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TEMA 10.- FACTORES QUE AFECTAN A LAS BIOTRANSFORMACIONES: Factores endgenos: especies, individuos, edad, gnero, estado hormonal, embarazo, enfermedad, ciclos biolgicos. Factores exgenos: qumicos y ambientales. INTRODUCCION El hombre, al igual que otros seres vivos, est continuamente expuesto y se contamina de un nmero creciente de productos qumicos tales como plaguicidas, aditivos en los alimentos, agentes industriales, frmacos, drogas, etc. Estos xenobiticos suelen ser eliminados del cuerpo, y para ello las reacciones de biotransformacin juegan un importante papel. La velocidad de metabolizacin de un compuesto y la ruta por la que este compuesto vaya a ser transformado dentro de un organismo depende de muchos factores, unos propios de l (endgenos) y otros ambientales (exgenos). Algunas variaciones en las reacciones de biotransformacin, pueden estar asociadas a las propiedades de los sistemas enzimticos actuantes, con amplias diferencias entre los distintos organismos, por eso estudiaremos la influencia de factores endgenos (genticos y fisiolgicos). Por otra parte, los mltiples factores exgenos (qumicos y ambientales) tambin afectan a los procesos de biotransformacin de XBs. Las diferencias que son observadas en la biotransformacin de un XB entre especies, entre individuos de una especie y dentro de un individuo en diferentes situaciones ambientales, dificultan la extrapolacin precisa de datos de unas especies a otras y en las diferentes situaciones posibles, lo que hace que se puedan estudiar algunas variaciones influyentes enlas biotransformaciones: Variaciones inter-especficas: (factores genticos). Variaciones inter-individuales: entre individuos de una especie (fenotipo, edad, sexo, factores ambientales). Variaciones intra-individuales: para un mismo individuo (enfermedad, desarrollo o edad, factores ambientales. Puede haber variaciones significativas inter-individuales en la capacidad de metabolizar xenobiticos. La tasa metablica de un individuo particular est determinada primariamente por sus factores genticos, pero tambin depende de la edad, sexo y factores ambientales (tales como dieta, tabaco, drogas, etc.). Adicionalmente, otros muchos factores ambientales pueden provocar variaciones intra-individuales en la biotransformacin de XBs. Los animales terrestres tienden a tener bien desarrollados los sistemas de biotransformacin. La influencia de la dieta sobre la actividad de estos sistemas es importante: los animales hervboros ingieren una mayor variedad de alimentos y de xenobiticos que los carnvoros. En animales carnvoros con dieta desequilibrada (monotemtica) se encuentra una menor actividad en las enzimas de biotransformacin; en cierto sentido su presa ha hecho ya parte del trabajo. Si se comparan peces con aves o con mamferos, la actividad de sus enzimas biotransformadoras aumenta peces < aves < mamferos, ya que ellos pueden eliminar mas fcilmente las sustancias, incluso las lipoflicas, a causa del extensivo intercambio con su ambiente. Los microorganismos tambin tienen una gran capacidad de biotransformacin de XBs. 1.- Factores endgenos

1.1. DIFERENCIAS ENTRE ESPECIES Se han demostrado diferencias significativas entre distintas especies en las reacciones de fase I y en las de fase II. La diferencia puede ser cuantitativa ( idnticas reacciones metablicas a diferentes tasas) o cualitativa (reacciones metablicas diferentes), diferentes enzimas y diferente distribucin isoenzimtica. Tal variacin hace que la extrapolacin de datos desde un ensayo con animales hacia el hombre sea muy difcil. Cuando estudiamos los efectos txicos de los XBs, es importante que los estudios de toxicidad sean desarrollados en animales de laboratorio que sean, desde el punto de vista metablico (por su capacidad biotransformadora), similares a los humanos, tanto cualitativamente (tipos de rutas de biotransformacin) como cuantitativamente (extensin en la biotransformacin de un xenobitico). Estas consideraciones pueden ser importantes cuando se estn identificando los efectos de un compuesto en ciertas reas cientficas (toxicologa, incluyendo patologa, hematologa, carcinognesis, mutagnesis, teratognesis y toxicologa celular).
EJEMPLO de diferencia CUALITATIVA La situacin es aun mas compleja si reacciones de ambas fases pueden tener lugar simultneamente, como ocurre en la biotransformacin dentro de un organismo, por ejemplo para la ANFETAMINA. Rata: se produce la hidroxilacin aromtica, seguida de conjugacin del fenol resultante. Conejo: la desaminacin oxidativa es la principal ruta, entonces la cetona se reduce y se excreta el alcohol resultante una vez conjugado.

Fenol conjugado

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Biotransformacin de anfetamina por diferentes especies Diferencias CUANTITATIVAS: El fenol se transforma mediante reacciones de fase II a derivados de glucurnido y sulfato. La cantidad relativa de cada metabolito depende de la especie. Diferencias especficas en las reacciones de conjugacin del FENOL y de hidroxilacin de XBs Especie Gato Hombre Rata Conejo Cerdo Ratn Mono
Conjugacin glucurnico Conjugacin sulfato

0 23 25 46 100

87 71 68 45 0

Hidroxilacin de benzo-a-pireno hgado rin pulmn 5.8 0.37 0.13

11.26 2.5

0.03 0.38

1.02 0.2

1.2. DIFERENCIAS GENETICAS

Las diferencias no se producen solo entre especies sino tambin entre cepas o familias de una misma especie. Hace tiempo que se conocen las influencias genticas sobre la biotransformacin de xenobiticos en hombre. La antipirina es un antipirtico y analgsico, que adems se usa como un modelo de sustrato para estudios metablicos. Se administr a dos gemelos monozigticos que mostraron la misma velocidad de eliminacin y a dos gemelos dizigticos que mostraron velocidad distinta, parece que un solo gen regulara el metabolismo oxidativo. En otros caso existen dos fenotipos, como se demostr para la hidroxilacin de la debrisoquina (antidepresivo), un grupo mayoritario de personas produce el metabolito hidroxilado en C-4, estos son lo metabolizadores extensivos y otro grupo muy escaso (alguna poblacin del Caucaso), no muestra hidroxilacin, estos son los metabolizadores pobres. El % de los metabolizadores pobres vara entre los diferentes grupos tnicos. Estas variaciones se basan en el polimorfismo gentico El polimorfismo gentico ha demostrado que no todas las oxidaciones radican en el mismo gen. Para las reacciones tipo fase II tambin se encuentran distribuciones bimodales. La acetilacin de xenobiticos es un ejemplo de polimorfismo gentico. Hay dos fenotipos, acetilador rpido y acetilador lento. En la mayora de los paises europeos, el 40 % de la poblacin son acetiladores rpidos; (en Asia el 80 % y el 96 % los esquimales. El fenotipo de acetilacin puede ayudar a determinar los efectos txicos colaterales de un compuesto. Isoniacida (tratamiento de la tuberculosis) puede causar efectos neurotxicos en los acetiladores lentos, pero daos hepticos en los acetiladores rpidos. Para la hidralacina, la dosis efectiva para reducir la hipertensin es menor para los acetiladores lentos que para los rpidos. Una seria complicacin de este tratamiento es el lupus eritromatoso, enfermadad autoinmune, que es mas comn en los acetiladores lentos que en los rpidos. El fenotipo de acetilacin puede ser fcilmente establecido usando algn compuesto que sufra acetilacin y despus cuantificar el N-acetil-metabolito en la orina.
Fenacetina a acetaminofen y 2-hidroxifenetidina

Conjugados fenoles

Es importante conocer si hay polimorfismo gentico en los patrones de biotransformacin de xenobiticos que son administrados a humanos. Un metabolizador lento puede experimentar un efecto fuerte con una dosis que no tenga efecto en un metabolizador rpido o extensivo. Tambin, si una ruta de oxidacin esta ausente, el compuesto puede ser convertido por otras reacciones de biotransformacin, que en condiciones normales solo seran minoritarias. Tales cambios en los tipos de conversion metablica pueden algunas veces acabar en la formacin de metabolitos altamente txicos. Ejemplo: El analgsico fenacetina (AcetilO-aminofen) normalmente sufre O-dealquilacin a acetaminofeno (reaccion fase I); a continuacin por reacciones de fase II, el metabolito se glucuronida o se sulfata y se excreta fcilmente. En organismos metabolizadores pobres, sigue una ruta secundaria de transformacin, la formacin de 2-hidroxi-metabolito, que a su vez puede incrementar la formacin de metaHb (Fe3+) afectando al transporte de O2.

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1.3. DIFERENCIAS CON LA EDAD.
La edad es tambin un factor que afecta a los procesos de biotransformacin, debido a las diferentes etapas del desarrollo por las que pasan los organismos, las diferencias en las biotransformaciones son evidentes entre animales muy jvenes y adultos. Evolucin de la glucuronidacin con la edad: a) XBs y b) endgenos Actividad enzimtica (% adulto)

destete

adulto

nacimiento

aos

En la Fig. 1 se comparan los patrones, de evolucin con la edad, de diferentes enzimas metabolizantes o transformadoras de XBs. La actividad puede aumentar linealmente desde el nacimiento a la edad adulta, como la curva a, es el caso del patron para muchas hidroxilaciones aromticas y alifticas en rata. Segn la curva b, un aumento en la actividad desde el periodo de lactancia hasta el estado se produce para algunas Ndemetilaciones. De acuerdo con la curva c (un rpido incremento en la actividad inmediatamente despus del nacimiento, seguido por una rpida caida en el estado adulto) y con la curva d, un aumento en la actividad desde el nacimiento al destete y entonces un descenso hasta el estado adulto. El patrn de desarrollo de la glucuronidacin se muestra en la Fig. 2, la curva a describe la glucuronidacin de xenobiticos, que muestra un aumento en la actividad hasta el nacimiento seguido de un descenso hasta la etapa adulta. La curva b, describe el desarrollo de la glucuronidacin para compuestos endgenos, muestra baja actividad hasta el nacimiento seguida por un rpido aumento. Otras reacciones de la fase II (acetilacin, conjugacin de AA y conjugacin con glutation) tambin se desarrollan en la etapa perinatal, despus del estado fetal. La mayora de las isoenzimas de la UDP-glucuroniltransferasa se encuentran en bajos niveles en los periodos fetales y neonatales y aumentan tras el nacimiento. Una excepcin es la actividad sulfotransferasa, que se observa durante el estado fetal, probablemente a causa del importante papel de la sulfatacin en las conjugaciones de esteroides endgenos.

Caractersticas en los Nios

pH neutro y tiempo prolongado de vaciado del estmago Reduccin en la capacidad renal Aumento en la absorcin percutnea Mayor proporcin de agua corporal Menor capacidad de formar ligandos con protenas Menor glucuronidacin y actividad microsomal heptica

Cambios Fisiolgicos en los Ancianos

Mltiples enfermedades, Deficiencias nutricionales Reduccin en la capacidad de ligar compuestos a las protenas plasmticas Alta proporcin de grasas Mayor vida media de drogas en el plasma Reduccin en la eliminacin renal Disminucin de la absorcin gastrointestinal

1.4 DIFERENCIAS CON EL SEXO

La dependencia del sexo para la biotransformacin en los organismos se corresponde con una forma de control gentico, manifestado bajo va hormonal. Desde un punto de vista bioqumico, las diferencias sexuales en la biotransformacin de xenobiticos proceden de una combinacin de diversos factores, incluyendo las diferencias en la concentracin y actividad de las enzimas y los cambios en el ambiente lipdico de las enzimas asociadas a membranas. Las isoenzimas del Cit P-450 en alguna medida tambin son dependientes del sexo. La pituitaria en el cerebro lanza los llamados factores femineizantes que provocan en el hgado de las hembras una forma de actuar especial. La salida de este factor es controlada por el hipotlamo. En varones esta funcin del hipotlamo es inhibida por hormonas masculinas y la pituitaria no lanza factores femineizantes. Los

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efectos del sexo sobre la biotransformacin son frecuentemente muy pronunciados en animales de experimentacin pero escasamente significativos en humanos. Durante el embarazo, se ha detectado un aumento de progesterona en circulacin, lo que puede estar relacionado con una disminucin de conjugaciones con glucurnico, porque parece que est inhibida la enzima UDP-Glucuronil-Transferasa.

Tabla.- 2.4.2.B Txicos con susceptibilidad diferente para cada Sexo en la Rata. Mayor en machos Plomo Aflatoxina B1 Epinefrina Vapores de gasolina sin plomo Mayor en hembras Warfarina Estricnina Hexobarbital Paratin

2.- Factores externos que influyen en la biotransformacin de XBs.

Entre los factores ambientales se encuentra la presencia de los contaminantes: plaguicidas: insecticidas y herbicidas, metales pesados y contaminacin industrial. Los plaguicidas estn presentes en el medio, en el suelo y en el aire, en el agua y en los alimentos. Factores que afectan a la velocidad de sntesis de las enzimas y a la de su degradacin Genes
Xenobioticos ACTH Glucocorticoides T3 y T4 Embarazo Hormona crecimiento

mRNA
piridina acetona xenobioticos otros

Protenas
xenobiticos adrenalina glucagon insulina

Aminocidos

En algunas aves se han demostrado variaciones estacionales. La actividad hidroxilasa de determinadas monooxigenasas, como la aldrn epoxidasa, se ha detectado con niveles mas altos en los meses de abril y mayo, lo cual se puede relacionar con la poca de puesta y por lo tanto de mayor actividad sexual y hormonal, como consecuencia los esteroides pueden producir induccin enzimtica de las isoenzimas del P450. Las variaciones entre individuos, entre especies, e intraindividuales en el metabolismo de xenobiticos pueden ser explicadas, al menos en parte, por la existencia de las isoenzimas del Cit P-450. FACTORES DE LA DIETA: Por va oral adems de los nutrientes entran otros compuestos no nutrientes: aditivos de los alimentos, productos generados en la cocina: pirlisis, etc. y otros como el tabaco, marihuana, alcohol, etc. Muchas diferencias inter-individuales en el metabolismo de compuestos pueden ser debidas a factores genticos, edad, y , en cierta medida, a factores ambientales. Las variaciones intra-individuales son principalmente causadas por factores externos o por enfermedades. Muchos rganos tiene capacidad biotransformadora, tales como el hgado, las paredes del intestino, la flora intestinal, los pulmones y los riones. Los cambios en la fisiologa de estos rganos resultantes de una enfermedad afectaran al metabolismo. Enfermedades hepticas causarn generalmente una reduccin de la actividad enzimtica en el hgado, la influencia del flujo sanguineo a travs del hgado (causa un cambio en el influjo de xenobiticos) e induce a una reduccin en la concentracin de albmina (hipoalbuminemia). La capacidad de unin de compuestos a la albmina de la sangre y su transporte, puede verse as modificada. Algunos experimentos han descrito los efectos de los productos de la pirlisis de alimentos sobre las reacciones de biotransformacin. Las carnes a la brasa, contienen gran cantidad de productos de pirlisis, que son principalmente formados por la degradacin de AA tales como el TRP o compuestos semejantes a los benzo-pirenos. Estos compuestos inducen (aumentan la concentracin de) una cierta isoenzima del Cit P-450, referida como el CYP 448. Esta isoenzima esta implicada en el metabolismo de hidrocarburos aromticos policclicos, que pueden acabar formando metabolitos cancergenos o mutagnicos. Los componentes (principalmente indoles) de ciertos tipos de repollo pueden tambin conducir a la induccin del CYP 448. Algunos plaguicidas, el DDT por ejemplo, induce varias enzimas que catalizan reacciones de fase I. Otros factores ambientales: temperatura, luz, altitud, estrs, radiaciones ionizantes, etc, tambin pueden afectar a la biotransformacin de XBs. EFECTOS QUE SE DERIVAN DE LA INTERVENCION DE VARIOS FACTORES

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Es evidente que algunos factores amplifican los procesos de biotransformacin (activacin-induccin), mientras que otros los reducen (inhibicin). Algunas veces los efectos no son aditivos, pero se refuerzan uno a otro en sentido positivo (sinergismo) o negativo (antagonismo). El metabolismo de xenobiticos es una materia compleja, ya que puede verse influenciado por muchos factores (generalmente descontrolados) y que suelen interactuar unos con otros.

Citocromo P-450: induccin e inhibicin.

Tanto la induccin como la inhibicin de las enzimas implicadas en la biotransformacin, afectarn al resultado total del proceso de biotranformacin. Se toma como ejemplo el Cit P-450 por ser un sistema universalmente distribuido y muy activo en la transformacin de XBs. INDUCCION : Se ha demostrado que muchos compuestos de estructuras diferentes inducen las isoenzimas del Cit P450 y otras enzimas transformadoras. Estos compuestos incluyen drogas, insecticidas, hidrocarburos policclicos, etc., todos ellos con unas caractersticas comunes: son de naturaleza orgnica y de caracter lipoflico. El efecto de la induccin enzimtica del Cit P450 sobre metabolismo de xenobiticos se viene analizando con ejemplos desde el tema 6 y siguientes. Otro caso lo ilustra la accin del relajante muscular zoxazolamina, el pretratamiento de los animales con fenobarbital causa induccin del Cit P-450, por lo tanto el metabolismo del zoxazolamina es estimulado y su efecto reducido. La induccin del Cit P-450 no siempre conlleva la estimulacin de las biotransformaciones o no siempre en la misma extensin. INHIBICION: Los inhibidores del Cit P-450 se unen a componentes del propio sistema Cit P-450: la regin apoproteica o la regin del hemo (porfirina o Fe2+) o a las otras protenas que componen el Cit P-450. Los compuestos que se unen al sitio activo de la regin apoproteica se localizan sobre una regin hidrofbica de la protena Cit P-450. Si el Sustrato tambin se une en esta regin es que es lipoflico. Entonces el S y el compuesto XB se unen sobre el mismo sitio en la E y habr una competencia por la unin (inhibicin competitiva), del XB y del S por la enzima. La inhibicin del Cit P-450 puede tener lugar tambin por unin covalente con la apoproteina. Los xenobiticos tambin pueden interaccionar con el Fe3+ del grupo hemo y as inhibir al Cit P-450, puesto que la enzima no puede activar al O2, que tiene lugar sobre el Fe del hemo.

La posibilidad de que se produzcan mecanismos combinados da lugar a efectos SINERGICOS y/o ANTAGONICOS (conceptos que se revisarn en el tema 11)
La mayora de las interacciones sinrgicas entre XBs se producen a travs de la inhibicin de enzimas que los metabolizan. Ejemplo: los compuestos metilen-dioxi-fenilo aumentan la toxicidad de ciertos insecticidas por inhibicin del sistema monooxigenasa del insecto, al formar un metabolito que se une al Cit P450. El malation, al ser hidrolizado por una carboxilesterasa tendra baja toxicidad, si no fuera porque determinados organofosforados inhiben a la citada enzima.

Ejemplo: El paration es un inhibidor de la monooxigenasa, mientras que los organoclorados: DDT, aldrn, dieldrn ,etc, son inductores. El pre-tratamiento con paration o con organoclorados de un animal, conlleva que en las muestras de tejido obtenidas despus, aparezcan inhibidas o aumentadas las actividades de las enzimas O.F.M. en el retculo endoplsmico, segn el caso. El tratamiento combinado de paration y un organoclorado puede dar lugar a resultados muy diversos e impredecibles. Estudio del polimorfismo de debrisoquina en una muestra de la poblacin cubana

Las diferencias en la capacidad con que cada individuo metaboliza una droga por una va determinada tiene relevancia clnica para medicamentos de amplio uso, de estrecho margen de seguridad, si esa es la principal va en la eliminacin de la droga, o si el nmero de alternativas teraputicas es limitada; por tanto, la informacin farmacogentica es esencial en la teraputica individualizada y contribuye a un uso racional de medicamentos. Como el citocromo P4502D6 (CYP2D6) cataliza ms del 65 % de los frmacos comnmente empleados en la prctica habitual, se propus identificar la presencia de diferentes fenotipos metabolizadores del CYP2D6 en una muestra de 104 sujetos de la poblacin cubana. Se determin la razn metablica entre las concentraciones urinarias de debrisoquina y su metabolito 4OH-debrisoquina, cuantificados mediante cromatografa lquida de alta resolucin. Se encontr que el 3,84 % de los individuos estudiados son metabolizadores lentos