha azok klnbz, s inkbb polris msodlagos klcsnhatsokkal, intermolekulris erkkel, kapcsoldnak a fzisokhoz. Apolris fzisok mint amilyenek pldul a C4, C8, C18 funkcis csoporttal rendelkezk diszperzis klcsnhatsaira, a hmrskletvltozs lnyegesen kevsb hat, mint az egybb polrisabb klcsnhatsokra. Nem vletlen, hogy a hmrsklethats azoknak a mozg-fzisok alkalmazsa esetn kifejezbbek, amelyek vztartalma a tbb. rdekessgknt meg kell jegyezni, hogy noha a hmrskletemels ha nem egyenl mrtkben, de cskkenti, a ktsek erssgt, gy a msodlagos intermolekulris ktseket, kapcsolatokat is. Gondoljunk csak az olvads, vagy a forrs jelensgre. A hmrskletemels mgis minden(!) esetben cskkenti a komponensek retencijt, vagyis okozza a mozg-fzis ersdst. s sohasem fordtva. Ez valsznleg csak gy kvetkezhet mindig be, hogy a mintakomponens ll-fzis kapcsolatok a hmrskletemelssel jobban cskkennek, mint a mintakomponens mozg-fzis kapcsolatok. Szerencsre vannak esetek amikor az emltett kapcsolatok nemcsak erssgkben, de tpusukban is klnbznek mintakomponensenknt, de legalbb s legszerencssebb esetben a mr korbban emltett kritikus komponensprok kztt. gy aztn a sorbarendezs szelektivitst

az oszlophmrsklet vltoztatsval is(!) befolysolhatjuk, valamelyest hasonlan, mint az oldszer-sszettellel tehetjk, azt. A (45.13) alatti vant Hoff fggvny, alapveten lineris s az egyes mintakomponensek esetben lehet sszetartan kicsit nem prhuzamos, amikor az adott minta hasonlan az log k- (B%) hasonl esethez a regulris elnevezssel jellemezhet. Amennyiben a komponensek, vant Hoff egyenesei kzl legalbb kett metszi egymst a minta irregulris. Ilyen esetben a hmrsklet vltoztatsa, az adott kt komponens esetben sorrendvltozst okoz. A baj csak az, hogy a vant Hoff grbk mg szk hmrsklettartomnyon se mindig egyenesek, de szles tartomnyon vgkppen ritkn. A vant Hoff fggvny azon a hmrsklettartomnyon lineris, ahol az sszefggsben szerepl Ho s So rtkek llandak, vagyis hmrskletfggetlenek. Amennyiben nem azok akkor a vant Hoff fggvny nem lineris, hanem bizonyos hmrsklet rtkeket is tartalmaz sszetett kifejezs. Hogy a hmrsklettel lehet-e vltoztatni adott komponenspr kromatogrfis sorrendjn, az megint csak az adott komponensek szerkezettl, s persze ennek megfelelen az ll-, s mozg-fzis megvlasztstl fgg. A modern folyadkkromatogrfis gyakorlatban egy sorbarendezsi mdszer, kidolgozsa adott ll-fzis esetn, a mozg-fzis, s a hmrsklet kombinlt kivlasztsval trtnhet, a (45.12) s a (45.13) sszefggsek alapjn, ltalban ngy prba kromatogrambl levonhat kvetkeztetsek alapjn. ll-fzis Nyilvn nem rdektelen az elzekben ismertetett tma a hmrskletvltoztats kromatogrfis lehetsgeirl, de mindez elmleti elssorban, fizikai-kmiai fejtegets maradna, ha mindezt a megvalsts lehetsgeinek emltsvel nem tennnk teljess, azaz szellemnk nem kborolna vissza a napi valsg terletre. Ugyanis az egsz eddigi vizsgldsunk nem rne tbbet egy elmletileg megalapozott tudomnyos lmodozsnl, ha a felfttt mozg-fzisokhoz, nem lennnek hstabil ll-fzisok, vagyis a folyadkkromatogrfia, a gyakorlatban kptelen lenne utnozni a gzkromatogrfit. De kpes. Mra mindenkppen. Pedig, ez nem kevesebbet jelent, mint azt, hogy a forr de mindenkppen kmiailag inert vivgzok helyett, forr oldszerek alkotta mozg-fzissal szemben, kell ll-fzist killtani, a folyadkkromatogrfia csataterre. Teht egy olyan fzissal szemben, amely minden csak nem inert, fleg, ha vzrl van sz forrn, aminek az eddigi negatv hatsrl, taln a farkasok meslhetnnek a legtbbet. De ha eltekintnk a rszletesebb malackodstl, akkor is nyilvnval, hogy a forr vz klnsen szlssges pH-n igencsak veszlyes a vdtelen ll-fzissal szemben. A vz egybknt szerencsre mg forrn sem csupn veszlyes, de nagyon rdekes s fleg krnyezetbart oldszer. Igazn megr mg egy mist. Ezrt a vzre nemcsak ivs okn fogunk visszatrni, hanem a kromatogrfiban betlttt szerepe kapcsn is. Visszatrve a hstabil ll-fzisok ismertetsre, itt s most minden mellbeszls nlkl, be kell vallani, hogy a szilika alap ll-fzisok, bizony nem igazn hstabilak. Legalbbis a ma mr tradicionlisnak tekinthet vltozatai. Ez szerencsre nem azt jelenti, hogy hasznlatukrl, az emelt hmrsklet folyadkkromatogrfiban eleve le kell mondani. Azt azonban felttlenl, hogy mint a mosnk korn halnak, a szilika fzisoktl is korn el kell bcszni, ha rendszerese stgetjk ket, j vizes eluensben. Viszont annyira a napi gyakorlat rszesei lettek mr, hogy ennek ellenre, amg a mkdkpessgk megfelel, addig igyeksznk, hasznlni. Egy ll-fzis stabilitst, a mozg-fzis, s az extra kromatogrfis krlmnyekkel szemben, azzal az oszloptrfogattal szoks jellemezni, amely anlkl ramoltathat t az oszlopon, hogy a teszt kromatogram klnsen elromlott volna. Ebbl a szempontbl a szilika alap ll-fzisok vgl is, nem teljesen hasznlhatatlanok emelt hmrskleten, de tnyleg magas hmrskleten (t 80 oC), nem sokig. Tekintettel arra, hogy a szilika mgiscsak, a legjobb ll-fzis, a mai napig, elindultak azok a kutatsok, amelyek az eddiginl hstabilabb szilikagl ellltst lehetsgt vizsgltk. Mra az a 100%-os vizet mint mozg-fzist mkdkpesen de szobahmrskleten elvisel fzisok analgijra, szinten szerves csoportokat tartalmaz szilika fzisok gyrtst talltk ki. Ezek a poli(metiloktilsziloxn) s poli(metiloktadecilsziloxn) fzisok. Remlhet, hogy a hstabil

szilika fzisok fejlesztse a szilika klnlegesen j kromatogrfis tulajdonsgainak az okn ezen a ponton nem fog lellni. Brmennyire is kitntetett szerepet tulajdontunk a sziliknak mint az ll-fzis, alapanyagnak a kromatogrfiban, a fejleszts egyik terlete fggetlenl az emelt hmrsklet folyadkkromatogrfitl j anyagok ll-fzisknt val alkalmazsa, illetve a rgiek rehabilitlsa. Az elbbire, zirkonium alap fzisok, az utbbira a klnbz fmoxidok, mint TiO2 s az Al2O3, stb. s valamennyire mgiscsak a szn, a legismertebb plda. Br ez a szn, a mai formjban nem igazn emlkeztet a klasszikus sznporra. A HPLC legnagyobb szerencsjre! A zirkonium alap fzisok egybknt akr 200 oC-on is mkdtethetk. Jelenleg a legnpszerbb zirkonium alap folyadkkromatogrfis ll-fzis a polibutadin bortott zirkonium. A klnbz manyag alap fzisok, mr korbban is szerepli voltak magas hmrsklet folyadkkromatogrfinak, amennyiben a gl- s ion-kromatogrfia ll-fzisaiknt hasznltuk s hasznljuk ket, ma is. A terhelhetsgk gyenge volta miatt, azonban ltalnos npszersgk a majdnem kivl pH-stabilitsuk ellenre sem vrhat. Szt kell mg ejteni a nem szemcsejelleg fzisokrl a szilika s manyag alap monolit fzisokrl, a hirtelen jtt de nem oknlkli npszersgket, mely a gyors kromatogrfia terletn val alkalmazhatsguk miatt alakult ki nem kvette a gyrtsnak a fejldse. Ez pedig szksges lenne ahhoz, hogy olyan reproduklhat oszlopok jelenjenek meg piacion, amire a kromatogrfinak ma szksge van. Ez a krds egybknt ltalban mg mindig jelentkezhet olykor olykor, sajnos. Szinte rkzld felvetseknt a kromatogrfinak. Amikor a magas hmrsklet folyadkkromatogrfia ll-fzisairl beszlnk, akkor nemcsak az ll-fzis anyagrl kell rtekezni, de a kromatogrfis oszlop alakjrl is. Ahogy ez a gzkromatogrfiban is trtnt, fejldse sorn. A gyors folyadkkromatogrfia kialakulsval, nemcsak a rvid, kis szemcsemret oszlopok jelentek meg a kromatogrfiban, de a klnbz, korbbinl lnyegesen kisebb bels tmrj oszlopok is. Miutn kzben a HPLC kszlkekben, az oszlopon kvli n. extra trfogatokat s a detektor cella-trfogatt is lecskkentettk, tulajdonkppen megteremtdtt a lehetsg arra, hogy a kvetkez lps a tlttt kapillris s nyitott csv kapillris tpus oszlopok bevezethessk a folyadkkromatogrfiba is. Az SFC kapillris vltozatnak oszlopai nagy segtsgre lehetnek a fejldsben. Mert ez a terlet mg igencsak gyerekcipben jr. De mr jr! Az emelt hmrsklet folyadkkromatogrfia egyik legnagyobb problmja a minta s az ll-fzis hstabilitsa mellett az oszlop termikus homogenitsban van. A klasszikus 4.6 mm-es oszlop teljes keresztmetszetben val termosztlsa igencsak lass folyamat, mg akkor is ha a hosszanti hmrsklet gradiens elkerlse rdekben a mozg-fzist felttlenl el-termosztlni kell, a svszleseds elkerlsrt. A vastagabb bels tmrj oszlopban azonban sugrirny hmrsklet gradiens gy is kialakul(hat). A megolds mint a kapillris elektroforzis esetben minl szkebb, vagyis lehetleg valamilyen kapillris alkalmazsa (lsd gzkromatogrfia!). A kapillris oszlopok folyadkkromatogrfis bevezetse egybknt nemcsak az emelt szint kromatogrfit tenn minl jobban lehetv, de a programozott hmrsklet HPLC-t is. Gondoljunk csak a htul cammog kromatogrfis cscsra, mg inkbb, ha az csak cscsocska de mgiscsak ltez mintakomponens. Vagy az oszlopon felgylemlett, koszokra. A gyors kromatogrfia emltsvel, kezdtk mostani elmlkedsnket. Ezt a magas hmrsklet folyadkkromatogrfival folytattuk. Vgezetl nhny megjegyzs: Br a gyors folyadkkromatogrfia olykor tbb mint 1000 bar tlnyomst is ignyelhet, a sorbarendezs nyomsfggse mgsem tma, egyelre. A kereskedelemben mr forgalmazs trgyt kpezi tbb gyors, vagyis az eddigieknl nagyobb nyomson is zemel HPLC kszlk. Engedtessk meg, hogy kapsbl a kszlk pontos neve nlkl az ismertebb gyrtkat felsoroljuk. Agilent, Jasco, Shimadzu, Thermo, Waters, gy abc sorrendben, a teljessg legkisebb ignye nlkl.

A Labinf kvetkez szmban igyekezni fogunk egy rszletes ismertetst adni a gyors folyadkkromatogrfia jelenlegi piaci helyzetrl! Az elzek, a jubileumi 10. Labortechnikai Killts tiszteletre (is) rdtak!

(folytatjuk)